專利名稱：一種具有體外殺精和抑菌作用的藥物及其制備方法和應用的制作方法
技術領域：
本發明屬于醫藥領域，涉及具有殺精和抑菌作用的藥物及其制備方法和應用。
背景技術：
我國人口眾多，實行計劃生育是國家的基本國策。實行計劃生育是以避孕為主，目前常用的避孕措施有口服避孕藥、外用避孕藥、避孕套、宮內節育器、絕育手術等。口服避孕藥多仿照人體激素制成，經常服用會影響體內激素的正常代謝，產生一系列副作用。雖然隨著工業水平的不斷進步，避孕套的厚度也越來越小，但可能會使性交時的快感減弱，也會由于使用不當致性交過程中避孕套破裂或性交結束時將套遺留在陰道中，使精液流入陰道，從而導致避孕失敗。因此兼具性病防治作用的外用陰道避孕藥的研究研究開發具有重要意義，受到廣泛重視。
發明內容
本發明的任務是提供一種具有體外殺精和抑菌作用的藥物，并提供該藥物的制備方法。
實現本發明的技術方案是 本發明提供的這種具有體外殺精和抑菌作用的藥物，是苦參和白頭翁按質量比為1∶3～1∶4的配比混合后采用乙醇提取法制取的提取物，本發明實施例具體采用的是乙醇加熱回流法。
本發名提供的這種具有體外殺精和抑菌作用藥物的制備方法是取苦參和白頭翁放置干燥箱內干燥后，將苦參與白頭翁按質量比為1∶3～1∶4，優選配比為1∶3的配比混合，取苦參和白頭翁混合物，用60％乙醇8倍量加熱回流提取3次，每次2小時；收集合并3次提取液，過濾，加熱濃縮，滴加稀NaOH溶液調定pH至7.2～7.5，定容至藥液濃度為1∶1，相當于每ml藥液含原生藥1g，然后在121℃下高溫滅菌20min，分裝備用。
本發明揭示，苦參與白頭翁配比為1∶3～1∶4時，殺精作用強于單藥，以配比為1∶3時最強。苦參、白頭翁復方提取液抑菌效果均比單藥提取液好。本發明藥物兼具體外殺精和抑菌作用，且殺精和抑菌作用均優于單藥提取液。
實驗資料 1.方法 1.1苦參、白頭翁復方提取液體制備方法 1.1.1材料白頭翁根粉末、苦參、NaOH溶液、蒸餾水 1.1.2制備方法 制備以下質量配比的9組提取液 將白頭翁根粉末和苦參放置干燥箱內干燥，各組別按上表質量配比取10g苦參和白頭翁混合物或單藥。取60％乙醇8倍量加熱回流提取3次，每次2h；收集合并3次提取液，過濾，加熱濃縮至不足10ml時滴加稀NaOH溶液調定pH至7.2～7.5，定容10ml，此時藥液濃度為1∶1，相當于每ml藥液含原生藥1g；然后在121℃下高溫滅菌20min，分裝備用[參見徐今寧，張鶴明，趙秀花.苦參堿提取工藝及多種制劑的研究進展.時珍國醫國藥，2007，18(9)2287-2289；劉文，馮果，劉夢瑩等.白頭翁湯有效成分提取工藝的研究.時珍國醫國藥，2007，18(9)60-63；張奎遠，余世春，謝冬梅.苦參提取工藝的優化選擇.基層中藥雜志，2002，16(1)13-14；劉琳，金鳳燮.白頭翁皂苷的分離提純.大連輕工業學院學報，23，118-21]。
1.2體外殺精作用 1.2.1精子懸液選取健康男性，年齡不超過40歲，禁欲4～7d，取樣前48h禁酒和咖啡等，手淫法取精。
1.2.2以計算機輔助精液分析(CASA)檢測藥物對精子活力。
入選的10例精液樣本均為 精子密度＞80*10^6個/ml 活率a級＞30％，a級+b級＞50％ PH7.2 液化時間＜30min 試驗方法 將精液與藥液以不同的體積比混合制成不同藥液濃度的混合液，快速混勻后在涂片觀察5個以上視野，觀察終點為混合后20s，若每個視野精子活率＜1％，則認為此濃度的藥液具有瞬間殺精作用[參見慕意，杜俊杰.白頭翁皂苷體外殺精效果研究.西北藥學雜志，1996，11(3)119-120；杜俊杰，郭仁輿，劉勝家等.苦參堿的體外殺精子作用.西安醫科大學學報，1996，3(17)338-339]。
1.3用藥敏紙片法觀察對大腸桿菌的抑菌作用 1.3.1藥敏紙片的制備將普通定性濾紙用打孔機打成若干圓形紙片，直徑為6mm，置于干燥潔凈的試管內，放入高壓滅菌鍋中經121℃高壓滅菌20分鐘后，取出放入恒溫干燥箱內進行干燥備用。
