專利名稱：鹽孢菌酰胺及其使用方法
技術領域：
本發明一般涉及抗腫瘤劑，特別是涉及鹽孢菌酰胺及其作為抗腫瘤劑的應用。
冃京fe息 特征是細胞增生不受細胞生長正常控制的腫瘤類疾病，是人類死亡的一個主要原 因。化療的臨床經驗表明，希望有新的更有效的細胞毒素類藥物來治療這些疾病。的確，由 于對轉移到不同部位的新的腫瘤和癌細胞類型的識別，以及由于抗腫瘤治療方案作為一種 主要的和附加的癌癥醫學療法的有效性，抗腫瘤劑的使用已經增加。 由于抗腫瘤劑是細胞毒素(對細胞有毒)，因此它們不僅會干擾腫瘤細胞的生長， 而且也會干擾正常細胞的生長。抗腫瘤劑對腫瘤細胞的作用要大于對正常細胞的作用，原 因是腫瘤細胞的生長很快。因此，抗腫瘤劑所作用的正常組織細胞是快速分裂的細胞，如骨 髓(在低血細胞計數中見到)，毛囊(以脫發方式見到)以及GI粘膜上皮(引起惡心，嘔 吐，喪失食欲，腹瀉)。通常，抗腫瘤劑具有任何種類的人類用藥的最低治療指數，從而產生 了對生命造成威脅的重大潛在毒性。某些通常使用的抗腫瘤劑對特異性組織具有獨特而急 性的毒性。例如，長春花屬生物堿對神經組織有重大毒性，而阿霉素對心臟組織有特異性毒 性，博來霉素對肺部組織具有毒性。 因此，對于有效抑制高增生性細胞的增生，同時具有低于現有抗腫瘤劑的IC50 值，從而導致潛在的嚴重副作用顯著下降的抗腫瘤劑，仍存在繼續的需求。
發明概述 本發明基于海洋放線菌菌株CNB392和CNB476的某些發酵產物是高增生性哺乳動 物細胞的有效抑制劑這一發現。CNB392和CNB476菌株存在于小單孢菌科中，而且鹽孢菌 (Salinospora)這一屬名(generic印ithet)已經被提議用于這種專性海洋族群。由這種 菌株產生的反應產物被歸為鹽孢菌酰胺，在治療腫瘤疾病方面特別有效，這是由于其具有
8低分子量、低IC50值、高藥效，以及癌細胞對真菌的選擇性。
在本發明的 一 種實施方式中，提供了具有結構(I)的化合物<formula>formula see original document page 9</formula>其中A至R3各自獨立地為-H，烷基，取代烷基，鏈烯基，取代鏈
烯基，炔基，取代炔基，芳基，取代芳基，雜芳基，取代雜芳基，雜環基，取代雜環基，環烷基， 取代環烷基，烷氧基，取代烷氧基，硫烷基(thioalkyl)，取代硫烷基，羥基，卣素，氨基，酰胺 基，羧基，-C (0) H，酰基，氧酰基(oxyacyl)，氨基甲酸酯，磺酰基，氨磺酰，或砜基；每個R4獨 立地為烷基，取代烷基，鏈烯基，取代鏈烯基，炔基，取代炔基，芳基，取代芳基，環烷基，取代 環烷基A至E4各自獨立地為-0， -NR5或-S，其中R5為-H或C「Ce烷基；且x為0到8。
在本發明的進一步實施方式中，提供了具有結構(II)的化合物<formula>formula see original document page 9</formula>其中A至R3各自獨立地為-H，烷基，取代烷基，鏈烯基，取代鏈烯
基，炔基，取代炔基，芳基，取代芳基，雜芳基，取代雜芳基，雜環基，取代雜環基，環烷基，取 代環烷基，烷氧基，取代烷氧基，硫烷基，取代硫烷基，羥基，卣素，氨基，酰胺基，羧基，-c(o)
H，酰基，氧酰基，氨基甲酸酯，磺酰基，氨磺酰，或砜基；每個R4獨立地為烷基，取代烷基，鏈 烯基，取代鏈烯基，炔基，取代炔基，芳基，取代芳基，環烷基，取代環烷基；E工至E4各自獨立 地為-0， -NR5，或-S，其中R5為-H或C「C6烷基；以及x為0到8。 在本發明的另 一 種實施方式中，提供了具有結構(III)的化合物其中至R3各自獨立地為-H，烷基，取代烷基，鏈烯基，取代鏈烯基，
炔基，取代炔基，芳基，取代芳基，雜芳基，取代雜芳基，雜環基，取代雜環基，環烷基，取代環
烷基，烷氧基，取代烷氧基，硫烷基，取代硫烷基，羥基，卣素，氨基，酰胺基，羧基，-C (0) H， 酰基，氧酰基，氨基甲酸酯，磺酰基，氨磺酰，或砜基，每個R4獨立地為烷基，取代烷基，鏈烯 基，取代鏈烯基，炔基，取代炔基，芳基，取代芳基，環烷基，取代環烷基，E工至E4各自獨立地 為-0， -NR5，或-S，其中R5為-H或CrC6烷基，以及x為0到8。 在本發明的又 一 種實施方式中，提供了具有結構(IV)的化合物
CI 在本發明的另 一 種實施方式中，提供了具有結構(V)的化合物
10<formula>formula see original document page 11</formula> 在本發明的另 一 種實施方式中，提供了具有結構(VI)的化合物
<formula>formula see original document page 11</formula> 在另一種實施方式中，提供了一種藥物組合物，其包括存在于藥學上可接受的載
體中的至少一種結構i-vi的化合物。 在另一種實施方式中，提供了制品，其包括包裝材料和裝在包裝材料內的藥物組 合物，其中該包裝材料包括指明該藥物組合物可用于治療細胞增生性疾病的標簽，以及其
中該藥物組合物包括至少一種結構i-vi的化合物。 在又一種實施方式中，提供了一種治療哺乳動物細胞增生性疾病的方法。這樣的
方法可通過例如將治療有效量的結構i-vi的化合物向所需的患者給藥的方式進行。 在另外的實施方式中，提供了制備結構I-VI的化合物的方法，該化合物具有 抑制高增生性哺乳動物細胞增生的能力。這樣的方法可通過例如對鹽孢菌種的菌株
CNB392(ATCC#_)或CNB476 (ATCC PTA-5275)培養物進行培養，并從該培養物中分離
出結構I的至少一種化合物的方式進行。附圖簡要說明
圖1示出了本發明示例性化合物鹽孢菌酰胺A的化學結構，其具有相對的立體化學。 圖2示出了說明"鹽孢菌"系統發育的系統樹。 圖3示出了用于治療幾種人類癌癥的抗腫瘤劑，足葉乙甙的化學結構。 圖4比較了鹽孢菌酰胺A和足葉乙甙的細胞毒素活性和劑量響應曲線。 圖5是描繪用于分離鹽孢菌酰胺A的示例性分離方案的方塊圖。 圖6-14是用于闡明鹽孢菌酰胺A結構的NMR， IR和UV光譜數據。 圖15是菌株CNB392和CNB476在其16S rDNA內具有的標記核苷酸，該標記核苷
酸使這些菌株與小單孢菌科中的其它成員在系統發育學上區分開來。 圖16示出了本發明示例性化合物鹽孢菌酰胺A(結構V)的化學結構，其具有絕對 的立體化學。 圖17繪出了鹽孢菌酰胺A的最終X-射線結構的ORTEP圖(熱橢圓形點圖)，描述 了其絕對立體化學。
