專利名稱：肽苯酰胺化合物及其制備方法
技術領域：
本發明涉及一種苯酰胺化合物及其制備方法，更具體地說，涉及一種3，4，5-三甲氧基-二異丙氧基磷酰化亮賴二肽苯酰胺化合物及其制備方法。
背景技術：
在現有技術中，尚未發現3，4，5-三甲氧基-二異丙氧基磷酰化亮賴二肽苯酰胺化合物。專利申請號為03100173.4公開了一種二異丙氧基磷酰化二肽甲酯化合物及其制備方法和以其為活性成分的藥物的應用。該化合物是二異丙氧基磷酰化二肽甲酯類化合物。二異丙氧基磷酰化二肽甲酯類化合物的制備方法是將DIPP-L-氨基酸和L-氨基酸甲酯鹽酸鹽作用生成DIPP二肽甲酯。與本發明化合物的結構具有實質性不同，是一種新的化合物。
發明內容
本發明的目的在于提供一種具有多種抗腫瘤活性基團的3，4，5-三甲氧基-二異丙氧基磷酰化亮賴二肽苯酰胺化合物及其制備方法和應用。
為了達到上述目的，本發明提出了如下的技術方案研制一種抗腫瘤活性的3，4，5-三甲氧基-二異丙氧基磷酰化亮賴二肽苯酰胺化合物，其結構式如下
上述化合物在肽類基礎上引入具有很好的生物活性的磷酰基和具有良好抗腫瘤活性的三甲氧基苯基。
本發明化合物的制備方法為以二異丙氧基磷酰化亮賴二肽和3，4，5-三甲氧基苯酰胺為反應物，反應生成3，4，5-三甲氧基-二異丙氧基磷酰化亮賴二肽苯酰胺化合物，具體方法為(1)向2mmol的3，4，5-三甲氧基苯酰胺和120～140mmol的四氫呋喃的混合物中，攪拌下加入2mmol的二異丙氧基磷酰化二肽和2.0～2.2mmol 1-羥基苯并三氮唑混合物，冰水浴下滴加2.0～2.2mmol N，N-二環己基碳二亞胺與60～70mmol干燥的四氫呋喃混合溶液，室溫反應12小時，過濾，殘余物用四氫呋喃洗滌三次，合并濾液和洗液，旋蒸除去溶劑，殘余物加飽和NaHCO3溶液，充分攪拌后用氯仿萃取，然后(2)合并萃取液依次用飽和NaHCO3溶液、10％檸檬酸、飽和NaCl溶液洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾洗滌，35℃～40℃旋蒸除去氯仿，最后(3)殘余物用200-300目硅膠柱層析或重結晶方法純化，得黃色固體產物。其產率為67％，結構鑒定ESI-MS(m/z)715.6[M+H]+。
本發明所用原料二異丙氧基磷酰化亮賴二肽的合成包括如下步驟(1)酸堿中和法合成二異丙基亞磷酸酯向3mol異丙醇及0.9～1.1molCCl4混合液中滴加1molPCl3，反應后調PH至6～7，分液，萃取水相，收集80℃溫度下，壓力為1.3×10-3Mpa，所得的二異丙基亞磷酸酯，然后(2)合成二異丙氧基亞磷酸酯亮氨酸將10mmol二異丙基亞磷酸酯與40mmolCCl4的混合液，滴入由10mmol亮氨酸、86mmol乙醇、72mmol三乙胺組成的堿性混合液中，除去有機溶劑，加入10ml水，用有機溶劑洗滌，棄去有機相，將水相酸化至PH＝3～4，用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，除去有機溶劑，得二異丙氧基亞磷酸酯亮氨酸，再(3)合成二異丙氧基磷酰化亮賴二肽甲酯向2mmol賴氨酸甲酯鹽酸鹽、4.2mmol