專利名稱：減少或去除下眼眶下形成的眼袋的合成肽及它們在化妝或皮膚藥學組合物中的用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及減少或去除眼下形成的眼袋的合成肽，以及可用于處理皮膚，優選為面部皮膚且尤其是位于眼下的皮膚的含有所述肽的化妝或皮膚藥學組合物，目的是既減少或去除腫脹又改善其穩固性、水合作用和彈性。
背景技術：
當下眼瞼的皮膚輕微腫脹且下垂，在下眼眶出現眼袋是非常普遍的化妝問題。眼部周圍的皮膚比較薄，且與許多區域的皮膚相比具有較少油性的成分。因為這個原因，年齡、壓力、不同的疾病和環境的污染可以顯示它們具有下眼眶腫脹的第一癥狀，且由于位于眼下皮膚失去穩固性和彈性會出現眼袋。位于眼下皮膚區域下的液體積聚物會引起浮腫，表現為腫眼泡(swollen eye)，其與面部區域周圍的皮膚相比常常更深(“黑眼圈”)，其是消費者觀察到不能接受的或非美感的。
直到現在，還不知道形成非美感的眼下眼袋的確切原因，但是已經認為不同的外因例如壓力、消耗過量的咖啡因或酒精以及缺乏睡眠是問題的相關因素或誘因。同樣的，文獻已經描述了形成眼下眼袋的內因，例如腎功能障礙和體液潴留、高血壓、炎癥、過敏成分(過敏性鼻炎)或淋巴引流變化(lymphatic drainage alteration)。認為還要加上皮膚內在的年齡、環狀肌肉的松弛以及由紫外線引發的損傷這些因素。
當皮膚失去其彈性且肌肉由于年齡變得衰弱，松弛的皮膚會積聚在眼部周圍，在眼瞼形成皺紋。此外，在眼窩供應和支撐眼睛的脂肪有向眼窩外部移動和以凸出眼部的形式積聚在眼睛周圍的趨勢。腫脹或凸出的眼瞼是由于在環狀區域積聚了脂肪，還在所述區域積聚了松弛的皮膚。
為了恢復年輕和不疲勞面部表情的外貌，通常使用化妝手術去除眼下的眼袋(瞼整形)，在該方法中包括在眼瞼產生內部和外部切口，以去除過量積聚的脂肪和/或皮膚。目前在美國瞼整形是通過整形手術最普遍采用的方法[Castro，E和Foster，J.A.(1999)Upper lidblepharoplasty Facial Plast.Surg.15(3)，173-181]。但是，事實表明盡管所述手術被認為是一個較小的外科手術方法，但由于在介入中使用麻醉伴隨風險，還有手術后感染的潛在風險，該技術不是沒有危險的。因此，仍然需要找到減少和去除眼下眼袋的簡單、有效且沒有危險的解決方案。
發明概述本發明提供一種減少或去除眼下眼袋的簡單、有效且沒有危險的解決方案，其包括能夠減少或去除眼下眼袋，還能改善下眼瞼區域皮膚的穩固性和彈性的合成肽的開發。
因此，本發明第一方面涉及能夠減少或去除眼下形成的眼袋的根據通式(I)的肽 它的立體異構體和其外消旋或非外消旋混合物，以及其化妝或皮膚藥用可接受的鹽，其中X可以是半胱氨酰(cystenyl)、絲氨酰、蘇氨酰或氨基丁酰基；R1可以是H或烷基、芳基、芳烷基或酰基；且R2可以是氨基、羥基或硫醇，它們全部由脂肪族或環狀的基團取代或非取代。
通式(I)中代表的肽優選的結構是那些
X可以是絲氨酰或氨基丁酰基；R1可以是H或飽和或未飽和、支鏈或環狀、直鏈的C2至C24酰基；且R2可以是由飽和或未飽和、支鏈或環狀、直鏈的C1-C24脂肪族基團取代或非取代的氨基或羥基。
本發明的肽可以以立體異構體或立體異構體混合物的形態存在，例如形成它們的氨基酸可以具有L-、D-構型，或可以彼此獨立地是外消旋的。因此根據不對稱的碳數和其存在的異構體或異構體混合物數，可能獲得異構體的混合物，還可能是外消旋物或非對映的混合物或純非對映體或對映異構體。
通式(I)肽優選的結構是純同分異構體，也就是對映異構體或非對映體。
在本發明的上下文中，術語“脂肪族基團”是指飽和或未飽和、直鏈或環狀的烴基基團。
在本發明中使用的術語“烴基”例如包括烷基、烯基和炔基基團。
術語“烷基”是指直鏈或支鏈、飽和的烴基，例如包括甲基、乙基、異丙基、異丁基、叔丁基、庚基、十二烷基、十六烷基、十八烷基、戊基、2-乙基己基、2-甲基丁基、5-甲基己基等等。
術語“烯基”是指具有一個或多個碳碳雙鍵的直鏈或支鏈、未飽和的烴基，例如乙烯基。
術語“炔基”是指具有一個或多個碳碳三鍵的直鏈或支鏈、未飽和的烴基。
術語“環狀基團”是指封閉的烴基環，其可以分類為脂環族的、芳香族的或雜環的基團。
術語“脂環族基團”是指具有類似脂肪族基團性質的環狀基團。
術語“芳香族基團”或“芳基基團”是指單環的或多環的芳香族烴基。
