來自糖巨肽的血壓降低肽的制作方法

來自糖巨肽的血壓降低肽的制作方法【專利摘要】本發明涉及來自糖巨肽的血壓降低肽。具體地，本發明公開了一種方法，用于從包含下述蛋白的蛋白質來源生產IPP，所述蛋白具有-I-P-P-序列，并且在其蛋白質氨基酸序列中存在的-I-P-P-是-V-P-P-的至少6倍高（基于摩爾），所述方法包括水解所述蛋白來源，以將-I-P-P-序列中的至少40%釋放為肽IPP，并且，其中使用能在蛋白來源中存在的脯氨酸殘基羧基末端進行切割的蛋白水解酶，所述酶優選是脯氨酸特異性內切蛋白酶或者脯氨酸特異性寡肽酶，更優選地，脯氨酸特異性內切蛋白酶，以及可選地，使用氨基肽酶。【專利說明】來自糖巨肽的血壓降低肽[0001]本申請是2007年8月24日遞交的中國發明專利申請200680006116.X(名稱為“來自糖巨肽的血壓降低肽”)的分案申請。發明領域[0002]本發明涉及對IPP的生產。[0003]發明背景[0004]高血壓是人類中相對普遍的疾病，其是心血管疾病、腎衰竭以及中風的主要風險因素。大量制藥產品(例如鈣阻斷藥、β阻斷藥、利尿劑、α阻斷藥、中樞α拮抗劑、血管緊張素II拮抗劑以及ACE抑制劑)的有效性表明，高血壓的基本生理機制是多方面的。[0005]高血壓的生理機制，尤其是腎素-血管緊張素機制已獲得了大量的科學關注。在該機制中，血管緊張素由肝臟分泌，其被肽酶腎素切割，產生沒有生物活性的十肽血管緊張素I。隨著血管緊張素I經過肺毛細血管，被稱為血管緊張素轉化酶(下文中稱為ACE)的另一肽酶通過去除血管緊張素I的最后兩個殘基(His-Leu)作用于血管緊張素I，形成八肽血管緊張素II。血管緊張素II八肽展示出強的血管收縮活性，因此提高了血壓。導致血管緊張II的水平降低的ACE抑制能預防血管收縮，以及由此預防高血壓。[0006]除了切割血管緊張素I之外，ACE還水解緩激肽，這是一種也參與血壓調節的九肽。在后一機制中，ACE抑制導致緩激肽水平增加，其促進血管舒張并且降低血壓。因此抑制ACE能通過至少兩種獨立的機制產生降低血壓的效果。[0007]人們還已知，八肽血管緊張素II會刺激腎上腺皮質釋放醛固酮。醛固酮的靶器官是腎臟，在該處，醛固酮促進了從腎小管對鈉的再吸收的增加。通過該第三種機制，ACE抑制也能降低血壓，但是在這種情況下，是通過減少鈉的再吸收來實現的。[0008]由于其多種生理效果，抑制ACE的蛋白水解活性成為降低血壓的有效方法。該觀察結果已導致了大量有效藥物降血壓產品的出現，例如，卡托普利(captopril)和依那普利(enalapril)(Ondetti,M.A.etal.,1977,Science,WashingtonDC,196，441-444)。[0009]因為高血壓是相對普遍的疾病，所以用具有溫和活性的天然成分抵消現代生活方式的這種不良后果將是有利的。特別地，可包括進食物或飲料產品之中的具有溫和活性的天然成分是有利的，因為此類產品可用于日常消耗。或者，此類具有溫和活性的天然成分可被包括進膳食補充劑。最近數十年已經發現，發酵奶中存在的特殊的肽具有ACE抑制能力，其可在高血壓個體中誘導血壓降低。如今，大量的體外試驗和一些動物試驗已展示了從多種蛋白來源獲得的不同的肽的ACE抑制效果。雖然體外ACE抑制試驗已揭示了許多不同的肽序列，但必須強調，ACE抑制肽需在血液中循環以施加體內作用。這暗示著:治療用的ACE抑制肽應能抵抗胃腸蛋白水解消化系統的降解，并且應在隨后的腸壁運輸過程中保持完整。[0010]對多種ACE抑制肽的結構-功能研究已表明，它們通常在其C末端序列具有Pro-Pro、Ala-Pro或Ala-Hyp(Maruyama,S.andSuzuki,H.,1982;AgricBiolChem.，46(5):1393-1394)。該發現被ACE是不能切割涉及脯氨酸的肽鍵的肽基(p印tidyl)二肽酶(EC3.4.15.1)這一事實部分地解釋。由此，不能從具有結構Xaa-Pro-Pro的三肽移出二肽Pro-Pro,因為Xaa-Pro鍵無法被切割。因此可想到，如果具有結構Xaa-Pro-Pro的三肽以相對高的濃度存在，其將抑制ACE活性。因為不僅是ACE，而是幾乎所有的蛋白水解酶都難于切割Xaa-PiO或Ρι.0-Ρι.0鍵，(多個)脯氨酸殘基在肽的羧基末端的存在導致相對具有蛋白酶抗性的分子這一觀點是基本能自圓其說的。類似地，含有羥脯氨酸(Hyp)代替脯氨酸的肽也是相對具有蛋白酶抗性的。由此可推斷出，在其羧基末端攜帶有一個或多個(羥)脯氨酸殘基的肽可能逃避胃腸道中的蛋白水解降解。這些推論將幫助我們理解特定的ACE抑制肽顯著的體內血壓降低效果:它們不僅符合ACE抑制的結構要求，它們還能抵抗胃道蛋白水解消化系統的降解，并且在隨后的腸壁運輸過程中保持完整。[0011]已報道了三肽Leu-Pro-ProCJPO2O36I27)、Val-Pro-Pro(EPO583OM)和Ile-Pro-Pro(J.DairySc1.78:777-7831995)的強ACE抑制活性。最初，所有的ACE抑制肽都基于其對于ACE活性的體外作用被分析，三肽Ile-Pro-Pro(下文中稱為IPP)、Val-Pro-Pro(下文中稱為VPP)以及Leu-Pro-Pro(下文中稱為LPP)由于其強的ACE抑制效果導致相對低的IC50值從而凸顯出來。之后在自發高血壓的大鼠中可驗證三肽VPP和IPP的假設抗高血壓效果(Nakamuraetal.,J.DairySc1.，78:12531257(1995))。在這些實驗中，從經乳酸細菌發酵的牛奶獲得抑制性三肽。