N-甲基嗎啡啉和120～140mmol干燥的四氫呋喃的混合溶液中，攪拌下加入4.2mmol N-磷酰亮氨酸和4.2mmol 1-羥基苯并三氮唑，冰水浴下滴加4.2mmol的N，N-二環己基碳二亞胺脫水劑與60～70mmol的干燥四氫呋喃混合溶液，室溫反應后過濾，殘余物用四氫呋喃洗滌，除去溶劑，殘余物加飽和NaHCO3溶液，充分攪拌后用氯仿萃取，合并萃取液依次用飽和NaHCO3溶液、10％檸檬酸、飽和NaCl溶液洗滌，干燥，過濾并洗滌，旋蒸除去氯仿，即得二異丙氧基磷酰化亮賴二肽甲酯，最后(4)脫甲酯將2mmol二異丙氧基磷酰化亮賴二肽甲酯溶于200～250mmol甲醇中，在冰水浴冷卻下加入2.5mmol 1NaOH溶液，室溫攪拌反應2小時，旋蒸除去甲醇，殘余物加入5mlH2O，冰水浴冷卻下，用1NHCl調節至PH為3，過濾除去少量不溶物，濾液用乙酸乙酯萃取數次，合并濾液，用飽和NaCl溶液洗滌數次，無水Na2SO4干燥過濾，洗滌，合并濾液和洗液，35℃旋蒸除去乙酸乙酯，殘余物用乙酸乙酯-石油醚重結晶，得二異丙氧基磷酰化亮賴二肽黃色固體產品。
在反應過程中，滴加亮氨酸、乙醇和三乙胺混合物是為了保持反應體系呈堿性；加入賴氨酸甲酯鹽酸鹽和N-甲基嗎啡啉的目的是除去賴氨酸甲酯鹽酸鹽中的鹽酸；攪拌下加入N-磷酰亮氨酸和1-羥基苯并三氮唑的作用是為了活化N-磷酰亮氨酸的羧基。
本發明的產品3，4，5-三甲氧基-二異丙氧基磷酰化亮賴二肽苯酰胺化合物的應用，作為生物活性和抗腫瘤活性成份，用于抗腫瘤藥物，這是由于該化合物在肽類基礎上引入具有很好的生物活性的磷酰基和具有良好抗腫瘤活性的三甲氧基苯基之緣故。
與現有技術相比，本發明具有如下明顯的優點本發明的產品是一種新的化合物，由于其結構中引入了具有很好的生物活性的磷酰基和具有良好抗腫瘤活性的三甲氧基苯基，因而具有很好的抗腫瘤作用，具有很強的實用性，可廣泛用于醫藥行業；另外，其制造工藝較為簡單，易于獲得。
圖1是本發明的化學結構式圖由該結構式圖可以看出，結構中含有磷酰基和三甲氧基苯基。
具體實施例方式
以下通過具體的實施方式對本發明進行更加詳細的描述實施例1 合成3，4，5-三甲氧基-二異丙氧基磷酰化亮賴二肽苯酰胺化合物1、酸堿中和法合成二異丙基亞磷酸酯(DIPPH)1000ml三頸瓶中加入3mol異丙醇(230ml)及1.1molCCl4(100ml)，裝上回流冷凝管和配有干燥的氣體吸收裝置，室溫下不斷攪拌，中速滴加1mol PCl3(87ml)，1小時滴加完畢，加入過程中自動放熱使CCl4回流，繼續反應30分鐘，用飽和NaHCO3溶液調節PH至6，分液，用100ml CCl4萃取水相，合并有機相，無水MgSO4干燥，旋去低沸物，減壓蒸餾，收集80℃/1.3×10-3Mpa餾分，得二異丙基亞磷酸酯。產率72％，結構鑒定ESI-MS(m/z)167[M+H]+。
