含有木鱉子提取物的傷口愈合劑的制作方法

專利名稱：含有木鱉子提取物的傷口愈合劑的制作方法
技術領域：
本發明涉及具有傷口愈合功效的木鱉子(Momordicae semen)提取物。本發明還涉及含有木鱉子提取物活性成分的傷口愈合局部透皮劑，通過誘導皮膚受傷的動物模型證 實其能夠縮短傷口閉合和治療所需的時間。
背景技術：
木鱉子是木鱉子(Momordicae)的成熟種子，木鱉子是廣泛分布于中國南部的多 年生藤本植物。從9月至11月收集其果實，然后如下處理將每個果實切成兩片并半干；立 即取出種子或將含有種子的果實放入罐中，直至果皮和果肉腐爛，將種子分離。用這種方法處理的木鱉子對于風濕性疼痛和肌肉痙攣等具有強效抗炎活性和治 療功效。直至最近，木鱉子提取物的已知成分是固醇、齊墩果醇酸、木鱉子酸、木鱉子皂苷I、 II。現在，廣泛使用的用于治療一般皮膚傷口的外用制劑是桿菌肽、慶大霉素、卡那霉 素、四環素、土霉素、甲氯環素、多粘菌素、硝基糠腙、磺胺嘧啶、夫西地酸等。事實上，對用 于有效治療難處理傷口如糖尿病性足部潰爛的新的、較好的傷口愈合藥劑存在著很大的需 求。此外，研發了 一種新的傷口愈合劑，如將上述外用制劑與濕敷料如水凝膠或聚氨酯泡沫 體混合的功能性敷料將形成高附加值的產品。發明詳述技術問題本發明的發明人努力研發了用于治療或緩和傷口的藥物，使用與化學物質相比由 局部施用引起的副作用或毒性少的植物化學藥品。將選定的粗制草藥提取物施用于用于測 試的皮膚受傷的小鼠模型，并且結果顯示木鱉子提取物或其含有木鱉子皂苷I的級分顯著 縮短了受傷皮膚閉合或治療所需的時間。因此，本發明的目的在于提供一種傷口愈合藥劑，其包含木鱉子提取物或含有木 鱉子皂苷I的木鱉子級分。技術解決方法本發明涉及一種傷口愈合藥劑，其特征在于含有木鱉子提取物作為活性成分。上述木鱉子提取物含有木鱉子級分，該級分含有由以下的通式1表示的作為活性 成分的木鱉子皂苷I。通式1 附圖描述

圖1表示皮膚受傷小鼠模型中顯示的傷口愈合效果。最佳實施方式以下將進一步舉例說明本發明。本發明涉及用于局部透皮應用的藥物制劑，包含木鱉子提取物或含有木鱉子皂苷 I的木鱉子級分作為活性成分，通過皮膚受傷的動物模型證實其顯著縮短了傷口閉合和治 療所需的時間。根據本發明的木鱉子提取物通過用為木鱉子干重2-10倍的水或含水醇溶液提取 來獲得，其也可以通過傳統的用于粗制藥品的提取方法獲得。上述方法中所用的醇優選 c「c6，更優選甲醇、乙醇等。根據本發明的包含木鱉子皂苷I的木鱉子級分可以從木鱉子提取物獲得，所述木 鱉子提取物通過用極性溶劑以傳統的方法處理木鱉子獲得。通過使用非離子吸附樹脂或反 相硅膠樹脂以傳統的柱色譜層析法處理木鱉子提取物可以有效地生產木鱉子級分，也可以 使用有機溶劑通過皂苷沉淀法來生產木鱉子級分，所述有機溶劑優選丙酮、乙酸乙酯等。在進行柱色譜層析法中，可以與有機溶劑，諸如含水醇溶液、乙醇、丙酮等一起使 用Amberlite XAD-16或十八烷基甲硅烷基(0DS)-硅膠樹脂，從而可以從木鱉子提取物中 選擇性地制備包含高濃縮皂苷的級分。將木鱉子提取物溶解于3-5倍(w/w)的蒸餾水中，并加入超過水5-10倍(w/w)的 丙酮，然后選擇性地沉淀皂苷，由此最終產生含有提高含量的木鱉子皂苷的級分。