程中建立的）的hSBA 效價來完成。
[0146] 人血清是用于SBA的補體來源。然而，hSBA效價可W根據所用的人補體批次而不 同。因此，人補體優選經嚴格篩選和定量來控制W確保hSBA中的一致表現。對于hSBA，人血 清補體可W從多位正常健康成年人合并或從單獨供體來使用（即，不合并）。
[0147] 實施例3-聚山梨醋80 對于藥物制劑已優化=個參數:pH、侶濃度和聚山梨醋SO(PS-SO)與蛋白摩爾比。在具 有0.5ml總體積的組合物劑量中，最優的與侶的蛋白結合在約6.0的pH下和約0.5 mg/ml濃 度的侶(作為憐酸侶(A1P化)（其等價于0.25 mg侶/劑量））實現。PS-80與蛋白摩爾比維持在 2.8 ± 1.4W穩定制劑的體外效力。聚山梨醋SO(PS-SO)添加至藥物W獲得2.8的目標PS-80與蛋白摩爾比。因此，優選在藥品配制過程中不加入PS-80。
[014引 實施例4 在健康青年人中與二價rLP2086疫苗同時施用的REPEVAX ?的免疫原性和安全性的隨 機化的、安慰劑對照的2期研究 背景/目標:評價研究中的二價rLP2086疫苗(開發為預防青年人中的腦膜炎奈瑟氏球 菌血清群B(MnB))與同時施用RE陽VAX @ ,RE陽VAX @為該群體中同時使用的dTaP滅活脊髓 灰質炎疫苗（其可描述于美國專利號7479283、胖01990/013313和6?1666057 81^及111( Marketing Authorisation PL06745/0121)。
[0149] 方法:青年人(對RE陽VAX+rLP2086或RE陽VAX +鹽水1:1隨機化)在第0、2和6個月 接種。測定初始接種后30天對于9種REPEVAX抗原實現預定的抗體水平的受試者比例。接種2 和3后30天測量對于4種MnB測試菌株的免疫應答(hSBA)。評價不利事件(AE)和局部/全身性 反應。
[0150] REPEVAX (Sanofi Pasteur MSD limited)是組合的低劑量白喉、破傷風、無細胞 百日咳和滅活脊髓灰質炎病毒疫苗，其每0.5 mL劑量含有吸附在憐酸侶上（1.5 mg (0.33 mg侶））的白喉類毒素(不低于2 IU)、破傷風類毒素(不低于20 IU)、百日咳抗原（百日咳類 毒素（2.5微克）、絲狀血凝素（5微克）、百日咳桿菌粘附素（3微克）和菌毛2型和3型（5微 克））、脊髓灰質炎(滅活的）1型（40 D抗原單位）、脊髓灰質炎病毒（滅活的2型（8 D抗原單 位）、脊髓灰質炎(滅活的)3型(32 D抗原單位）。
[0151] 使用多路LUMI肥X測定評估針對RE陽VAX(白喉類毒素、破傷風類毒素、百日咳類毒 素、百日咳桿菌粘附素、菌毛2型和3型W及絲狀血凝素）的白喉、破傷風、和百日咳組分的免 疫應答。在病毒中和測定中測量針對脊髓灰質炎1型、2型和3型的免疫應答。將從兩個組中 的所有受試者獲得的血清用于運些測定中。
[0152] 對于評估針對二價rLP2086的免疫應答，在hSBA中用所述的4種主要MnB測試菌株 分析功能性抗體。選擇四種主要MnB hSBA測試菌株(A22、A56、B44和B24)，2種表達LP2086亞 家族A且另巧巾表達LP2086亞家族B。使用運四種主要hSBA測試菌株(來自6種f皿P系統進化 亞群中的4種且代表美國和歐洲流行的>90%的疾病分離株）用于測定該研究中的主要免疫 原性終點。此外，A22、B24和B44變體是歐洲的流行病學相關變體，而在美國，A22和B24是在 引起疾病的MnB菌株上表達的發現的最流行變體。測試用于一級和二級分析的樣品前驗證 MnB hSBA。
[0153] 來自兩組中50 %的隨機選擇的受試者的血清樣品用A22和B24進行hSBA且另50 % 用A56和B44現聯。運些測試在接種1之前、接種2之后和接種3之后對血液樣品進行。
