一株枯草芽孢桿菌及發酵豆粕前處理工藝的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物技術領域，具體說涉及一株枯草芽孢桿菌及發酵豆柏前處理工 藝。
【背景技術】
[0002] 豆柏是飼料工業中應用最廣泛的植物性蛋白原料，營養豐富，但由于存在多種抗 營養因子，影響動物對豆柏營養的吸收率。采用微生物發酵處理后，不僅可以去除或降低豆 柏中抗營養因子，還可以大大提高豆柏的營養價值。
[0003] 發酵豆柏品質的優劣、營養價值的高低，除粗蛋白指標外，小肽含量也是業內人士 普遍關注的指標，肽含量與酸溶蛋白含量存在顯著的正相關，所以使用酸溶蛋白含量指標 評價發酵豆柏品質時，既可以反映豆柏中抗原蛋白和其它抗營養因子蛋白被水解的程度， 同時又可一定程度上反映肽含量，所以酸溶蛋白含量是評價發酵豆柏品質較好且重要的指 標。
[0004] 固態發酵由于成本低，工藝簡單，國內外豆柏發酵多采用固態發酵模式，但在短時 間內獲得高酸溶蛋白存在一定難度。皮祖坤、梁運祥等人曾提出"正常發酵豆柏產品小肽含 量一般在5%_8%之間，固態發酵生產發酵豆柏小肽含量一般不會超過10%，過高的小肽含量 只有通過液態酶解的方式才可以做到，但其成本遠遠高于固態發酵產品"。由此可見，在固 態發酵豆柏工業化生產過程中，生產高酸溶蛋白指標的豆柏存在一定難度。本發明針對該 問題，通過篩選優良菌株及優化發酵豆柏前處理方式，實現顯著提高酸溶蛋白含量的目的。
[0005] 目前，關于發酵豆柏前處理方式主要有：
[0006] 1、原料豆柏中加入一定量的水，攪拌均勻，進行熱處理；
[0007] 2、原料豆柏加入一定的水，攪拌均勻，不經熱處理，直接接種發酵；
[0008] 但采用上述處理方式，豆柏經發酵后，酸溶蛋白含量較低，或者酸溶蛋白含量增加 了，但發酵時間卻大大延長。
[0009] 此外，近年來，國內外大量研究表明，經微生物發酵可使豆柏變成一種具有多種功 能的優質蛋白質飼料。但目前，發酵豆柏采用的菌株往往不能在較短時間內、全面、徹底地 降解抗營養因子，提高小肽含量。
[0010] 因此，有必要對提供更優異的發酵菌株，以及對現有的生產方法加以改進，以縮短 發酵時間，獲得良好的發酵豆柏。
【發明內容】
[0011] 本發明的第一個目的在于，提供一種用于豆柏發酵的菌株。
[0012] 本發明提供的菌株為枯草芽孢桿菌，保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通 微生物中心，其保藏號為CGMCC N0. 7641。
[0013] 本發明的第二個目的在于，提供一種發酵豆柏的預處理方法。
[0014] 本發明提供的發酵豆柏的預處理方法，包括以下步驟：
[0015] a、將豆柏于70_120°C滅菌；
[0016] b、調節滅菌后豆柏的水分。
[0017] 在本發明的一個實施方案中，所述滅菌時間為10-30min。
[0018] 在本發明的一個實施方案中，所述調節滅菌后豆柏水分為調節至水分含量為 45%-55%〇
[0019] 本發明提供的發酵豆柏的預處理方法，包括以下步驟：
[0020] a、調節豆柏水分為65-70% ;
[0021] b、將經步驟a處理后的豆柏于70-120°C滅菌。
[0022] 在本發明的一個實施方案中，所述調節豆柏水分的方法為：添加過量水浸泡完全 后，去除多余水分。
[0023] 在本發明的一個實施方案中，所述滅菌時間為10_30min。
[0024] 本發明還提供了使用上述方法預處理的豆柏。
[0025] 本發明還提供了一種發酵豆柏的方法，所述方法為在經上述方法預處理的豆柏中 加入豆柏發酵菌株，以發酵豆柏。
[0026] 在本發明的一個實施方案中，所述豆柏發酵菌株包括：枯草芽孢桿菌、釀酒酵母、 乳酸菌、地衣芽孢桿菌、產朊假絲酵母中的一種或多種。
[0027] 在本發明的一個實施方案中，所述豆柏發酵菌株為枯草芽孢桿菌CGMCC N0. 7641。
[0028] 在本發明的一個實施方案中，所述發酵為于28_37°C發酵24_48h。
[0029] 本發明還有一個目的在于，提供一種使用前述的方法制備獲得的發酵豆柏。
[0030] 本發明提供的枯草芽孢桿菌CGMCC N0. 7641在24h內，不僅將低聚糖、抗原蛋白、 TI等抗營養因子降解殆盡，還能顯著提高酸溶蛋白含量，使發酵豆柏品質明顯改善。使用本 發明提供的方法預處理豆柏在進行發酵，所獲得的發酵豆柏，其粗蛋白含量、酸溶蛋白含量 提高明顯，胰蛋白酶抑制劑降低顯著。本發明提供的發酵豆柏，用于制備飼料濃縮料、寵物 飼料、水產、畜禽等多種動物飼料中，由于大分子蛋白經低分子化降解、酸溶蛋白含量顯著 提高，利于動物吸收利用，促進動物生長，提高消化利用率及轉化率，降低飼料成本易于工 業化實施。
【附圖說明】
[0031] 圖1顯示了實施例1中使用菌株WBRD00470-B3發酵豆柏前后的抗原蛋白的降解 情況，其中，泳道1為發酵前豆柏的電泳結果，泳道2為發酵后豆柏的電泳結果。
[0032] 圖2為枯草芽抱桿菌（Bacillus subtilis) WBRD00470-B3菌落形態照片。
[0033] 圖3為枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis) WBRD00470-B3的系統發育樹。
[0034] 本發明的菌株WBRD00470-B3已于2013年05月24日保藏在"中國微生物菌種保 藏管理委員會普通微生物中心（CGMCC)"（北京市朝陽區北辰西路1號院3號中國科學院微 生物研究所，郵編100101)，保藏號是CGMCC No. 7641，分類命名為：枯草芽孢桿菌Bacillus subtilis。
【具體實施方式】
[0035]以下結合具體實施例，對本發明作進一步說明。應理解，以下實施例僅用于說明本 發明而非用于限定本發明的范圍。
[0036] 在本發明中，如果沒有特別的說明，百分數（％ )或者份都指相對于組合物的重量 百分數或者重量份。
[0037] 在本發明中，如果沒有特別的說明，所涉及的各組分或其優選組分可以相互組合 形成新的技術方案。
[0038] 在本發明中，如果沒有特別的說明，本文所提到的所有實施方式以及優選實施方 式可以相互組合形成新的技術方案。
[0039] 在本發明中，如果沒有特別的說明，本文所提到的所有技術特征以及優選特征可 以相互組合形成新的技術方案。
[0040] 在本發明中，如果沒有相反的說明，組合物中各組分的含量之和為100%。
[0041] 在本發明中，如果沒有相反的說明，組合物中各組分的份數之和可以為100重量 份。
[0042] 在本發明中，除非有其他說明，數值范圍"a_b"表示a到b之間的任意實數組合的 縮略表示，其中a和b都是實數。例如數值范圍"0-5"表示本文中已經全部列出了 "0-5" 之間的全部實數，"0-5"只是這些數值組合的縮略表示。
[0043] 在本發明中，除非有其他說明，整數數值范圍"a_b"表示a到b之間的任意整數組 合的縮略表示，其中a和b都是整數。例如整數數值范圍"1-N"表示1、2……N，其中N是 整數。
[0044] 在本發明中，除非有其他說明，"其組合"表示所述各元件的多組分混合物，例如兩 種、三種、四種以及直到最大可能的多組分混合物。
[0045] 如果沒有特別指出，本說明書所用的術語"一種"指"至少一種"。
[0046] 如果沒有特別指出，本發明所述的百分數(包括重量百分數）的基準都是所述組合 物的總重量。
[0047] 本文所公開的"范圍"以下限和上限的形式。可以分別為一個或多個下限，和一個 或多個上限。給定范圍是通過選定一個下限和一個上限進行限定的。選定的下限和上限限 定了特別范圍的邊界。所有可以這種方式進行限定的范圍是包含和可組合的，即任何下限 可以與任何上限組合形成一個范圍。例如，針對特定參數列出了 60 - 120和80 - 110的 范圍，理解為60 - 110和80 - 120的范圍也是預料到的。此外，如果列出的最小范圍值1 和2,和如果列出了最大范圍值3,4和5,則下面的范圍可全部預料到：1 一 3、1 一 4、1 一 5、 2 - 3、2 - 4、和 2 - 5。
[0048] 在本文中，除非另有說明，各組分的比例或者重量都指干重。
[0049] 在本文中，除非另有說明，各反應都在常溫常壓下進行。
[0050] 在本文中，除非另有說明，各個反應步驟可以順序進行，也可以不按順序進行。例 如，各個反應步驟之間可以包含其他步驟，而且反應步驟之間也可以調換順序。優選地，本 文中的反應方法是順序進行的。
[0051] 菌株
[0052] 本發明的發明人從新疆古爾班通古特沙漠的梭梭樹的植物根系土壤中篩選獲得 了一種枯草芽孢桿菌，將該枯草芽孢桿菌用于豆柏發酵24h內，其不僅將豆柏中的低聚糖、 抗原蛋白、TI等抗營養因子降解殆盡，還能顯著提高豆柏中酸溶蛋白含量，使發酵豆柏品質 明顯改善。因此，本發明提供