術語“雜環基團”是指封閉的烴基環，其中一個或多個環原子不是碳元素(例如，氮、氧、硫等等)。
如本技術領域所了解的，不但允許并且推薦高度取代。因此，本發明的肽可以被取代。為了簡化本發明的描述，術語“基團”和“嵌段”用于區別允許取代的化學類型或其可以被取代(“基團”)，和不允許被取代或其不能夠被取代(“嵌段”)。這樣，當用術語“基團”描述化學取代基，描述的化學物質包括非取代的基團和含有O、N或S原子的基團。
另一方面，當術語“嵌段”用于描述化學的化合物或取代基，只可以包括非取代的化學物質。例如，措辭“烷基”不但包括開鏈飽和的烷基取代基，例如甲基、乙基、丙基、異丁基等等，而且包括含有本領域已知的其他取代基的烷基取代基，例如羥基、烷氧基(alcoxy)、氨基、羧基、羧酰胺基、鹵素原子、氰基、硝基、烷基磺酰基及其它。這樣，“烷基”包括酯、鹵烷基、醇、硫醇、羰基、胺、羥烷基、磺基烷基、胍基團及其它。另一方面，措辭“烷基嵌段”只限于包括開鏈飽和的烷基取代基，例如甲基、乙基、丙基、異丁基等等。
本發明提供的式(I)肽的化妝或皮膚藥學可接受的鹽包括在本發明的范圍內。術語“化妝或皮膚藥學可接受的鹽”包括通常用于形成金屬鹽或酸加成鹽的鹽類，可以是有機鹽(例如尤其是醋酸鹽、檸檬酸鹽、油酸鹽、草酸鹽或葡萄糖酸鹽)或無機鹽(例如尤其是鹽酸鹽、硫酸鹽、硼酸鹽或碳酸鹽)。只要其是化妝或皮膚藥學可接受的鹽，鹽類的性質并不重要。本發明的式(I)肽的化妝或皮膚藥學可接受的鹽可以通過本領域已知的常規方法獲得。
可以根據本領域已知的常規方法合成通式(I)的肽，例如修改的固相肽合成方法[Stewart J.M.和Young J.D.(1984)Solid PhasePeptide Synthesis，2nd edition，Pierce Chemical Company，Rockford，Illinois.aodanzsky M.和Bodanzsky A.(1984)Thepractice of peptide Synthesis，Springer Verlag，New York.Lloyd-Wiiliams，P.，Albericio，F.和Giralt，E.(1997)ChemicalApproaches to the Synthesis of Peptides and Proteins.CRC，BocaRaton(FL，USA)]，溶液的合成，固相合成與溶液合成方法的結合或酶方法[Kullmann W.(1980)Proteases as catalysts for enzymicsyntheses of opioid peptides J.Biol.Chem.255，8234-8238]。也可以發酵為獲得期望序列的用基因工程修飾或未修飾的菌株以獲得該肽。
例如，獲得通式(I)肽的方法是將具有游離羧基或其反應性衍生物的通式(I)肽的片段與具有氨基基團的互補片段反應，該互補基團具有至少一個游離氫原子，隨后形成酰胺鍵，且其中不參與酰胺鍵形成的所述片段的官能基團，如果存在，用暫時或持久性保護基團適當地保護。
獲得通式(I)肽的方法的另一個實例是將具有離去基團的通式(I)肽的片段與具有至少一個游離氫原子的氨基基團的互補片段通過親核反應進行反應，其中離去基團例如尤其是甲苯磺酰基、甲磺酰基、鹵素基團，且其中不參與N-C鍵形成的所述片段的官能基團，如果存在，用暫時或持久性保護基團適當地保護。保護基團引入和去除的實例描述在文獻[Greene T.W.(1981)Protective groups in organicsynthesis，John Wiley&Sons，New York.Atherton B.和SheppardR.C.(1989)Solid Phase Peptide SynthesisA practicalapproach，IRL Oxford University Pres]中。術語“保護性基團”還包括在固相合成中使用的聚合性載體。