發明詳述<formula>formula see original document page 12</formula>中A至R3各自獨立地為-H，烷基，取代烷基，鏈烯基，取代鏈烯基，炔基，取代炔基，芳基， 取代芳基，雜芳基，取代雜芳基，雜環基，取代雜環基，環烷基，取代環烷基，烷氧基，取代烷 氧基，硫烷基，取代硫烷基，羥基，卣素，氨基，酰胺基，羧基，-C(O)H，酰基，氧酰基，氨基甲酸 酯，磺酰基，氨磺酰，或砜基；每個R4獨立地為烷基，取代烷基，鏈烯基，取代鏈烯基，炔基，取 代炔基，芳基，取代芳基，環烷基，取代環烷基&至E4各自獨立地為-0， -NR5，或-S，其中R5 為-H或C「Ce烷基；以及x為0到8。 在本發明的進一步實施方式中，提供了具有結構(II)的化合物<formula>formula see original document page 13</formula>其中A至R3各自獨立地為-H，烷基，取代烷基，鏈烯基，取代鏈烯
II
基，炔基，取代炔基，芳基，取代芳基，雜芳基，取代雜芳基，雜環基，取代雜環基，環烷基，取
代環烷基，烷氧基，取代烷氧基，硫烷基，取代硫烷基，羥基，卣素，氨基，酰胺基，羧基，-c(o)
H，酰基，氧酰基，氨基甲酸酯，磺酰基，氨磺酰，或砜基；每個R4獨立地為烷基，取代烷基，鏈 烯基，取代鏈烯基，炔基，取代炔基，芳基，取代芳基，環烷基，取代環烷基；E工至E4各自獨立 地為-0， -NR5，或-S，其中R5為-H或C「C6烷基；以及x為0到8。
&至R3各自獨立地為-H，烷基，取代烷基，鏈烯基，取代鏈烯基，炔基，取代炔基，芳基，取代 芳基，雜芳基，取代雜芳基，雜環基，取代雜環基，環烷基，取代環烷基，烷氧基，取代烷氧基， 硫烷基，取代硫烷基，羥基，卣素，氨基，酰胺基，羧基，-C(0)H，酰基，氧酰基，氨基甲酸酯，磺 酰基，氨磺酰，或砜基，每個R4獨立地為烷基，取代烷基，鏈烯基，取代鏈烯基，炔基，取代炔 基，芳基，取代芳基，環烷基，取代環烷基，E工至E4各自獨立地為-0， -NR5，或-S，其中R5為-H 或C「Ce烷基，以及x為0到8。 在本發明的又 一 種實施方式中，提供了具有結構(IV)的化合物<formula>formula see original document page 13</formula> 在一種實施方式中，提供了具有結構(III)的化合物
其中
拷2<formula>formula see original document page 14</formula>IV 在本發明的另 一 種實施方式中，提供了具有結構(V)的化合物:
<formula>formula see original document page 14</formula>
在本發明的另 一 種實施方式中，提供了具有結構(VI)的化合物:<formula>formula see original document page 15</formula> 此處所用的術語〃 烷基〃 是指具有1至約12個碳原子的單價直鏈或支鏈烴基，包括甲基，乙基，正丙基，異丙基，正丁基，異丁基，叔丁基，正己基，和類似基團。
此處所用的術語〃 取代烷基〃 是指帶有一個或多個取代基的烷基，這些取代基選自羥基，烷氧基，氫硫基，環烷基，取代環烷基，雜環基，取代雜環基，芳基，取代芳基，雜芳基，取代雜芳基，芳氧基，取代芳氧基，鹵素，氰基，硝基，氨基，酰胺基，-C (0) H，酰基，氧酰基，羧基，磺酰基，氨磺酰，砜基，和類似基團。 此處所用的術語〃 低級烷基〃 是指具有1至約6個碳原子的烷基。 此處所用的術語〃 鏈烯基〃 是指具有一個或多個碳碳雙鍵以及約2至12個碳原
子的直鏈或支鏈烴基，以及〃 取代鏈烯基〃 是指進一步帶有一個或多個上述取代基的鏈烯基。 此處所用的術語〃 炔基〃 是指具有至少一個碳碳叁鍵以及約2至約12個碳原子的直鏈或支鏈烴基，而〃 取代炔基〃 是指進一步帶有上述一個或多個取代基的炔基。
此處所用的術語〃 芳基〃 是指具有6至14個碳原子的芳香基團，而〃 取代芳基〃是指進一步帶有一個或多個上述取代基的芳基。 此處所用的術語〃 雜芳基〃 是指含有一個或多個雜原子(例如N， 0， S或類似原子)作為環結構一部分，以及具有3至14個碳原子的芳香基團，而〃 取代雜芳基〃 是指進一步帶有一個或多個上述取代基的雜芳基。 此處所用的術語〃 烷氧基〃 是指-0-烷基-部分，其中烷基如上定義，而〃 取代烷氧基〃 是指進一步帶有一個或多個上述取代基的烷氧基。 此處所用的術語〃 硫烷基〃 是指-S-烷基-部分，其中烷基如上定義，而〃 取代硫烷基〃 是指進一步帶有一個或多個上述取代基的硫烷基。 此處所用的術語〃 環烷基〃 是指具有約3至約8個碳原子的含環烷基，而〃 取代環烷基〃 是指進一步帶有一個或多個上述取代基的環烷基。 此處所用的術語〃 雜環基〃 是指具有一個或多個雜原子(例如N， 0， S或類似原子)作為環結構一部分以及具有3至14個碳原子的環狀(即含環)基團，而〃 取代雜環基〃 是指進一步帶有一個或多個上述取代基的雜環基。
在一些實施方式中，提供了結構I-III的化合物，其中Ep E3和E4為-0，而E2為-NH。 在一些實施方式中，提供了結構I-III的化合物，其中&和R2為-H，烷基或取代烷基，而R3為羥基或烷氧基。在一些實施方式中，Ri為取代烷基。預期使用的示例性取代烷基包括鹵化烷基，例如諸如氯化烷基。 本發明的化合物可被配制成天然形式或鹽形式的藥物組合物。藥學上可接受的非毒性鹽包括堿加成鹽(base addition salt)(采用自由羧基或其它陰離子基團形成)，其可來源于無機堿，例如鈉，鉀，銨，鈣，或鐵的氫氧化物，以及有機堿，例如異丙基胺，三乙基胺，2-乙基氨基-乙醇，組氨酸，普魯卡因，和類似物。這類鹽也可以用任何的自由陽離子基團形成為酸加成鹽，通常是用無機酸如鹽酸，硫酸或磷酸，或有機酸如乙酸，對甲苯磺酸，甲磺酸，草酸，酒石酸，苦杏仁酸，和類似酸。本發明的鹽包括采用無機酸如鹽酸、氫溴酸、氫碘酸、硫酸、磷酸和類似酸對氨基基團進行質子化而形成的胺鹽。本發明的鹽也包括采用合適的有機酸如對甲苯磺酸、乙酸和類似酸對氨基基團進行質子化而形成的胺鹽。本發明實踐中預期采用的其它賦形劑是本領域普通技術人員可獲知的那些賦形劑，如在UnitedStates Pharmacopeia Vol. XXII禾口 National Formulary Vol. XVII， U. S. PharmacopeiaConvention, Inc. ， Rockville，MD (1989)中可見到的那些賦形劑，這里將這些文獻的相關內容引入作為參考。 根據本發明的化合物可包含一個或多個不對稱碳原子，因此可存在為外消旋物或外消旋混合物、單個的對映體、非對映異構混合物和單獨的非對映異構體。術語〃 立體異構體〃 是指分子中不同基團僅在空間取向上互不相同的化合物。立體異構體具有相同的分子量，化學組成，以及結構，但原子的組合方式不同。也就是說，某些相同的化學部分在空間取向上有所不同，因此，當為純化合物時，該化合物具有旋轉偏振光平面的能力。然而， 一些純立體異構體的旋光度很小，以至于采用目前的儀器探測不到。這些化合物的所有這類異構體形式都清楚地包含在本發明的范圍內。 每個立體型的碳可以具有R或S構型。盡管本申請中舉例的具體化合物被以特定的構型描繪，但也想象得出在任何給定的手性中心處具有相反立體化學的化合物或它們的混合物。當在本發明的衍生物中發現手性中心時，應該理解，本發明涵蓋了所有可能的立體異構體。術語〃 光學純的化合物〃 或〃 光學純的異構體〃 是指手性化合物的單一立體異構體，而不管化合物的構型如何。 本發明示例性的結構I化合物如下所示
