一種造血干細胞培養基及其應用和干細胞培養方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及細胞培養領域，尤其涉及一種造血干細胞培養基及其應用和干細胞培 養方法。
【背景技術】
[0002] 諸多研宄表明造血干細胞在體液循環中發揮關鍵作用：一方面，體液中紅細胞、淋 巴細胞都是由造血干細胞分化而來，然而正常生理條件下造血干細胞主要存在于骨髓中， 只有在應急或動員劑處理之后才能釋放到外周血中；另一方面，體液中的細胞更新也依賴 于造血干細胞的數量和分化潛能。隨著個性化再生醫學技術的興起，造血干細胞在抗衰老 及疾病治療（如糖尿病、腫瘤、免疫系統疾病以及缺血性組織壞死等）起著日益重要的作 用。
[0003] 隨著細胞治療個性化技術的興起，目前認為體外快速擴增造血干細胞后再回輸到 哺乳生物體內，有利于提高機體的造血系統功能，包括提升紅細胞及免疫細胞的數量和功 能、血糖的維護、抗腫瘤能力以及免疫防御能力等，其主要表現在可以提高機體抗腫瘤等疾 病的治療能力、使組織器官年輕化，延長機體壽命。
[0004] 而造血干細胞培養如何實現快速擴增又不影響其功能是造血干細胞培養的關鍵， 然而現有技術中培養造血干細胞技術不夠成熟，表現在細胞的增殖速度慢和傳代次數較 低。
[0005] 因此，現有技術還有待于改進和發展。
【發明內容】
[0006] 鑒于上述現有技術的不足，本發明的目的在于提供一種造血干細胞培養基及其應 用和干細胞培養方法，旨在解決現有技術中造血干細胞的增殖速度比較慢和傳代次數低的 問題。
[0007] 本發明的技術方案如下：
[0008] -種造血干細胞培養基，其中，所述造血干細胞培養基包括氨基酸、維生素、鹽類、 脂類、蛋白多肽和細胞因子；
[0009] 其中，所述氨基酸包括丙氨酸、精氨酸、天冬酰胺、天冬氨酸、半胱氨酸、谷氨酸、甘 氨酸、組氨酸、異亮氨酸、亮氨酸、賴氨酸、甲硫氨酸、苯丙氨酸、脯氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、色 氨酸、酪氨酸、纈氨酸、谷氨酰胺及牛磺酸中的一種或多種；
[0010] 所述維生素包括生物素、氯化膽堿、D-泛酸鈣、D-泛酸鈉、葉酸、肌醇、煙酰胺、吡 哆醇鹽酸鹽、核黃素、鹽酸硫氨、輔酶Q10、維生素B12、腐胺二鹽酸鹽、維生素C及維生素E 中的一種或多種；
[0011] 所述鹽類包括碳酸氫鈉、氯化鈣、氯化鉀、氯化鎂、氯化鈉、丙酮酸鈉、乙二胺四乙 酸鈉鹽、肝素鈉、巰基乙醇及酚紅中的一種或多種；
[0012] 所述脂類包括地塞米松、油酸、膽固醇、乙醇胺、亞油酸、硫辛酸及脂質混合物中的 一種或多種；
[0013] 還包括蛋白多肽和/或細胞因子；其中，所述蛋白多肽和/或細胞因子包括纖維 細胞生長因子1、纖維細胞生長因子2、表皮生長因子、血小板衍生生長因子、胰島素、胰島 素樣生長因子1、血管內皮細胞生長因子、胎盤生長因子、白細胞抑制因子、轉鐵蛋白、人血 清白蛋白、集落刺激因子1、腫瘤壞死因子、腫瘤轉化因子、巨噬細胞集落刺激因子、粒細胞 集落刺激因子、白介素一2、干擾素、促紅細胞生成素、促血小板生成素、干細胞因子中、胰島 素、還原性谷光甘肽的一種或多種。
[0014] 所述造血干細胞培養基，其中，所述造血干細胞培養基按1升計，包括以下組分：
[0015]丙氨酸 0.05mM
[0016]精氨酸 2.00mM
[0017] 天冬酰胺0? 55mM
[0018] 天冬氨酸0.4mM
[0019] 半胱氨酸0? 15mM
[0020] 谷氨酸0? 15禮