可以通過使用常規的方法制得根據本發明的木鱉子提取物或含有木鱉子皂苷I 的木鱉子級分，通過將作為活性成分的木鱉子提取物或含有木鱉子皂苷I的木鱉子級分與 藥物學上可接受的載體、成形劑、稀釋劑等以20000-20 1的重量比，并且相對于整個藥物 組合物的含量為0. 01-30wt%重量比混合。以這種方式，可以制得膏劑、敷劑、貼劑等形式的傷口愈合局部透皮劑。此外，根據本發明的木鱉子提取物或級分的劑量根據內部再吸收速率、體重、年 齡、性別、健康狀況、飲食、給藥時間、使用方法、排泄速率、疾病嚴重程度、醫學專家(或主 管人)的決定、患者需求等而不同。此外，以這種方式由此制造的單位劑量制劑可以根據醫學專家指導和監控的決定 以及患者的需求，通過專門的方法來使用，或以規律的時間間隔來給藥。本發明可以使用下文中所述的實施例來得到進一步的描述，但本發明并不限于這些。
實施例制備實施例1 木鱉子提取物的制備將獲自中國草藥市場的木鱉子種子研磨成合適的大小，將含水乙醇溶液(2L， 10% )加入磨細的木鱉子種子中(1kg，干重)，然后在80°C的水浴中提取兩次，6小時。將 提取物過濾，在60°C下使用旋轉蒸發器減壓濃縮，在真空爐中將溶劑完全除去，將所得物干 燥并磨成粉，然后獲得木鱉子提取物(40-50g)。制備實施例2 使用非離子吸附樹脂制備木鱉子皂苷I級分1使用非離子吸附樹脂Amberlite XAD-16對制備實施例1中獲得的提取物進行柱 色譜層析。將溶解于甲醇中(10%)的提取物(30g)倒入吸附樹脂柱中(11)。將蒸餾水和含 水甲醇溶液(30%，ν/ν)各自以樹脂體積3倍的量流過柱子，接著將含水甲醇溶液(70% ) 和100%的甲醇各自以樹脂體積3倍的量流過柱子，以獲得洗出液級分。將所得到的級分干 燥，磨成粉，并最終獲得木鱉子皂苷I級分1 (IOg)。制備實施例3 使用用于沉淀的有機溶劑制備木鱉子皂苷I級分2通過使用有機溶劑如丙酮沉淀制備實施例1中所獲得的提取物來獲得含有高 濃度木鱉子皂苷I的級分。將制備實施例1中獲得的提取物(IOOg)溶解于蒸餾水中 (300-500ml)，加入丙酮(1800-3000ml)，并混合在一起，然后產生了含有皂苷的沉淀物。通 過使用濾紙將沉淀物分離出來，干燥，然后獲得了木鱉子皂苷I級分2(60g)。制備實施例4 使用反相硅膠樹脂色譜層析制備木鱉子皂苷I級分3使用十八烷基甲硅烷基(ODS)-硅膠樹脂(YMOGEL 0DS_A12nm，S_150m)對制備實 施例3中獲得的提取物進行柱色譜層析。相對于IOg樣品，使用了 250g樹脂。將 樹脂2-3 倍量的30% (ν/ν)含水甲醇溶液流過后，將樹脂2-3倍量的60% (ν/ν)含水甲醇溶液流過， 以獲得洗出液級分。將所得到的級分減壓濃縮，在真空爐中將溶劑完全干燥，然后獲得了木鱉子皂苷I 級分 3 (3. 5g)。制備實施例5 純木鱉子皂苷I的分離從制備實施例4中獲得的級分純化木鱉子皂苷I。使用乙腈和水的混合溶劑 (29 71，0.1%三氟醋酸)以9. 5ml/min的洗脫速度進行高性能液相色譜層析(HLPC)，并 且只收集約45min時的峰。將所得到的級分減壓濃縮并在真空爐中完全干燥。所用的柱是 YMC J’ Sphere0DS-H80，并且在 210nm 處檢測波長。