在奶發酵期間，通過生長中的乳酸細菌產生的蛋白酶來生產想要的肽。該發酵方法的缺陷是，乳酸細菌是活的生物，其排出的酶的類型和量都難于控制。因此，對ACE抑制肽的生產難于重現，并且還不太可能產生酶的最優組合以確保所需肽的最大產率。此外，需要的發酵時間相對較長，這與低產率一起暗示了這種生物活性肽的成本結構不受歡迎。此外，發酵制品不太適于被直接包括進a.ο.固體食物之中，這會產生嚴格的感官局限。此類發酵奶制品的不良口感以及從此類發酵培養液回收ACE抑制肽期間遇到的很多加工困難已在US6，428，812中描述過。盡管有這些缺點，發酵奶制品已作為口服血管減壓劑(vasodepressor)被用于實際應用。已用電透析、中空纖維膜透析或色譜方法從發酵奶制品中濃縮了ACE抑制肽，使得它們能以經濃縮膳食補充劑形式(例如片劑或錠劑)上市。[0012]上面提到的發酵生產途徑的缺陷在a.ο.專利申請W001/68115和EP1231279中認識到。在后一申請中，描述了一種純的酶促方法，以從奶酪蛋白中回收三肽Val-Ρ---Ριχ)和Ile-Pro-Pro0該申請要求保護一種用于生產這些三肽的方法，所述方法通過用一種蛋白酶和一種肽酶通過中間產物肽消化含有奶酪蛋白的材料來實現。這些酶溫育中的每一步可長達12小時，并且在易于導致微生物污染物生長的條件下進行。在與肽酶溫育之前，優選對中間產物肽加以純化，只有在對中間產物肽的額外的色譜純化步驟之后才能獲得高終濃度的ACE抑制肽。【
發明內容】[0013]在科學文獻中，很多種不同的肽和水解產物已與血壓降低作用關聯起來。此外，已知很多生理機制涉及對血壓的調控。根據本發明，通過選擇合適的蛋白底物(水解后其將產生具有IPP的肽級分，IPP作為主要的血壓降低組分)，使得涉及的肽和生理機制最小化。我們已發現:K酪蛋白，以及更優選地，來自K-酪蛋白的糖巨肽(GMP)形成了肽級分的優選的起始點。在由此產生的血壓降低肽混合物以及級分中，尤其是IPP發揮了重要作用。與現有技術的水解方法(其導致產生了IPP、VPP以及很多其它具有潛在生物活性的肽的混合物)相反，本發明的方法涉及直接生產IPP，由此防止例如VPP的生產。根據本發明，優選地，用分子量小于20kDa(優選小于IOkDa)且在其氨基酸序列中包含-1-P-P-序列的的蛋白質作為起始蛋白。如前所述，GMP是優選的底物蛋白。GMP可從本文下述的K-酪蛋白獲得。牛奶是K-酪蛋白的優選來源。還可使用來自其它哺乳動物的奶，例如來自山羊的奶，只要K酪蛋白分子的GMP部分包含-1PP-序列即可。因為并非所有的K酪蛋白都可被牛凝乳酶切割，可能需要使用更合適的凝固酶(clottingenzyme)來獲得GMP部分。[0014]本發明公開了在其氨基酸序列中存在的-1-P-P-是-V-P-P-的至少6倍高的蛋白(或蛋白或肽的混合物)的用途。優選地，在蛋白或肽序列中不存在-V-P-P-序列(或者在用作為水解底物的蛋白或肽混合物中的序列中不存在)。優選的蛋白來源是不含-V-P-P-的蛋白或肽，或蛋白或肽的混合物，其中包含所述不含-V-P-P-的蛋白。因此，該混合物優選包含至少50%,更優選至少80%,進一步更優選至少90%,以及最優選至少95%(w/w)的不含-V-P-P-的蛋白或肽。更優選地，所述-V-P-P-序列是-P-V-P-P-或-A-V-P-P-序列。[0015]此類蛋白的優選的例子是GMP(可從牛奶獲得的糖巨肽)。[0016]本發明的一個目的是提供純的狀態的血壓降低肽IPP，即沒有被顯著量的VPP肽污染。[0017]本發明的另一個目的是提供以高濃縮形式存在的血壓降低肽IPP，而無需使用昂貴的純化步驟。[0018]本發明的另一個目的是提供在無苦味配方中存在的血壓降低肽IPP。該無苦味的配方優選具有實施例8中所定義的2或更小的苦味強度。[0019]本發明的另一個目的是提供一種酶促方法，所述方法從K酪蛋白的GMP部分選擇性切割IPP，其中優選使用脯氨酸特異性蛋白酶來進行，更優選地，使用脯氨酸特異性內切蛋白酶，以及最優選地，使用具有酸性最優pH的脯氨酸特異性內切蛋白酶。[0020]本發明的另一個目的是提供一種酶促方法，所述方法從GMP選擇性產生IPP，其中，優選地，先將GMP與氨基肽酶溫育，隨后，優選在所述氨基肽酶不再具有活性的條件下，將GMP與脯氨酸特異性蛋白酶溫育。[0021]本發明的另一個目的是提供一種包含IPP的組合物，并且同樣的配方中不存在阿片月太(opioidpeptides)。[0022]本發明的另一個目的是提供一種包含IPP的組合物，其存在于低過敏原的配方中。[0023]本發明的另一個目的是提供一種包含處于肽混合物中的IPP的組合物，所述肽混合物具有低于30%、優選低于20%、更優選低于15%的水解程度。[0024]本發明的另一個目的是提供一種包含水解產物的組合物，所述水解產物包含IPP并且具有低于30%、優選低于20%、更優選低于15%的水解程度。優選地，所述水解產物具有至少1%的水解程度，更優選至少2%的水解程度。[0025]本發明的另一個目的是提供包含IPP的組合物，其還包含不超過10%(w/w)、優選地不超過7%、最優選地不超過3%的游離氨基酸水平。[0026]本發明的另一個目的是提供一種方法，用于從經酸沉淀的酪蛋白回收K酪蛋白的GMP部分。[0027]此外，本發明提供了本發明的組合物，或者通過本發明的方法生產的組合物用作為營養藥物(優選地，藥劑)的用途，用于生產營養藥物(優選地，藥劑)的用途，用于改善健康或預防和/或治療疾病的用途，或者用于生產用于預防或治療疾病(例如，高血壓、心力衰竭、前糖尿病或糖尿病、肥胖、葡萄糖耐受不良或應激)的營養藥物(優選地，藥劑)的用途。