專利名稱：一種從鉤吻提取物中制備蔓藤堿甲的方法
技術領域：
本發明涉及一種胡蔓藤堿甲(humantenmine)的制備方法，特別是涉及一種從鉤吻提取物中分離制備胡蔓藤堿甲的方法。
背景技術：
鉤吻(Gelsemium elegans Benth.)為馬錢科胡蔓藤屬植物，分中國鉤吻和北美鉤吻兩種。我國盛產于福建、浙江、廣西、廣東、湖南等地，又名斷腸草。其藥用部位為全草。具有祛風攻毒，消腫止痛的功效。鉤吻堿類化合物是存在于鉤吻中的一類化合物，被證明在腫瘤、鎮痛等方面有較好的活性。臨床上用于抑制腫瘤細胞生長、治療神經痛、局部用于擴瞳等作用，可以被認為是鉤吻藥效的物質基礎之一。胡蔓藤堿甲(humantenmine)是自鉤吻中分離得到的一種鉤吻堿類化合物，其含量較高，具有一定的開發新藥的潛力。其藥理作用主要包括其能抑制腫瘤細胞生長，鎮痛、 鎮靜等作用。目前，未見到胡蔓藤堿甲的制備工藝的相關報道，因此，胡蔓藤堿甲分離手段的不足是限制其醫藥用途的一個主要原因。
O-
I
^^ N \〇
I
〇\式1
發明內容
本發明要解決的技術問題是提供一種從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，以解決現有技術中制備手段繁瑣，產率極低的技術問題。為解決上述技術問題，本發明的從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，包括步驟(1)乙酸乙酯萃取步驟將鉤吻提取物的水溶液用體積比為0.5 1 2 1的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑，得萃取純化的浸膏A ；(2)硅膠色譜純化步驟將步驟(1)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱層析硅膠柱色譜分離，并以體積比為50 1 25 1的氯仿-甲醇溶液進行洗脫，將洗脫液作TLC檢識，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，得浸膏B。將浸膏B再用薄層層析硅膠柱色譜分離，并以體積比為100 1 50 1的氯仿-甲醇溶液梯度洗脫，收集洗脫液，并作TLC檢識，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，回收溶劑，即得浸膏C。(3)反相C 18色譜純化步驟將步驟⑵所得的浸膏C用反相硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與C18反相硅膠重量比為1 30 1 50)，體積比為55% 65%的甲醇-水溶液洗脫，洗脫液作TLC檢識，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，得純化的胡蔓藤堿甲。其中，所述硅膠色譜純化步驟與反相色譜純化步驟的順序能夠顛倒。所述步驟(1)中鉤吻提取物中所用的提取溶劑為體積濃度為70% 95%的乙醇溶液。采用本發明的方法依次經(1)乙酸乙酯萃取，(2)硅膠色譜純化，(3)反相色譜純化，能極大地提高得率，因此，該方法是一種制備胡蔓藤堿甲的簡化工藝，可用于胡蔓藤堿甲的工業制備。
圖1是胡蔓藤堿甲的1H-NMR譜。 圖2是胡蔓藤堿甲的13C-NMR譜。 圖3是胡蔓藤堿甲的DEPT譜。
具體實施例方式下面將結合具體實施例對本發明做進一步詳細說明。實施例1胡蔓藤堿甲的制備鉤吻藥材1kg，去除雜質后粉碎成粗粉，體積濃度為70%乙醇5L回流提取3次，每次2小時，合并提取液，回收溶劑得提取液約1L。將提取液用2L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑得浸膏A約 40g。將浸膏A用硅膠柱色譜分離(硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為1 30，硅膠柱規格Φ100*1000πιπι)，并以體積比為50 1的氯仿-甲醇溶液進行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有胡蔓藤堿甲的部分，減壓回收溶劑，得浸膏B 約12g。將浸膏B再用薄層硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與硅膠重量比為1 100，硅膠柱規格Φ100*1000πιπι)，并以體積比為100 1的氯仿-甲醇溶液洗脫，將洗脫液薄層硅膠板 (GF254)點樣，以體積比為100 1的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有胡蔓藤堿甲的部分，減壓回收溶劑，即得浸膏C約3g。將浸膏C反相C18硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與C18硅膠重量比為1 50，硅膠柱規格Φ60*600πιπι)，體積比為55%的甲醇-水溶液洗脫，洗脫液作TLC檢識，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，即得純化的胡蔓藤堿甲0. 12g。最終所得胡蔓藤堿甲經常規公知的NMR方法鑒定J. Nat. Prod.，1989，52 (3) 588-594.，并經高效液相檢測[Kromasil-C18柱(4. 6mm*250mm)，檢測波長254nm，流動相為體積比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL · mirT1，進樣量10 μ 1，柱溫25°C，理論塔板數以胡蔓藤堿甲計不低于5000含量在97%以上，其得率為0. 012%實施例2胡蔓藤堿甲的制備
