復合辣木多肽及其制備方法和應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物制品技術領域，具體涉及復合辣木多肽及其制備方法和應用。
【背景技術】
[0002] 辣木為辣木科辣木屬植物，起源于印度西北部的喜馬拉雅山南麓。研宄發現，辣木 除了具備豐富的營養外，還用作治療糖尿病、高血壓、皮膚病、免疫力低下、貧血、骨骼疾病、 抗憂郁、關節炎、消化器官腫瘤等疾病。辣木作為一種功能性植物，有著廣闊的的開發前景。 辣木全株都可利用，營養物質種類多，辣木含粗蛋白為23. 0 %~43. 5 %，富含VA、VB、V。、Ve 及鈣、鉀、鐵等礦質營養元素，此外還含有人體必需的各種氨基酸和微量元素等，其營養價 值與現代營養學家稱為"人類營養的微型寶庫"。我國廣東的韶關和湛江、云南、海南和貴州 等地現有引種。
[0003] 目前，人們對于辣木的開發利用還處于比較粗放的階段，主要采用將其種子、葉子 等粉碎后直接添加到食物或保健品中的方式，這種方法的缺點在于對于營養成分的有效利 用不夠，且產品內的有效成分也不太明確。因此人們也開始嘗試利用酶解等方法將辣木中 的有效成分、特別是蛋白質進行分離，如中國發明專利CN 102669423 A《一種辣木提取物 及其制備方法和辣木飼料添加劑》，其借助特定的蛋白酶、纖維素酶和果膠酶的酶解作用， 將辣木葉本身大塊的、分子結構復雜的成分充分地水解成較小、易溶于水、生物利用度高的 小分子活性物質，然后通過水提醇沉方法獲得高收率和高質量的辣木提取物。該方法用辣 木葉為起始原料，因酶解溫度低、時間短，所得沉淀得到的酶解物分子量仍然較大，主要為 蛋白質，作為動物飼料添加劑使用。而中國發明專利CN 103652930 A《一種辣木鈣全營養 素及其制備方法》是采用生物質酶酶解和納米雙重破壁以及全程低溫萃取辣木中的有效成 分，然而該方法制備的仍然是100~200毫微米的超微辣木粉末而不是多肽。
[0004] 辣木中含有粗蛋白為23. 0%~43. 5%，比奶粉蛋白含量（21% )還高，不含膽固 醇，這部分蛋白質經酶解后得到的小分子多肽具有較高的生物活性，促進人體的新陳代謝， 抗氧化、保護心腦細胞的抗超氧自由基損傷，防治心腦血管疾病，緩解疲勞。多種植物中的 多肽是生物體內重要的低分子物質，具有許多生理功能，除作為RNA、DNA的前體外，也作為 生物化學過程的調節物質參與體內代謝，在細胞結構、代謝和調節功能方面起著重要作用， 因此多肽的研宄利用已成為生物制品研宄的方向。而傳統中藥材丹參含有?參酮、原兒茶 醛、原兒茶酸、丹參素、維生素E等:人參為五加科植物人參的干燥根，有人參皂甙、單糖、人 參酸、多鐘維牛素 、多種氨基酸等:枸杞為茄科棺物枸杞的成熟果實，含有枸杞多糖，酸漿紅 素、隱昔質、東莨菪素、胡蘿卜素 、核昔素 、煙酸、維牛素BKB2及C.種子含氨基酸等。目前， 以辣木為原材料進行深加工獲得小分子多肽，并結合傳統中醫制備復方產品的相關研宄尚 未見到記載。
[0005] 因此，有必要在這一方向展開進一步的研宄。
【發明內容】
[0006] 為了彌補現有技術的不足，本發明提供了復合辣木多肽及其制備方法和用途，通 過從辣木原材料中通過酶解法提取出辣木肽，并添加中藥制備成復方制劑，進一步在藥物、 食品等領域將其應用，使得辣木內的有效成分得到充分的利用。
[0007] 為了實現上述發明目的，本發明采用的技術方案如下：
[0008] 復合辣木多肽的制備方法，以辣木為主要原料，在受控蛋白酶作用下，低溫酶解制 備為分子量為1~IOKD的小分子多肽，按比例添加丹參、人參、枸杞提取物，混勻后噴霧干 燥，得到復合辣木多肽原料；具體制備過程包括以下步驟：
[0009] (1)取辣木原料，篩選、清洗、50~60°C干燥、粉碎成10目以下顆粒；
