專利名稱：一種具有抗hiv潛伏作用的藥物及其用途的制作方法
技術領域：
本發明屬醫藥領域，涉及治療艾滋病的藥物，具體涉及一種具有抗HIV潛伏作用的藥物及其用途，尤其涉及As2O3抗HIV潛伏作用及其在制備治療艾滋病藥物中的應用。
背景技術：
獲得性免疫缺陷綜合征(AIDS)是由HIV感染引起的一種嚴重危害人們生命健康的傳染性疾病。據WHO統計全球艾滋病患者已超過4000萬，每年新增患者500萬，而每年死亡約為300萬。目前，艾滋病臨床治療方法主要采用高效抗逆傳錄病毒療法(Highlyactive antiretroviral therapy, HAART),該療法不僅有效控制HIV復制，并且能重建AIDS患者的免疫功能，為AIDS的治療打開了希望之門。人們曾寄希望于憑借HAART完全清除體內的HIV，從而達到徹底治愈AIDS的目的。但隨后的實踐證明，雖然HAART可以最大限度地抑制患者體內病毒復制，使血漿病毒載量(virus load)降低至現有常規檢測方法測不出的水平，但感染者體內仍有病毒持續存在，一旦停止藥物治療，病毒載量又會反彈到治療前水平(Ho, D. D. Toward HIV eradication or remission the tasks ahead. Science，1998. 280:1866 1867.)。研究顯示，HIV難以在體內被完全清除的一個重要原因是HIV-I能夠潛伏在靜息的記憶CD4+T細胞中，該潛伏感染細胞是由一小部分HIV感染的活化CD4+T細胞轉化而產生的，其整合的前病毒缺乏轉錄活性，因而，不會被免疫系統和抗逆轉錄酶病毒的藥物攻擊。盡管感染個體攜帶潛伏感染細胞數量較少，但衰減率是如此之慢，以至于欲在個體生存期內僅靠HAART治療將其徹底清除是不可能的。因此，HIV潛伏感染的靜息CD4+T細胞是構成機體內病毒儲藏庫(reservoir)的主要部分，同時也是目前臨床治療不能徹底清除HIV的巨大障礙[Finzi,D. et al. Latent infection of CD4+T cells providesa mechanism for lifelong persistence of HIV-1, even in patients on effectivecombination therapy. Na ture Med. 1999,5,512517]。一般認為 HIV-1 潛伏感染細胞形成的分子機制與整合位點處的染色質狀態，抑制性核小體nuc-1的存在，以乙酰化為代表的表觀遺傳修飾，宿主轉錄因子如NF-K B以及病毒轉錄活化因子Tat等因素有關[Coiras，M. , M. R. et al. Understanding HIV-I latency provides clues for the eradicationof long-term reservoirs. Nat. Rev. Microbiol. . 2009. , 7 :798-812. ] 據此機制，有研究提出了清除潛伏病毒儲存庫的治療策略，即試圖通過藥物誘導HIV潛伏感染細胞的前病毒表達，使其潛伏病毒再次激活，同時結合高效抗逆傳錄病毒療法及在人免疫系統作用下，來殺死激活的潛伏感染的細胞，以此加速病毒庫的清除(Richman et al. The Challenge ofFinding a Cure for HIV Infection, Science, 2009,1304, 323)。盡管，該策略已在臨床上已有幾個治療方案，但其結果仍未盡人意，不是激活劑無效，就是雖有效但其毒副作用大，因而，研發安全有效于一體的能消除病毒儲藏庫的免疫激活劑及相應的治療方案已是當務之急.中藥作為我國所特有的醫藥資源，以其種類繁多、臨床應用廣泛、作用溫和、副作用少等優點而越來越受到現代醫藥學的關注。