[0021]甘氨酸 0? 25mM
[0022]組氨酸 0? 15mM
[0023] 異亮氨酸2. 50mM
[0024]亮氨酸 1. 2〇mM
[0025]賴氨酸 1. OOmM
[0026] 甲硫氨酸0.60mM
[0027] 苯丙氨酸 1. 05mM
[0028]脯氨酸 0? 02mM
[0029]絲氨酸 0? 7〇mM
[0030]蘇氨酸 0? 3〇mM
[0031]色氨酸 0? 10mM
[0032] 酪氨酸0? 15禮
[0033]纈氨酸 1. 4mM
[0034] 谷氨酰胺4mM
[0035]胰島素2-10mg/L
[0036]轉鐵蛋白5_50mg/L
[0037] 人血清白蛋白0.1 g/L
[0038] 抗壞血酸 50mg/L
[0039]生物素 30 y M
[0040] 氯化膽堿60 y M
[0041]葉酸6uM
[0042] 輔酶Q10 lyM
[0043] 地塞米松 10nM
[0044] D-泛酸鈉 5 u M
[0045]肌醇70 u M
[0046]煙酰胺 20 yM
[0047]吡哆醇鹽酸鹽0.15 yM
[0048]核黃素 0.55 yM
[0049]鹽酸硫氨0? 55 y M
[0050]維生素B12 0.5yM
[0051] 腐胺二鹽酸鹽0.5 yM
[0052]維生素C 10mg/L
[0053]維生素E 0? 25mg/L
[0054]肝素鈉 0? 4g/L
[0055] D-葡萄糖18禮
[0056] 還原性谷胱甘肽0? 001mg/L
[0057]牛磺酸 0? 0072g/L
[0058] 0-巰基乙醇0.05g/L
[0059]酚紅8. lmg/L
[0060]油酸2. 50mg/L
[0061]亞油酸 1. 5mg/L
[0062]硫辛酸0? lmg/L
[0063]脂質混合物lml/L
[0064]膽固醇 5mg/L
[0065]乙醇胺 60 y 1/L
[0066]碳酸氫鈉11.6mM
[0067]氯化鈣 0? 084mM
[0068]氯化鉀 4. 16mM
[0069]氯化鎂 0? 3mM
[0070]硫酸鎂 0? 407mM
[0071]氯化鈉 120.61mM
[0072]磷酸二氫鈉0? 453mM
[0073]磷酸氫二鈉0? 5mM
[0074]丙酮酸鈉0? 5mM
[0075] 造血干細胞擴增劑0? 5mg/L。
[0076]所述造血干細胞培養基，其特征在于，所述造血干細胞培養基按1升計，包括以下 組分：
[0077]表皮生長因子1-10 yg/L
[0078] 纖維細胞生長因子1 1-10 y g/L
[0079] 纖維細胞生長因子2 1-10 y g/L
[0080] 胰島素樣生長因子1 1-10 y g/L
[0081] 白細胞抑制因子1-10 yg/L
[0082] 血小板衍生生長因子1-10 y g/L
[0083] 胎盤生長因子1-10 y g/L
[0084] 腫瘤壞死因子1-10 y g/L
[0085] 血管內皮細胞生長因子1-10 yg/L
[0086] 集落刺激因子1 1-10 y g/L
[0087] 巨噬細胞集落刺激因子1-10 y g/L
[0088] 粒細胞集落刺激因子1-10 y g/L
[0089] 促紅細胞生成素1-10 y g/L
[0090] 促血小板生成素1-10 y g/L
[0091] 干細胞因子l-l〇yg/L
[0092]白介素一 2l-10yg/L
[0093]干擾素1-10 y g/L。
[0094] 所述造血干細胞培養基，其中，所述造血干細胞培養基還包括微量元素和/或有 機小分子物質；