[0154] RE陽VAX的免疫原性通過使用在關鍵的3期臨床試驗中在形成對于RE陽VAX的許可 基礎的青少年中確定的每一抗原的預定標準來評估。REPEVAX共存抗原包括白喉、破傷風、 百日咳類毒素、百日咳絲狀血凝素、百日咳百日咳桿菌粘附素、百日咳菌毛凝集原化3型、脊 髓灰質炎病毒1型、脊髓灰質炎病毒2型、脊髓灰質炎病毒3型。例外是百日咳菌毛凝集原 (FIM)2+3型，其限定在用于REPEVAX許可的測定中>5抓/mL的效價。在該研究中，百日咳 FIM 2+3型的定量下限化LOQ)為>10.6抓/mL,其更高且因此比REPEVAX的許可標準更嚴 格。
[015引共存抗原的化OQ如下：白喉類毒素為0.037 IM/mL;破傷風類毒素為0.05 lU/ml; 百日咳類毒素為0.9抓/mL百日咳絲狀血凝素為2.9抓/mL,百日咳百日咳桿菌粘附素為 3.0抓/mL百日咳菌毛凝集原2+3型為10.6抓/mL對于脊髓灰質炎病毒1型、脊髓灰質炎 病毒2型、脊髓灰質炎病毒3型為1:8。
[0156] 對于一級目標的額外描述終點為測量為在接種1后(探視2)的幾何平均效價化MT) 或幾何平均濃度化MC)的針對共存疫苗抗原的抗體。
[0157] 另一終點為在接種3后(探視6)對于4種主要MnB測試菌株具有含化OQ的hSBA效價 的受試者的比例。
[0158] 共存疫苗抗原接種白喉、破傷風和百日咳無細胞(CTTaP)-IPV (REPEVAX)后1個 月實現對于共存疫苗抗原的預定標準的受試者的比例用2側95 %精確(或Clopper-化arson 置信限）對于組巧日組2進行計算。比例的差異(二價rLP2086 / cTTaP-IPV - (TTaP-IPV,或組 1-組2)還連同2側95%精確Cl對于差異進行計算。如果對于差異的2側95%CI的下限對于 dTaP-IPV疫苗中所有9種抗原大于-0.10 (-10%)，則聲明為非劣等(Noninferiority)。
[0159] 用主要測試菌株的hSBA對于每一主要MnB hSBA測試菌株，在每一血液采樣時間 點實現> LL0Q、> 1:4、> 1:8、> 1:16和> 1:128的hSBA效價的受試者的數目和比例連同精 確2側95 % CI (或Clopper-Pearson置信限)對于比例進行描述性概述。
[0160] 結果：在隨機的749位受試者中，685位（91.5%)包括可評價的免疫原性群。 REPEVAX +rLP2086或RE陽VAX +鹽水后的免疫應答對于所有9種RE陽VAX抗原是不差的。針 對二價rLP2086疫苗的免疫應答在2次劑量后是實質性的且在3次劑量后進一步增強(表2)。 輕度至中度注射部位疼痛是最常見的局部反應;頭疼和疲勞是最常見的全身性事件。接種 后30天內報道AE的受試者比例是相似的（8.8%和11.4%，分別對于REPEVAX +rLP20 86和 RE陽VAX +鹽水）。
[0161] 對于共存疫苗可評價的免疫原性群，在REPEVAX劑量后1個月實現針對共存疫苗抗 原的抗體的預定水平(對于應答的闊值)的受試者比例在二價rLP2086 + REPEVAX組和單獨 的REPEVAX組之間對于共存的疫苗抗原是相似的：白喉類毒素(各組中99.4% )，破傷風類毒 素（各組中100%)，百日咳類毒素（分別94.7%和96.0%)，百日咳絲狀血凝素（各組中 100%)，百日咳百日咳粘附菌素(各組中100%)，百日咳菌毛凝集原2+3型（分別97.6%和 98.9%)，脊髓灰質炎病毒1型（各組中100%)，脊髓灰質炎病毒2型（各組中100%)，脊髓灰 質炎病毒3型(各組中100%)。
[0162] 由于RE陽VAX劑量后一個月二價rLP2086 + RE陽VAX組（組1)和單獨的RE陽VAX組 (組2)之間應答者比例中差異的2側95%CI的下界對于RE陽VAX中的9種抗原大于-0.10 (-10%)(即，比例差異上95%CI的最低下界為-4.7%詔日咳類毒素）），因此實現非劣等。因此， 通過與二價rLP2086-同給予的RE陽VAX誘導的免疫應答對于由單獨RE陽VAX誘導的免疫應 答是不差的。