[0028]優選地，本發明的組合物為膳食補充劑的形式，為個人護理用品的形式，包括洗液、凝膠或乳液形式的局部用品或者作為食物、飼料或寵物食品的成分。[0029]本發明的組合物可用于生產用于預防肥胖或用于體重控制的功能性食物產品，或者用于生產用于心血管健康保持的功能性食物產品，優選地，所述心血管健康保持包括抑制血管緊張素轉化酶或者控制血液膽固醇水平。[0030]本發明的組合物可用于能向消費者提供健康益處的食物產品，所述健康益處優選選自預防肥胖、體重控制和心血管健康保持。[0031]該功能性食物產品優選包含一種或多種B族維生素或3至25wt%的固醇。[0032]本發明還提供了一種方法，用于制備食物產品、飲料產品或膳食補充劑，所述方法包括生產本發明的組合物或生產通過本發明的方法生產的組合物，以及將所述組合物包括進食物產品、飲料產品或膳食補充劑之中。[0033]優選地，該食物產品、飲料產品或膳食補充劑選自植物黃油、涂抹醬、黃油、乳制品或含乳清飲料的組，優選地，基于酸奶或奶的產品，例如酸奶或奶。[0034]發明詳沭[0035]本發明涉及一種方法，其中，肽IPP以高產量產生，優選地，從小分子量的蛋白質產生，所述蛋白質在其氨基酸序列中具有相對-V-P-P-含量而言高含量的-1-P-P-。優選地，使用K酪蛋白，更優選地，使用K-酪蛋白的GMP級分。優選地,所述方法包括單一酶促溫育步驟。雖然根據本發明的方法對于所用的蛋白質底物高度特異，但是可以使用多種不同的蛋白水解酶制劑來獲得相對純狀態的血壓降低活性。可以使用合適的蛋白水解酶制劑，從單種酶到復合酶混合物均可使用。優選地，使用在脯氨酸羧基末端進行切割的單種酶，優選地，該酶是脯氨酸特異性蛋白酶或者脯氨酸特異性寡肽酶。優選地，底物分子包括-A-1-P-P-或者-P-1-P-P-序列。此外，可以使用脯氨酸特異性內切蛋白酶與合適的氨基肽酶的組合。在后一種情況中，優選地，先在優選近中性條件(例如PH5至8)下用含有GMP的級分與氨基肽酶一起溫育。該手段還允許使用包括有-X-1-P-P-序列的底物，其中，X可代表任何氨基酸殘基。優選地,在對氨基肽酶失活或者在氨基肽酶不具有活性的pH條件下，用N-末端被截短的GMP分子與脯氨酸特異性蛋白酶一起溫育。優選地，在脯氨酸羧基末端進行切割的蛋白酶(例如脯氨酸特異性內切蛋白酶)以及氨基肽酶活性不含任何污染性的內切蛋白酶活性。優選地，在脯氨酸羧基末端進行切割的蛋白酶(例如脯氨酸特異性內切蛋白酶)以及氨基肽酶活性不含污染性的羧基肽酶活性。不含污染性內切蛋白酶活性的脯氨酸特異性內切蛋白酶是具有優選地大于I的ProlSpecact/Endo比的酶制劑,更優選地，大于100。不含污染性內切蛋白酶活性的氨基肽酶是具有優選地至少0.1的AP/Endo比的酶制劑，更優選地，至少0.5，最優選地，至少I。[0036]不含污染性羧基肽酶活性的脯氨酸特異性內切蛋白酶是具有優選地至少I的ProSpecact/CPD比的酶制劑,更優選地,至少10。[0037]不含污染性羧基肽酶活性的氨基肽酶活性是具有優選地至少0.1的AP/CPD比的酶制劑，更優選地，至少0.3。上面提到的比例按照實施例5所述來測定。[0038]優選地，蛋白序列中存在的-1-P-P-序列中的至少20%、更優選至少40%、或者進一步更優選至少60%以及最優選至少70%被轉化為肽IPP。脯氨酸特異性內切蛋白酶優選能水解大的蛋白分子，例如底物蛋白質本身。根據本發明的方法具有通常少于24小時的溫育時間，優選地，溫育時間少于10小時，更優選地，少于4小時。溫育溫度通常高于30°C，優選地，高于40°C，更優選地，高于50°C。本發明的另一方面是從可溶的水解產物通過傾析、離心或通過過濾純化含IPP的肽混合物的方法。[0039]本發明還公開了:[0040]-肽組合物,其包含I至5mg的IPP/g(基于干物質,基于蛋白質),或者20至50mgIPP/g(基于干物質，基于蛋白質)，以及[0041]-肽組合物，其包含15-90%(wt干物質)的肽，以及至少20mgIPP/g(基于干物質，基于蛋白質)，優選地，20至IOOmgIPP/g(基于干物質，基于蛋白質)。[0042]在現有技術中，三肽IPP、VPP和LPP已被描述為有效的ACE抑制劑。如可從已知的氨基酸序列判斷的，牛奶的乳清蛋白不包括對應于這三種ACE抑制三肽中任何一種的氨基酸序列。因此，不能從乳清蛋白中分離IPP、VPP和LPP。但是，這些肽確實存在于牛奶的酪蛋白級分中。例如，β-酪蛋白包括-1-P-P_(74-76)、-V-P-P-(84-86)以及-L-P-P-(151-153)序列。此外，K-酪蛋白還包括-1-P-P-，但是不含另外兩種序列。K酪蛋白中存在的IPP序列位于109-110位，即，K酪蛋白中獨特的凝乳酶Phe(105)-Met(106)切割位點羧基末端數個氨基酸的位置。因此，在K酪蛋白中，-1-P-P-序列位于該分子的GMP部分。本發明的發明人已發現:在通過酶凝固的奶中，可以在奶酪乳清中發現從K酪蛋白獲得的IPP物質；在通過酸凝固的奶中，可以在沉淀的酪蛋白部分發現。[0043]雖然按重量考慮K-酪蛋白并非酪蛋白的重要級分是事實，但本發明的發明人注意到從分子角度看，其存在是相當有意義的。例如酪蛋白以每立方米奶大約400毫摩爾的濃度存在，K-酪蛋白以每立方米奶大約180毫摩爾的濃度存在。此外，在奶酪乳清中，GMP是重要的級分。