專利名稱：一種具有抗癌活性的熊果酸衍生物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種熊果酸衍生物及其制備方法，具體說是一種具有抗腫瘤活性的熊果酸衍生物及其制備方法。熊果酸⑴rsolic acid，UA)，又名烏索酸、烏蘇酸，屬五環三萜類化合物，化學名 (3 β ) -3-Hydroxyurs-12-en-28-oic acid,其相對分子量為 456. 68，分子式為 C3tlH48O3,它以游離或糖苷的形式，廣泛分布于自然界中。藥理學研究發現，熊果酸具有廣泛的生物學效應，熊果酸具有多種生物學活性，如抗癌、抗HIV、抗肝損傷、抗瘧、抗炎抑菌等，其中尤以抗癌活性最為顯著，其抗癌譜廣，不僅對多種致癌、促癌物有抵抗作用，而且對多種腫瘤細胞體內、外均有抑制作用。其副作用小，毒性低，顯示出較大的臨床應用潛力。熊果酸的化學結構式為
權利要求
1. 一種熊果酸衍生物，其特征在于所述熊果酸衍生物為Ν-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺-葉酸，結構式如式I所示
2. 一種如權利要求1所述的熊果酸衍生物的制備方法，其特征在于 (1)熊果酸與醋酸酐反應，生成3-0-乙酰基熊果酸；3-0-乙酰基熊果酸的結構式如式 II所示，
3.根據權利要求2所述的熊果酸衍生物的制備方法，其特征在于所述制備方法具體步驟如下(1)1重量份的熊果酸攪拌溶解于40-50重量份的吡啶中，滴加入2-3重量份的醋酸酐，加入0. 001-0. 02重量份的DMAP，室溫下攪拌16-18 h，反應結束后，用2 N HCl調節pH 3-4，蒸除溶劑，抽濾，水洗濾餅至中性，干燥，干燥后的產物干法上樣，柱層析純化，無水乙醇熱溶，冷卻重結晶，得白色粉末狀的3-0-乙酰基熊果酸；(2)1重量份3-0-乙酰基熊果酸溶解于30-35重量份CH2Cl2中，逐滴加入1_2重量份的草酰氯，室溫下攪拌反應12-Mh，蒸除溶劑及反應產生的氣體，得3-0-乙酰基UA酰氯中間體的粗品，直接進入下一步反應；在上述中間體的粗品中加入20-30重量份的CH2Cl2，三乙胺調節溶液PH 8-9，加入1-2重量份的乙二胺，室溫下攪拌反應12-Mh，反應結束后，反應液中加5-10重量份的水，以2N HCl調節pH3-4，過濾，水洗濾餅至濾液pH為中性，干燥；干燥后的產物干法上樣，柱層析純化，無水乙醇熱溶，冷卻重結晶，得白色粉末狀Ν-[3 β -乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺；(3)1重量份Ν-[3 β -乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺溶解于20-30 重量份的無水二甲基亞砜中，加入1-2重量份的葉酸，室溫攪拌30-60min，然后加入1_2重量份的1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽、1-2重量份的N-羥基丁二酰亞胺， 室溫避光反應20-30 h;反應結束后，蒸除溶劑，然后加入5-10重量份的水，以2N HCl調節 PH3-4，過濾，水洗濾餅至濾液pH為中性，干燥；干燥后的產物干法上樣，反相柱純化，無水乙醇熱溶，冷卻重結晶，得黃色粉末狀N-[3 β -乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺-葉酸。
4.一種熊果酸衍生物，其特征在于所述熊果酸衍生物為Ν-[3β-羥基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺，結構式如式IV所示
5. 一種如權利要求4所述的熊果酸衍生物的制備方法，其特征在于 (1)熊果酸與醋酸酐反應，生成3-0-乙酰基熊果酸；3-0-乙酰基熊果酸的結構式如式II所示；(2)3-0-乙酰基熊果酸與草酰氯反應，再與乙二胺反應得Ν-[3 β -乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺，結構式如式III所示；(3)Ν-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺與NaOH水解反應，得到 Ν-[3β-羥基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺，結構式如式IV所示。
6.根據權利要求5所述的熊果酸衍生物的制備方法，其特征在于所述制備方法具體步驟如下(1)1重量份的熊果酸攪拌溶解于40-50重量份的吡啶中，滴加入2-3重量份的醋酸酐， 加入少量的DMAP，室溫下攪拌16-18 h，反應結束后，用2 N HCHfpH 3_4，蒸除溶劑，抽濾， 水洗濾餅至中性，干燥，干燥后的產物干法上樣，柱層析純化，無水乙醇熱溶，冷卻重結晶， 得白色粉末狀的3-0-乙酰基熊果酸；(2)1重量份3-0-乙酰基熊果酸溶解于30-35重量份CH2Cl2中，分批次、逐滴加入1_2 重量份的草酰氯，室溫下攪拌反應12-24 h，蒸除溶劑及反應產生的氣體，得3-0-乙酰基UA 酰氯中間體的粗品，直接進入下一步反應；在上述中間體中加入20-30重量份的CH2Cl2，三乙胺調節溶液PH 8-9，加入1-2重量份的乙二胺，室溫下攪拌反應12-24 h，反應結束后，反應液中加5-10重量份的水，以2N HCl調pH3-4，過濾，水洗濾餅至濾液pH為中性，干燥，干燥后的產物干法上樣，柱層析純化，無水乙醇熱溶，冷卻重結晶，得白色粉末狀Ν-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺；(3)稱取1-2重量份的Ν-[3β -乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺，溶于20-30重量份的CH3OH-THF中，所述CH3OH與THF的體積比為1 :1. 5-2. 5 ；加入4-8重量份的4N NaOH，室溫下攪拌反應3- ，向反應液中加入5-10重量份的水，2 N HCl調節pH 3-4，減壓蒸除溶劑，水洗沉淀至中性，干燥；干燥后的產物干法上樣，柱層析純化，無水乙醇熱溶，冷卻重結晶，得Ν-[3 β -羥基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺。
7.—種如權利要求2或5所述的熊果酸衍生物，其特征在于所述乙二胺用丙二胺、丁二胺、戊二胺或己二胺代替，得到一系列對應的熊果酸衍生物。
8.—種如權利要求1或4所述的熊果酸衍生物或由權利要求2、3、5或6所述制備方法制備的熊果酸衍生物在制備抗腫瘤藥物中的應用。
全文摘要
本發明提供了一種熊果酸衍生物，所述熊果酸衍生物為N-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺-葉酸，本發明對天然產物熊果酸進行結構改造，得N-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺-葉酸(Ⅰ)、N-[3β-乙酰氧基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺(Ⅲ)和N-[3β-羥基-熊果烷-12-烯-28-酰]-氨基乙二胺(Ⅳ)，體外細胞增殖抑制實驗表明，化合物Ⅰ、Ⅲ和Ⅳ對所測腫瘤細胞株HepG2、BGC823、A-375、Hela等的增殖抑制作用優于熊果酸，而對人胚肺成纖維細胞HELF的毒性作用則低于熊果酸。其中化合物Ⅲ的體外抗腫瘤效果最好，化合物Ⅰ具有一定的靶向性。
文檔編號A61P35/00GK102516351SQ20111037356
公開日2012年6月27日 申請日期2011年11月22日 優先權日2011年11月22日
發明者王繼闖, 邵敬偉 申請人:福州大學