鹽孢菌酰胺A的分子結構中具有可被化學修飾以制造合成衍生物的各種官能團(內酯，鹵代烷，酰胺，羥化物)。因此，示例性的本發明化合物鹽孢菌酰胺A具有優異的形成合成和半合成衍生物的引導性結構。確實，可對鹽孢菌酰胺A進行衍生以改進藥物代謝動力學和藥效學性質，這使得衍生物易于給藥并增加了其作為抗腫瘤劑的利用度。對本發明的鹽孢菌酰胺化合物進行化學修飾而制得本發明范圍內的其它化合物的方法是本領域普通技術人員可獲得的。 在HTC-116細胞分析試驗中，鹽孢菌酰胺A顯示出對人類結腸癌細胞具有強的細胞毒素活性。IC50值為11ng/mL，這幾乎超過足葉乙甙(參見圖3， IC50值為828ng/mL)的活性達2個數量級(參見圖4)，足葉乙甙是一種用于治療多種癌癥的抗癌藥物。這種高活性使本發明的鹽孢菌酰胺成為用于治療各種人類癌癥的優異候選物，尤其是減慢了目前尚無治療方案的頑固癌(refractile cancers)的生長。鹽孢菌酰胺A對抑制哺乳動物細胞具有特效，對白念珠菌(Candida albicans)的抗真菌活性很小(IC50 250 y g/mL)，且不具有抗細菌活性(金黃色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)，尿腸球菌(Enterococcusfaecium))。鹽孢菌酰胺A的IC50遠遠低于目前已在使用或處于臨床試驗中的最強化療劑。
鹽孢菌酰胺A是海洋放線菌菌株CNB392和CNB476的發酵產物。這些菌株是放線菌目的成員，其為高G+C革蘭氏陽性菌。CNB392和CNB476的新穎性在于屬這一級別上。這里所述的發明化合物由某些〃 鹽孢菌〃 種產生。在一些實施方式中，本發明的化合物由〃鹽孢菌〃 種的菌株CNB392和CNB476產生。為此，根據國際承認用于專利程序的微生物保存布達佩斯條約，于2003年6月20日將〃 鹽孢菌〃 種的CNB392和CNB476菌株保藏在位于12301Parklawn Drive, Rockville， Md. 20852U. S. A.的美國模式菌種收集中心的專利菌種存放處，ATCC保藏號分別為_和PTA-5275。 如同其它生物體的情況， 〃 鹽孢菌〃 種的特征易于變化。例如，可采用各種已知
的物理和化學誘變劑，如紫外線J-射線、Y _射線和N-甲基-N'-硝基-N-亞硝基胍，進
行處理，可得到特定菌株的重組體、變異體或突變體。保留了產生本發明化合物這個特性的
特定菌株的所有天然的和誘發的變異體、突變體和重組體都落入本發明的范圍內。 本發明的化合物可例如通過細菌發酵而制備，其產生的化合物的量足以用于開發
藥物和用于臨床試驗。在一些實施方式中，本發明的化合物是通過在AlBfe+C或CKA-液體介質中對放線菌菌株CNB392和CNB476進行發酵而產生的。培養介質中還應該包括培養物生長和發育所必需的基本痕量元素。這類痕量元素在介質的其它組分中作為雜質存在，其存在量足以滿足生物體的生長要求。如果發泡變成問題，需要向大規模的培養介質中加入少量的(即0. 2mL/L)消泡劑如聚丙二醇(M. W.約為2000)。通過將有機代謝物吸附到安珀萊特(amberlite)XAD-16樹脂上，使有機代謝物分離。例如，采用甲醇二氯甲烷l : l洗脫XAD-16樹脂而分離出鹽孢菌酰胺A，每升培養物中得到的粗提取物為約105mg。然后采用反相快速色譜法，接著采用反相HPLC和正相HPLC，從初提取物中分離鹽孢菌酰胺A，獲得6. 7mg鹽孢菌酰胺A。圖5給出了本發明化合物分離和分開方案的方塊圖。
采用各種NMR技術、質譜、IR和UV光譜對鹽孢菌酰胺A的結構進行解析，如圖6_14所示。 鹽孢菌酰胺A的絕對結構，以及對鹽孢菌酰胺A的整體結構的確認是采用單晶體X-射線衍射分析獲得的(參見實施例3)。 本發明還提供了包括包裝材料和裝在包裝材料內的藥物組合物的制品，其中所述的包裝材料包括說明藥物組合物可用于治療癌癥的標簽，及其中所述的藥物組合物包括本發明的化合物。因此，一方面，本發明提供了一種包括本發明化合物的藥物組合物，其中所述的化合物的濃度為有效治療細胞增生性疾病的濃度。本領域的普通技術人員可例如根據標準治療方案或采用動物體內試驗來確定該濃度。 用作本發明制品的構成部分的藥物組合物可以以固體、溶液、乳液、分散系、膠束、脂質體的形式和類似形式使用，其中最終的組合物含有一種或多種作為活性成分的本發明化合物，與適于經腸或腸胃外應用的有機或無機載體或賦形劑相混合。用作本發明制品的構成部分的化合物可以例如與常規的無毒性藥學可接受載體結合，形成片劑、顆粒劑、膠囊、栓劑、溶劑、乳液、懸浮液，以及其它適用的劑型。可以采用的載體包括葡萄糖、乳糖、阿拉伯膠、白明膠、甘露糖醇、淀粉糊、三硅酸鎂、滑石、玉米淀粉、角蛋白、硅膠、馬鈴薯淀粉、脲、中等鏈長的甘油三酯、右旋糖酐以及其它適于制備固體、半固體或液體形式制劑的載體。此外也可采用輔劑、穩定劑、增稠劑和著色劑以及香味劑。 本發明的組合物可包含下述的其它治療劑，并且例如，可采用常規的固體或液體載體或稀釋劑，以及適于所需給藥方式的藥物添加劑類型(例如，賦形劑，粘結劑，防腐劑，穩定劑，調味劑等)，根據藥物配制領域公知的技術，進行配制。 本發明的藥物組合物可以采用任何合適的方式給藥，如口服給藥，諸如以片劑、膠囊、顆粒或粉末形式；舌下給藥；口腔給藥；腸胃外給藥，諸如通過皮下、靜脈內、肌肉或腦池內的注射或輸注技術(如作為無菌注射性水性或非水性溶液或懸浮液)；鼻腔給藥，諸如通過吸入噴劑；局部給藥，諸如采用乳膏或藥膏形式；或者直腸給藥，諸如以栓劑形式；以含有無毒性藥學可接受載體或稀釋劑的單位劑量制劑的形式。本發明的化合物可以例如以適于立即釋放或延遲釋放的形式進行給藥。可采用包括本發明化合物的適當藥物組合物，或者，特別在延遲釋放的情況下，可采用裝置，如皮下輸注裝置或滲透泵，實現立即釋放或延遲釋放。本發明的化合物也可以脂質體方式進行給藥。 本發明還提供了采用發明的結構(I)-(VI)的鹽孢菌酰胺化合物來抑制哺乳動物細胞增生的方法，該方法是通過使這些細胞與其量足以抑制哺乳動物細胞增生的本發明鹽孢菌酰胺化合物相接觸而實現的。 一種實施方式是抑制高增生性哺乳動物細胞增生的方法。在本發明中， 〃 高增生性哺乳動物細胞〃 是指不受生長的特性限制，如編程性細胞死亡(細胞凋亡)的哺乳動物細胞。另一種優選實施方式是哺乳動物細胞為人類細胞時。本發明還提供了使哺乳動物細胞和至少一種本發明的鹽孢菌酰胺化合物以及至少一種其它的抗腫瘤劑相接觸的方法。 在另一種實施方式中，提供了治療哺乳動物細胞增生性疾病的方法，該方法包括