[0163] 評估對于4種主要MnB測試菌株的每一種對于接種3后可評價的免疫原性群具有> 化OQ的hSBA效價的受試者比例。A22的化OQ為等于1:16的hSBA效價而對于所有其他MnB測試 菌株的LLOQ為等于1:8的hSBA效價。
[0164] 對于組1，在基線(接種1前）具有含化OQ的hSBA效價的受試者比例對于主要MnB菌 株A22為14.4 %，對于A56為18.2 %，對于B24為12.7 %，且對于B44為6.2 %。對于組2，在基線 (接種1前)具有含化OQ的hSBA效價的受試者比例對于主要MnB菌株A22為23.0%，對于A56為 21.8%，對于 B24為12.9%，且對于 B44為6.3〇/〇。
[0165] 劑量2的二價rLP2086后組1受試者中觀察到實質上的hSBA應答，且接種3后1個月3 個劑量后觀察到額外增加。對于組U二價rLP2086 + RE陽VAX)，接種2后1個月時和接種3后 1個月時實現 > 化〇0的hSBA效價的受試者比例對于A22為81.1%和95.6%，對于A56為97.3% 和100%，對于B24為81.0%和96.8%，且對于B44為55.5%和81.5%。盡管在僅兩次二價rLP2086 劑量后實現實質上的hSBA應答，但2次劑量(接種2后一個月）相比于3次劑量(接種3后1個 月）后具有含化OQ的hSBA效價的受試者比例中的增加示例3次劑量后免疫應答的增強。在 對照組(組2)中，在接種2后1個月和在接種3后1個月時對于4種主要MnB測試菌株的每一種 具有含化OQ的hSBA效價的受試者比例與每一 MnB測試菌株的基線hSBA結果(接種1前)是相 似的。
[0166] 對于4種主要MnB測試菌株，組1中展示確定的hSBA效價的受試者比例在3次劑量后 大于2次劑量后。描述了實現^ 1:16的hSBA效價的受試者，由于該效價從1:4效價的4倍增 加（> 1:4的效價廣泛接受為與針對IMD的保護相關性）。對于組1，在接種2后1個月時具有 1:16的hSBA效價的受試者比例對于A22為81.8%，對于A56為97.3%，對于B24為68.0%，且對 于B44為53.4%。在接種3后1個月時，具有1:16的hSBA效價的受試者比例對于A22為95.6%，對 于 A56 為 100%，對于 B24 為 87.3%，且對于844為79.5〇/〇。
[0167] 在對照組(組2)中，在接種2后1個月和在接種3后1個月時對于4種主要MnB測試菌 株的每一種展示確定的hSBA效價的受試者比例與具有在基線(接種1前)確定的hSBA效價的 受試者比例是相似的。
[0168] 對于組1，3次劑量的二價rLP2086后具有1:16的hSBA效價的受試者比例證明當施 用3次劑量的二價rLP2086時疫苗引發強力的免疫應答。
[0169] hSBA幾何平均效價(GMT)通常，基線處GMT對于兩組均低于hSBA LL0Q。對于組1，在 接種2后1個月的hSBA GMT對于A22為35.5，對于A56為91.1，對于B24為15.9且對于B44為 14.6。在接種3后1個月的hSBA GMT對于A22為63.4，對于A56為151.5，對于B24為28.3且對于 644為36.5。
[0170] 對于組1，2次劑量后對于亞家族A菌株觀察的GMT W及3次劑量后對于亞家族B菌株 觀察的GMT表明強力的免疫應答。
[0171] 評價顯示A22、A56、B24和B44的hSBA效價分布的反向累積分布曲線(RCDC)。組1中 來自RCDC的結果顯示在二價rLP2086接種后在組1受試者中觀察到實質上的免疫應答;然 而，附圖還顯示第S劑量的二價rLP2086的益處，因為更高比例的受試者實現針對4種MnB測 試菌株的更高效價。該效果對于菌株B44是最顯著的。