1.3.2瓊脂培養基的制備1、配方牛肉膏3.0g，蛋白胨10.0g，氯化鈉5.0g，瓊脂18.0g，蒸餾水1L，稀NaOH溶液。2、制備方法用玻璃棒挑取牛肉膏至小燒杯中，加適量蒸餾水加熱溶解后倒入裝有蛋白胨和氯化鈉粉末的大燒杯中加熱。待藥品完全溶解后放入瓊脂，使之溶化，調節PH7.4～7.6，定容至1L。制好的培養基趁熱倒入培養面中，使瓊脂高度4～5mm，凝固后121℃高壓滅菌20min。滅菌完畢后待其凝固，放入37℃溫箱中培養24h，無細菌生長的放入4℃冰箱保存備用。
1.3.3大腸桿菌的準備從微生物實驗室取得大腸桿菌的標準株用劃線法接種于瓊脂培養基表面傳代2次，使其活化。
1.3.4將活化好的大腸桿菌菌株用滅菌蒸餾水制成懸濁液，用血細胞計數板在顯微鏡下計數細菌濃度，調整濃度至105個/ml。用微量加樣器吸取100ul菌液滴與培養基表面，用玻璃棒鋪勻。再將滅菌紙片浸濕與各不同藥液中約10秒，取出紙片稍刮干后均勻間隔貼于各瓊脂培養基表面，放入37℃恒溫培養箱中，24小時后取出，用游標卡尺測量抑菌圈[參見時維靜，路振香，焦坤.白頭翁根不同提取物體外抑菌試驗研究.中獸醫醫藥雜志，2005，426-28；李文廣，詹志農，周貞鑒.苦參泡騰片體外抗菌作用的實驗觀察.海南醫學院學報2001，7(2)68～69]。
2.結果 2.1體外殺精結果 不同配比的苦參、白頭翁提取液均有體外瞬間殺死精子的作用。其最小殺精濃度因精子的密度、活力、個體差異而略有波動。其中苦參、白頭翁配比為1∶3及1∶4時，殺精作用強于單藥，以配比為1∶3時最強。見表1。
表1苦參、白頭翁復方提取液體外殺精結果
ED80表示能對80％樣本有效時的最小濃度 2.2抑菌試驗結果 苦參、白頭翁復方提取液抑菌效果均比單藥提取液好。單藥體外抑菌效果甚微，配比為1∶1的復方提取液抑菌效果最好，配比為1∶4～1∶2的次之。見表2、圖1～8。苦參、白頭翁單藥提取液按1∶1混合后抑菌效果仍遠不及配比為1∶1的復方提取液。見圖9。
表2苦參、白頭翁復方提取液抑菌效果
“+++”抑菌圈D≥10.00mm“++”抑菌圈D≥7.50mm，D＜10.00mm；“+”有抑菌圈但D＜7.50mm；“-”無抑菌圈 我國人口眾多，實行計劃生育是國家的基本國策。實行計劃生育是以避孕為主，目前常用的避孕措施有口服避孕藥、外用避孕藥、避孕套、宮內節育器、絕育手術等。口服避孕藥多仿照人體激素制成，經常服用會影響體內激素的正常代謝，產生一系列副作用。雖然隨著工業水平的不斷進步，避孕套的厚度也越來越小，但可能會使性交時的快感減弱，也會由于使用不當致性交過程中避孕套破裂或性交結束時將套遺留在陰道中，使精液流入陰道，從而導致避孕失敗。因此兼具性病防治作用的外用陰道避孕藥的研究正受到世界衛生組織和我國國家計劃生育委員會重視。我國傳統醫學具有幾千年的用藥歷史和經驗，具有一套完整的中醫藥理論，同時還擁有豐富的中草藥資源。因此從中草藥中篩選出兼具性病防治作用的外用陰道避孕藥是具有廣闊前景的。
苦參，性苦，寒。歸心，肝，胃，大腸，膀胱經。功能主治清熱燥濕，殺蟲，利尿。用于熱痢，便血，黃疸尿閉，赤白帶下，陰腫陰癢，濕疹，濕瘡，皮膚瘙癢，疥癬麻風；外治滴蟲性陰道炎。白頭翁，性苦，寒。歸胃、大腸經。功能主治清熱解毒，涼血止痢，燥濕殺蟲的功效[參見陸付耳，劉沛霖主編.基礎中醫學.北京科學出版社，2003(1)265-273]。兩者氣味相投，歸經一致，相須，能提高療效。現代中藥研究發現苦參和白頭翁均有抗腫瘤、調節免疫、抗炎、抗菌、抗滴蟲、殺精等作用，兩者的藥理作用也是一致的[參見莫少紅.白頭翁的化學成分及藥理作用研究進展.中藥材，2001，24(5)385-387；徐今寧，張鶴明，趙秀華.苦參的藥理活性研究進展.河北北方學院學報(醫學版)，2007，24(5)67-69]。