給予患者所需的治療有效量的結構(i)-(vi)的化合物。可采用本發明的方法有效治療的
細胞增生性疾病包括以腫瘤的形成為特征的疾病。如此，本發明的化合物就是抗腫瘤劑。此處所用的術語〃 腫瘤的〃 涉及異常生長的腫瘤，這類生長的發生是由于細胞增生不受到生長的通常限制。此處所用的術語〃 抗腫瘤劑〃 是抑制、消除、阻礙、或逆轉細胞的腫瘤表型的任何化合物、組合物、混合物、共混物或摻和物。在一些實施方式中，腫瘤選自乳腺腫瘤，小細胞肺部腫瘤，非小細胞肺部腫瘤，結直腸腫瘤，白血病，黑素瘤，胰腺癌，中樞神經系統(CNS)腫瘤，卵巢腫瘤，前列腺腫瘤，軟組織或骨肉瘤，頭頸部腫瘤，包括甲狀腺和非何杰金氏病的胃癌，胃部腫瘤，骨髓瘤，膀胱腫瘤，腎部腫瘤，包括甲狀腺和非何杰金氏和何杰金氏病的神經內分泌性腫瘤。在一種實施方式中，腫瘤是結直腸腫瘤。 目前癌癥治療中使用化療，外科手術，放療，采用生物反應調節劑進行的治療，以及免疫療法。每種治療方式都有本領域普通技術人員公知的特異性適應癥，可采用一種療法或所有療法實現腫瘤細胞的全部毀滅。本發明提供了利用一種或多種本發明鹽孢菌酰胺的化療法。而且，本發明也提供了聯合利用本發明的鹽孢菌酰胺化合物和其它抗腫瘤劑的聯合化療法，該聯合化療法一般比采用單獨一種抗腫瘤劑更有效。因此，本發明的再一方面提供了組合物，其包括治療有效量的至少一種本發明鹽孢菌酰胺化合物與至少一種抗腫瘤劑。這類組合物也可與生理學容許的液體，凝膠或固體載體，稀釋劑，輔劑和賦形劑一起提供。這類載體，稀釋劑，輔劑和賦形劑可在United StatesPharmacopeiaVol.XXII禾口 National Formulary Vol.XVII， U.S.Pharmacopeia Convention, Inc.,Rockville， Md. (1989)中找到，這里將其內容引入作為參考。其它的治療方法可參見AHFS Druglnformation，1993版，美國醫院處方月艮務機構(American HospitalFormularyService)編輯，第522-660頁，在此將其內容引入作為參考。 可與本發明的鹽孢菌酰胺化合物聯合使用的抗腫瘤劑包括TheMerck Index, 11thed. Merck & Co. ， Inc. (1989)卯.Ther 16-17中提供的那些抗腫瘤齊U，在此將其內容引入作為參考。在本發明的進一步實施方式中，抗腫瘤劑可以是抗代謝物，其包括但不限于氨甲蝶呤，5-氟尿嘧啶，6-氫硫基嘌呤，阿糖胞苷，羥基脲，以及2-氯脫氧腺苷。在本發明的另一種實施方式中，預期的抗腫瘤劑是烷基化試劑，其可包括但不限于環磷酰胺，美法侖，白消安，伯爾定(Paraplatin)，苯丁酸氮芥，以及氮芥。在本發明的進一步實施方式中，抗腫瘤劑是植物生物堿，其包括但不限于長春新堿，長春花堿，紫杉醇，以及足葉乙甙。在本發明的進一步實施方式中，預期的抗腫瘤劑是抗生素，其包括但不限于亞德里亞霉素(可霉素)，道諾霉素，絲裂霉素c，以及博來霉素。在本發明的進一步實施方式中，預期的抗腫瘤劑是激素，其包括但不限于卡普睪酮，diomostavolone，丙酸酯，環硫雄醇，美雄烷，睪內脂，三苯氧胺，聚磷酸雌二醇，醋酸甲地孕酮(megesterol acetate)，氟他胺，尼魯米特，以及trilotane。在本發明的進一步實施方式中，預期的抗腫瘤劑包括酶或氨基吖啶衍生物，其中酶可包括但不限于左旋門冬酰胺酶，而氨基吖啶衍生物可包括但不限于安吖啶。其它的抗腫瘤劑包括Skeel， Roland T. ， 〃 Antineoplastic Drugs and Biologic ResponseModifier : Classification, Use and Toxicity of Clinically Useful Agents, 〃 Handbook of Cancer Chemotherapy (3rd ed.) ， Little Brown & Co. (1991)中所述的那些抗月中瘤劑，在 此將其內容引入作為參考。 除了例如人類的靈長類動物之外，本發明的方法也可用于治療各種其它的哺乳動 物。例如，可被治療的哺乳動物包括但不限于母牛，綿羊，山羊，馬，狗，貓，豚鼠，大鼠或其它 的牛科，綿羊科，馬科，犬科，貓科，嚙齒目或鼠科動物。 術語〃 治療有效量〃 是指主題化合物的用量，其能引起研究者、獸醫、醫生或其它 臨床醫生所探尋的組織、系統、動物或人的生物學或醫學反應，例如減輕細胞增生性疾病的 影響/癥狀。 術語〃 藥學上可接受的〃 是指載體，稀釋劑或賦形劑必須和制劑中的其它成分相 容，并且對其接受者無害。 術語〃 給予(administration of) 〃禾口或〃 提供(administering a) 〃化合物應 該理解為，向需要治療的個體提供本發明的化合物。給予本發明化合物可以在其它治療劑 或其它抗腫瘤劑給藥之前、同時或之后進行。 為進行本發明化合物給藥的藥物組合物可方便地以單位劑型存在，并且可采用制 藥領域任何公知的方法進行制備。所有的方法都包括使活性組分和載體結合的步驟，該載 體構成了一種或多種輔助的組分。通常，藥物組合物是通過將活性組分和液體載體或細分 的固體載體或兩者均勻緊密地結合，必要時再將產物制成所需制劑形式而制備的。在藥物 組合物中，活性目標化合物的含量足以產生對病程或病況的預期效果。 含有活性組分的藥物組合物可以為適合口服的劑型，如片劑，小藥錠，錠劑，水性 或油性懸浮液，可分散粉末或顆粒，乳液，硬或軟膠囊，或糖漿或酏劑。 用于口服的組合物可根據藥物組合物制備領域公知的任何方法制備得到，并且這 類組合物可含有選自甜味劑，調味劑，著色劑和防腐劑的一種或多種試劑，以獲得藥學上精 致和可口的制劑。片劑含有活性組分，其與適于制造片劑的非毒性藥學可接受賦形劑相混 合。這些賦形劑可以是例如惰性稀釋劑，例如碳酸鈣，碳酸鈉，乳糖，磷酸鈣或磷酸鈉；成粒 和崩解劑，例如玉米淀粉或藻酸；粘結劑，例如淀粉，白明膠或阿拉伯膠；以及潤滑劑，例如 硬脂酸鎂，硬脂酸或滑石。片劑可為未包衣的，也可采用已知技術進行包衣以延遲在胃腸道 中的崩解和吸收，從而獲得較長時間的持續作用。例如，可采用延時材料，例如單硬脂酸甘 油酯或二硬脂酸甘油酯。也可對片劑進行包衣而形成可控制釋放的滲透性治療片劑。