當完全或部分地在固相中實施該合成，下述提及的物質可以作為在本發明的方法中使用的固體載體由聚苯乙烯、聚乙二醇接枝聚苯乙烯等等組成的載體，例如對甲基二苯甲基胺樹脂(MBHA)[MatsuedaG.R.和Stewart J.M.(1981)A p-methylbenzhydrylamine resin forimproved solid-phase synthesis of peptide amides Peptides2，45-50]，2-氯三苯甲基樹脂[(a)Barlos K.，GatosD.，KallitsisJ.，Papaphotiu G.，Sotiriu P.，Wenqing Y.和SchferW.(1989)Darstellung geschützter peptid-fragmente untereinsatz substituierter triphenylmethyl-harze TetrahedronLett.30，3943-3946.(b)Barlos K.，GatosD.，Kapolos S.，PapaphotiuG.，Schfer W.和Wenqing Y.(1989)Veresterung von partiellgeschützten peptid-fragmenten mit harzen.Einsatz von2-chlortritylcblorid zur synthese von Leu15-gastrin/Tetrahedron Lett.30，3947-3951]，TentaGel樹脂等等，其可以包括或可以不包括不穩定的間隔基團，例如5-(4-氨基甲基-3，5-二甲氧基苯氧基)戊酸(PAL)[Albericio F.，Kneib-CordonierN.，Biancalana S.，Gera L.，Masada R.I.，Hudson D.和BaranyG.(1990)Preparation and application of the 5-(4-(9-Fluorenylmethyloxycarbonyl)aminomethyl-3，5-dimethoxyphenoxy)-valeric acid(PAL)handle for the solid-phase synthesis ofC-terminal peptide amides under mild condition J.Org，Chem.55-3730-3743]，2-[4-氨基甲基-(2，4-二甲氧基苯基)苯氧醋酸(AM)[Rink H.(1987)Solid-phase synthesis of protected Peptidefragments using a trialkoxy-diphenyl-methylester resinTetrahedron Lett.28，3787-3790]，Wang[wang，S.S.(1973)p-AlkoxybenzylAlcohol Resin and p-Alkoxybenzyloxycarbonylhydrazide Resin forSolid Phase Synthesis of Protected Peptide FragmentsJ.AM.CHEM.Soc.95，1328-1333]等等，允許去保護和從聚合物載體上同時發生化合物的分解。
為了它們在哺乳動物體的外部應用，優選在人類的外部應用，根據本發明的肽可以形成一些局部類型的組合物。從該意義來說，本發明提供一種含有通式(I)肽的化妝或皮膚藥用組合物。所述組合物可以由本領域技術人員已知的常規方法制備。
本發明目的的肽根據R1、R2和X基團的性質具有變化的水溶解性。不具有水溶解性的那些可以溶解在常規的化妝或皮膚藥用可接受的溶劑中，該溶劑例如乙醇、丙醇或異丙醇、丙二醇、丙三醇、丁二醇或聚乙二醇。該肽還可以預先以化妝品載體的形式引入，例如以脂質體、毫微粒、微粒和納米粒的形式，也可以是海綿狀物、毫球、微球和納米球、毫膠囊、微膠囊和納米膠囊。
這些制劑可以使用不同類型的劑型，例如膏劑、洗劑、凝膠劑、油劑、搽劑、漿液(serums)、摩絲、軟膏、條狀、鉛筆狀或噴霧劑，包括“留置型”和“用后清洗的”劑型，還可以以本領域技術人員已知的不同類型固體輔助技術引入到，例如小毛巾、水凝膠、粘著性(或非粘著性)貼片或面膜，或者還可以混合入化妝線的產品中，例如尤其是遮瑕膏、化妝粉底、洗劑、卸妝洗劑。