2、合成二異丙氧基亞磷酸酯亮氨酸(DIPP-L-Leu)在冰鹽浴及攪拌下，將10mmol二異丙基亞磷酸酯(DIPPH)和40mmol CCl4(5ml)的混合液滴入由10mmol亮氨酸、5ml乙醇、10mlH2O及10ml三乙胺組成的混合液中，10分鐘滴完，繼續于冰浴上攪拌30分鐘，室溫下反應20分鐘，在35℃旋蒸除去有機溶劑，然后加入10ml水，用石油醚、乙醚、乙酸乙酯各洗滌兩次，棄去有機相。冰鹽浴下用稀HCl將水相酸化至PH＝3，用乙酸乙酯萃取三次，合并萃取液，用飽和食鹽水洗滌2次，無水硫酸鎂干燥，于35℃旋蒸除去有機溶劑，再用油泵抽干，得二異丙氧基亞磷酸酯亮氨酸產品。產率85％，結構鑒定ESI-MS(m/z)296[M+H]+。
3、合成二異丙氧基磷酰化亮賴二肽甲酯((DIPP-L-Leu)2-L-Lys-OCH3)在50ml燒瓶中加入2mmol賴氨酸甲酯鹽酸(L-Lys-OCH3)、4.2mmol N-甲基嗎啡啉(NMM)和120mmol干燥的四氫呋喃，攪拌下加入4.2mmol N-磷酰亮氨酸(DIPP-Leu)和4.2mmol 1-羥基苯并三氮唑(HOBt)，冰水浴下滴加4.2mmolN，N-二環己基碳二亞胺脫水劑(DCC)與60mmol干燥的四氫呋喃的混合液，室溫反應12小時后過濾，殘余物用60mmol四氫呋喃(THF)洗滌三次，合并濾液和洗液，旋蒸除去溶劑，殘余物加飽和NaHCO3溶液，充分攪拌后用氯仿萃取，合并萃取液依次用飽和NaHCO3、溶液10％檸檬酸、飽和NaCl溶液洗滌三次，無水Na2SO4干燥，過濾洗滌，旋蒸除去氯仿，即得二異丙氧基磷酰化亮賴二肽甲酯產品。產率67％，結構鑒定ESI-MS(m/z)715.6[M+H]+。
4、脫甲酯將2mmol二異丙氧基磷酰化亮賴二肽甲酯溶于250mmol甲醇中，在冰水浴冷卻下加入2.5mmol 1NaOH溶液，室溫攪拌反應2小時，旋蒸除去甲醇，殘余物加入5mlH2O，冰水浴冷卻下，用1NHCl調節至PH為3，過濾除去少量不溶物，濾液用乙酸乙酯萃取數次，合并濾液，用飽和NaCl溶液洗滌數次，無水Na2SO4干燥過濾，洗滌，合并濾液和洗液，35℃旋蒸除去乙酸乙酯，殘余物用乙酸乙酯-石油醚重結晶，得二異丙氧基磷酰化亮賴二肽黃色固體產品，結構鑒定ESI-MS(m/z)701.6[M+H]+。
5、合成3，4，5-三甲氧基-二異丙氧基磷酰化亮賴二肽苯酰胺化合物(1)向2mmol的3，4，5-三甲氧基苯酰胺和120mmol的四氫呋喃的混合物中，攪拌下加入2mmol的二異丙氧基磷酰化二肽和2.0mmol 1-羥基苯并三氮唑混合物，冰水浴下滴加2.0mmol N，N-二環己基碳二亞胺與70mmol干燥的四氫呋喃混合溶液，室溫反應12小時，過濾，殘余物用四氫呋喃洗滌三次，合并濾液和洗液，旋蒸除去溶劑，殘余物加飽和NaHCO3溶液，充分攪拌后用氯仿萃取，然后(2)合并萃取液依次用飽和NaHCO3溶液、10％檸檬酸、飽和NaCl溶液洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾洗滌，40℃旋蒸除去氯仿，最后(3)殘余物用硅膠柱層析(具體化)或重結晶方法純化，得黃色固體產物，產率為70％。