用于口服的制劑也可以硬明膠膠囊存在，其中活性組分和惰性固體稀釋劑如碳酸 鈣、磷酸鈣或高嶺土相混合；或者可以軟明膠膠囊存在，其中活性組分與水或油介質如花生 油，液體石蠟或橄欖油相混合。 水性懸浮液含有活性材料，該活性材料與適于制造水性懸浮液的賦形劑相混合。 這類賦形劑有懸浮劑，例如羧甲基纖維素鈉，甲基纖維素，羥丙基甲基纖維素，藻酸鈉，聚乙 烯_吡咯烷酮，黃蓍膠和阿拉伯膠；分散或潤濕劑，可以是天然存在的磷脂，例如卵磷脂，或 環氧烷烴與脂肪酸的縮合產物，如聚環氧乙烷硬脂酸酯，或環氧乙烷與長鏈脂肪醇的縮合 產物，如十七亞乙氧基鯨蠟醇(h印tadecaethyleneoxycetanol)，或環氧乙烷與源自脂肪酸 和己糖醇的部分酯的縮合產物，如聚環氧乙烷山梨糖醇單油酸酯，或環氧乙烷與源自脂肪酸和己糖醇酐的部分酯的縮合產物，如聚乙烯山梨糖醇酐單油酸酯。水性懸浮液也可含有 一種或多種防腐劑，例如對羥基苯甲酸乙酯或正丙酯；一種或多種著色劑；一種或多種調 味劑，以及一種或多種甜味劑，例如蔗糖或糖精。 油性懸浮液可通過將活性組分懸浮于植物油如花生油，橄欖油，芝麻油或椰子油， 或懸浮于礦物油如液體石蠟中而配制得到。油性懸浮液可包含增稠劑，例如蜂蠟，硬石蠟或 鯨蠟醇。可加入上述的甜味劑和調味劑以獲得可口的口服制劑。可加入抗氧劑如抗壞血酸 以保存這些組合物。 適于通過加入水而制得水性懸浮液的可分散粉末和顆粒中含有與分散或潤濕劑、
懸浮劑以及一種或多種防腐劑預混合的活性組分。合適的分散或潤濕劑以及懸浮劑的例子
已在上文中列舉。也可存在其他的賦形劑，例如甜味劑，調味劑和著色劑。 可采用甜味劑，例如甘油，丙二醇，山梨糖醇或蔗糖配制成糖漿或酏劑。這類制劑
還可含有緩和劑，防腐劑以及調味劑和著色劑。 藥物組合物可以是無菌的可注射水性或油性懸浮液形式。該懸浮液可采用上述合 適的分散或潤濕劑以及懸浮劑，按照本領域的方法配制而成。無菌的可注射制劑也可以是 存在于無毒性腸胃外可接受的稀釋劑或溶劑中的無菌可注射溶液或懸浮液，例如存在于l， 3-丁二醇中的溶液。可采用的可接受載體和溶劑中有水、Ringer' s溶液(林格氏液)和 氯化鈉等滲溶液。此外，無菌的不揮發性油通常也可用作溶劑或懸浮介質。為此，可采用包 括合成的單-或二甘油酯在內的無剌激性不揮發性油。另外，脂肪酸如油酸也可用于制備 可注射制劑。 本發明的化合物也可以直腸給藥的栓劑形式給藥。這些組合物可通過將藥物和合
適的非剌激性賦形劑相混合而制得，其中的非剌激性賦形劑在常溫下是固態，但在直腸溫
度下是液態，從而在直腸中融化而釋放出藥物。這類材料是可可油和聚乙二醇。 在局部使用的情況下，可采用含有本發明化合物的乳膏、油膏、凝膠劑、溶液或懸
浮液等。 本發明的化合物和組合物可以與其他治療劑相同的方式，在例如針對家畜的獸醫 應用中或針對人類的臨床應用中向哺乳動物給藥。 一般來說，達到療效所要求的劑量會隨 著應用類型和給藥方式，以及單個主體的具體要求而有所不同。通常，劑量范圍為主體體重 的約0. 001到1000 ii g/kg，更通常為主體體重的0. 01到10 ii g/kg。可選地，這些范圍內的 劑量可在延長的時間段內，通常在超過24小時的時間段內進行持續輸注，直到達到期望的 治療效果。然而，應該理解，對任何具體患者的具體劑量水平和劑量頻率可以是不同的，并 取決于各種因素，包括所采用的具體化合物的活性，該化合物的代謝穩定性和作用時間長 短，年齡，體重， 一般健康狀況，性別，食欲，給藥方式和時間，排泄率，聯合用藥情況，具體病 癥的嚴重性，以及受治療的主體。 現在將參照以下非限定性實施例對本發明做更詳細的描述。
實施例
方法和材料 HPLC-本發明化合物的純化是在C18-固體相(Aldrich)上進行RP-MPLC法，在
21Kontes Flex-柱(15x7mm)上采用分步梯度而完成的。半制備性HPLC是在等度HPLC系統 上進行的，該系統的正相柱Si-Dynamas-60 A (250x5mm)或反相柱C18-Dynamax-60 A上帶 有Waters泵6000H，流速為2mL/分鐘，并帶有差示折射率檢測儀Waters R401。
LC-MS-LC-MS色譜分析是在帶有DAD和MSD1100檢測的Hewlett-Packard系統系 列HP1100上進行的。在反相C18柱(AgilentHypersil ODS 5 y m，柱尺寸為4. 6x100mm)上 進行分離，流速為0. 7mL/分鐘，采用的標準梯度為10%乙腈，15分鐘；98%乙腈(Burdick fejackson高純度溶劑)。MS-檢測是在ESI正離子模式下進行的，毛細管電壓為3500eV，碎 裂電壓為70eV，質量范圍m/z為100-1000。 APCI-模式在流速為0. 5mL/分鐘、正離子檢測、 毛細管電壓為3000eV、碎裂電壓為70eV的條件下測定。 NMR-NMR譜是在對^或2D-NMR譜具有反相模式的Varian300MHz梯度場光譜儀上 測得的。13C和DEPT譜是在Varian 400MHz的寬譜帶儀器上測得的。參照物是內標四甲基 硅烷(TMS，O. OO卯m)。 MS-EI-低分辨率MS-EI光譜是在帶有扇形磁場設備(magneticsector field device)的Hewlett-Packard質譜儀上測得的，以20°C /分鐘的加熱速率升溫到320°C，并 直接注入進樣。 FTMS-MALDI-高分辨MS數據是在IonSpec Ultima FT質譜儀上以MALDI操作模式 獲得的。 IR-紅外光譜是在Perkin-Elmer FT紅外光譜儀上采用NaCl窗測得的。 實施例1
〃鹽孢菌〃 種的分離和表征 培養物編號為CNB392和CNB476 CNB392和CNB476在其16S rDNA內具有標記核苷酸，這在系統發育學上將這些 菌株與所有其他的小單孢菌科成員區分開來(參見圖15)。這些標記核苷酸已經被確認 為是這組成員的決定性標記物，該組成員對鈉也具有生理學生長需求。利用Ribosomal Database Project中1_31_01上所有存在的小單孢菌科成員將標記核苷酸排列到大腸桿 菌(E.coli)位置27-1492上。對〃 鹽孢菌〃 分化枝，45個部分測序的形態型顯示出所有來 自位置207-468的標記核苷酸。這七個幾乎全部測序的〃 鹽孢菌〃 分離物(參見圖2)顯 示出圖15中的全部標記。 菌株CNB392和CNB476在瓊脂上形成了鮮橙色至黑色的菌落，并且不存在氣生菌 絲體。取決于細胞的生長階段，產生了深棕色和鮮橙色的可擴散色素。孢子使菌落表面變 黑，并負載在基質菌絲體上。營養菌絲體被微細地分支且并不分裂成碎片。孢子被單獨地 或成群地產生。對這些菌株，既沒有觀察到孢子囊的游動性，也沒有觀察到孢子的游動性。 CNB392和CNB476對鈉具有專性生長需求，不會在用于維持小單孢菌科其它屬成員的通常 介質中生長。已發現，CNB392和CNB476于3(TC下在固體介質TCG或M1上最佳地生長。TCG 3g胰蛋白胨 Ml IO克淀粉 5克酪胨 4克酵母提取物
4克葡萄糖 2克蛋白胨 18克瓊脂(任選) 18克瓊脂(任