在本發明中提及的組合物可以含有用于護理和治療皮膚常規使用的添加成分，例如且不限制地為乳化劑、潤膚劑、有機溶劑、皮膚調理劑例如潤濕劑、α羥酸、保濕劑、維生素、顏料或染料、凝膠性聚合物、增稠劑、柔軟劑、抗皺物質、美白劑、捕獲自由基的化合物、抗氧化化合物、刺激真皮或內皮的大分子合成的化合物和/或可以防止它們降解的物質，例如刺激膠原蛋白合成的化合物、刺激彈性蛋白合成的化合物、抑制膠原蛋白降解的化合物、刺激成纖維細胞增殖的化合物、刺激角質化細胞增殖的化合物、刺激角質化細胞分化的化合物、松弛皮膚的化合物、刺激葡糖胺聚糖合成的化合物、固化劑、作用于毛細管循環的化合物、作用于細胞代謝的化合物、刺激黑色素合成的化合物、防腐劑、香料、螯合劑、植物提取物、精油、海產物提取物、細胞提取物和防曬劑(有效對抗紫外A或B射線的有機或無機的光保護劑)，其中前提是它們要與組合物剩余組分在物理上和化學上相容，且尤其是要與本發明的肽相容。
本發明的組合物還可以含有或與用于減少膨脹和眼下眼袋相關刺激的止痛化合物和/或抗炎化合物共同施用。類固醇類化合物例如氫化可的松或天然提取物或具有體內抗炎和止痛活性的精油是這些化合物中要強調的。
在本發明的化妝或皮膚藥用組合物中使用的通式(I)的肽以化妝或皮膚藥用有效濃度實現期望的效果，優選地含量在0.00001％(以重量計)至10％(以重量計)之間；優選在0.0001％(以重量計)至5％(以重量計)之間，且更特別的是在0.001％(以重量計)至1％(以重量計)之間。
此外，本發明另外一方面涉及通式(I)的肽在制備用于處理皮膚的化妝或皮膚藥用組合物中的用途，優選地是面部皮膚，且更特別的是用于減少或去除眼下的眼袋。
本發明進一步提供一種用于減少或去除在人類眼下形成的眼袋的化妝或皮膚藥用的方法，其包括給予有效量的通式(I)的肽，優選以含有其的化妝或皮膚藥用組合物的形式。
實施例在此提供用于舉例說明本發明性質的下述具體實施例。這些實施例包括單獨地用于舉例說明的目的，且并非意圖限制本發明此處權利要求。
常規方法化學合成所有合成過程在裝備有多孔聚乙烯盤的聚丙烯注射管中進行。所有試劑和溶劑是用于合成的品質，且沒有任何添加劑處理。用哌啶-DMF(2∶8，v/v)(1×1分鐘，1×5分鐘；5mL/g樹脂)去除Fmoc基團[Lloyd-Williams，P.，Albericio，F.和Giralt，E.(1997)ChemicalApproaches to the Synthesis of Peptides and Proteins.CRC，BocaRaton(FL，USA)]。在去保護和偶合步驟中洗滌，重復一次，每次使用10mL溶劑/g樹脂的DMF(3×1分鐘)進行去保護。使用3mL溶劑/g樹脂實施偶合反應。借助茚三酮實驗控制該偶合[Kaiser，E.，ColeescottR.L.，Bossinger C.D.和Cook P.L.(1970)Color test for detectionof free terminal amino groups in the solid-phase synthesis ofpeptides Anal.Biochem.34，595-598]。所有合成的轉化和洗滌都在25℃進行。
使用恒溫在30℃的反相色譜柱(250×4.0mm，Kromasil C8，5μm，Akzo Nobel，Sweden)，在Shimadzu設備中(Kyoto，Japan)通過HPLC進行色譜分析。在水(+0.1％TFA)中梯度的乙腈(+0.07％TFA)以1mL/分鐘進行洗脫，且在220nm檢測。
縮寫詞
用于氨基酸的縮寫詞依據IUPAC-IUB Commission on BiochemicalNomenclature specified in Eur.j.Biochem.(1984)138，9-37和J.Biol.Chem.(1989)264，663-673的規則。
Abu，2-氨基丁酸；βAla，β-丙胺酸，3-氨基丙酸；AM，2-[4-氨基甲基-(2，4-二甲氧基苯基)苯氧乙酸；Boc，叔丁氧基羰基；DCM，二氯甲烷；DIEA，N，N-二異丙基乙胺；DIPCDI，N，N’-二異丙基碳二亞胺；DMF，N，N-二甲基甲酰胺；ES-MS，電噴霧質譜法；Fmoc，9-芴甲氧羰基(fluorenyl甲氧基羰基)；HOBt，1-羥基苯并三唑；HPLC，高效液體色譜；MBHA，對甲基二苯甲基胺樹脂；MeCN，乙腈；MeOH，甲醇；PAL，5-(4-氨基甲基-3，5-二甲氧基苯氧基)戊酸；Palm，棕櫚酰；tBu，叔丁基；THF，四氫呋喃；TFA，三氟醋酸；Trt，三苯甲基。
