一種二氯喹啉酸固態降解菌劑的制作方法
【技術領域】
[0001]本發明屬于微生物領域，具體涉及一種二氯喹啉酸固態降解菌劑的制作方法。
【背景技術】
[0002]二氯喹啉酸屬激素型的喹啉酸類選擇性較強的除草劑。是20世紀80年代初德國巴斯夫公司開發的新型激素型喹啉羧酸類除草劑，主要用于稻田防稗草。稻田施用二氯喹啉酸也對后茬的煙田造成一定的危害，使煙株生長畸形、植株變矮，新葉背面翻卷，皺縮，葉寬受抑制嚴重。農藥作為人工合成的生物外源性物質，通常不易被微生物降解，在自然界中半衰期非常長，故稱之為頑固性化合物。但是經過長期自然選擇，已經有很多微生物可以降解農藥。利用微生物降解二氯喹啉酸是近十年來發展起來的用于治理環境污染的一門新技術。目前，對于微生物降解農藥的研宄主要集中于細菌。細菌降解農藥的本質是酶促反應，即化合物通過一定的方式進入細菌體內，然后在各種酶作用下，經過一系列的生理生化反應，最終將農藥完全降解或分解成分子量較小的無毒或毒性較小化合物的過程。
【發明內容】
[0003]本發明的目的在于提供一種二氯喹啉酸固態降解菌劑的制作方法。
[0004]基于上述目的，本發明采取了如下技術方案:
一種二氯喹啉酸固態降解菌劑的制作方法，包括如下步驟:
(1)固體培養基的制備:麥麩、玉米秸桿和活性炭按比例配好，然后加入總原料兩倍體積的蒸餾水，高溫滅菌后得到固體培養基；
(2)固體培養基的預處理:用NaOH水溶液調節pH為7.0，然后高溫滅菌；
(3)液體種子的制備:向裝有LB液體培養基的三角瓶中接種斜面保藏的博德特氏菌株HN36，于35 °C搖床振蕩，得到液體種子。
[0005](4)將液體種子接種到步驟(2)預處理后的固體培養基中，混勻，至恒溫培養箱中密閉培養得到固態菌劑，通風干燥至菌劑含水量30%以下，磨碎后過0.45mm篩，以備用。
[0006]較好地，步驟(I)中麥麩、玉米秸桿和活性炭按85%: 10%: 5%的質量百分比例配料；步驟(2)中NaOH水溶液的濃度為6mol/L ;步驟(3)中搖床振蕩是指150轉/分振蕩培養36小時；步驟(4)中所述的接種是指以固體培養基計，接種10v% (體積百分比)的液體種子；所述恒溫培養箱中密閉培養是指于35°C電熱培養箱中培養12-48小時，檢測固體培養基質中的活菌數達到5.0X 18個/g以上即可。
[0007]該菌劑的使用方法可采用在煙株移栽后穴施或撒施，施用量為45~55 kg/畝。
[0008]本發明提供了一株博德特氏菌固態菌劑的制備方法，該菌劑可用于降解土壤中的二氯喹啉酸。從生產二氯喹啉酸的農藥廠廢水處理污泥中，分離純化到一株高效降解二氯喹啉酸的菌株HN36。結合形態學、生理生化特征試驗、16S rDNA序列及菌株系統進化發育分析，菌株HN36鑒定為博德特氏菌株Bordetella sp.搖瓶培養條件下的降解特性研宄表明:HN36能以二氯喹啉酸為唯一碳源和氮源生長，在最適溫度為35 °C，pH為7時，48 h對400 mg/L 二氯喹啉酸的降解率高達96.2%(該菌劑的分離，鑒定具體參見二氯喹啉酸降解菌HN36的分離、鑒定及降解特性研宄《安全與環境學報》2012年4月第12卷第2期45-49頁)。
[0009]該方法生產的有機磷農藥降解菌劑，具有生產成本低、環境友好的特點，產品能高效降解植物表面和土壤中的有機磷農藥殘留，而且還可改善土壤的理化、生物性狀，提高土壤肥力，能增強作物的免疫能力，防止病菌的侵入，尤其對土傳病和重茬障礙有很好的預防作用。從而促進作物生長，提高農業產量，改善農產品品質，并節省生產成本。
【具體實施方式】
[0010]以下結合具體實施例對本發明的技術方案作進一步詳細說明，但本發明的保護范圍并不局限于此。
[0011]實施例1
一種二氯喹啉酸固態降解菌劑的制作方法，包括如下步驟:
(1)固體培養基的制備:以麥麩、玉米秸桿粉末(20-30mm)、活性炭按85%:10%:5%的質量百分比例配好，然后加入總原料兩倍體積的蒸餾水，121°C滅菌20min后得到固體培養基;
(2)固體培養基的預處理:用NaOH水溶液調節pH為7.0，于121°C滅菌20min ；
(3)液體種子的制備:向裝有LB液體培養基的三角瓶中接種斜面保藏的博德特氏菌株HN36，于35°C，150轉/分振蕩培養36小時(分光光度計檢測OD值在1.0左右)，得到液體種子；
(4)以固體培養基計，將液體種子按10v%(體積百分比)接種到步驟(2)預處理后的固體培養基中，混勻，至35 V電熱培養箱中培養48小時，檢測固體培養基質中的活菌數達到