結構鑒定ESI-MS(m/z)886.3[M+H]+化合物的波譜數據如下1H NMR(CH3OH)δ0.95(d，12H，Leucine CH3×4)，1.29(m，24H，i-propyl CH3×8)，1.82(m，10H，Lysine γ-CH2，δ-CH2，β-CH2，Leucine-CH2)，3.18(m，2H，Leucine γ-CH)，3.44～3.61(m，2H，Lysine ε-CH2)，3.72(m，5H，Leucine α-CH×2，ph-4-OCH3)，3.81(s，6H，ph-3，5-OCH3)，4.53(m，6H，Leucine NH×2，Leucine OCH×4)，4.82(m，4H，Lysineα-CH，Lysineε-NH，Lysineα-NH，ph-NH)，6.99(s，2H，ph-CH×2)ppm。
實施例2 方法及過程完全同例1，僅有如下工藝參數不同過程1，酸堿中和法合成二異丙基亞磷酸酯(DIPPH)加入3mol異丙醇(230ml)及0.9mol CCl4，反應后調PH值至7；過程2，合成二異丙氧基亞磷酸酯亮氨酸(DIPP-L-Leu)冰鹽浴下用稀HCl將水相酸化至PH＝4；過程3，合成二異丙氧基磷酰化亮賴二肽甲酯燒瓶中干燥的四氫呋喃量為140mmol，冰水浴下滴加4.2mmolN，N-二環己基碳二亞胺脫水劑(DCC)與70mmol干燥的四氫呋喃的混合液；過程4，脫甲酯將2mmol二異丙氧基磷酰化亮賴二肽甲酯溶于200mmol甲醇中；過程5，合成3，4，5-三甲氧基-二異丙氧基磷酰化亮賴二肽苯酰胺化合物(1)向2mmol的3，4，5-三甲氧基苯酰胺和140mmol的四氫呋喃的混合物中，攪拌下加入2mmol的二異丙氧基磷酰化二肽和2.2mmol 1-羥基苯并三氮唑混合物，冰水浴下滴加2.2mmol N，N-二環己基碳二亞胺與60mmol干燥的四氫呋喃混合溶液；(2)35℃旋蒸除去氯仿。
化合物的波譜數據如下1H NMR(CH3OH)δ0.95(d，12H，Leucine CH3×4)，1.29(m，24H，i-propyl CH3×8)，1.82(m，10H，Lysineγ-CH2，δ-CH2，β-CH2，Leucine-CH2)，3.18(m，2H，Leucineγ-CH)，3.44～3.61(m，2H，Lysineε-CH2)，3.72(m，5H，Leucineα-CH×2，ph-4-OCH3)，3.81(s，6H，ph-3，5-OCH3)，4.53(m，6H，Leucine NH×2，Leucine OCH×4)，4.82(m，4H，Lysineα-CH，Lysineε-NH，Lysineα-NH，ph-NH)，6.99(s，2H，ph-CH×2)ppm。
權利要求
1.一種肽苯酰胺類化合物，其特征在于該化合物是3，4，5-三甲氧基-二異丙氧基磷酰化亮賴二肽苯酰胺化合物，其結構式如下
2.權利要求1所述化合物的制備方法，其特征在于以二異丙氧基磷酰化亮賴二肽和3，4，5-三甲氧基苯酰胺為反應物，反應生成3，4，5-三甲氧基-二異丙氧基磷酰化亮賴二肽苯酰胺化合物，具體方法為(1)向2mmol的3，4，5-三甲氧基苯酰胺和120～140mmol的四氫呋喃的混合物中，攪拌下加入2mmol的二異丙氧基磷酰化二肽和2.0～2.2mmol 1-羥基苯并三氮唑混合物，冰水浴下滴加2.0～2.2mmol N，N-二環己基碳二亞胺與60～70mmol干燥的四氫呋喃混合溶液，室溫反應12小時，過濾，殘余物用四氫呋喃洗滌三次，合并濾液和洗液，旋蒸除去溶劑，殘余物加飽和NaHCO3溶液，充分攪拌后用氯仿萃取，然后(2)合并萃取液依次用飽和NaHCO3溶液、10％檸檬酸、飽和NaCl溶液洗滌，無水Na2SO4干燥，過濾洗滌，35℃～40℃旋蒸除去氯仿，最后(3)殘余物用硅膠柱層析或重結晶方法純化，得黃色固體產物。