實施例1Ac-βAla-His-Cys-His-OH的獲得將5.5g Fmoc-L-His(Trt)-OH(8.9mmol，1當量)溶解于55mL DCM中，其中已經加入了1.3mL DIEA(2.9mmol，0.33當量)，將它們與干燥的2-氯三苯甲基樹脂(5.5g，8.8mmol)混合。保持攪拌5分鐘，然后加入2.5mL DIEA(5.9mmol，0.67當量)。使其反應40分鐘。用4.4mL MeOH處理阻斷剩余的氯化物基團。
如描述的通常方法對氨基端基Fmoc基團去保護，在存在DIPCDI(3.39mL，22mmol，2.5當量)和用DMF作為溶劑的HOBt(3.37g，22mmol，2.5當量)下，將12.89g Fmoc-L-Cys(Trt)-OH(22mmol，2.5當量)混入肽酰樹脂中1小時。隨后用通常描述的方法洗滌該樹脂，且重復Fmoc基團的去保護處理以混入下一個氨基酸。通過下面記載的方案，13.63g Fmoc-L-His(Trt)-OH(22mmol，2.5當量)和6.85g Fmoc-βAla-OH(22mmol，2.5當量)從而偶合，每一個偶合都存在3.37g的HOBt(22mmol，2.5當量)和3.9mL DIPCDI(22mmol，2.5當量)。
如描述的通常方法對N端Fmoc基團去保護，在存在用DMF作為溶劑的DIEA(7.53mL，22mmol)下，將肽酰樹脂用醋酸酐(2.1mL，22mmol)處理30分鐘，用DMF(5×1分鐘)、DCM(4×1分鐘)、二乙醚(4×1分鐘)洗滌，且在真空下干燥。
用87mL的TFA-iPr3Si-H2O(90∶5∶5)在室溫下處理12.36g干燥肽酰樹脂2小時。在冷卻的二乙醚(700mL)上收集濾液，經多孔板(porpusplate)過濾，且用乙醚(500mL)洗滌該沉淀物5次。最終的沉淀物在真空下干燥。
通過在水(+0.1％TFA)中2至32％梯度的MeCN(+0.07％TFA)的HPLC分析顯示出保留時間為12.63分鐘，且純度大于85％。用ES-MS測定其分子量[(M+H)+理論上509.19，(M+H)+實驗上509.2]。
實施例2Palm-βAla-His-Ser-His-NH2的合成為了去除Fmoc基團，根據通常實驗方案的描述用哌啶-DMF處理帶有0.73mmol/g(0.5mmol)官能基團(functionalization)的0.685mgFmoc-AM-MBHA樹脂。在存在DIPCDI(385μL，2.5mmol，5當量)和用DMF作為溶劑的HOBt(385mg，2.5mmol，5當量)下，將1.58gFmoc-L-His(Trt)-OH(2.5mmol，5當量)混入樹脂中1小時。
隨后用通常描述的方法洗滌該樹脂，且重復Fmoc基團的去保護處理以混入下一個氨基酸。通過下面記載的實驗方案，0.95gFmoc-L-Ser(tBu)-OH(2.5mmol，5當量)、1.59gFmoc-L-His(Trt)-OH(2.5mmol，5當量)和0.77g Fmoc-βAla-OH(2.5mmol，5當量)順序偶合，每一個結合都存在385mg的HOBt(2.5mmol，5當量)和385μL的DIPCDI(2.5mmol，5當量)。
如描述的通常方法對N端Fmoc基團去保護，且在存在770mg的HOBt(5mmol，10當量)和770μL的DIPCDI(5mmol，10當量)下，混入預溶解在DMF(10mL)中的1.28g棕櫚酸(5mmol，10當量)。反應保持15小時，此后用THF(5×1分鐘)、DCM(5×1分鐘)、DMF(5×1分鐘)、MeOH(5×1分鐘)、DMF(5×1分鐘)、THF(5×1分鐘)、DMF(5×1分鐘)、DCM(4×1分鐘)、乙醚(3×1分鐘)洗滌，且在真空下干燥。
用15mL的TFA-iPr3Si-H2O(90∶5∶5)在室溫下處理1.17g干燥肽酰樹脂2小時。在冷卻的二乙醚(100mL)上收集濾液，以4000rpm離心5分鐘，傾析乙醚溶液，且乙醚洗滌重復5次。最終的沉淀物在真空下干燥。
通過在水(+0.1％TFA)中5至95％梯度的MeCN(+0.07％TFA)的HPLC分析顯示出保留時間為19.3分鐘，且純度大于70％。用ES-MS測定其分子量[(M+H)+理論上688.45，(M+H)+實驗上688.7]。