[0172] 結論：當同時給予二價rLP2086時，RE陽VAX誘導不比由單獨RE陽VAX引發的免疫應 答差的免疫應答。二價rLP2086疫苗誘導針對四種不同MnB測試菌株強力的殺菌應答，尤其 是針對代表亞家族B的那些，其在3次劑量后比2次劑量后更高。同時施用通常是安全的且完 全耐受的。
[0173] 實施例5 健康青少年中研究中的腦膜炎球菌血清群B二價rLP2086疫苗的免疫原性 背景和目標:腦膜炎奈瑟氏球菌血清群B(MnB)引起嬰兒、青少年和成年人中的侵襲性 疾病。保守的、表面暴露的脂蛋白LP2086(因子H結合蛋白[f皿P])是有希望的MnB疫苗祀標。 在健康青少年（11-18歲）中研究了研究中的二價、重組疫苗(rLP2086)的安全性和免疫原 性。
[0174] 方法:將該安慰劑對照的、單盲研究中的受試者隨機分至兩個3劑量時間表和=個 2劑量時間表。每一 120-yg劑量含有巧巾rLP2086抗原，每個LP2086亞家族(A和B)1種。當未排 定疫苗日程時，給予鹽水。使用人補體的血清殺菌測定用4種MnB測試菌株（與疫苗巧BP異 源)進行。
[0175] 結果:將1713位受試者(平均年齡14.4歲）隨機化。3劑量疫苗后一個月，針對亞家 族A和B菌株的含8的hSBA效價分別在95-99%和86-89%的受試者中觀察到；2劑量后，運些數 字范圍分別為91-100%和69-77%的受試者。在2劑量時間表中，0和6個月誘導最高的抗體應 答(實施例5的表1)。在4種MnB異源測試菌株中，2劑量后hSBA GMT范圍為6.2-125.6且3劑量 后范圍為25.6-155.6。輕度至中度注射位點疼痛是最常見的局部反應。劑量1后，分別在 3.3-6.5 %和2.1 %的rLP2086和鹽水接受者中經歷發燒含38°C。
[0176] 結論:rLP2086是完全耐受的。所有劑量方案產生強力的殺菌應答，其在3劑量后最 為顯著。
[0^7]實施例5的表1與上述的實施例1的表1相同。表2概述了通過研究時間對于可評價 的免疫原性群的hSBA GMT及相應CKGMT從基線(注射1前）增加且用二價rLP2086的每一隨 后劑量持續增加。
[0178] 對于4種主要MnB菌株，3劑量的二價rLP2086后(組1和2)比2劑量后（組3、4和5)的 GMT更高。GMT在兩個3劑量組之間相似，且它們在=個2劑量組之間相似。
[0179] 注射1前(基線），組1、2、3、4和5的hSBA GMT如下:對于A22分別為7.1、6.3、6.4、6.4 和6.8;對于A56分別為6.8、6.1、6.7、6.3和6.2;對于B24分別為5.3、5.1、5.0、4.9和5.1;和 對于844分別為4.4、4.5、4.5、4.6和4.4。
[0180] 對于組1(0、巧日6月），在劑量2后1個月對于所有4種主要MnB菌株觀察到的GMT存在 實質上增加(對于A22、A56、B24和B44分別為24.4、77.3、13.8和13.1)。611'進一步在3劑量的 二價rLP2086后對于組1的受試者對于4種主要MnB測試菌株進一步增加；55.1 (A22); 152.96 (A56); 29.1 (B24);和40.3 (B44)。
[0181] 對于組2，2和3劑量的二價rLP2086后觀察到GMT的相似增加。2劑量的二價rLP2086 后對于組2受試者的GMT對于A22為32.9，對于A56為94.6，對于B24為14.9且對于B44為15.5。 3劑量后，GMT對于A22增加為56.3，對于A56增加為155.6，對于B24增加為25.6且對于B44增 加為35.0。
[0182] 對于組1和次劑量后對于亞家族A菌株觀察的GMTW及3次劑量后對于亞家族B 菌株觀察的GMT表明強力的免疫應答。
