專利名稱：一種長春堿和長春新堿的純化方法
技術領域：
本發明涉及天然產物化學領域，特別是一種抗癌植物長春花的粗提物中的有效成分——長春堿、長春新堿的分離和精制工藝。
背景技術：
長春堿(Vinblastine，VLB)、長春新堿(Vincristine，VCR)是夾竹桃科植物長春花中的有效成分。硫酸長春堿(Vinblastine Sulfate)為國家基本藥物，主要適用于治療霍其金病及惡性淋巴瘤，亦可用于治療絨毛膜上皮癌與乳腺癌等癥。硫酸長春新堿(Vincristine Sulfate)，為國家基本藥物，主要適用于治療急性白血病及霍其金病、惡性淋巴瘤、小細胞肺癌及乳腺癌等，也可用于乳腺癌、支氣管肺癌、軟組織肉瘤，睪丸腫瘤、卵巢癌、消化道癌及惡性循環性黑色素瘤及神經母細胞瘤等。硫酸長春堿、硫酸長春新堿等已廣泛應用于臨床，是目前國際上應用最廣泛的天然植物抗癌藥物之一。
迄今為止，我國只有報道長春堿提取的專利，而對于長春堿分離精制的專利未見專門報道。目前我國只有少數長春花提取物生產廠家生產的長春堿的純度能夠達到國際標準，但其生產成本相當高昂，耗費大量的原料，降低了企業的利潤；而多數廠家則生產純度要求不高的長春堿原料藥或長春堿粗品，產品純度不足95％，不能滿足國際市場對高純度長春堿(≥98％)的需求，長春堿得率也低于30％，降低了其工業化生產的價值，造成了很大的浪費，在客觀上加大了生產成本，同時也降低了產品的國際競爭力。
發明內容
本發明的目的在于提供一種長春堿、長春新堿的分離方法，來生產高純度、高得率的長春堿和長春新堿。
為了達到上述目的，本發明采用的技術方案包括將長春花粗提物經酰化反應后調pH＝6-10，再經紫外光照射，然后用連續重結晶法分離，得到純度≥98％的硫酸長春堿，再將重結晶所用的母液減壓濃縮，將濃縮品經柱層析純化，并分段收集，得到長春堿、長春新堿。所述的酰化反應是用酸和酸酐的組合溶液來完成的。所述紫外照射是用波長為210-390nm，照射劑量為5-20w/m2，照射時間為10-45分鐘。所述的酰化反應與紫外照射的步驟可互換，即亦可先進行紫外輻射，再進行酰化反應。所述的重結晶的溶劑為甲醇、乙醇、乙腈、丙酮等溶劑的一種或其中幾種的混合。所述的重結晶的溶液的濃度為75-100％。所述的柱層析的填料為硅膠或氧化鋁，柱層析的洗脫方式采用梯度洗脫，柱層析的洗脫劑為氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、石油醚、正己烷、甲醇、乙醇中的一種或其中幾種的梯度配比溶液。還可以將經酰化反應的長春花粗提物直接用柱層析法分離，分段收集，減壓蒸干洗脫劑后，得到長春堿、長春新堿，再經過重結晶得到純度≥98％的長春堿和長春新堿。
本發明的優點是1.本發明改變了傳統的生產工藝，通過酰化反應和紫外光照反應將長春新堿的含量由原來的不足2％提高到8-10％，長春堿的含量由60％提高到65-75％，同時也提高了長春堿和長春新堿的純度，采用本工藝所得到的各種長春花堿的純度≥98％，符合國際標準。
2.本發明具有方法流程簡單，操作簡便易行，工藝實用、方便，能耗少，安全可靠，生產成本低，適合于較大規模的工業化生產。
具體實施例方式下面對本發明實施作進一步詳細描述將長春花粗提物經酰化反應后調pH＝6-10，再經紫外光照射，然后用連續重結晶法分離，得到純度≥98％的硫酸長春堿，再將重結晶所用的母液減壓濃縮，將濃縮品經柱層析純化，并分段收集，得到長春堿、長春新堿。所述的酰化反應是用酸和酸酐的組合溶液來完成的。所述紫外照射是用波長為210-390nm，照射劑量為5-20w/m2，照射時間為10-45分鐘。所述的酰化反應與紫外照射的步驟可互換，即亦可先進行紫外輻射，再進行酰化反應。所述的重結晶的溶劑為甲醇、乙醇、乙腈、丙酮等溶劑的一種或其中幾種的混合。所述的重結晶的溶液的濃度為75-100％。所述的柱層析的填料為硅膠或氧化鋁，柱層析的洗脫方式采用梯度洗脫，柱層析的洗脫劑為氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、石油醚、正己烷、甲醇、乙醇中的一種或其中幾種的梯度配比溶液。還可以將經酰化反應的長春花粗提物直接用柱層析法分離，分段收集，減壓蒸干洗脫劑后，得到長春堿、長春新堿，再經過重結晶得到純度≥98％的長春堿和長春新堿。