實施例3Ac-βAla-His-Ser-His-NH(CH2)9-CH3的獲得將2.0g Fmoc-L-His(Trt)-OH(3.23mmol，1當量)溶解于20mL DCM中，其中已經加入了500μL DIEA(1.1mmol，0.33當量)，將它們與干燥的2-氯三苯甲基樹脂(2.0g，3.3mmol)混合。保持攪拌5分鐘，然后加入1mL DIEA(2.2mmol，0.67當量)。使其反應40分鐘。用1.6mL MEOH處理阻斷剩余的氯化物基團。
在1mmol氨基乙酰樹脂上如描述的通常方法對氨基端基Fmoc基團去保護，在存在DIPCDI(770μL，5mmol，5當量)和用DMF作為溶劑的HOBt(770mg，5mmol，5當量)下，混入1.95g Fmoc-L-Ser(tBu)-OH(5mmol，5當量)1小時。隨后用通常描述的方法洗滌該樹脂，且重復Fmoc基團的去保護處理以混入下一個氨基酸。通過下面記載的實施方案，3.09g Fmoc-L-His(Trt)-OH(5mmol，5當量)和1.60g Fmoc-βAla-OH(5mmol，5當量)順序偶合，每一個結合都存在770mg的HOBt(5mmol，5當量)和770μL DIPCDI(5mmol，5當量)。
如描述的通常方法對N端Fmoc基團去保護，在存在用DMF作為溶劑的4.28mL DIEA(25mmol，25當量)下，用2.36mL醋酸酐(25mmol，25當量)處理肽酰樹脂30分鐘，用DMF(5×1分鐘)、DCM(4×1分鐘)、二乙醚(4×1分鐘)洗滌且真空下干燥。
在存在KOH、在DCM中的3％TFA溶液下預先真空干燥，對肽酰樹脂處理5分鐘以獲得肽[Ac-βAla-L-His(Trt)-L-Ser(tBu)-L-His-(Trt)-OH]的完全保護。在冷卻的二乙醚上收集濾液，重復處理三次。在室溫下旋轉蒸發乙醚溶液至干燥，該沉淀物混懸于在水中的50％MeCN中并凍干。通過在水(+0.1％TFA)中5至95％梯度的MeCN(+0.07％TFA)的HPLC分析獲得的原料，顯示出保留時間為24.1分鐘，且純度大于88％。用ES-MS測定其分子量[(M+H)+理論上1034.2，(M+H)+實驗上1034.0]。
在球形大燒瓶中稱量380mg的Ac-βAla-L-His(Trt)-L-Ser(tBu)-L-His-(Trt)-OH(367μmol)，加入350mg癸胺(3當量)和30mL無水DMF。加入120μL的DIPCDI(2當量)，且在47℃磁力攪拌下反應。通過HPLC依靠Ac-βAla-L-His(Trt)-L-Ser(tBu)-L-His-(Trt)-OH的消失控制在2.5小時完成該反應。蒸發該溶劑至干燥，且與DCM共蒸發兩次。將獲得的殘留物[Ac-βAla-His(Trt)-L-Ser(tBu)-L-His(Trt)-NH(CH2)9-CH3]混懸在50mL TFA-DCM-苯甲醚(49∶49∶2)的混合物中，且在室溫下反應30分鐘。加入250mL冷卻的二乙醚，旋轉蒸發該溶劑，且用乙醚實現兩種添加物的共蒸發。殘留物溶解于在水中50％MeCN的混合物中并凍干。
通過在水(+0.1％TFA)中5至85％梯度的MeCN(0.07％TFA)的HPLC分析顯示出保留時間為16.6分鐘，且純度大于71％。用ES-MS測定其分子量[(M+H)+理論上632.4，(M+H)+實驗上632.6]。
實施例4Ac-βAla-His-Ser-His-OH的獲得通過實施例1的相同合成實驗方案(數量、溶劑、余量和反應物)獲得實施例4的肽，但是混入Fmoc-L-Ser(tBu)-OH(8.43g，22mmol)以替代Fmoc-L-Cys(Trt)-OH作為第二個氨基酸。一旦合成完成，用DMF(5×1分鐘)、DCM(4×1分鐘)、二乙醚(4×1分鐘)洗滌樹脂并在真空下干燥。
通過如實施例1中相同的合成實驗方案(數量、溶劑、余量和反應物)，肽從固體載體中釋放。
通過在水(+0.1％TFA)中0至10％梯度的MeCN(0.07％TFA)的HPLC分析顯示出純度大于90％。且用ES-MS測定其分子量[(M+H)+理論上493.22，(M+H)+實驗上493.2]。
實施例5含有Ac-βAla-His-Ser-His-OH化妝品組合物的制備如在本發明中的描述制備下述制劑在足夠大的反應器中稱量油類、表面活性劑和卡波姆類。在另一個反應器中稱量肽，將其溶解在水中，加入防腐劑(Phenonip)。在持續強力攪拌下將肽溶液傾倒入油溶液中。一旦加完添加物，用三乙醇胺調節pH為6.5至7.0。