[0183] 對于組3，1劑量的二價rLP2086后觀察到GMT的少量增加:A22為12.0,對于A56為 18.5，對于B24為9.2且對于B44為5.7。2劑量后，GMT對于A22增加為48.4，對于A56增加為 125.6，對于B24增加為20.6且對于B44增加為22.5。
[0184] 對于組4，1劑量的二價rLP2086后GMT對于A22為13.3;對于456為17.7;對于824為 9.8且對于B44為5.9。2劑量的二價rLP2086后，GMT對于A22為37.1，對于A56為104.9，對于 B24為17.7且對于B44為19.1。
[0185] 對于組5，1劑量的二價rLP2086后GMT對于A22為16.0，對于A56為26.8，對于B24為 12.6且對于B44為6.8。2劑量的二價rLP2086后，GMT對于A22增加為39.6，對于A56增加為 111.8，對于B24增加為14.7且對于B44增加為17.8。
[0186] 總之，對于組3、4和5,觀察到的GMT表明2劑量的二價rLP2086后對于亞家族A和B菌 株的免疫應答。
[0187] 總之，3劑量的二價rLP2086提供基于4種主要MnB測試菌株的hSBA效價的強力的且 最寬的免疫應答。與2劑量相比，接受3劑量的二價rLP2086的受試者的更高比例實現針對4 種主要MnB測試菌株的> 1:8的hSBA效價。
[0188] 0、1和6月劑量時間表后的結果（組1)與0、2、和6月劑量時間表后的結果（組2)相 似。對于組1和2,劑量3后實現的GMT值比劑量2后GMT值更高。對于組1和2,劑量2后GMT值對 于亞家族A菌株范圍為24.2-94.6且對于亞家族B菌株范圍為13.1-15.5。劑量3后GMT值對于 亞家族A菌株范圍為55.1-155.6且對于亞家族B菌株范圍為25.6-40.3。對于組1和2,當與2 劑量的二價rLP2086后針對4種主要MnB測試菌株實現> 1:8的hSBA效價的受試者比例相比 時，3劑量的二價rLP2086后針對4種主要MnB測試菌株更高比例的受試者實現> 1:8的hSBA 效價。
[0189] 還評估了實現> 1:16的hSBA效價的受試者。對于組1，在2劑量的二價rLP2086后一 個月實現含1:16的hSBA效價的受試者百分比對于A22為73.5%，對于A56為96.3,對于B24為 57.6，且對于B44為47.2%。3劑量的二價rLP2086后，組I中實現含1:16的hSBA效價的受試者 百分比對于A22為91.4%，對于A56為99.2%，對于B24為82.8%，且對于B44為84.8〇/〇。
[0190] 對于組2,在2劑量的二價rLP2086后一個月實現> 1:16的hSBA效價的受試者比例 對于A22為88.1%，對于A56為97.9%，對于B24為63.5%，且對于B44為58.6%。3劑量的二價 rLP2086后，組2中實現> 1:16的hSBA效價的受試者百分比對于A22為95.0%，對于A56為 98.9%，對于 B24 為 83.6%，且對于 B44 為 83.8〇/〇。
[0191] 對于組1和2,3次劑量的二價rLP2086后實現含1:16的hSBA效價的受試者百分比證 明當疫苗引發強力的免疫應答。
[0192] 對于組3,在2劑量的二價rLP2086后實現> 1:16的hSBA效價的受試者比例對于A22 為 93.2%，對于 A56 為 98.4%，對于 B24 為 73.8%，且對于 B44 為 70.8〇/〇。
[0193] 對于組4,在2劑量的二價rLP2086后一個月實現> 1:16的hSBA效價的受試者比例 對于A22為90.8%，對于A56為99.2%，對于B24為67.1%，且對于B44為64.5〇/〇。
[0194] 對于組5,在2劑量的二價rLP2086后實現> 1:16的hSBA效價的受試者比例對于A22 為91.0%，對于A56 為99.1%，對于 B24為64.5%，且對于 B44為66.7〇/〇。