發明內容
本發明的目的是提供一種具有抗HIV潛伏作用的藥物，尤其涉及三氧化二砷(As2O3)抗HIV潛伏作用及其在制備治療艾滋病藥物中的應用。本發明的抗HIV潛伏作用的藥物能使感染細胞內潛伏的HIV表達，最終達到殺滅HIV的目的。As2O3為常用中藥，現代主要集中于白血病治療等方面。本發明涉及的三氧化二砷(As2O3) (Sigma, Product Number A 1010),英文名稱Arsenic trioxide Arsenic oxide,通用或商品名稱:白石比;亞砷酸；舭霜；其分子量197.84 ；
外觀無色菱形結晶(三聚物、白砷石);相對密度無色菱形結晶4. 15 ;無色立方體3. 86 ；熔點無色菱形結晶278°C ;無色立方體309°C ；沸點460°C;蒸汽壓13.33kPa(332. 5°C )；溶解性溶于乙醇，水中溶解度為1. 82/100 (20°C )。本發明目的的解決方案是基于建立的特有篩選模型本發明采用HIV潛伏細胞模型進行活性篩選試驗，結果顯示了具有抗HIV潛伏作用的As2O3,并用相應的賦型劑，按照常規的方法制成適用劑型，進行抗HIV潛伏作用試驗，結果證實，所述的As2O3使感染細胞內潛伏的HIV表達，具有干預HIV潛伏的作用，與抗逆傳錄病毒藥物聯合使用，可清除被激活的潛伏感染的細胞，以此加速潛伏病毒儲藏庫的清除。本發明涉及的HIV潛伏細胞模型，包括一個攜帶綠色熒光蛋白基因的人T細胞
10.6克隆株克隆株(J-Lat Full Length Clone 10. 6)，由美國國家健康衛生研究院AIDS參考試劑計劃部提供，被加洲大學Eric Verdin博士建立。該細胞小，球形細胞被懸浮培養。由攜帶綠色熒光蛋白基因HIV-R7/E-/GFP反轉錄病毒載體轉染人T細胞Jurkat精細胞分選而來(Jordan A,Bisgrove D, Verdin E. HIV reproducibly establishes a latentinfection after acute infection of T cells in vitro. EMBO J 22:1868-1877,2003)；另一個建立的HIV潛伏篩選模型Cll克隆，由HIV慢病毒感染T細胞經2次分選和激活而獲得(中國專利:20081003885LX)。本發明提供了一種抗HIV潛伏作用的藥物，其特征在于，所述的藥物中所含主要成分為As2O3原料藥和藥劑學上必要的輔料；該藥物采用相應的賦型劑，按照常規的方法制成適用劑型。本發明中，作為抗HIV潛伏作用的藥物，As2O3的用量可以為成年人每日0. I IOOmg,優選I 5mg/天,每日服用I 5次；兒童的用量和次數需在成人的基礎上酌情遞減。本發明中，抗HIV潛伏作用的藥物可以制成口服和非口服制劑。口服制劑可制成片劑、散劑、顆粒劑、膠囊劑等常用劑型，所用的賦型劑可以為淀粉、乳糖、蔗糖、甘露糖、羥甲基纖維素等中的一種或幾種；崩解劑可以為馬鈴薯淀粉、羥甲基纖維素等中的一種或幾種；粘合劑可以為阿拉伯膠、玉米淀粉、明膠、糊精等中的一種或幾種；所述的口服制劑除上述劑型外，還可以制成乳劑、糖漿劑等。
非口服制劑可以制成注射劑，可以與注射用水、生理鹽水、葡萄糖水制成注射劑，也可以在其中加入一定比例的乙醇、丙醇、乙二醇等。本發明所述的As2O3可進一步制備新型的抗艾滋病的藥物，將為艾滋病的徹底治愈提供新的途徑。