[0095] 其中，所述微量元素微量元素包括氯化鈷、亞硒酸鈉、氯化鎳、氯化錳、七鉬酸銨、 氯化鋁、硫酸鉻鉀、硫酸銅、硝酸鐵、硫酸亞鐵或硫酸鋅中的一種或多種；所述有機小分子包 括巰基乙醇、還原型谷胱甘肽、D-葡萄糖、造血干細胞擴增劑、牛磺酸或肝素鈉中的一 種或多種。
[0096] 所述造血干細胞培養基，其中，所述造血干細胞培養基還包括經無菌及無病原體 安全處理后的植物抽提物和/或動物組織細胞抽提物；
[0097] 其中，所述植物抽提物來源于人參、黃芪、枸杞、當歸及黨參中的一種或多種；所述 動物組織細胞抽提物來源于動物的血漿或血清中的一種或多種。
[0098] 所述造血干細胞培養基，其中，所述造血干細胞培養基按1升計，包括以下組分：
[0099] 人參抽提物l_50mg/L
[0100] 黃芪抽提物l-50mg/L
[0101] 枸杞抽提物l-50mg/L
[0102] 當歸抽提物l_50mg/L
[0103] 幼年動物血漿或血清1-5%的體積百分數。
[0104] 一種造血干細胞培養基的應用，其中，所述造血干細胞培養基用于培養造血干細 胞。
[0105] 所述造血干細胞培養基的應用，其中，所述造血干細胞是從外周血或臍帶血中分 離得到的⑶34+細胞。
[0106] -種造血干細胞培養基的干細胞培養方法，其中，包括以下步驟：
[0107]A、培養基的制備：依次將氨基酸、維生素、鹽類、脂類、蛋白多肽和細胞因子加入到 培養基中；
[0108]B、造血干細胞的制備：從外周血或臍帶血中除去無核或多核細胞，分離得到 ⑶34+細胞；
[0109]C、細胞培養：將分離得到的CD34+細胞接種到上述培養基中，并進行懸浮培養。
[0110] 有益效果：本發明所述一種造血干細胞培養基及其應用和干細胞培養方法，其通 過采用氨基酸、維生素、鹽類、脂類、蛋白多肽和細胞因子作為基本培養基，并加入微量元素 或有機小分子中的一種或多種、植物細胞抽提物或動物細胞抽提物中的一種或多種，組成 造血干細胞培養基，其能快速擴增以CD34+為特征的造血干細胞，讓造血干細胞的擴增速 度以及端粒長度較常規對照培養基獲得的細胞均有極大的提升；并且，經本發明所述培養 基培養后的干細胞具有降低血糖、抗腫瘤以及延長機體壽命等功效。
【附圖說明】
[0111] 圖1為基于本發明所述造血干細胞培養基的干細胞培養方法的流程圖。
[0112] 圖2-3為本發明實施例1中的結果數據對照圖。
[0113]圖4為本發明實施例2中的結果數據對照圖。
[0114]圖5為本發明實施例3中的結果數據對照圖。
[0115]圖6為本發明實施例4中的結果數據對照圖。
[0116]圖7為本發明實施例5中的結果數據對照圖。
[0117]圖8為本發明實施例6中的結果數據對照圖。
【具體實施方式】
[0118]本發明提供一種造血干細胞培養基及其應用和干細胞培養方法，為使本發明的目 的、技術方案及效果更加清楚、明確，以下對本發明進一步詳細說明。應當理解，此處所描述 的具體實施例僅僅用以解釋本發明，并不用于限定本發明。
[0119]本發明提供一種造血干細胞培養基，其包括氨基酸、維生素、鹽類、脂類、蛋白多肽 和細胞因子。本發明所制備的造血干細胞培養基中的組分能為造血干細胞的培養提供足夠 的養分，加快了造血干細胞的生長速度，與普通培養基相比，本發明所述培養基不僅能更快 速擴增不同來源的干細胞，延長了傳代次數，還能很好的保持干細胞的潛能性。
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