[0195] 對于組3、4和5,實現>1:16的hSBA效價的受試者百分比證明僅2次劑量后疫苗引 發針對亞家族A菌株的強力免疫應答。然而，3次劑量增加針對亞家族B菌株的應答的強度。
[0196] 3次劑量的二價rLP2086后實現> 1:16的hSBA效價的受試者的百分比顯示疫苗引 發針對表達與疫苗組分不同的LP2086變體的MnB菌株的強力且廣泛的免疫應答。
[0197] 通過研究時間顯示hSBA效價分布的反向累積分布曲線(RCDC)也對于每一菌株組 間對于可評價的免疫原性群進行評估。RCDC顯示2次劑量的二價rLP2086亞家族A菌株后的 強力免疫應答。第S劑量的二價rLP2086后，應答曲線下面積對于所有4種主要MnB測試菌株 增加，由此證實3劑量的二價rLP2086后免疫應答的增強。
[0198] 來自主要和次要免疫原性終點分析的結果顯示疫苗可W產生具有針對MnB的異源 亞家族A和亞家族B變體的顯著hSBA活性的抗體。盡管2或3次劑量的二價rLP2086后實現> 1:8的hSBA效價的受試者比例更高，但高比例的受試者在1次劑量的二價rLP2086后一個月 實現> 1:8的hSBA效價。例如，參見組5。
[0199] 對于4種主要MnB測試菌株，3劑量的二價rLP2086后（組1和2)比2劑量后（組3、4和 5)的GMT更高。GMT在兩個3劑量組中是相似的。GMT還在立個2劑量組中是相似的。運些數據 也基于實現> 1:16的hSBA效價的受試者百分比證明3次劑量的二價rLP2086后的強力hSBA 應答。
[0200] 運些數據證明二價rLP2086的最終制劑產生強力免疫應答且當W2或3次劑量給予 時是安全且完全耐受的。甚至1劑量的二價rLP2086也提供了高于基線的實質上的免疫應答 且也是安全且完全耐受的。總之，在2或3次劑量的二價rLP2086后在安全性概況中不存在臨 床上有意義的差異。
[0201 ] 實施例6 在=期、隨機化的、設置對照的研究中腦膜炎球菌血清群B二價rLP2086疫苗在年齡Ills 歲的健康青少年中的安全性、耐受性和免疫原性 背景:腦膜炎奈瑟氏球菌血清群B(MnB)是青少年中侵襲性腦膜炎球菌疾病的主要原 因。保守的、表面暴露的脂蛋白LP2086(因子H結合蛋白[f皿P])是保護免于由MnB引起的侵 襲性疾病的有希望的疫苗祀標。在=期2、隨機化的、設置對照的研究中在11-18歲齡的健康 青少年中檢查研究中的二價、重組MnB疫苗(包括SEQ ID NO: 1和SEQ ID NO: 2、2.8摩爾比 的聚山梨醋80、0.5 111邑/1111侶、1〇11^組氨酸和15〇11^氯化鋼，本文所有實施例中稱為"二價 rLP2086")的安全性、耐受性和免疫原性。
[0202] 方法:研究1012檢查了二價rLP2086的5種疫苗方案，而研究1010和1011評價了分 別與TdaP-IPV和HPV疫苗同時給予的二價rLP2086的3劑量時間表。每一劑量的二價rLP2086 含有60 yg的rLP2086亞家族A變體A05和60 yg的rLP2086亞家族B變體B01。為了檢查二價 rLP2086在S項研究中的每一項中的免疫原性，用表達異源f皿P變體A22、A56、B24和B44的4 種MnB測試菌株進行使用人補體的血清殺菌測定(hSBA)，選擇所述測試菌株W代表甜BP變 異性的相關多樣性W及提供對于針對表達流行病學上流行的巧BP變體的菌株的疫苗引發 的免疫應答寬度的觀點。評價不利事件W及收集的局部和全身性反應。
[0203] 結果:所有3個研究中82-100%的受試者在劑量3后1個月實現對于4種MnB測試菌株 的每一種高于定量下限化L0Q)的hSBA效價(表）。在運些研究中，大部分全身性事件和局部 反應在嚴重程度上是輕度至中度的;不利事件通常不嚴重或不與研究疫苗有關。
[0204] 結論: