專利名稱：一種高含量倍半萜類雷公藤生物堿的制備方法
技術領域：
本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及一種高含量的倍半萜類雷公藤生物堿單體的 制備方法。
背景技術：
雷公藤(Tripterygium wilfordii Hook. f.)系衛矛科雷公藤屬植物，以根、葉、花 及果入藥，，對治療自身免疫性疾病，如類風濕性關節炎、慢性腎炎、紅斑狼瘡、接觸性皮炎 等均有顯著療效。據《中國藥植志》記載，雷公藤堿、雷公藤定堿及二萜內酯、衛矛醇均有明 顯的抗腫瘤活性，對小鼠白血病及人類鼻咽癌均有抑制作用，能使周圍小動脈舒張增加血 流量，減低外圍血流的阻力，改善微循環的阻礙，有活血作用。對多種變態性反應與非細菌 性炎癥有激素樣抗炎作用。雷公藤化學成分復雜，藥理作用廣泛，有重要的臨床應用價值。但由于雷公藤毒副 作用大，限制了臨床應用的推廣。應進一步加強對雷公藤藥物化學、藥理作用和臨床應用的 研究，提取、純化出高效的雷公藤活性成分，為雷公藤中藥飲片的質量監控及雷公藤中藥材 的進一步開發利用研究奠定基礎。雷公藤生物堿是雷公藤的主要活性成分之一，一直是人們研究的主要對象，特 別是其中的含量相對較高的雷公藤生物堿，如雷公藤春堿(wilfortrine)、雷公藤定堿 (wilfordine)、雷公藤吉堿(wilforgine)和雷公藤次堿(wilforine)等。目前雷公藤生物 堿單體的制備主要采用液/液萃取法結合柱層析色譜法(林綏，李援朝，櫻井信子，郭舜民， 鄧福孝.雷公藤倍半萜生物堿的研究，植物學報，2001，43(6) :647-649;陳俊元，夏志林，鄧 福孝.雷公藤生物堿提取工藝的改進，中國醫藥工業雜志，1989,20(11) 484-485)和高速 逆流色譜法(High-speed countercurrent chromatography,HSCCC) (CN100422188C)等，主 要采用雷公藤根莖為原料，獲得的雷公藤生物堿單體含量一般在95%左右或更低一些，其 純度難以滿足雷公藤生物堿單體醫藥用對照品的要求，也不利于雷公藤倍半萜類生物堿藥 理的進一步研究。
發明內容
本發明的目的在于針對現有雷公藤生物堿單體制備技術的不足，提供一種高含量 的雷公藤生物堿單體的半制備色譜分離純化方法。高含量倍半萜類雷公藤生物堿單體的制備方法的具體步驟如下1)將脫除雷公藤甲素和雷公藤乙素后的雷公藤醋酸乙酯浸膏廢液，用5 15g/L 的易揮發性有機酸，或5 20g/L的易揮發性堿調節溶液pH值至6-10. 5，進行重結晶，重結 晶的溶劑為低級醇，重結晶的溫度為0 40°C，得到雷公藤粗總生物堿；2)將雷公藤粗總生物堿，用體積比為55 45 99 1的乙腈和水混合溶劑溶解 后，使用體積比為55 45 99 1的乙腈和水混合溶劑為流動相，以0. 2 2. OmL/min 的流速，在0 40°C溫度范圍內，在C18反相半制備色譜柱上實現雷公藤春堿、雷公藤定堿、
4雷公藤吉堿和雷公藤次堿的分離，通過紫外在線檢測，得到雷公藤春堿、雷公藤定堿、雷公 藤吉堿和雷公藤次堿。所述的雷公藤春堿、雷公藤定堿、雷公藤吉堿和雷公藤次堿為倍半萜類生物堿，倍 半萜類生物堿的分子結構式
權利要求
一種高含量倍半萜類雷公藤生物堿單體的制備方法，其特征在于具體步驟如下1)將脫除雷公藤甲素和雷公藤乙素后的雷公藤醋酸乙酯浸膏廢液，用5～15g/L的易揮發性有機酸，或5～20g/L的易揮發性堿調節溶液pH值至6 10.5，進行重結晶，重結晶的溶劑為低級醇，重結晶的溫度為0～40℃，得到雷公藤粗總生物堿；2)將雷公藤粗總生物堿，用體積比為55∶45～99∶1的乙腈和水混合溶劑溶解后，使用體積比為55∶45～99∶1的乙腈和水混合溶劑為流動相，以0.2～2.0mL/min的流速，在0～40℃溫度范圍內，在C18反相半制備色譜柱上實現雷公藤春堿、雷公藤定堿、雷公藤吉堿和雷公藤次堿的分離，通過紫外在線檢測，得到雷公藤春堿、雷公藤定堿、雷公藤吉堿和雷公藤次堿。
2.根據權利要求1所述的一種高含量倍半萜類雷公藤生物堿單體的制備方法，其特征 在于所述的雷公藤春堿、雷公藤定堿、雷公藤吉堿和雷公藤次堿為倍半萜類生物堿，倍半蔽 類生物堿的分子結構式
3.根據權利要求1所述的一種高含量倍半萜類雷公藤生物堿單體的制備方法，其特征 在于所述的C18色譜柱為普通C18柱。
4.根據權利要求3所述的一種高含量倍半萜類雷公藤生物堿單體的制備方法，其特征 在于所述的C18色譜柱為Hypersil C18色譜柱。
5.根據權利要求1所述的一種高含量倍半萜類雷公藤生物堿單體的制備方法，其特征 在于所述的低級醇為甲醇、乙醇或異丙醇。
6.根據權利要求5所述的一種高含量倍半萜類雷公藤生物堿單體的制備方法，其特征 在于所述的低級醇為甲醇。
7.根據權利要求1所述的一種高含量倍半萜類雷公藤生物堿單體的制備方法，其特 征在于所述的乙腈和水的比例為75 25，所述的流動相流速為l.OmL/min，所述的柱溫為 30 "C。
8.根據權利要求1所述的一種高含量倍半萜類雷公藤生物堿單體的制備方法，其特征 在于所述的易揮發性有機酸為醋酸、鹽酸或甲酸。
9.根據權利要求8所述的一種高含量倍半萜類雷公藤生物堿單體的制備方法，其特征 在于所述的易揮發性有機酸為醋酸，醋酸濃度為10g/L。
10.根據權利要求1所述的一種高含量倍半萜類雷公藤生物堿單體的制備方法，其特 征在于所述的易揮發性堿為氨水，氨水的濃度為10g/L。
全文摘要
本發明公開了一種半制備色譜法分離制備高純度倍半萜類雷公藤生物堿單體的方法。以脫除雷公藤甲素和雷公藤乙素后的雷公藤醋酸乙酯浸膏廢液為原料，先經氯代烷烴萃取及以低級醇為溶劑的重結晶過程，隨后采用反相高效液相半制備色譜法制備高含量的倍半萜類雷公藤生物堿單體，采用紫外在線檢測，收集目標物，冷凍干燥后，獲得4種含量大于99.0％的倍半萜類雷公藤生物堿單體(雷公藤春堿、雷公藤定堿、雷公藤吉堿和雷公藤次堿)。采用本發明公開的制備方法，分離所得的產品純度高、過程短、成本低，易于產業化。
文檔編號C07D491/20GK101974005SQ201010269420
公開日2011年2月16日 申請日期2010年8月27日 優先權日2010年8月27日
發明者蔡美強, 金米聰, 陳曉紅 申請人:浙江工商大學