雖然組合的血清蛋白的濃度為每立方米320毫摩爾，但是GMP以每立方米奶酪乳清400毫摩爾的濃度存在。[0044]令人吃驚地，可以容易地獲得GMP。根據本發明，可以通過用凝乳酶在選定的pH條件下進行酶處理，從經酸沉淀的酪蛋白選擇性釋放GMP。雖然從奶酪乳清中分離GMP更加困難，但是已知一些工業方法，其中能獲得富含GMP的乳清級分。這些用上述已知方法獲得的可商購富GMP級分目前用于多種營養藥物應用。[0045]在本申請中，我們描述了GMP作為優選的起始材料用于獲得以高純狀態存在的血壓降低IPP的用途。[0046]典型地，奶的蛋白級分包括膠束酪蛋白級分以及經增溶的乳清蛋白級分。從定量角度來說，乳清蛋白中β_乳球蛋白和α-乳清蛋白是最重要的。從定量角度來說，酪蛋白中，相對疏水的α-酪蛋白和β_酪蛋白占據主要地位。酪蛋白膠束通過K-酪蛋白保持在溶液中。K酪蛋白的親水部分，即所謂的糖巨肽從膠束表面產生，由此對水溶液中的疏水酪蛋白加以穩定。[0047]根據大量已良好建立的工業方法，可從奶中分離酪蛋白級分，例如用于制作奶酪。在這些方法之一中，對奶進行酸化，以從奶中選擇性沉淀酪蛋白級分。經酸沉淀的物質包括所有酪蛋白，即α酪蛋白、β酪蛋白、K酪蛋白和Y酪蛋白。未沉淀的經酸化奶級分被稱為“乳清漿(wheyserum)”。在另一種方法中，將奶與奶凝固酶一起溫育，例如與牛凝乳酶一起溫育(凝乳酶處理“rennet”)。凝乳酶是一種蛋白酶，其非常有選擇性地切割κ-酪蛋白的Phe(105)-Met(106)肽鍵。通過該反應，κ-酪蛋白的疏水GMP部分被切下，這導致膠束酪蛋白級分的立即聚集和沉淀。在這種情況下，沉淀的酪蛋白級分被稱為“凝乳(curd)”。隨著K酪蛋白的GMP部分被切下，該酶促手段中，親水的GMP片段與多種漿蛋白保持在溶液中，形成所謂“奶酪”或“甜”乳清。[0048]多篇公開文獻要求保護消耗富含GMP的奶級分而產生的生理益處。此外，大量公開文獻描述了分離富含GMP的奶酪乳清級分的具有成本效益的途徑。例如，在EP1037537中描述了超濾的使用，在US6787158中描述了陰離子樹脂的使用。[0049]本發明的一個方面涉及用GMP的水解產物作為血壓降低試劑。我們已發現，GMP中相對高水平的IPP以及具有羧基末端脯氨酸的其它肽可與血壓降低作用相關。[0050]水解產物指通過對底物蛋白質水解形成的產物(蛋白水解產物或經水解的蛋白)，可溶的水解產物是蛋白水解產物的(水)可溶性級分，其還在本文中被描述為含有可溶肽的組合物或者包含可溶肽的組合物，或蛋白水解產物和可溶水解產物的混合物。[0051]“肽”或“寡肽”在本文中被定義為通過肽鍵連接的至少兩個氨基酸的鏈。術語“肽”和“寡肽”被認為是同義詞(如通常所認識的那樣)，根據上下文需要，每個術語可互換使用。“多肽”或“蛋白質”在本文中被定義為包含超過30個氨基酸殘基的鏈。本文中所有(寡)肽和多肽的結構式或序列都是從左至右按照從氨基端到羧基端的方向書寫的，與通常實踐一致。本文中使用的單字母氨基酸代碼在本領域中是公知的，其可以在Sambrook，etal.(MolecularCloning:ALaboratoryManual,2nd,ed.ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarborLaboratoryPress,ColdSpringHarbor,NY,1989)中找到。[0052]阿片肽是可結合鴉片劑受體的肽。[0053]對所有酶進行分類和命名的、來自IUMB的國際承認的體系包括蛋白酶。用于蛋白酶EC號碼的更新的IUMB文本可在互聯網站點http://www.chem.qmw/ac.uk/iubmb/enZyme/EC3/4/ll/找到。在該系統中，按照其催化單一反應的事實對酶進行定義。這具有下述重要暗示:若干種不同的蛋白質均被描述為同一種酶，而能催化超過一種反應的蛋白質卻被當作不止一種酶。該系統將蛋白酶分為內切蛋白酶和外切蛋白酶。內切蛋白酶是催化內部肽鍵水解的那些酶，外切蛋白酶則水解與末端^!-氨基鄰近的肽鍵(“氨基肽酶”)，或末端羧基與倒數第二個氨基酸之間的肽鍵(“羧基肽酶”)。內切蛋白酶基于催化機制被分為多個亞-亞組。存在有下述亞-亞組:絲氨酸內切蛋白酶(EC3.4.21)、半胱氨酸內切蛋白酶(E.C3.4.22)、天冬氨酸內切蛋白酶(EC3.4.23)、金屬內切蛋白酶(EC3.4.24)和蘇氨酸內切蛋白酶(EC3.4.25)。[0054]氨基肽酶在3.4.11組中。亞分組基于除去20種不同氨基酸的相對效率。可區分開具有窄的和寬的特異性的氨基肽酶。氨基肽酶可從蛋白質和肽底物順序除去單個的氨基末端氨基酸。具有窄特異性的氨基肽酶展示出對于在Pi位置上從底物肽釋放的氨基酸殘基類型的強烈偏好。寬特異性的氨基肽酶能在N-末端或Pl位置釋放一定范圍的不同氨基酸(按照Schechter的命名法:Schechter,1.AndBerger,A.1967.BiochemBiophysResCommun27:157-162)。羧基肽酶能從蛋白質和肽底物順序除去單個的羧基末端氨基酸。與內切蛋白酶的情況相當，羧基肽酶基于催化機制被分為多個亞-亞組。絲氨酸型羧基肽酶處于EC3.4.16組，金屬羧基肽酶處于EC3.4.17組，半胱氨酸型羧基肽酶處于EC3.4.18組。針對蛋白酶的EC表的值用于提供針對多種類型的蛋白酶活性的標準術語，尤其用于向每種蛋白酶分配獨特的身份號碼以及推薦名稱。[0055]K酪蛋白分子的GMP部分是長度為64個氨基酸殘基的多態。