為了檢測所獲得材料的結構，將其質譜和NMR譜數據與文獻中的相比較[Iwamoto， Okabe， Yamauchi, Tanaka， Rokutani, Hara, Mihashi, Higuchi.Studies on the constituents of Momordicacochinchinensis Spreng.I.Isolation and characterization of the seedsaponins， Momordica saponin I and II.(對 木 鱉子組分的研究。I.種子皂苷、木鱉子皂苷I和II的分離和表征Khemical & pharmaceuticalbulletin 1985,33(2) :464_478]，并發現數據與木鱉子皂苷I的相同，已 經報道了木鱉子皂苷I存在于木鱉子中(木鱉子皂苷I ;3-0-β-D-吡喃半乳糖基(1-> 2)-[a-L_吡喃鼠李糖基(1- > 3)]-i3_D-葡糖醛酸吡喃糖苷-28-0-i3_D-吡喃木糖基 (1- > 3) - β -D-吡喃葡糖基(1- > 3) - [ β -D-吡喃木糖基(1- > 4) ] - a -L-吡喃鼠李糖基 (1- > 2) - β -D-吡喃巖藻糖基絲石竹皂甙)。[通式1] 分子量1673.77熔點241_244°C比旋光[a]19D=-14.8° (CO. 7, MeOH H2O = 1 2)制備實施例1至4中獲得的木鱉子提取物和木鱉子皂苷I級分的含量顯示于表1 中。[表 1] 實施例1 木鱉子提取物的傷口愈合效果1.測試材料和給藥將制備實施例1獲得的木鱉子提取物、制備實施例4中獲得的木鱉子皂苷I級分3 和制備實施例5中獲得的木鱉子皂苷I分別以50、10和5 μ g/20 μ 1的濃度溶解于CMC中 (羧甲基纖維素，0.5%)。將由此制得的測試材料(20μ1)局部施用于受傷的小鼠皮膚上，
每天一次，連續10天。作為陽性對照藥物，如上制備了 CGS-21680(Tocris，USA)，并以10 μ g/20 μ 1的劑 量局部施用，每天一次，連續10天。2.測試方法將二十五只具有24g士2g體重的⑶-1血統的小鼠分成5組。將小鼠放入分開的 籠子中。用環已烯巴比妥(90mg/kg，IP)麻醉后，將小鼠肩部和背部的毛剃除。使用鋒利的 打孔機(ID12mm)將一部分皮膚切除，該部分皮膚包括皮膚下的肌肉層和與其連接的組織。 在皮膚上形成傷口后，將木鱉子提取物、木鱉子皂苷I級分3、木鱉子皂苷I和CGS-21680的 測試材料各自以50、10、5和10 μ g/20 μ 1的濃度分別局部施用于小鼠，每天一次，連續10 天。在第1、3、5、7、9和 11 天使用 Image-ProPlus (Media Cybernetics，版本4· 5. 0. 29) 測量透明塑料薄膜上檢測的受傷皮膚面積。然后，使用graph-prism (Graph Software USA) 計算傷口閉合率(％)和傷口閉合所需的時間(CT5tl)(表2和圖1)。在一尾方差分析(一 尾AN0VA)后進行Durmett ’ s測試，以比較各個測量點的處理組和載體組。差異在P < 0. 05 是統計學顯著的。如表2和圖1所示，發現根據本發明的木鱉子提取物、含有木鱉子皂苷I的木鱉子 級分和木鱉子皂苷I具有較好的傷口愈合效果。