涉及平行和同時分離的電泳方法

專利名稱：涉及平行和同時分離的電泳方法
技術領域：
本發明涉及牽涉平行和同時分離的電泳方法。
背景技術：
由于在DE805399 ; Barrolier，J等人在Z. Naturforschung， 1958， 13B，第754 - 755頁；Hannig，K.在Zeitschrift der Analytischen Chemie， 1961， 181，第244 - 254頁和Roman, M.等人在Journal of Chromatography 1992，592，第3 - 12頁中公開了被稱為自由流動電泳 (FFE)的方法的原理，因此發現在工業和化學中使用的有效分析和制備 方法當中這一技術具有永久的位置。盡管小的離子以及大的顆粒二者 均可使用這一技術分離，但主要應用是分級蛋白質，特別是生物技術 生產酶和其他生物活性蛋白質、膜顆粒和甚至存活細胞。與能分離單
獨的樣品組分的其他方法相比，FFE提供兩個主要的優點(i)可連續 進行分離且能使人獲得多達數百mg或者甚至g含量的純物質/小時， 和(ii)分離過程溫和且保持被分離組分的酶活性。FFE技術尤其可用 于分離和分級復雜蛋白質，因此可應用于proteomics的應急領域，該 領域在科學研究、藥物、生物技術和臨床診斷市場中變得愈加重要。 例如，當proteomic研究增長時，愈加需求改進蛋白質的分離性能， 特別是相對于離析工藝的可靠度和通用的前端。
一般地，自由流動的分離方法適合于分離任何分子量的離子以及 生物顆粒。通常不關心待分離的樣品是否本身荷電或者是否通過吸收 或吸附離子產生電荷。在例如美國專利5275706中反映了通過穩定介 質和逆流介質，連續偏轉電泳的方法及其改進，其公開內容在此通過 參考引入。才艮據這一專利，逆流介質與分離介質流動方向相反地引入 到分離空間內。這兩種介質通過分級出口排放，從而導致具有低空隙 體積的分級，和另外維持介質在例如具有非常低湍流的分級出口區域
內的層流。可在例如美國專利申請2004/0050697中找到各種模式的自 由流動電泳的討論，其公開內容在此通過參考引入。
等電點聚焦是一種電泳技術，它給緩沖溶液增加pH梯度，且與電 場一起集中大多數兩性的生物材料。兩性生物材料，例如蛋白質、肽 和病毒在酸性介質內荷正電和在堿性介質內荷負電。在IEF期間，在 橫向，即與流動方向相反的方向上建立的pH梯度內這些材料遷移到其
等電點(pl)，在此它們不具有凈電荷并形成穩定的窄區域。在這一點 處，材料終止橫向遷移且它們變得集中。在這一技術中，不存在電壓 的依賴關系。等電點聚焦得到這種高離析帶，這是因為通過pH梯度和 電場的結合作用，由于擴散或流體運動導致的從其等電點處移開的任 何兩性生物材料將會返回。聚焦工藝因此純化并濃縮樣品為相對穩定 的帶。這是得到一些最高離析分離的強有力概念，特別是當在二維凝 膠內與電泳結合時。
區域電泳是可在FFE中使用的另一種分離模式。區域電泳主要基 于電荷，且在較小的程度上基于形式與尺寸來分離生物顆粒。可在FFE 中使用的進一 步的模式是等速電泳(I TP) 。 I TP FFE涉及使用非均質的 分離介質。當各組分與起始樣品的主要帶分離時，基于局部的條件， 這些組分與本體樣品流動相反地進入當它們加速或減速時的區域內。 然后利用這一所謂的聚焦效果從本體樣品中分級所得的組分。
典型地，FFE方法涉及通過使樣品流經在腔室內的單一分離空間 進行分離，其中這一空間被兩個電極從側面包圍(flank)。在美國專利 申請US2004/045826中反映了在單一的腔室內允許平行和同時聚焦的 改進方法。這一專利申請公開了具有多個電極的單一分離腔室，以便 在單一腔室內提供多個分離空間。希望在單一腔室內涉及平行、同時 分離的進一步改進。

