專利名稱：辣根過氧化物酶的鄰苯二胺底物配制方法
技術領域：
本發明涉及免疫檢測領域，尤其涉及一種辣根過氧化物酶的鄰苯二胺底物配制方法。
背景技術：
辣根過氧化物酶是免疫檢測領域中一種非常重要的一種工具酶，由于其來源方便，價格較低，并且檢測體系靈敏因而被廣泛地應用于免疫學分析測試，其中有可溶性的體系、有沉淀性的體系，可溶性體系是底物經辣根過氧化物酶催化反應后其終產物為可溶性的，因而可以被儀器讀取數據，因而主要用于定量、定性分析。辣根過氧化物酶的底物很多，其中最常用的是鄰苯二胺，該底物的常用配方是0.1M檸檬酸 24.3ml0.2M Na2HPO4 25.7ml鄰苯二胺 20mg30％雙氧水 75ul。
上述底物配方中鄰苯二胺雖然價格較低，但鄰苯二胺的用量在20mg在許多單位精確稱量這樣劑量較為困難，有稱量條件并且稱量起來也是較為煩瑣，并且這種底物必需要現用現配、并且對光敏感，同時這種底物在現配時不太容易被底物緩沖液溶解，這給實驗室研究分析以及低層分析機構的分析與應用帶來不便，同時由于實際應用時情況也不是一層不變的，有時人們分析測試時只需要用到4ml、有時只用到10ml底物，這樣相應的底物也需要變化，稱量將會精確稱量工作的確變得煩瑣，以至一些機構不得不粗放稱量。稱量的鄰苯二胺量太多，也是一種浪費，同時也會對環境保護產生不利影響。
發明內容
本發明的目的是提供一種辣根過氧化物酶的鄰苯二胺底物配制方法。
辣根過氧化物酶的鄰苯二胺底物配制方法首先將10-100毫克鄰苯二胺溶于100微升N，N-二甲基甲酰胺中，形成A液，含有雙氧水的檸檬酸-磷酸鹽的底物緩沖液為B液，使用時，將5微升A液與10-20毫升B液混合后即可使用。
含有雙氧水的檸檬酸-磷酸鹽的底物緩沖液為0.1M檸檬酸 24.3ml
0.2M Na2HPO4 25.7ml30％雙氧水75-300ul。
本發明主要針對辣根過氧化物酶底物鄰苯二胺的底物配方作一些改進，解決鄰苯二胺的精確稱量的煩瑣問題、鄰苯二胺在底物緩沖液中不易溶解問題、鄰苯二胺小量保存的穩定性以及底物緩沖體系的操作方便等問題。并且這種改進不能破壞原先的辣根過氧化物酶底物系統的靈敏性，也不破壞該系統的分析測試等相關內容。
具體實施例方式
經實際使用發現將鄰苯二胺溶于適當的溶劑中時，鄰苯二胺在這種溶劑中較穩定，不會出現鄰苯二胺在過去常用的檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中很容易出現變色反應。并且將這種溶液混合物在使用前才吸取適量加入底物緩沖液中直接溶解使用，即時應用。
也可以將混合液分裝到適量的容器瓶中，每次使用一瓶，一次性用完。這樣使用是非常方便，也不會出現底物浪費現象，也不會出現底物在溶解到底物緩沖液中的難溶解問題。精確稱量一次，溶解到適量的溶劑中后，再精確分裝到各個小瓶中，也可以避免多次精確稱取特定量底物的煩瑣。并且所涉及的底物分裝到小瓶中的體積是極微小的，用前只需將底物緩沖液加入到底物瓶中即可，由于是速溶的，用戶只需輕輕吹打數次即可。
實施例1稱取100毫克鄰苯二胺，溶于100微升無水的N，N-二甲基甲酰胺中，然后放入低溫下保存，用前吸取10微升體積的底物加入10毫升的含有雙氧水的檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中，鄰苯二胺在N，N-二甲基甲酰胺中是非常容易溶解的，因而底物鄰苯二胺所溶解的溶劑的體積不宜太大，以10毫克鄰苯二胺溶于10微升N，N-二甲基甲酰胺是很容易做到的，用時只需吸取所需量的底物直接加入到底物緩沖液中。