如果所有IPP都被定量回收，純的GMP制劑可產生大約5%(w/w)的IPP濃度，而沒有被VPP和LPP顯著污染。在本申請中，我們描述了多種蛋白水解方法，用于從GMP多肽分離IPP三肽，可選地，在單一溫育步驟中并且以高產量進行。因此，根據本發明的方法，可獲得包含IPP的組合物，其中，IPP的濃度足夠高到可以在簡單純化步驟直接或間接使用，而無需復雜的高成本的純化過程，例如色譜分離或純化。[0056]根據第一種蛋白水解方法，將經分離的GMP分子與復合微生物蛋白酶制劑(例如SumizymeFP(ShinNihon)或Flavourzyme(NOVO)或Umamizyme(Amano))一起溫育。SumizymeFP、Flavourzyme和Umamizyme是含有多種內切蛋白水解酶加外切蛋白水解活性(例如氨基肽酶和羧基肽酶)的酶制劑。通過對酶劑量和PH條件的仔細選擇，我們已能使用SumizymeFP或Flavourzyme制劑在單一溫育步驟中獲得IPP三肽。但是,該第一種蛋白水解策略的缺點在于，通過存在的多種酶活性可形成多種不同的肽。此外，產生相對高含量的游離氨基酸，如果不進行進一步純化的話，這將導致最終含有IPP的產物出現肉湯味的異味。[0057]根據第二種蛋白水解方法，將經分離的GMP分子與脯氨酸特異性寡肽酶(EC3.4.21.26)或脯氨酸特異性內切肽酶一起溫育。在該手段中，這兩種類型的酶獨特的特異性被有利地使用。兩種類型的脯氨酸特異性蛋白酶優選水解肽鍵——脯氨酸殘基的C末端。但是，這兩種酶固有的副作用是對丙氨酸殘基的C-末端進行水解。因為存在于GMP中的-1-P-P-序列N末端前是丙氨酸殘基，因此將GMP與純的脯氨酸特異性寡肽酶或純的脯氨酸特異性內切肽酶一起溫育直接產生IPP。該途徑的重要優點是在不產生污染性的大量其它肽(能導致非常苦的異味以及甚至施加不想要的生物活性)的情況下獲得高的IPP產率。此外，在該過程期間幾乎沒有游離氨基酸殘生，使得獲得具有高濃度IPP的味道溫和的產物。[0058]根據另一種蛋白水解方法，首先將經分離的GMP分子與氨基肽酶一起溫育，以除去GMP中IPP序列之前的GMPN-末端氨基酸(Met和Ala)。僅在該次溫育之后，才將脯氨酸特異性蛋白酶加入到反應混合物中，以釋放IPP肽。優選地，在用脯氨酸特異性蛋白酶溫育期間或之后氨基肽酶不再有活性。我們已經發現，該手段導致更高的IPP產率，并且仍然不會導致異味產生，并且很少導致終產物中存在的游離氨基酸產生。此外，IPP以相對其它肽的高含量存在，尤其是相對三肽。制備的IPP可被進一步與較大的肽分離。因為氨基肽酶能從肽的N-末端側順序性除去氨基酸，因此需要氨基肽解酶活性，其可高效釋放IPP序列之前的甲硫氨酸(“M”)和丙氨酸(“A”)殘基。IPP三肽中存在的1-P和P-P肽鍵被發現能抵抗酶促切割，并且在對完整GMP分子進行溫育之后，這種氨基肽解活性將截短GMP分子的N-末端，以便從序列IPP開始。[0059]具有想要的氨基肽酶活性的商業酶制劑是CorolaseLAP(AB酶)。CorolaseLAP代表相對純的、克隆的且過量表達的亮氨酸氨基肽酶活性，其來自Aspergillus。因為，該制劑缺乏非特異性的內切蛋白水解活性以及羧基肽解活性，因此阻止了對GMP底物分子的不想要的切割。具有相對廣的特異性的另一克隆的過量表達氨基肽酶是來自A.niger的氨基肽酶(W002/068623的SEQID171)。[0060]最后我們已注意到，GMP還可有利地用于下述方法，其中通過發酵途徑產生IPP。如實施例中所闡述的，將GMP與特定乳酸桿菌一起溫育產生IPP，并且不產生對于全奶發酵來說特征性的異味。[0061]所有上述方面都特別重要，因為其允許生產高度標準化的產品，而沒有不想要的生物活性或者味道或者氣味。此類高度標準化的產品無須進行隨后的純化步驟即可被包括進多種食物應用或者經濃縮的膳食產品(例如片劑或錠劑)。可以通過選擇性除去并非IPP的肽，獲得含有甚至更高的IPP濃度的高度標準化產品，例如，生產更小的片劑或錠劑。除去沒有顯著的血壓降低活性的肽可以例如通過下述方法來進行:沉淀這些非活性肽，接著進行(超)過濾或傾析步驟。在另一種手段中，可通過隨后的純化來進一步增加生物活性成分的濃度，其中，使用肽IPP非常疏水這一特征。這些純化方法包括納米過濾、萃取(例如用丁醇來進行)接著蒸發/沉淀，或將獲得的經酸化水解產物與粘合劑接觸，所述粘合劑例如活性碳或色譜樹脂，例如來自AmberliteXAD范圍的(Rohm)的。此外，可以使用例如Pharmacia提供的丁基瓊脂糖樹脂。將血壓降低肽從此類材料上解吸附下來可用有機溶劑(例如甲醇/乙醇混合物或用丙醇)來進行。此外，使用CO2或N2O進行的超臨界萃取也可用于獲得高度純化的生物活性肽。[0062]在EP1231279中，描述了一種純粹的酶促方法，用于從奶的酪蛋白回收三肽VPP和IPP。該申請要求保護一種用于生產三肽的方法，所述方法通過一種蛋白酶和一種肽酶對含有奶酪蛋白的材料進行消化來實現，這通過所謂的“中間產物肽”進行，所述“中間產物肽”選自由含有序列-V-P-P-但是除了該序列中的Pro之外不含Pro的肽，以及含有序列-1-P-P但是除了該序列中的Pro之外不含Pro的肽構成的組。如EP1231279的實施例所述，該方法涉及兩步過程。首先，產生包含Val-Pro-Pro或Ile-Pro-Pro的中間產物肽。這通過將酪蛋白與合適的蛋白酶溫育來進行。根據實施例之一，在37攝氏度進行12小時的時間。