[表 2] (*相對于載體組P < 0. 05)實施例2 大鼠的口服急性毒性測試如下對6周大的SPF (無特異性病原體)SD大鼠進行2_周重復劑量毒性測試。將制備實施例1中獲得的木鱉子提取物和制備實施例4中獲得的木鱉子皂苷I級 分3分別溶解于0.5% CMC中。將制劑口服給藥于大鼠(5只大鼠/組)，每日劑量分別為 2，000mg/kg 和 500mg/kg，持續 2 周。在第15天，觀察大鼠的存活、臨床癥狀和體重變化。然后，對大鼠進行血液學測試 和血液生化測試。然后將大鼠尸檢，并用肉眼觀察來發現它們腹腔和胸腔器官的任何異常。 結果表明沒有發現明顯的臨床癥狀，并且所有大鼠都存活了。此外，關于它們的體重、血液 學和血液生化測試和尸檢，沒有發現毒性。因此，認為根據本發明的木鱉子提取物和木鱉子 皂苷I級分3對于口服是安全的，口服的最小致死劑量(LD5tl)分別為2，000mg/kg和500mg/
kg ο制劑實施例1 透皮組合物的制備如下所述使用本發明的木鱉子提取物或含有木鱉子皂苷I的木鱉子級分制備透 皮組合物。[組合物1]活性成分(0. 04g)、聚丙烯酸鈉(1. 3g)、甘油(3. 6g)、氫氧化鋁(0. 04g)、對羥基苯 甲酸甲酯(0. 2g)，水(14g)[組合物2]活性成分(0.08g)、丙二醇(1.6g)、液體石蠟(0. Sg)、肉豆蔻酸異丙酯(0. 4g)、 Gelva 1430(16. 4g)。制劑實施例2 膏劑的制備如下從本發明的木鱉子提取物或含有木鱉子皂苷I的木鱉子級分制備膏劑組合 物。[組合物]活性成分(Ig)、鯨蠟醇棕櫚酸酯(20g)、鯨蠟醇(40g)、硬脂醇(40g)、肉豆蔻酸異 丙酯(80g)、山梨酸酐硬脂酸酯(20g)、聚山梨酸酯(60g)、丙基P-氧苯甲酸酯(Ig)、甲基 P-氧苯甲酸酯(Ig)、適量磷酸和蒸餾水。[工業實用性]本發明公開了沒有由局部施用引起的副作用或毒性但在治療傷口中具有較好效 果的木鱉子提取物、天然提取物，因此預期可以用作傷口愈合藥劑。
權利要求
一種傷口愈合藥劑，其含有木鱉子提取物或含有木鱉子皂苷I的木鱉子級分作為活性成分。
2.根據權利要求1的傷口愈合藥劑，其中通過用水或低級含水醇溶液提取木鱉子來獲 得所述木鱉子提取物。
3.根據權利要求1的傷口愈合藥劑，其中通過使用有機溶劑的皂苷沉淀法或通過使用 非離子吸附樹脂或反相硅膠樹脂的柱色譜層析，使所述木鱉子級分含有提高含量的木鱉子 皂苷I。
4.根據權利要求3的傷口愈合藥劑， [通式1] 其中所述木鱉子級分含有16-80wt%由通式1所示的木鱉子皂苷I。
5.根據權利要求1的傷口愈合藥劑，其中所述藥劑是局部透皮組合物。
6.根據權利要求6的傷口愈合藥劑，其中將所述局部透皮組合物配制成膏劑、敷劑或 貼劑。
全文摘要
本發明涉及具有傷口愈合功效的木鱉子提取物。特別地，本發明涉及含有木鱉子提取物活性成分的傷口愈合透皮劑，通過誘導皮膚受傷的動物模型證實其能夠縮短傷口閉合和治療所需的時間。
文檔編號A61K36/42GK101861158SQ200880116400
公開日2010年10月13日 申請日期2008年10月21日 優先權日2007年10月22日
發明者尹世晙, 張基旭, 表成洙, 金周玄, 金峰撤 申請人:Sk化學株式會社