鉤吻藥材1kg，去除雜質后粉碎成粗粉，體積濃度為95%乙醇5L回流提取3次，每次2小時，合并提取液，回收溶劑得提取液約2L。將提取液用IL乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑得浸膏A約 35g。將浸膏A用硅膠柱色譜分離(硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為1 50，硅膠柱規格Φ100*1000πιπι)，以體積比為25 1的氯仿-甲醇溶液進行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板(GF254)點樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有胡蔓藤堿甲的部分，減壓回收溶劑，得浸膏B 約Sg。將浸膏B再用薄層硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與硅膠重量比為1 50，硅膠柱規格 Φ100*1000πιπι)，并以體積比為50 1的氯仿-甲醇溶液進行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板 (GF254)點樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有胡蔓藤堿甲的部分，減壓回收溶劑，即得浸膏C約2. 5g。將浸膏C用反相C18硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與C18硅膠重量比為1 50，硅膠柱規格Φ60*600mm)，體積比為60%的甲醇-水溶液洗脫，洗脫液作TLC檢識，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，即得純化的胡蔓藤堿甲0. 13g。最終所得胡蔓藤堿甲經常規公知的NMR方法鑒定J. Nat. Prod.，1989，52 (3) 588-594.，并經高效液相檢測[Kromasil-C18柱(4. 6mm*250mm)，檢測波長254nm，流動相為體積比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL · mirT1，進樣量10 μ 1，柱溫25°C，理論塔板數以胡蔓藤堿甲計不低于5000含量在98%以上，其得率為0. 013%實施例3胡蔓藤堿甲的制備鉤吻藥材1kg，去除雜質后粉碎成粗粉，體積濃度為80%乙醇5L回流提取3次，每次2小時，合并提取液，回收溶劑得提取液約1L。將提取液用0. 5L乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑得浸膏A約 35g。將浸膏A用反相C18硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與C18硅膠重量比為1 30，硅膠柱規格Φ 100*1000mm)，體積比為65 %的甲醇-水溶液洗脫，洗脫液作TLC檢識，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，得浸膏B約4g。浸膏B用薄層硅膠柱色譜分離(浸膏樣品與硅膠重量比為1 70，硅膠柱規格 Φ60*600πιπι)，并以體積比為75 1的氯仿-甲醇溶液進行洗脫，將洗脫液薄層硅膠板 (GF254)點樣，以體積比為10 1的氯仿-甲醇溶液展開后置于紫外燈254nm下觀察，收集含有胡蔓藤 堿甲的部分，減壓回收溶劑，即得純化的胡蔓藤堿甲0. 26g。最終所得胡蔓藤堿甲經常規公知的NMR方法鑒定J. Nat. Prod.，1989，52 (3) 588-594.，并經高效液相檢測[Kromasil-C18柱(4. 6mm*250mm)，檢測波長254nm，流動相為體積比50 50的水-甲醇溶液，流速ImL · mirT1，進樣量10 μ 1，柱溫25°C，理論塔板數以胡蔓藤堿甲計不低于5000含量在98%以上，其得率為0. 026%。以上實驗結果表明，本方法用于制備胡蔓藤堿甲，工藝簡單，得率在萬分之一以上，因此，本發明可用于胡蔓藤堿甲的工業制備。
權利要求
1.從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，其特征在于包括步驟(1)乙酸乙酯萃取步驟將鉤吻提取物的水溶液用體積比為0.5 1 2 1的乙酸乙酯萃取3次，合并乙酸乙酯層，減壓回收溶劑，得萃取純化的浸膏A ；(2)硅膠色譜純化步驟將步驟(1)所得浸膏A用100-200目或200-300目柱層析硅膠柱色譜分離，并以體積比為50 1 25 1的氯仿-甲醇溶液進行洗脫，將洗脫液作TLC檢識，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，得浸膏B。將浸膏B再用薄層層析硅膠柱色譜分離，并以氯仿_甲醇100 1 50 1梯度洗脫，收集洗脫液，并作TLC檢識，合并含有胡蔓藤堿甲的流份， 回收溶劑，即得浸膏C。(3)反相C18色譜純化步驟將步驟⑵所得的浸膏C反相硅膠柱色譜分離，體積比為55% 65%的甲醇-水溶液洗脫，洗脫液作TLC檢識，合并含有胡蔓藤堿甲的流份，減壓回收溶劑，即得純化的胡蔓藤堿甲。其中，所述硅膠色譜純化步驟與反相色譜純化步驟的順序能夠顛倒。
2.如權利要求1所述的從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，其特征在于所述步驟(1)中鉤吻提取物中所用的提取溶劑為體積濃度為70% 95%的乙醇溶液；鉤吻提取物的水溶液濃度相當于生藥0. 5g · πιΓ1 1. Og · Iiir10
3.如權利要求1所述的從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，其特征在于所述乙酸乙酯萃取中，鉤吻提取物的水溶液與乙酸乙酯溶液的體積比為0.5 1 2 1。
4.如權利要求1所述的從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，其特征在于所述硅膠色譜純化步驟中，硅膠為100-200目或200-300目柱層析硅膠或薄層層析硅膠，浸膏樣品與硅膠重量比為1 30 1 100。
5.如權利要求1所述的從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，其特征在于所述反相色譜純化步驟中，浸膏樣品與C18反相硅膠重量比為1 30 1 50。
全文摘要
本發明公開了一種從鉤吻提取物中制備胡蔓藤堿甲的方法，包括步驟(1)乙酸乙酯萃取；(2)硅膠色譜純化；(3)反相色譜純化。本發明是一種制備胡蔓藤堿甲的簡化工藝，能極大地提高胡蔓藤堿甲的得率，可用于胡蔓藤堿甲的工業制備。
文檔編號A61P29/00GK102199155SQ20101013391
公開日2011年9月28日 申請日期2010年3月26日 優先權日2010年3月26日
發明者馮怡, 梁爽, 王源, 鄭向煒, 阮克鋒 申請人:上海張江中藥現代制劑技術工程研究中心