實施例6含有Ac-βAla-His-Cys-His-OH的化妝品組合物的制備如在本發明中的描述制備下述制劑在足夠大的反應器中稱量油類、蠟類、硅酮和卡波姆類。加熱混合物至65-70℃以熔化蠟類。在另一個反應器中稱量丙三醇，將其混懸在水中，并加入防腐劑(Phenonip)和三乙醇胺。在持續強力攪拌或應用剪切力下加熱混合物至65-70℃。一旦加完添加物，在低速攪拌下冷卻，當混合物的溫度在40℃，加入Ac-βAla-His-Cys-His-OH的水溶液。在室溫下冷卻該膏劑，且如果需要用三乙醇胺調整pH。
實施例7在20個眼下形成眼袋的受試者上進行實施例5描述的化妝品組合物的臨床研究，研究顯示該組合物可以減少眼下形成眼袋的大小。指導受試者在眼眶區域兩個月每天一次輕柔地按摩涂抹該化妝品組合物。借助corneometer(Skinlab)客觀地測量皮膚的水合程度，且借助彈性計在開始處理的0和15，30和60天后測量皮膚彈性，并且還可以由皮膚科醫生觀察眼下眼袋的大小。
定量的結果顯示水合指數增加了5.8％，同時在處理60天后彈性指數增加了35％。根據Friedman’s實驗[Cristoni A.(2001)Lasignificativitádel risultato sperimentale.Quali test usare？Cosmetic News 130，January/February pp30-32]由皮膚科醫生對眼袋外觀作出的主觀評價證實70％的志愿者在僅用15天后眼下眼袋減小，當處理60天后該百分比增加到95％的志愿者眼下眼袋減小(30％輕微減小、30％discreet減小且35％顯著減小)。
根據第一方面，本發明涉及通式(I)的肽
其立體異構體的混合物，其化妝和皮膚藥用可接受的鹽及它們的混合物，其中-X選自半胱氨酰(cysteny1)、絲氨酰、蘇氨酰和氨基丁酰基；-R1選自H或烷基、芳基、芳烷基和酰基；且-R2選自由脂肪族或環狀基團取代的或非取代的氨基、羥基或硫醇。
根據第二個重要的方面，通式(I)的肽中優選地R1為飽和或未飽和、支鏈或環狀、直鏈的C2至C24酰基。
根據本發明一個重要的方面，通式(I)的肽中優選地R2為由飽和或未飽和、支鏈或環狀、直鏈C1-C24脂肪族基團取代的氨基或羥基。
根據本發明一個重要的方面，通式(I)的肽中優選地X為L-絲氨酰，R1為H且R2為由甲基或乙基或十二烷基或十六烷基取代或非取代的氨基。
根據本發明一個重要的方面，通式(I)的肽中優選地X為L-絲氨酰，R1為乙酰基且R2為由甲基或乙基或十二烷基或十六烷基取代或非取代的氨基。
根據本發明一個重要的方面，通式(I)的肽中優選地X為L-絲氨酰，R1為棕櫚酰基且R2為由甲基或乙基或十二烷基或十六烷基取代或非取代的氨基。
根據本發明一個重要的方面，通式(I)的肽中優選地X為L-絲氨酰，R1為H且R2為由甲基或乙基或十二烷基或十六烷基取代或非取代的羥基。
根據本發明一個重要的方面，通式(I)的肽中優選地X為L-絲氨酰，R1為乙酰基且R2為由甲基或乙基或十二烷基或十六烷基取代或非取代的羥基。
根據本發明一個重要的方面，通式(I)的肽中優選地X為L-絲氨酰，R1為棕櫚酰基且R2為由甲基或乙基或十二烷基或十六烷基取代或非取代的羥基。
根據另一個重要的方面，本發明涉及一種基于固相肽合成而獲得通式(I)肽的方法。
根據另一個重要的方面，本發明涉及使用選自Fmoc/叔丁基、Fmoc/三苯甲基和Fmoc/烯丙基的保護基團而獲得通式(I)肽的方法。
根據另一個重要的方面，本發明涉及包括化妝或皮膚藥用有效量的至少一種通式(I)的肽和至少一種化妝或皮膚藥用可接受的賦形劑或輔料的化妝或皮膚藥用組合物。
根據另一個重要的方面，本發明涉及含有至少一種混合入化妝或皮膚藥用可接受載體的通式(I)肽的化妝或皮膚藥用組合物，該載體選自脂質體、毫膠囊(millicapsules)、微膠囊和納米膠囊、海綿狀物、毫球(millispheres)、微球、納米球、毫微粒、微粒和納米粒。
根據另一個重要的方面，本發明涉及一種化妝或皮膚藥用組合物，其具有選自水包油乳劑、油包水乳劑、乳膏、乳液(milks)、洗劑、凝膠劑、油膏劑、搽劑、漿液(serums)、摩絲、香膏(balms)、泡沫劑、體油、肥皂、條狀、鉛筆狀、噴霧劑的劑型。
根據另一個重要的方面，本發明涉及一種含有混合入選自小毛巾、水凝膠、貼片和面膜的固體載體的通式(I)肽的化妝或皮膚藥用組合物。