然后通過將該第一種水解產物加熱至100攝氏度3分鐘來失活所用的蛋白酶，再次冷卻之后，加入另一種酶制劑(事實上，具有外切蛋白水解活性的制劑)。用該另一酶制劑在37攝氏度再溫育12小時后，可展示出三肽V-P-P和1-P-P的存在。為獲得這些ACE抑制肽的更高產率，EP1231279還建議在暴露給外切蛋白水解活性之前對中間產物肽進行純化和濃縮。EP1231279還建議，在該工藝中，在獲得中間產物肽之后，并且在中間產物肽與肽酶接觸之前，可選地，可進行多種操作，例如，通過例如在5000至20000rpm下離心3至10分鐘去除未反應的蛋白。因此，以工業方式而非不實用的兩步酶促工藝來獲得想要的三肽。因為每次酶溫育要在PH4.5至7.0以及25至50攝氏度的溫度下進行長達12小時，明顯地，從微生物學的角度來看，該工藝也是難以接受的。上述長的溫育時間與25至50°C的低溫育溫度的組合可能容易導致含蛋白的溶液被感染。[0063]較之EP1231279所述的方法，本申請中指出的創造性步驟地優勢是顯而易見的。首先，本申請描述了僅使用K酪蛋白的GMP片段。由此，將僅釋放IPP，而已知被酪蛋白所包含的其它很多可能非常苦的肽并不產生。第二，使用脯氨酸特異性蛋白酶進行的根據本發明的溫育是在單個溫育步驟中通過單種純的酶來進行。因為脯氨酸特異性蛋白酶非常具有選擇性的切割模式(這是該特殊內切蛋白酶所固有的)，想要的IPP肽立即釋放出來，同時僅有非常有限數量的其它肽釋放。令人吃驚地，并沒有EP1232279中提到的“中間產物肽”的形成。第三，根據本發明的溫育(其中，GMP酪蛋白片段先與純的氨基肽酶溫育，然后再與脯氨酸特異性蛋白酶溫育)與EP1232279中描述的途徑實質上是不同的，本發明的溫育高效釋放IPP，并且具有最小水平的污染性肽和游離氨基酸。優選的溫育用氨基肽酶(根據EP1232279的“肽酶”)開始，代替蛋白酶(proteinase)，并且不產生“中間產物肽”。在后來的步驟中，使用內切蛋白酶代替蛋白酶(proteinase)，同樣沒有“中間產物肽”形成。[0064]盡管存在針對現有技術產品提到的缺點，經發酵的奶制品已作為經口施予的被用于實踐應用。也已通過電滲析、中空纖維膜滲析或色譜方法從經發酵奶制品濃縮出了ACE抑制肽，使得它們可以以經濃縮膳食補充劑(例如片劑或錠劑)上市。[0065]本發明的一個目的是提供純的狀態的肽IPP，即沒有例如VPP或LPP的肽顯著地污染的IPP。[0066]本發明的另一個目的是提供以高濃縮形式存在的肽IPP，而無需使用昂貴的純化步驟。[0067]本發明的另一個目的是提供在無苦味配方中存在的血壓降低肽IPP。[0068]本發明涉及含肽組合物，用作為營養藥物，優選地，藥劑。本發明還涉及本發明的含肽組合物作為營養藥物(優選地，藥劑)的用途，涉及本發明的含肽組合物用于生產營養藥物(優選地，藥劑)的用途，涉及本發明的含肽組合物用于改善健康或預防和/或治療疾病的用途，涉及本發明的含肽組合物用于生產營養藥物(優選地，藥劑)的用途，涉及本發明的含肽組合物用于治療心血管疾病(例如高血壓或心力衰竭)的用途，涉及本發明的含肽組合物用于治療前糖尿病或糖尿病的用途，涉及本發明的含肽組合物用于治療或預防肥胖的用途，涉及本發明的含肽組合物用于增加血漿胰島素或用于增加對于血漿胰島素的敏感性的用途，涉及本發明的含肽組合物用于增加血漿胰島素或用于增加2型糖尿病或前糖尿病的血漿胰島素的敏感性的用途，涉及本發明的含肽組合物用于降低2型糖尿病或前糖尿病血液中餐后葡萄糖濃度的用途，涉及本發明的含肽組合物用于增加2型糖尿病或前糖尿病血液中餐后胰島素分泌的用途，涉及本發明的含肽組合物的下述用途，其中，本發明的含肽組合物是膳食補充劑的形式，涉及本發明的含肽組合物用于生產對應激影響進行治療性處理的功能性食物產品的用途，涉及本發明的含肽組合物在局部應用(優選地，在個人護理應用)中的用途，以及涉及本發明的含肽組合物在飼料和寵物食品中的用途。[0069]此外，本發明涉及一種方法，所述方法用于治療I型和2型糖尿病，以及用于在具有前糖尿病或葡萄糖耐受不良(IGT)的個體中預防2型糖尿病，所述方法包括向需要此類治療的個體施予本發明的含肽組合物，本發明還涉及一種方法，用于治療遭受高血壓或心力衰竭的人群，或者用于對其進行預防，所述方法包括向需要此類治療的個體施予本發明的含肽組合物，以及，展示出降血壓效果。對ACE的抑制導致血管收縮減少，血管舒張增加，鈉和水排出提高，這進而導致外周血管抵抗(periphralvascularresistance)降低以及血壓降低，以及局部血流改善。因此，本發明的包含肽的水解產物對于預防和治療可受ACE抑制影響的疾病特別有用，所述疾病包括但不限于，高血壓、心力衰竭、心絞痛、動脈梗塞、中風、外周動脈障礙疾病、動脈硬化、腎病、腎功能不全、勃起障礙、內皮功能障礙、左心室肥大、糖尿病血管并發癥、液體潴留(fluidretention)以及醛固酮增多癥。組合物還可用于預防和治療胃腸紊亂(腹灣、腸易激綜合征(irritablebowelsyndrome))、炎癥、糖尿病、肥胖、癡呆、癲癇、老年性意識錯亂以及Meniere’s綜合征。此外，組合物可增強認知功能和記憶力(包括Alzheimer’s癥)、飽腹感(satietyfeeling)、限制缺血性損傷以及預防動脈旁路(by-pass)手術或血管成形術(angioplasty)之后被再次占領。[0070]糖尿病是常見的慢性疾病，迄今為止沒有治愈方法。糖尿病的發病率和流行程度正呈指數增長，在發達國家和發展中國家其是最普遍的代謝紊亂之一。糖尿病是多種致病因素導致的復雜疾病，其特征為碳水化合物、蛋白質及脂肪代謝受損，這與胰島素分泌不足和/或與胰島素抗性相關。這會導致空腹及餐后的血清葡萄糖濃度升高，如果未被治療則會導致并發癥。此疾病有兩大類，胰島素依賴型糖尿病(IDDM，T1DM)和非胰島素依賴型糖尿病(NIDDM，T2DM)。TlDM=I型糖尿病。T2DM=2型糖尿病。[0071]TlDM及T2DM與高血糖、高膽固醇血和高脂血相關。TlDM及T2DM中，相應的胰島素的絕對缺乏和對胰島素的不敏感性會導致肝臟、肌肉和脂肪組織對葡萄糖的利用減少，并且導致血液中葡萄糖水平升高。由于微血管和大血管疾病的風險增加，未受控制的高血糖與增加的死亡率和過早死亡率相關，所述疾病包括腎病、神經病、視網膜病、高血壓、中風和心臟病。新近證據表明，嚴格血糖控制是預防TlDM及T2DM的上述并發癥的主要因素。因此，通過藥物或治療進行最優血糖控制，是治療糖尿病的重要手段。[0072]對T2DM的治療最初涉及膳食及生活方式的改變，當上述措施無法保持足夠的血糖控制時，就會用口服的降血糖制劑和/或外源胰島素對病人進行治療。目前用于治療T2DM的口服藥物制劑包括加強胰島素分泌的藥物(磺脲制劑)、增進胰島素在肝臟中作用的藥物(縮二胍制劑)、增加胰島素敏感性的制劑(噻唑烷二酮類)以及作用于抑制葡萄糖吸收的制劑(α-葡糖苷酶抑制劑)。然而，由于胰腺細胞功能的逐漸喪失導致高血糖逐漸惡化，目前可利用的藥物通常不能長期保持足夠的血糖控制。能夠保持目標血糖水平的病人比例在一定時間之后會顯著降低，因此必須施用額外/另外的藥物制劑。此外，所述藥物可能具有不想要的副作用，而且其同高無效率和高復發率聯系在一起。最后，降血糖藥物的使用可能對控制血液中葡萄糖水平有效，但其卻可能無法預防糖尿病的所有并發癥。因此，目前用于治療所有類型的糖尿病的方法不能達到令血糖量正常的目標，也無法預防糖尿病的并發癥。[0073]因此，雖然被選用于治療TlDM及T2DM的方法基本都基于施予胰島素和口服降血糖藥物，但人們卻需要副作用最小的安全有效的營養補充劑，用于糖尿病的治療和預防。很多病人都對另外的療法感興趣，所述療法能將與高劑量藥物相關的副作用降至最小，并能產生額外的臨床效益。糖尿病人對被認為是“自然的”治療特別感興趣，所述治療具有溫和的抗糖尿病效果，而且沒有大的副作用，其可被用作輔助治療。T2DM是逐漸發展的慢性疾病，其通常不為病人所知，直到產生胰島素的胰腺細胞(胰島的細胞)出現了明顯的損傷。因此，人們對于發展可用于針對風險人群，尤其是處于T2DM發展的高風險狀態的老年人預防β-細胞損傷以及因此預防明顯的T2DM發展的膳食補充劑的興趣也在增加。對胰腺β-細胞的保護可通過降低血液葡萄糖和/或脂類水平來獲得，因為葡萄糖和脂類對β-細胞造成損傷性影響。血液葡萄糖水平的降低可通過不同的機制來獲得，例如通過增強胰島素敏感性和/或通過降低肝對葡萄糖的生產來獲得。血液脂類水平的降低也可通過不同機制獲得，例如，通過增強脂類氧化和/或脂類貯藏來獲得。用于保護胰腺β-細胞的另一可能策略將是降低氧化脅迫。氧化脅迫還導致β-細胞損傷，以及隨后對胰島素分泌的損失，和向明顯的T2DM的發展。[0074]因此，T2DM是一種并發疾病，其源自多種器官位點上同時存在的缺陷:肌肉和脂肪組織中對胰島素作用的抗性、胰腺對胰島素的分泌有缺陷、肝臟中葡萄糖無限制的產生這些缺陷，伴隨脂肪異常和內皮功能障礙。因此，鑒于T2DM中的多種病理生理損傷，組合療法對其控制來說是有吸引力的手段。[0075]本發明涉及新穎的營養藥物組合物，所述組合物包含本發明的含肽組合物。包含本發明的含肽組合物的營養藥物組合物還可包含未水解蛋白和碳水化合物作為活性成份，用于治療或預防糖尿病，或與葡萄糖耐受不良相關的其它病況，例如X綜合征。另一方面，本發明涉及此類組合物作為營養補充劑在所述治療或預防中的用途，例如，作為包含維生素和礦物質的復合維生素制劑的添加劑，所述維生素和礦物質對維持正常代謝功能來說是必需的，但其卻不能在體內被合成。在另一個方面，本發明涉及一種方法，用于治療I型和2型糖尿病，以及用于在具有前糖尿病或葡萄糖耐受不良(IGT)或肥胖的個體中預防T2DM，所述方法包括向需要此類治療的個體施予本發明的含肽組合物，以及蛋白水解產物或未水解蛋白和/或碳水化合物。[0076]本發明的組合物特別用于治療TlDM和T2DM，以及用于在具有前糖尿病或葡萄糖耐受不良(IGT)的個體中預防T2DM。[0077]我們發現，本發明的含肽組合物可用于2型糖尿病或前糖尿病，優選地，用于降低餐后葡萄糖濃度，或者用于增加血液中餐后胰島素的分泌。[0078]包含肽以及可選地碳水化合物的組合物刺激胰島素分泌，增加葡萄糖向胰島素敏感性靶組織(例如脂肪組織、骨骼肌和肝臟)的分配，以及由此在對糖尿病的治療提供協同效果。[0079]通常認為，應激(stress)相關疾病，以及應激對身體的負面影響對于很多人有顯著的作用。近年來，在藥物和科學界，應激的影響，以及其對于多種疾病和病況發展的作用已獲得了更廣泛的接受。消費者現在逐漸認識到這些潛在的問題，并開始對于減少或預防應激對其健康的可能的負面作用產生逐漸增加的興趣。[0080]本發明的另一方面是提供適合用于幫助身體應付應激影響的食物產品，或可被包括進其中的成分。[0081]本發明的另一個目的是提供一種食物產品，其包括提供健康益處(諸如幫助身體應付應激的負面影響)的本發明的含肽組合物。[0082]術語“營養藥物”在本文中指同時在營養領域及制藥領域應用中的有用性。