本發明的進一步目的是提供一種治療艾滋病藥物的制備方法，采用所述的As2O3為藥物原料，用相應的賦型劑，按照常規的方法制成口服和非口服制劑，其中的As2O3的用量可以為成年人每日0. I IOOmg,優選I 5mg/天,每日服用I 5次；兒童的用量和次數需在成人的基礎上酌情遞減。本發明的抗HIV潛伏作用的藥物的優點有1，提出了 As2O3的新用途，所述的As2O3在低濃度時即能明顯使感染細胞內潛伏的HIV表達。2，所述的As2O3可作為活性成分，制備抗H IV潛伏作用的藥物，且制備工藝簡單實用。3，可進一步制備治療艾滋病藥物，將為艾滋病的徹底治愈提供新的途徑。為了便于理解，以下將通過具體的附圖和實施例對本發明的抗HIV潛伏作用的藥物進行詳細地描述。需要特別指出的是，具體實例和附圖僅是為了說明，顯然本領域的普通技術人員可以根據本文說明，在本發明的范圍內對本發明做出各種各樣的修正和改變，這些修正和改變也納入本發明的范圍內。
圖IAs2O3對HIV潛伏誘導激活熒光顯微鏡下觀察結果，未加As2O3組(圖1-1為熒光照片，圖1-2為同一視野白光照片)，加As2O3 (圖1_3為熒光照片，圖1-4為同一視野白光照片，圖1-5為As2O3處理后流式細胞圖，圖1-6為未加As2O3處理的流式細胞圖，)；為了便于在打印文本上識別，熒光照片經去色處理后，其熒光細胞為白色。
具體實施例方式實施例IAs2O3對HIV潛伏誘導激活的影響按每孔2X10E4個細胞將Cll細胞種植于96孔板，每孔加入100 yl含10 %FBS(Gibco)的1640培養基(Gibco)。24小時后，加As 203至終濃度I U g/mL。每個濃度至少3個復孔，每個實驗重復3次。藥物處理細胞72小時后，在熒光顯微鏡下觀察細胞GFP表達情況，并收集細胞進行流式細胞術檢測，分析熒光細胞所占比例。本發明以終濃度為I ii g/mL的As2O3處理HIV潛伏感染細胞模型，在As2O3處理后的3天，通過對報告基因綠色熒光蛋白的熒光顯微鏡觀察和流式細胞術檢測，分析HIV潛伏感染細胞的激活效率，從而獲得藥物作用的劑量效應關系。結果顯示，HIV潛伏感染細胞經As2O3處理后綠色熒光陽性的細胞比例達高達33% ;未加As2O3處理的HIV潛伏感染細胞，其熒光陽性的細胞比例僅有不到1%背景激活，結果提示，As2O3具有對HIV潛伏感染細胞的干預作用。
權利要求
1.一種具有抗HIV潛伏作用的藥物，其特征在于，所述的藥物中以三氧化二砷為原料，以及藥劑學上必要的輔料。
2.按權利要求I所述的具有抗HIV潛伏作用的藥物，其特征在于，所述的三氧化二砷的劑量為成人每日0. I IOOmg,
3.按權利要求I所述的具有抗HIV潛伏作用的藥物，其特征在于，所述的三氧化二砷的劑量為成人I 5mg/天。
4.按權利要求I所述的具有抗HIV潛伏作用的藥物，其特征在于，所述的藥物劑型為口服給藥或非口服給藥劑型。
5.按權利要求4所述的具有抗HIV潛伏作用的藥物，其特征在于，所述的口服給藥劑型是片劑、散劑、顆粒劑或膠囊劑，或乳劑或糖漿劑。
6.按權利要求4所述的具有抗HIV潛伏作用的藥物，其特征在于，所述的非口服給藥劑型是注射劑。
7.權利要求I的具有抗HIV潛伏作用的藥物在制備治療艾滋病藥物中的用途。
8.按權利要求7所屬的用途，其特征在于，所述的藥物使感染細胞內潛伏的HIV表達。
全文摘要
本發明屬醫藥領域，涉及一種抗HIV潛伏作用的藥物，尤其涉及As2O3抗HIV潛伏作用及其在制備治療艾滋病藥物中的應用。本發明采用HIV潛伏細胞模型進行活性篩選試驗，結果顯示As2O3使感染細胞內潛伏的HIV表達，具有抗HIV潛伏作用，與抗逆傳錄病毒藥物聯合使用，可清除被激活的潛伏感染的細胞，以此加速潛伏病毒儲藏庫的清除。本發明以As2O3為原料，制成抗HIV潛伏作用的各種制劑。本發明可進一步制備新型的抗艾滋病的藥物，將為艾滋病的徹底治愈提供新的途徑。
文檔編號A61P31/18GK102727523SQ20111008447
公開日2012年10月17日 申請日期2011年4月2日 優先權日2011年4月2日
發明者朱煥章, 馬忠俊 申請人:復旦大學