根據另一個重要的方面，本發明涉及一種含有混合入選自遮瑕膏、化妝粉底、洗劑和卸妝洗劑的化妝線產品中的通式(I)肽的化妝或皮膚藥用組合物。
根據另一個重要的方面，本發明涉及通式(I)的肽在制備用于處理皮膚的化妝或皮膚藥用組合物中的用途。
根據另一個重要的方面，本發明涉及通式(I)的肽在制備用于處理面部皮膚的化妝或皮膚藥用組合物中的用途。
根據另一個重要的方面，本發明涉及通式(I)的肽在制備用于減少或去除下眼眶下形成的眼袋的化妝或皮膚藥用組合物中的用途。
權利要求
1.通式(I)的肽 其立體異構體，其混合物以及其化妝和皮膚藥用可接受的鹽，其特征在于X選自半胱氨酰、絲氨酰、蘇氨酰和氨基丁酰基；R1選自H或烷基、芳基、芳烷基和酰基；且R2選自由脂肪族或環狀的基團取代的或非取代的氨基、羥基或硫醇。
2.根據權利要求1的肽，其特征在于R1是飽和或未飽和、支鏈或環狀、直鏈的C2至C24酰基。
3.根據權利要求1的肽，其特征在于R2是由飽和或未飽和、支鏈或環狀、直鏈C1-C24脂肪族基團取代或未取代的氨基或羥基。
4.根據權利要求1和3任一項的肽，其特征在于X是L-Ser，R1是H且R2是由甲基或乙基或十二烷基或十六烷基取代或非取代的氨基。
5.根據權利要求1至3任一項的肽，其特征在于X是L-Ser，R1是乙酰基且R2是由甲基或乙基或十二烷基或十六烷基取代或非取代的氨基。
6.根據權利要求1至3任一項的肽，其特征在于X是L-Ser，R1是棕櫚酰基且R2是由甲基或乙基或十二烷基或十六烷基取代或非取代的氨基。
7.根據權利要求1和3任一項的肽，其特征在于X是L-Ser，R1是H且R2是由甲基或乙基或十二烷基或十六烷基取代或非取代的羥基。
8.根據權利要求1至3任一項的肽，其特征在于X是L-Ser，R1是乙酰基且R2是由甲基或乙基或十二烷基或十六烷基取代或非取代的羥基。
9.根據權利要求1至3任一項的肽，其特征在于X是L-Ser，R1是棕櫚酰基且R2是由甲基或乙基或十二烷基或十六烷基取代或非取代的羥基。
10.獲得根據權利要求1至9任一項通式(I)的肽的方法，其特征在于在固相中進行。
11.根據權利要求10的獲得通式(I)的肽的方法，其特征在于使用選自Fmoc/叔丁基、Fmoc/三苯甲基和Fmoc/alyl的保護基團。
12.根據權利要求1至9任一項的化妝或皮膚藥用組合物，其特征在于包括化妝或皮膚藥用有效量的至少一種通式(I)的肽和至少一種化妝或皮膚藥用可接受的賦形劑或輔料。
13.根據權利要求12的化妝或皮膚藥用組合物，其特征在于含有至少一種混合入化妝或皮膚藥用可接受的載體的通式(I)的肽，該載體選自脂質體、毫膠囊(millcapsules)、微膠囊、納米膠囊、海綿狀物、毫球(millispheres)、微球、納米球、毫微粒、微粒和納米粒。
14.根據權利要求12和13任一項的化妝或皮膚藥用組合物，特征在于其具有選自水包油乳劑、油包水乳劑、乳液(milks)、洗劑、凝膠劑、軟膏劑、香膏(balms)、泡沫劑、體油、肥皂、條狀、鉛筆狀、噴霧劑、乳膏、搽劑、油膏(unguents)、漿液(serums)和摩絲的劑型。
15.根據權利要求12和13任一項的化妝或皮膚藥用組合物，其特征在于含有至少一種混合入選自小毛巾、水凝膠、貼片和面膜的固體載體的通式(I)的肽。
16.根據權利要求12和13任一項的化妝或皮膚藥用組合物，其特征在于含有至少一種混合入選自遮瑕膏、化妝粉底、洗劑和卸妝洗劑的化妝線產品的通式(I)的肽。
17.根據權利要求1至9任一項通式(I)的肽在制備用于處理皮膚的化妝或皮膚藥用組合物中的用途。
18.根據權利要求17通式(I)的肽在制備用于處理面部皮膚的化妝或皮膚藥用組合物中的用途。
19.根據權利要求17和18任一項通式(I)的肽在制備用于減少或去除下眼眶下形成的眼袋的化妝或皮膚藥用組合物中的用途。
全文摘要
本發明涉及可以減少或去除下眼眶下形成的眼袋的通式(I)的肽，它們的立體異構體和外消旋的或其非外消旋的混合物，以及其化妝或皮膚藥用可接受的鹽，其中X是半胱氨酰、絲氨酰、蘇氨酰或氨基丁酰基；R
文檔編號A61Q19/08GK101061135SQ200580039632
公開日2007年10月24日 申請日期2005年9月22日 優先權日2004年10月5日
發明者A·普伊赫蒙鐵爾, J·塞夫里亞普奇, E·帕塞里尼 申請人:利普泰股份公司