因此，所述新穎的營養藥物組合物可作為食物和飲料的補充劑，也可作為藥物制劑用于腸道或非腸道應用，所述制劑可以是固體制劑，例如膠囊或片劑，或是液體制劑，例如溶液或懸浮液。從前文明顯可知，術語“營養藥物組合物”還包含食物和飲料，其包含本發明的含肽組合物以及可選地碳水化合物，以及包含前述活性成份的補充性組合物，例如膳食補充劑。[0083]術語膳食補充劑在本文中指含有用以對膳食加以補充的“膳食成分”且通過嘴攝取的產品。這些產品中“膳食成分”可包括:維生素、礦物質、草本物質或其它植物性藥材(botanical)、氨基酸和酶、器官組織、腺體(glandular)和代謝產物等物質。膳食補充劑可以是提取物或濃縮物，其可以以多種形式出現，例如片劑、膠囊、軟明膠(softgels)、明膠膠囊(gelcaps)、液體或粉末。它們還可以是其它形式，例如條棒狀，但是如果它們是的話，膳食補充劑標簽上的信息通常將不把產品標示為傳統食品，或餐食或膳食中的唯一項目。[0084]本發明中的營養藥物組合物中還可以加入復合維生素及礦物質補充劑，以獲得足夠數量的必需營養物，所述營養物在某些膳食中是缺乏的。復合維生素及礦物質補充劑還可用于疾病預防和防止營養缺乏及缺陷，所述營養缺乏及缺陷是由于生活方式以及通常不充分的飲食模式造成的，這有時可見于糖尿病。此外，氧化應激也已被暗示與胰島素抗性的發展有牽連。活性氧物質(reactiveoxygenspecies)可能通過擾亂胰島素受體信號級聯過程來破壞由胰島素激發的葡萄糖吸收。用抗氧化劑，例如α-生育酚(維生素E)、抗壞血酸(維生素C)，來控制氧化應激對于治療糖尿病來說可能是有價值的。因此，復合維生素補充劑可添加到上述活性物質中，以保持良好的平衡營養。[0085]此外，本發明的含肽組合物與礦物質，例如鎂(Mg2+)、鈣(Ca2+)和/或鉀(K+)的組合可用于改善健康以及預防和/或治療疾病，包括但不限于心血管疾病和糖尿病。[0086]在本發明的一個優選方面，本發明的營養藥物組合物含有本發明的含肽組合物。IPP適合以向將被施予的個體提供每kg體重大約0.0Olg至每kg體重大約Ig的每日劑量的量存在于根據本發明的組合物中。食物或飲料適合含有每份大約0.05g至每份大約50g的IPP。如果營養藥物組合物是藥物制劑，此類制劑可以按每個劑量單位(例如每個膠囊或片劑)計，包含大約0.0Olg至大約Ig的量的IPP，或者，對液體制劑而言，按每份每日劑量計，分別包含大約0.035g至大約70g的量的IPP。本發明的含肽組合物適合以向將被施予的個體提供每kg體重大約0.0lg至每kg體重大約3g的每日劑量的量存在于根據本發明的組合物中。食物或飲料適合含有每份大約0.1g至每份大約IOOg的蛋白水解產物。如果營養藥物組合物是藥物制劑，此類制劑可以按每個劑量單位(例如，每個膠囊或片劑)計，包含大約0.0lg至大約5g的量的含肽組合物，或者，對液體制劑而言，按每份每日劑量計，包含大約0.7g至大約210g的量的含肽組合物。[0087]在本發明的另一個優選方面，組合物包含前面指出的本發明的肽以及可選地，碳水化合物。碳水化合物適合以向將被施予的個體提供每kg體重大約0.0lg至每kg體重大約7g的每日劑量的量存在于根據本發明的組合物中。食物或飲料適合含有每份大約0.5g至每份大約200g的碳水化合物。如果營養藥物組合物是藥物制劑，此類制劑可以按每個劑量單位(例如,每個膠囊或片劑)計,包含大約0.05g至大約IOg的量的碳水化合物,或者,對液體制劑而言，以每份每日劑量計，包含大約0.7g至大約490g的量的碳水化合物。[0088]劑暈范圍(對701^的人而言)[0089]【權利要求】1.包含水解產物的組合物，所述水解產物包含IPP，并且具有低于30%的水解程度。2.如權利要求1的組合物，其中所述水解程度低于20%。3.如權利要求1的組合物，其中所述水解程度低于15%。4.包含水解產物的組合物，所述水解產物包含IPP并且不含阿片肽。5.包含摩爾比在1.5至0.5之間的IPP和TSTP的組合物。6.如權利要求5的組合物，其中所述摩爾比在1.3至0.7之間。7.如權利要求1-6中任意一項所述的組合物，其中所述IPP是從GMP生產的不含顯著量VPP或LPP的IPP，所述IPP的生產方法包括:用GMP與脯氨酸特異性蛋白酶溫育，并且任選地，其中，先將GMP與氨基肽酶溫育，隨后與脯氨酸特異性內切蛋白酶溫育。8.如權利要求7所述的組合物，所述IPP的生產方法中，當加入所述脯氨酸特異性蛋白酶的時候所述氨基肽酶是沒有活性的。9.如權利要求7或8所述的組合物，所述IPP的生產方法中，在水解所述GMP期間形成的包括IPP的可溶肽被分離，以及可選地被干燥。10.肽組合物，其能通過如下方法獲得:用GMP與脯氨酸特異性蛋白酶溫育，并且任選地，其中，先將GMP與氨基肽酶溫育，隨后與脯氨酸特異性內切蛋白酶溫育，由此產生不含顯著量VPP或LPP的IPP。11.如權利要求10所述的肽組合物，所述方法中，當加入所述脯氨酸特異性蛋白酶的時候所述氨基肽酶是沒有活性的。12.如權利要求10或11所述的肽組合物，所述方法中，在水解所述GMP期間形成的包括IPP的可溶肽被分離，以及可選地被干燥。【文檔編號】A61P9/12GK103463615SQ201310272306【公開日】2013年12月25日申請日期:2006年2月23日優先權日:2005年2月24日【發明者】安德烈·利納爾杜斯·魯斯·德,彼得·馬里修斯·布瑞克·范德,路泊·伊登斯申請人:帝斯曼知識產權資產管理有限公司