22選)1升過濾海水 1升過濾海水
發酵 于35 °C下，在1升的搖動AlBf e+C或CKA-液體介質中培養CNB392和CNB476 達9天。4天之后，加20克Amberlite XAD-16樹脂(Sigma，非離子型聚合物吸附劑)。 AlBf e+C IO克淀粉 CKA 5克淀粉 4克酵母提取物 4mL
水溶性物(50% ) 2克蛋白胨 2克鯡魚粉 1克
CaC03 2克海藻粉 5mL KBr(水溶液，20g/1) 2克殼
5mL Fe2 (S04) 3x4H20 (8g/l)1升過濾海水1升過濾海水
提取 過濾XAD-16樹脂，并先用1升乙酸乙酯，再用1升甲醇洗脫有機提取物。然后，用 乙酸乙酯(3x200mL)提取濾液。XAD吸收的粗提取物為105mg。對人類結腸癌細胞HCT-116 的分析試驗得到的細胞毒性為IC50 < 0. Q76ii g/mL。
從CNB392分離出鹽孢菌酰胺A 在C18反相(RP)色譜上采用分段梯度，對粗提取物進行快速色譜分析(圖5)。 HCT-l 16分析獲得了兩種活性級分，CNB392-5和CNB392-6 。然后，在等度的RP-HPLC上 對合并的活性級分(51. 7mg， HCT-116 < 0. 076 y g/mL)進行色譜分析，采用流速為2mL/ 分鐘的85%甲醇作為洗脫液，并采用折射率檢測。采用流速為2mL/分鐘的乙酸乙酯 異辛烷(9 : 1)，在等度正相HPLC的硅膠上純化活性級分CNB392-5/6(7.6mg， HCT-116 < 0.076iig/mL)。分離出的鹽孢菌酰胺A(圖1)是無色的無定形固體，產率為每升 6. 7mg(6.4%)。在硅膠上進行的TLC分析(二氯甲烷甲醇=9 : l)表明，鹽孢菌酰 胺A的rf = 0. 6，在256nm處無UV消光或熒光，采用H2S04/乙醇時是黃色，采用Godin試 劑(香蘭素/H2S04/HC104)時是暗紅棕色。鹽孢菌酰胺A可溶解于CHC13，甲醇，以及其它 極性溶劑如匿SO，丙酮，乙腈，苯，吡啶，N， N-二甲基甲酰胺和類似溶劑。^ NMR:(d「卩比 啶，300MHz) 1. 37/1. 66 (2H， m， CH2) ， 1. 70， 2. 29 (2H， m， CH2) ， 1. 91 (2H，寬，CH2) ， 2. 07 (3H， s， CH3) ，2. 32/2. 48(2H， ddd，3J = 7. OHz， CH2) ， 2. 85(1H，寬，m， CH) ， 3. 17(1H， dd，3J = lOHz， CH)，4.01/4. 13(2H，m，CH2)，4. 25(lH，d，3J = 9. OHz， CH) ， 4. 98 (1H，寬，OH) ， 5. 88， (1H， ddd， 3J = lOHz， CH)，6.41(lH，寬d，3j = lOHz， CH)10.62(1H， s， NH) 13C NMR/DEPT : (d5-妣啶， 400MHz) 176. 4(C00R) ， 169. O(CONH) ， 128. 8( = CH)，128.4( = CH) ， 86. 1 (Cq) ， 80. 2 (Cq)， 70. 9 (CH) ， 46. 2 (CH) ， 43. 2 (CH2) ， 39. 2 (CH) ， 29. 0 (CH2) ， 26. 5 (CH2) ， 25. 3 (CH2) ，21.7 (CH2)， 20. 0 (CH3) LC-MS (ESI) tr = 10. 0分鐘，流速0. 7mL/分鐘m/z : (M+H) +314， (M+Na) +336 ;片段: (M+H-C02)+29 2， (M+H-C02-H20)+270，252，204. CI圖樣(M+H， 100% )+314， (M+H， 30% )+316. LC MS(APCI) :tr= 11. 7分鐘，流速0. 5mL/分鐘，m/z : (M+H)+314，片段(M+H_C02-H20)+270， 252,232,216，160. CI圖樣(M+H，100 % )+314， (M+H，30 % )+316. EI :m/z :269,251,235， 217,204， 188(100% ) ， 160， 152， 138， 126， 110,81. FTMS-MALDI :m/z : (M+H)+314. 1144FT-IR : (cm—1) 2920， 2344， s， 1819m， 1702s， 1255， 1085s， 1020s， 797s.分子式C15H2。C1N04實施例2
生物活性分析試驗 鹽孢菌酰胺A對人類結腸癌細胞具有很強的活性，IC50值為0.011 iig/mL(參 見圖4)。對抗細菌或抗真菌活性的篩選表明沒有明顯的活性，參見表l。表l分析試 驗 鹽孢菌酰胺A的 IC50 (ii g/mL)
HCT-116 0. Oll白色念珠菌 250白色念珠菌(耐兩
性霉素 NSA*B)金黃色葡萄球菌(耐甲 NSA*氧西林)尿腸球菌(耐萬
古霉素) NSA*NSA* =無明顯活性
實施例3
絕對立體化學的測定 結構I的化合物從乙酸乙酯/異辛烷中結晶，得到單個立方晶體，其作為單斜晶系 P2(l)進行衍射。3009 A不尋常的大單胞體積內容納了四個獨立的分子，其中對柔性氯乙 基取代基，觀察到不同的構象位置。從氯取代基的衍射各向異性，指定絕對結構，分辨出鹽 孢菌酰胺A的絕對立體化學為2R，3S，4R，5S，6S(圖16和17)， Flack參數為0. 01，而esd為 0. 03。 盡管參照上述實施例，對本發明展開了描述，但應該理解，修飾和改變均落入本發 明的精神和范圍內。因此，本發明僅受限于所附權利要求書。
權利要求
一種藥物組合物，其包含具有結構(I)的化合物和藥學上可接受的載體其中R1至R3各自獨立地為-H、烷基、取代烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環基、取代雜環基、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、鹵素、氨基、酰胺基、羧基、-C(O)H、酰基、氧酰基、氨基甲酸酯、磺酰基、氨磺酰或砜基；每個R4獨立地為烷基、取代烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、環烷基或取代環烷基；E1至E4各自獨立地為-O、-NR5或-S，其中R5為-H或C1-6烷基；以及X為0至8。FSA00000064181700011.tif