實施例2稱取300毫克鄰苯二胺，溶于500微升無水的N，N-二甲基甲酰胺中，然后放入低溫下保存，用前吸取10微升的底物加入20毫升的含有雙氧水的檸檬酸-磷酸鹽緩沖液中即可，鄰苯二胺在N，N-二甲基甲酰胺中是非常容易溶解的，因而底物鄰苯二胺所溶解的溶劑的體積不宜太大，以3毫克鄰苯二胺溶于5微升N，N-二甲基甲酰胺也是很容易實現的，用時只需吸取所需量的底物直接加入到底物緩沖液中即可。
實施例3稱取20毫克的鄰苯二胺，溶于200微升無水N，N-二甲基甲酰胺中，然后分裝到10-20毫升小透明玻璃瓶中或棕色瓶中，依據需要每瓶分裝成5微升，一般每瓶分裝底物的量為2毫克。這種底物一次稱量，并分裝成一批等量的底物，分裝量均一致，而且鄰苯二胺的溶劑的體積只有大約5微升，一個分裝瓶中的底物通常為一快96孔酶標反應板中的底物使用量。使用前只需將10毫升含有雙氧水的底物緩沖液加入該底物瓶中混勻即可使用。這樣每次使用的底物相對一致，并且底物很容易溶解于底物緩沖液中。
實施例4稱取400毫克的鄰苯二胺，溶于500微升無水N，N-二甲基甲酰胺中，然后分裝到10-20毫升小透明玻璃瓶中或棕色瓶中，依據需要每瓶分裝成5微升，每瓶分裝底物的量鄰苯二胺為4毫克。這種底物一次稱量，并分裝成一批等量的底物，分裝量均一致，而且鄰苯二胺的溶劑的體積只有大約5微升，一個分裝瓶中的底物通常為一快96孔酶標反應板中的底物使用量。使用前只需將10毫升含有雙氧水的底物緩沖液加入該底物瓶中混勻即可使用。這樣每次使用的底物相對一致，并且底物很容易溶解于底物緩沖液中。
權利要求
1.一種辣根過氧化物酶的鄰苯二胺底物配制方法，其特征在于，首先將10-100毫克鄰苯二胺溶于100微升N，N-二甲基甲酰胺中，形成A液，含有雙氧水的檸檬酸-磷酸鹽的底物緩沖液為B液，使用時，將5微升A液與10-20毫升B液混合后即可使用。
2.根據權利要求1所述的一種辣根過氧化物酶的鄰苯二胺底物配制方法，其特征在于，所述的含有雙氧水的檸檬酸-磷酸鹽的底物緩沖液為0.1M檸檬酸24.3ml0.2M Na2HPO4 25.7ml30％雙氧水75-300ul。
全文摘要
本發明公開了一種辣根過氧化物酶的鄰苯二胺底物配制方法。辣根過氧化物酶的鄰苯二胺底物配制方法首先將10－100毫克鄰苯二胺溶于100微升N，N－二甲基甲酰胺中，形成A液，含有雙氧水的檸檬酸－磷酸鹽的底物緩沖液為B液，使用時，將5微升A液與10毫升B液混合后即可使用。本發明主要針對辣根過氧化物酶底物鄰苯二胺的底物配方作一些改進，解決鄰苯二胺的精確稱量的煩瑣問題、鄰苯二胺在底物緩沖液中不易溶解問題、鄰苯二胺小量保存的穩定性以及底物緩沖體系的操作方便等問題。并且這種改進不能破壞原先的辣根過氧化物酶底物系統的靈敏性，也不破壞該系統的分析測試等相關內容。
文檔編號G01N33/532GK1725011SQ20051005080
公開日2006年1月25日 申請日期2005年7月21日 優先權日2005年7月21日
發明者陳正賢, 徐正, 吳建祥, 周雪平, 沈立榮, 葉興乾 申請人:浙江大學