3.根據權利要求2所述的方法，其特征在于二異丙氧基磷酰化亮賴二肽的合成包括如下步驟(1)酸堿中和法合成二異丙基亞磷酸酯向3mol異丙醇及0.9～1.1molCCl4混合液中滴加1molPCl3，反應后調PH至6～7，分液，萃取水相，收集80℃溫度下，壓力為1.3×10-3Mpa所得的二異丙基亞磷酸酯，然后(2)合成二異丙氧基亞磷酸酯亮氨酸將10mmol二異丙基亞磷酸酯與40mmolCCl4的混合液，滴入由10mmol亮氨酸、86mmol乙醇、72mmol三乙胺組成的堿性混合液，除去有機溶劑，加入10ml水，用有機溶劑洗滌，棄去有機相，將水相酸化至PH＝3～4，用乙酸乙酯萃取，飽和食鹽水洗滌，除去有機溶劑，得二異丙氧基亞磷酸酯亮氨酸，再(3)合成二異丙氧基磷酰化亮賴二肽甲酯向2mmol賴氨酸甲酯鹽酸鹽、4.2mmol N-甲基嗎啡啉和120～140mmol干燥的四氫呋喃的混合溶液中，攪拌下加入4.2mmol N-磷酰亮氨酸和4.2mmol 1-羥基苯并三氮唑，冰水浴下滴加4.2mmol的N，N-二環己基碳二亞胺脫水劑與60～70mmol的干燥四氫呋喃混合溶液，室溫反應后過濾，殘余物用四氫呋喃洗滌，除去溶劑，殘余物加飽和NaHCO3溶液，充分攪拌后用氯仿萃取，合并萃取液依次用飽和NaHCO3溶液、10％檸檬酸、飽和NaCl溶液洗滌，干燥，過濾并洗滌，旋蒸除去氯仿，即得二異丙氧基磷酰化亮賴二肽甲酯，最后(4)脫甲酯將2mmol二異丙氧基磷酰化亮賴二肽甲酯溶于200～250mmol甲醇中，在冰水浴冷卻下加入2.5mmol 1NaOH溶液，室溫攪拌反應2小時，旋蒸除去甲醇，殘余物加入5mlH2O，冰水浴冷卻下，用1NHCl調節至PH為3，過濾除去少量不溶物，濾液用乙酸乙酯萃取數次，合并濾液，用飽和NaCl溶液洗滌數次，無水Na2SO4干燥過濾，洗滌，合并濾液和洗液，35℃旋蒸除去乙酸乙酯，殘余物用乙酸乙酯-石油醚重結晶，得二異丙氧基磷酰化亮賴二肽黃色固體產品。
全文摘要
本發明公開了一種3，4，5－三甲氧基－二異丙氧基磷酰化亮賴二肽苯酰胺化合物及其制備方法，以二異丙氧基磷酰化亮賴二肽和3，4，5－三甲氧基苯酰胺為反應物，按摩爾比1∶1，室溫反應12小時，并經過濾、洗滌、干燥、旋蒸，最后用硅膠柱層析或重結晶方法純化，得黃色固體產物，解決了合成具有良好抗腫瘤活性的化合物問題，具有制造工藝較為簡單，原料易得等優點，由于其結構中引入了具有很好的生物活性的磷酰基和具有良好抗腫瘤活性的三甲氧基苯基，因而具有很好的抗腫瘤作用，可廣泛用于醫藥及化工行業。
文檔編號C07K5/00GK1763080SQ200510037250
公開日2006年4月26日 申請日期2005年9月9日 優先權日2005年9月9日
發明者蔣宇揚, 宇小青 申請人:清華大學深圳研究生院