[0010] (2)將辣木顆粒加入其重量5~10倍的純凈水或蒸餾水，加熱至40~60°C，攪拌 下，調節pH值為5. 5~6. 5,加入蛋白酶，按重量份計辣木與酶的比例為100 :0. 1~1，酶解 4~6小時，分離上清液；
[0011] (3)將上一步所得的剩余殘渣加入3~5倍的純凈水或蒸餾水，按照第（2)步方法 對其進行2次酶解，分離上清液；
[0012] (4)合并⑵和（3)兩步酶解所得的上清液，70~80°C滅酶30~50分鐘，低溫真 空濃縮，得到辣木多肽濃縮液；
[0013] (5)按照重量份計以1:0.2:0.5的比例取丹參、人參、枸杞，清洗、浸泡、水煎、過 濾、濃縮至比重為1. 12~1. 20的濃縮液；
[0014] (5)將辣木多肽濃縮液與丹參、人參、枸杞濃縮液按30~60% :40~70%的重量 百分比混合均勻，噴霧干燥，得到固體粉末或顆粒狀的復合辣木多肽。
[0015] 其中，所述辣木原料為按照1:5:6:1重量比的辣木根、莖、葉、花。
[0016] 其中，所述蛋白酶為選自枯草桿菌蛋白酶、糜蛋白酶和磷酸二酯酶中的一種或多 種。
[0017] 本發明還包括按照上述復合辣木多肽的制備方法制備所得的復合辣木多肽。
[0018] 上述復合辣木多肽應用于包括片劑、膠囊、顆粒劑、口服液劑型的醫藥制劑、保健 食品及化妝品中。
[0019] 本發明采用生物工程技術方法將辣木中含有的辣木蛋白在受控蛋白酶作用下，低 溫酶解，得到分子量為1~IOKD的小分子多肽，具有生物活性高，用量小，人體容易吸收、安 全、有效、質量可控的特點。本發明所提供的復合辣木多肽經緩解體力疲勞和過氧化物誘發 超氧自由基損傷心肌細胞實驗證明：本發明得到的復合辣木多肽對小鼠有較強的緩解體力 疲勞作用、能提高缺氧耐受力。復合辣木多肽可明顯延長小鼠負重游泳時間，乳酸值下降， 血清尿素氮降低，肝糖原升高；心肌組織超氧化歧化酶和谷胱甘肽過氧化物酶活性增強、 丙二醛含量降低。實驗證明復合辣木多肽有緩解體力疲勞的作用，對過氧化物誘發超氧自 由基損傷心肌細胞具有保護作用。制得的醫藥制劑有促進人體的新陳代謝，抗氧化、緩解體 力疲勞的作用，對人體疾病衰老過程中抗氧化能力減弱產生的超氧自由基過多損傷心、腦 組織細胞均有保護作用，能防治心、腦血管系統疾病。
[0020] 本發明的有益效果在于：1)本發明采用酶對辣木進行選擇性受控水解，其生產工 藝簡單、成本低。2)本發明提供的產品為分子量較小的多肽，便于人體的吸收利用；3)本發 明取材自辣木植株的各個部分，材料獲取容易，而非限定于對辣木的種子等特定部分進行 取材。4)本發明得到的復合植物多肽來源于純植物配方，通過急性毒性實驗結果表明，產品 無毒副作用，安全可靠。
【附圖說明】
[0021] 附圖通過照片說明復合辣木多肽對過氧化物產生的超氧自由基損傷心肌細胞的 保護作用。圖1-4為各組培養心肌細胞在倒置顯微鏡下觀察圖片；圖5-8為各組培養心肌 細胞鈣離子熒光探針AM-Fluo-3光染料鈣超載圖片。
[0022] 圖1-正常組心肌細胞照片；
[0023] 圖2-過氧化物產生超氧自由基損傷心肌細胞組照片；
[0024] 圖3-復合辣木多肽中劑量預保護后，再用過氧化物產生超氧自由基損傷心肌細 胞組照片；
[0025] 圖4-復合辣木多肽高劑量預保護后，再用過氧化物產生超氧自由基損傷心肌細 胞組照片。
[0026] 圖5.正常組心肌細胞光染料鈣超載圖片；
[0027] 圖6.過氧化物產生超氧自由基損傷心肌細胞組光染料鈣超載圖片；
[0028] 圖7.復合辣木多肽中劑量預保護后產生超氧自由基損傷心肌細胞組光染料鈣超 載圖片；
[0029] 圖8.復合辣木多肽高劑量預保護后產生超氧自由基損傷心肌細胞組光染料鈣超 載圖片。
【具體實施方式】
[0030] 下面結合具體實施例進一步說明本發明，實施例是為了便于更好地理解本發明及 其應用，而不應該看做對本發明保護范圍的限制，本發明的保護范圍以權利要求書記載的 內容為準。