5.0XlO8個/g以上即可，通風干燥至菌劑含水量30%以下，磨碎后過0.45mm篩，包裝，存放在陰涼干燥處，12個月內使用。
[0012]試驗例I
有機磷農藥降解菌劑對煙草葉面二氯喹啉酸農藥殘留的降解效果選取兩個完全相同的煙草地塊各30m2，均勻噴灑1000倍稀釋的二氯喹啉酸粉劑農藥(農藥中二氯喹啉酸有效成分為50wt%)。6h后，一塊地均勻撒入本發明的二氯喹啉酸固態降解菌劑I公斤，另一塊地作為對照組，什么也不使用，翻耕均勻；36d后，五點取樣法檢測煙草葉面二氯喹啉酸的殘留，發現處理組較對照組二氯喹啉酸殘留量減少40%左右。
[0013]試驗例2
本發明的二氯喹啉酸固態降解菌劑促進煙草生長
采用蔬菜大棚小區實驗，設置8個條件完全相同的實驗小區，每個小區30m2，2個小區為I組平行試驗，共分成4組，種植煙草，煙草幼苗期，第I組2個小區不施肥作對照；第2組2個小區按照50公斤/畝的用量在煙草完全發芽后和3周后各追施本發明的二氯喹啉酸固態降解菌劑一次；第3組2個小區按照15公斤/畝的施肥量在煙草完全發芽后和3周后各施用尿素一次；第4組2個小區按照15公斤/畝的施肥量在煙草完全發芽后和3周后各施用尿素一次，并在每次施用尿素后I天按照50公斤/畝的施肥量追施發明的二氯喹啉酸固態降解菌劑一次，各小區相同的灌溉和管理方式。煙草生長5周后調查產量和品質。單獨施用本發明的微生物菌劑和單獨施用尿素的煙草產量基本一致，都比不施肥的對照小區增產12%左右；菌劑和尿素都施用的小區比對照小區增產18%左右；煙草中硝酸鹽和亞硝酸鹽含量以不施肥和單獨施用微生物菌劑的最低，在國家標準限量值的1/3以下，施用尿素后又施用微生物菌劑的在國家標準限量的1/2以下，而單獨施用尿素的煙草中硝酸鹽和亞硝酸鹽含量都超標嚴重。表明該微生物菌劑具有良好的增產效果，而且可以明顯提高煙草的品質。
【主權項】
1.一種二氯喹啉酸固態降解菌劑的制作方法，其特征在于，包括如下步驟: (1)固體培養基的制備:麥麩、玉米秸桿和活性炭按比例配好，然后加入總原料兩倍體積的蒸餾水，高溫滅菌后得到固體培養基； (2)固體培養基的預處理:用NaOH水溶液調節pH為中性，然后高溫滅菌； (3)液體種子的制備:向裝有LB液體培養基的三角瓶中接種斜面保藏的博德特氏菌株，于35°C搖床振蕩，得到液體種子； (4 )將液體種子接種到步驟(2 )預處理后的固體培養基中，混勻，至恒溫培養箱中密閉培養得到固態菌劑，通風干燥至菌劑含水量30%以下，磨碎后過0.45mm篩，以備用。2.根據權利要求1所述的二氯喹啉酸固態降解菌劑的制作方法，其特征在于，步驟(I)中麥麩、玉米秸桿和活性炭按85%: 10%:5%的質量百分比例配料。3.根據權利要求1所述的二氯喹啉酸固態降解菌劑的制作方法，其特征在于，步驟(2)中NaOH水溶液的濃度為6mol/L。4.根據權利要求1所述的二氯喹啉酸固態降解菌劑的制作方法，其特征在于，步驟(3)中搖床振蕩是指150轉/分振蕩培養36小時。5.根據權利要求1所述的二氯喹啉酸固態降解菌劑的制作方法，其特征在于，步驟(4)中所述的接種是指以固體培養基計，接種10v%的液體種子；所述恒溫培養箱中密閉培養是指于35°C電熱培養箱中培養12-48小時，檢測固體培養基質中的活菌數達到5.0XlO8個/g以上即可。
【專利摘要】一種二氯喹啉酸固態降解菌劑的制作方法，屬于微生物技術領域，該方法包括(1)培養基的制備、pH調節和滅菌；(2)接種斜面保藏的博德特氏菌，振蕩培養獲得液體種子；(3)向裝有麥麩，玉米秸稈粉末，活性炭的培養基質中接種液體種子，至恒溫培養箱中密閉培養得到目的產物。該工藝生產的有機磷農藥降解菌劑，具有生產成本低、環境友好的特點，產品能高效降解植物表面和土壤中的有機磷農藥殘留，而且還可改善土壤的理化、生物性狀，提高土壤肥力，能增強作物的免疫能力，防止病菌的侵入，尤其對土傳病和重茬障礙有很好的預防作用。從而促進作物生長，提高農業產量，改善農產品品質，并節省生產成本。
【IPC分類】A01N63/00, C12N1/20, C09K17/00, C12R1/01, A01P21/00, C09K101/00
【公開號】CN104988094
【申請號】CN201510384248
【發明人】徐淑霞, 張世敏, 梁振普, 高玉千, 吳坤, 趙培, 賀亞斐
【申請人】河南農業大學
【公開日】2015年10月21日
【申請日】2015年6月30日