下面，本發明將用實施例進行進一步的說明，但是它并不限于這些實施例的任一個或類似實例。
實施例1長春花粗提物10g(約含硫酸長春堿60％，硫酸長春新堿1.2％)，加入25mL甲酸和乙酸酐(1.5∶1)的混合溶劑，反應1.5h后，氨水調pH＝8，用波長為366nm的紫外線照射，照射劑量為5w/m2，照射時間為15min，反應完畢后用三倍量的二氯甲烷萃取，濃縮至干，溶于20ml水中，用10％的硫酸乙醇溶液酸化后，倒入沸騰的無水乙醇600ml溶解，冷卻析晶，過濾，濾餅真空干燥，再溶于60℃95％乙醇溶液中，冷卻析晶，過濾，濾餅真空干燥，得硫酸長春堿2.43g(98.4％)。將重結晶母液濃縮后用硅膠柱層析分離，分別用石油醚∶二氯甲烷(10-1∶5-10)、二氯甲烷∶甲醇(99-80∶1-20)梯度洗脫，分段收集，得硫酸長春堿3.21g(98.21％)、硫酸長春新堿0.52g(98.33％)。
實施例2
長春花粗提物10g(約含硫酸長春堿60％，硫酸長春新堿1.3％)，甲醇和80％的乙醇溶液溶解后，氨水調pH＝8，用波長為254nm的紫外線照射，照射劑量為10w/m2，照射時間為12min，加入30mL甲酸和乙酸酐(1∶1)的混合溶劑，反應0.5h后，氨水調pH＝9，300ml二氯甲烷萃取，濃縮至干，堿性氧化鋁柱層析分離，分別用石油醚∶二氯甲烷(10-1∶5-10)、二氯甲烷∶甲醇(99-80∶1-20)梯度洗脫，分段收集，濃縮至干后，得到長春堿和長春新堿，再經重結晶得到長春堿5.73g(98.51％)、長春新堿0.58g(98.2％)。
權利要求
1.一種長春堿和長春新堿的純化方法，其特征在于將長春花粗提物經酰化反應后調pH＝6-10，再經紫外光照射，然后用連續重結晶法分離，得到純度≥98％的硫酸長春堿，再將重結晶所用的母液減壓濃縮，將濃縮品經柱層析純化，并分段收集，得到長春堿、長春新堿。
2.根據權利要求1所述的工藝方法，其中所述的酰化反應是用酸和酸酐的組合溶液來完成的。
3.根據權利要求1所述的工藝方法，其中所述的紫外照射是用波長為210-390nm，照射劑量為5-20w/m2，照射時間為10-45分鐘。
4.根據權利要求1所述的工藝方法，其中所述的酰化反應與紫外照射的步驟可互換，即亦可先進行紫外輻射，再進行酰化反應。
5.根據權利要求1所述的工藝方法，其中所述的重結晶的溶劑為甲醇、乙醇、乙腈、丙酮等溶劑的一種或其中幾種的混合。
6.根據權利要求1所述的工藝方法，其中所述的重結晶的溶液的濃度為75-100％。
7.根據權利要求1所述的工藝方法，其中所述的柱層析的填料為硅膠或氧化鋁，柱層析的洗脫方式采用梯度洗脫，柱層析的洗脫劑為氯仿、二氯甲烷、1，2-二氯乙烷、石油醚、正己烷、甲醇、乙醇中的一種或其中幾種的梯度配比溶液。
8.根據權利要求1所述的工藝方法，還可以將經酰化反應的長春花粗提物直接用柱層析法分離，分段收集，減壓蒸干洗脫劑后，得到長春堿、長春新堿，再經過重結晶得到純度≥98％的長春堿和長春新堿。
全文摘要
一種長春堿和長春新堿的純化方法，它是將長春花粗提物經酰化反應后調pH＝6－10，再經波長為210－390nm，照射劑量為5－20w/m
文檔編號C07D471/18GK1724539SQ20051001017
公開日2006年1月25日 申請日期2005年7月13日 優先權日2005年7月13日
發明者祖元剛, 楊磊, 羅猛, 祖柏實, 李慶勇, 付玉杰, 劉莉娜, 牟璠松, 田 浩, 趙文灝, 王俐, 施曉光, 王磊 申請人:東北林業大學, 祖元剛