本發明試驗發現7種復方提取液的體外殺精及抑菌效果均較單藥有明顯增強。其中苦參、白頭翁配比為1∶3的提取液殺精效果最好；配比為1∶1的提取液殺菌效果最好，配比為1∶4～1∶2的次之。說明兩種藥物合用能產生協同作用而增進療效。殺精試驗中前六個標本精液樣本使用高溫滅菌前的提取液，后四個精液樣本使用高溫滅菌后的提取液。從結果上看高溫作用后，殺精效果明顯增強了，說明在高溫作用下藥液成分發生了變化。在試驗中將相同濃度的配比為1∶1提取液與兩種單藥提取液的混合液做體外抑菌實驗，結果前者有明顯的殺菌效果(抑菌圈＞10mm)而后者則無抑菌作用。說明兩種藥物的協同作用不僅僅是不同藥理成分作用于不同位點，而是生成了新的藥理成分，并且此成分抑菌殺精效果均十分明顯。原因可能是氧化苦參堿、氧化槐果堿的結構中含有N→O配位鍵，與含羥基、雙鍵等基團的三萜皂甙合煎時，氧化苦參堿、氧化槐果堿被還原為苦參堿、槐果堿[參見吳笛，劉法錦，廖彩震.中藥配伍對化學成分的影響.中成藥，2003，25(2)152-154]或其他化學反應。現有文獻中未見有關苦參與白頭翁混合提取的研究，本發明實驗根據有關單藥提取方法及成本綜合考慮采取了乙醇加熱回流法。苦參與白頭翁配比為1∶3時殺精效果最好，配比為1∶1～1∶4時抑菌效果較好。故苦參、白頭翁復方提取液體外殺精和抑菌最佳配比是1∶3。考慮本發明藥物藥的藥理作用為殺精兼備殺菌，且苦參、白頭翁配比為1∶3時體外殺精、抑菌效果均很明顯，所以處方定為苦參與白頭翁配比為1∶3(質量比)。
圖1提取液1&3基本沒有抑菌作用； 圖2提取液2抑菌效果最好，抑菌圈大小隨濃度降低而減小； 圖3提取液4濃度為0.1g/ml時無明顯抑菌圈； 圖4提取液5抑菌圈較提取液4稍小； 圖5提取液6濃度為0.1g/ml時無明顯抑菌圈)； 圖6提取液7濃度為0.2g/ml時抑菌圈很小； 圖7提取液8濃度為0.1、0.2g/ml時無明顯抑菌圈； 圖8提取液9濃度為0.1～0.3g/ml時無明顯抑菌圈； 圖9左提取液2；右提取液1+3同濃度配比為1∶1的提取液(左)與兩種單藥提取液的混合液(右)抑菌效果比較，左側有明顯的殺菌效果，而右側則無。
具體實施例方式 實施例1 制備苦參、白頭翁復方提取液 材料白頭翁根粉末、苦參、NaOH溶液、蒸餾水 制備方法將白頭翁根粉末和苦參放置干燥箱內干燥。取10g苦參和白頭翁混合物，苦參與白頭翁配比為1∶3(質量比)，取60％乙醇8倍量加熱回流提取3次，每次2h；收集合并3次提取液，過濾，加熱濃縮至不足10ml時滴加稀NaOH溶液調定pH至7.2～7.5，定容10ml，此時藥液濃度為1∶1，相當于每ml藥液含原生藥1g，然后在121℃下高溫滅菌20min，分裝備用。
權利要求
1.一種具有體外殺精和抑菌作用的藥物，其特征在于，它是苦參和白頭翁按質量比為1∶3～1∶4的配比混合后采用乙醇提取法制取的提取物。
2.根據權利要求1所述的具有體外殺精和抑菌作用的藥物，其特征在于，它是苦參和白頭翁按質量比為1∶3的配比混合后采用乙醇提取法制取的提取物。
3.根據權利要求1或2所述的具有體外殺精和抑菌作用的藥物，其特征在于，所述的乙醇提取法是乙醇加熱回流法。
3.一種具有體外殺精和抑菌作用藥物的制備方法取苦參和白頭翁放置干燥箱內干燥后，將苦參與白頭翁按質量比為1∶3～1∶4的配比混合，取苦參和白頭翁混合物，用60％乙醇8倍量加熱回流提取3次，每次2小時；收集合并3次提取液，過濾，加熱濃縮，滴加稀NaOH溶液調定pH至7.2～7.5，定容至藥液濃度為1∶1，相當于每ml藥液含原生藥1g，然后在121℃下高溫滅菌20min，分裝備用。
4.根據權利要求3所述的制備方法，其特征在于，苦參與白頭翁的質量配比為1∶3。
全文摘要
本發明提供了一種具有體外殺精和抑菌作用的藥物，其特征在于，它是苦參和白頭翁按質量比為1∶3～1∶4的配比混合后采用乙醇加熱回流法制取的提取物，本發明揭示，苦參、白頭翁配比為1∶3及1∶4時，殺精作用強于單藥，以配比為1∶3時最強。苦參、白頭翁復方提取液抑菌效果均比單藥提取液好。本發明藥物兼具體外殺精和抑菌作用，且殺精和抑菌作用均優于單藥提取液。
文檔編號A61P15/00GK101757140SQ20101013048
公開日2010年6月30日 申請日期2010年3月24日 優先權日2010年3月24日
發明者劉博 , 尹春萍 申請人:華中科技大學