2.權利要求1所述的藥物組合物，其中&是_H、 C卜4烷基、取代(V12烷基、C2—12鏈烯基、取代C2—12鏈烯基、C2—12炔基、取代C2—12 炔基、C6—14芳基、取代C6—14芳基、C3—14雜芳基、取代C3—14雜芳基、C3—14雜環基、取代C3—14雜環 基、C3—8環烷基、取代C3—8環烷基、(V12烷氧基、取代12烷氧基、硫代C卜12烷基、取代硫代 (V12烷基、羥基、卣素、氨基、酰胺基、羧基、-C(0)H、酰基、氧酰基、氨基甲酸酷、磺酰基、氨磺 酰或砜基；其中，當&是取代(V12烷基時，(V12烷基可以進一步攜帶一個或更多個取代基，所述取代基選自c卜12烷氧基、巰基丄3—8環烷基、取代c3—8環烷基丄3—14雜環基、取代c3—14雜環基、 c6—14芳基、取代c6—14芳基、c3—14雜芳基、取代c3—14雜芳基、芳氧基、取代芳氧基、氰基、硝基、氦基、酰胺基、-C(0)H、酰基、氧酰基、羧基、磺酰基、氨磺酰和砜基；R2是-H、 C卜12烷基、取代(V12烷基、C2—12鏈烯基、取代C2—12鏈烯基、C2—12炔基、取代C2—12 炔基、C6—14芳基、取代C6—14芳基、C3—14雜芳基、取代C3—14雜芳基、C3—14雜環基、取代C3—14雜環基、c3—8環烷基、取代c3—8環烷基、cv12烷氧基、取代12烷氧基、硫代c卜12烷基、取代硫代(V12烷基、羥基、卣素、氨基、酰胺基、羧基、-C(0)H、酰基、氧酰基、氨基甲酸酷、磺酰基、氨磺 酰或砜基；R3是-H、 C卜12烷基、取代(V12烷基、C2—12鏈烯基、取代C2—12鏈烯基、C2—12炔基、取代C2—12 炔基、C6—14芳基、取代C6—14芳基、C3—14雜芳基、取代C3—14雜芳基、C3—14雜環基、取代C3—14雜環基、c3—8環烷基、取代c3—8環烷基、cv12烷氧基、取代12烷氧基、硫代c卜12烷基、取代硫代(V12烷基、羥基、卣素、氨基、酰胺基、羧基、-C(0)H、酰基、氧酰基、氨基甲酸酷、磺酰基、氨磺、射酰或砜基；禾口各R4獨立為C卜12烷基、取代(V12烷基、C2—12鏈烯基、取代C2—12鏈烯基、C2—12炔基、取代 C2—12炔基、C6—14芳基、取代C6—14芳基、C3—8環烷基或取代C3—8環烷基。
3. 權利要求1所述的藥物組合物，其中E3和E4為-0，及E2為-NH。
4. 權利要求1所述的藥物組合物，&和R2為-H.烷基或取代烷基，和R3為羥基或烷氧基。
5. 權利要求1所述的藥物組合物，其中&為取代烷基。
6. 權利要求5所述的藥物組合物，其中所述的取代烷基為卣化烷基。
7. 權利要求6所述的藥物組合物，其中所述的鹵化烷基為氯化烷基。
8. 權利要求1所述的藥物組合物，其中所述化合物具有化合物(V)的結構
9. 權利要求1-8任一項所述的藥物組合物，其包含蔗糖。
10. 權利要求1-8任一項所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物是固體形式。
11. 權利要求l-8任一項所述的藥物組合物，其中所述藥物組合物是無菌注射溶液的 形式。
12. 權利要求11所述的藥物組合物，其中所述無菌注射溶液是無菌注射水性溶液。
13. 權利要求l-8任一項所述的藥物組合物，進一步包含至少一種額外的抗腫瘤劑。
14. 權利要求13所述的藥物組合物，其中所述抗腫瘤劑包括抗代謝物、烷基化試劑、植 物生物堿、抗生素、激素或酶。
15. 權利要求14所述的藥物組合物，其中所述抗代謝物選自氨甲蝶呤、5-氟尿嘧啶、 6-氫硫基嘌呤、阿糖胞苷、羥基脲、以及2-氯脫氧腺苷。
16. 權利要求14所述的藥物組合物，其中所述烷基化試劑選自環磷酰胺、美法侖、白消 安、伯爾定、苯丁酸氮芥、以及氮芥。
17. 權利要求14所述的藥物組合物，其中所述植物生物堿選自長春新堿、長春花堿、紫 杉醇、以及足葉乙甙。
18. 權利要求14所述的藥物組合物，其中所述抗生素選自亞德里亞霉素(阿霉素)、道 諾霉素、絲裂霉素c、以及博來霉素。
19. 權利要求14所述的藥物組合物，其中所述激素選自卡普睪酮、diomostavolone、丙酸酯、環硫雄醇、美雄烷、睪內脂、三苯氧胺、聚磷酸雌二醇、醋酸甲地孕酮、氟他胺、尼魯米 特、以及trilotane。
20. 權利要求14所述的藥物組合物，其中所述酶選自左旋門冬酰胺酶衍生物和氨基吖 啶衍生物。
21. 權利要求20所述的藥物組合物，其中所述氨基吖啶衍生物是安吖啶。
22. 權利要求1-21任一項所述的藥物組合物在制備用于治療哺乳動物細胞增生疾病 的藥物中的用途。
23. 權利要求22所述的用途，其中所述哺乳動物細胞是人的。
24. 權利要求22所述的用途，其中所述疾病的特征是腫瘤形成。
25. 權利要求24所述的用途，其中所述腫瘤選自乳腺腫瘤，小細胞肺部腫瘤，非小細胞 肺部腫瘤，結直腸腫瘤，白血病，黑素瘤，胰腺癌，中樞神經系統(CNS)腫瘤，卵巢腫瘤，前列 腺腫瘤，軟組織或骨肉瘤，頭頸部腫瘤，包括甲狀腺和非何杰金氏病在內的胃癌，胃部腫瘤， 骨髓瘤，膀胱腫瘤，腎部腫瘤，包括甲狀腺和非何杰金氏及何杰金氏病在內的神經內分泌性 腫瘤。
26. 權利要求24所述的用途，其中所述腫瘤是結直腸腫瘤。
27. 權利要求24所述的用途，其中所述腫瘤是骨髓瘤。
28. 權利要求22所述的用途，其中向個體口服給藥有效量的所述藥物組合物。
29. 權利要求22所述的用途，其中向個體腸胃外給藥有效量的所述藥物組合物。
30. 權利要求29所述的用途，其中所述藥物組合物通過皮下、靜脈內、肌肉或腦池內注 射進行給藥。
31. 權利要求22所述的用途，其中向個體舌下給藥、口腔給藥、鼻腔給藥、局部給藥、或 者直腸給藥有效量的所述藥物組合物。
32. 具有結構(I)的化合物在制備用于治療頑固癌的藥物中的用途<formula>formula see original document page 4</formula>其中&至R3各自獨立地為-&烷基、取代烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、炔基、取代炔基、 芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環基、取代雜環基、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取 代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、卣素、氨基、酰肢基、羧基、-C(0)H、酰基、氧酰基、氨基 甲酸酯、磺酰基、氨磺酰或砜基；每個R4獨立地為烷基、取代烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、環烷基或取代環烷基；E工至E4各自獨立地為-0、 -NR5或-S，其中R5為-H或C"烷基；以及X為0至8。
33.具有結構(I)的化合物在制備用于治療小細胞肺癌、胰腺癌、軟組織瘤、骨肉瘤、頭 部癌癥、頸癌、胃癌、甲狀腺癌、何杰金氏病、非何杰金氏病、胃部腫瘤、骨髓瘤、膀胱癌或神經內分泌性癌的藥物中的用途<formula>formula see original document page 5</formula>其中&至R3各自獨立地為-&烷基、取代烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、炔基、取代炔基、 芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環基、取代雜環基、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取 代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、卣素、氨基、酰肢基、羧基、-C(0)H、酰基、氧酰基、氨基 甲酸酯、磺酰基、氨磺酰或砜基；每個R4獨立地為烷基、取代烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、環烷基或取代環烷基；E工至E4各自獨立地為-0、 -NR5或-S，其中R5為-H或C"烷基；以及 X為0至8。
34.具有結構(I)的化合物在制備與至少一種額外的抗腫瘤劑聯合、用于治療哺乳動 物細胞增生疾病的藥物中的用途<formula>formula see original document page 5</formula>其中，&至R3各自獨立地為-&烷基、取代烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、炔基、取代炔基、 芳基、取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環基、取代雜環基、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取 代烷氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、卣素、氨基、酰肢基、羧基、-C(0)H、酰基、氧酰基、氨基 甲酸酯、磺酰基、氨磺酰或砜基；每個R4獨立地為烷基、取代烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳基、環烷基或取代環烷基；E工至E4各自獨立地為-0、 -NR5或-S，其中R5為-H或烷基；以及 X為0至8。
35. 權利要求34所述的用途，其中所述抗腫瘤劑包括抗代謝物、烷基化試劑、植物生物 堿、抗生素、激素或酶。
36. 權利要求35所述的用途，其中所述抗代謝物選白氨甲蝶呤、5-氟尿嘧啶、6-氫硫基 嘌呤、阿糖胞苷、羥基脲、以及2-氯脫氧腺苷。
37. 權利要求35所述的用途，其中所述烷基化試劑選自環磷酰胺、美法侖、白消安、伯 爾定、苯丁酸氮芥、以及氮芥。
38. 權利要求35所述的用途，其中所述植物生物堿選自長春新堿、長春花堿、紫杉醇、 以及足葉乙甙。
39. 權利要求35所述的用途，其中所述抗生素選自亞德里亞霉素(阿霉素)、道諾霉 素、絲裂霉素c、以及博來霉素。
40. 權利要求35所述的用途，其中所述激素選自卡普睪酮、diomostavolone、丙酸酯、 環硫雄醇、美雄烷、睪內脂、三苯氧胺、聚磷酸雌二醇、醋酸甲地孕酮、氟他胺、尼魯米特、以 及trilotane。
41. 權利要求35所述的用途，其中所述酶選自左旋門冬酰胺酶衍生物和氨基吖啶衍生物。
42. 權利要求41所述的用途，其中所述氨基吖啶衍生物是安吖啶。
43. 制備具有結構(I)的化合物的方法，亂(I)其包括(a) 發酵海洋放線菌菌株；(b) 通過吸附到樹脂，從所述放線菌菌株分離有機代謝物；禾口 (C)通過色譜分離具有結構(I)的化合物；其中&至R3各自獨立地為-&烷基、取代烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、炔基、取代炔基、芳基、 取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環基、取代雜環基、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷 氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、卣素、氨基、酰胺基、幾基、-C(0)H、酰基、氧酰基、氨基甲酸 酯、磺酰基、氨磺酰或砜基；每個R4獨立地為烷基、取代烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳 基、環烷基或取代環烷基；E工至E4各自獨立地為-0、 -NR5或-S，其中R5為-H或烷基；以及 X為0至8。
44.制品，其包括包裝材料和裝在所述包裝材料內的藥物組合物，其中所述包裝材料包 括指明所述藥物組合物可用于治療細胞增生性疾病的標簽，以及其中所述藥物組合物包括 至少一種具有結構(I)的化合物<formula>formula see original document page 7</formula>其中&至R3各自獨立地為-&烷基、取代烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、炔基、取代炔基、芳基、 取代芳基、雜芳基、取代雜芳基、雜環基、取代雜環基、環烷基、取代環烷基、烷氧基、取代烷 氧基、硫烷基、取代硫烷基、羥基、卣素、氨基、酰胺基、幾基、-C(0)H、酰基、氧酰基、氨基甲酸 酯、磺酰基、氨磺酰或砜基；每個R4獨立地為烷基、取代烷基、鏈烯基、取代鏈烯基、炔基、取代炔基、芳基、取代芳 基、環烷基或取代環烷基；E工至E4各自獨立地為-0、 -NR5或-S，其中R5為-H或烷基；以及X為0至8。
45. 權利要求44所述的制品，其中所述細胞增生性疾病是結腸癌。
46. 權利要求44所述的制品，其中所述細胞增生性疾病是骨髓瘤。
47. 權利要求44所述的制品，其中所述細胞增生性疾病是頑固癌。
全文摘要
本發明是基于如下發現海洋放線菌菌株CNB392和CNB476的某些發酵產物是高增生性哺乳動物細胞的有效抑制劑。CNB392和CNB476菌株存在于小單孢菌科中，而且鹽孢菌這一屬名已經被提議用于這種專性海洋族群。由這種菌株產生的反應產物被歸為鹽孢菌酰胺，在治療腫瘤疾病方面特別有效，這是由于其具有低分子量、低IC50值、高藥效，以及癌細胞對真菌的選擇性。
文檔編號C07D491/04GK101791306SQ20101014548
公開日2010年8月4日 申請日期2004年6月18日 優先權日2003年6月20日
發明者P·R·詹森, R·H·R·費林格, T·J·明瑟, W·H·費尼科 申請人:加利福尼亞大學董事會