發明內容
在一個實施方案中，本發明提供一種方法，該方法包括下述步驟 (a)提供含第一端壁、第二端壁、第一側壁、第二側壁和兩塊板的 分離腔室，其中端壁、側壁和板確定分離空間；位于分離腔室內分別
與第一側壁和第二側壁鄰近的單一陽極和單一陰極；與第一端壁相鄰 地布置的至少兩個樣品入口；與第一端壁相鄰地布置的至少兩個分離 介質入口 ；與第一端壁相鄰且與陽極相鄰的第一陽極穩定介質入口；
與第一端壁相鄰且與陰極相鄰的第一陰極穩定介質入口；和一個或更 多個額外的陽極穩定介質入口和一個或更多個額外的陰極穩定介質入 口 ，其中額外的陽極和陰極穩定介質入口與第一端壁相鄰地布置且進
一步位于第 一陽極穩定介質入口和第 一 陰極穩定介質入口之間，
(b) 通過至少兩個分離介質入口引入至少一種分離介質到分離腔 室內，
(c) 通過至少兩個樣品入口引入一種或更多種待分離的樣品到分 離腔室內，和
(d) 通過第 一 和額外的陽極穩定介質入口引入陽極穩定介質到分 離腔室內，和通過第 一和額外的陰極穩定介質入口引入陰極穩定介質 到分離腔室內，其中通過陽極和陰極穩定介質經額外的陽極穩定介質 入口和額外的陰極穩定介質入口的相鄰流動，提供確定分離亞空間的
一個或更多個邊界。
在進一步的實施方案中，本發明提供一種方法，該方法包括下述 步驟
(a) 提供含第一端壁、第二端壁、第一側壁、第二側壁和兩塊板的 分離腔室，其中端壁、側壁和板確定分離空間；位于分離腔室內分別 與第一側壁和第二側壁鄰近的陽極和陰極；與第一端壁相鄰地布置的 至少兩個樣品入口 ；與第 一端壁相鄰地布置的至少兩個分離介質入口 ； 與第一端壁相鄰且與陽極相鄰的第一陽極穩定介質入口；與第一端壁 相鄰且與陰極相鄰的第一陰極穩定介質入口；和一個或更多個額外的 陽極穩定介質入口和一個或更多個額外的陰極穩定介質入口 ，其中額 外的陽極和陰極穩定介質入口與第一端壁相鄰地布置且進一 步位于第 一陽極穩定介質入口和第 一 陰極穩定介質入口之間，
(b) 通過至少兩個分離介質入口引入至少一種分離介質到分離腔 室內，(C)通過至少兩個樣品入口引入 一 種或更多種待分離的樣品到分 離腔室內，和
(d)通過第 一 和額外的陽極穩定介質入口引入陽極穩定介質到分 離腔室內，和通過第一和額外的陰極穩定介質入口引入陽極穩定介質 到分離腔室內，其中通過陽極和陰極穩定介質經額外的陽極穩定介質 入口和額外的陰極穩定介質入口的相鄰流動，提供確定分離亞空間的 一個或更多個邊界，其中陽極穩定介質包括單質子酸，所述單質子酸 中的陰離子的電泳遷移率小于或等于約40mVV/s，和其中陰極穩定介 質包括一元堿，其中所述一元堿中的陽離子的電泳遷移率小于或等于 約40m2/V/s。
這些實施方案還涉及借助陽極和陰極產生電場。分離亞空間允許 在總的裝置內平行和同時分離，其中每一亞空間基本上充當單獨的分 離腔室。本發明因此能借助平行和同時的工藝提供例如分離增加量的 樣品，且不需要多個分離腔室和儀器。
(在以上這兩個實施方案中，可同時進行一個或更多個引入和發生 步驟，或者與以上列出的不同順序進行)。


圖1是進行平行和同時的無載流子電泳的現有技術裝置的示意 圖，它包括三個分離空間，其中每一空間由兩個電極來定義。 圖2是本發明實施方案的示意圖。
圖3示出了根據本發明的實施方案，自由流動的電泳腔室的特征。
具體實施例方式
圖1示出了現有技術的分離腔室10,它分成三個分離空間，其中 每一個空間被陽極和陰極(即陽極20a和陰極22a，陰極22a和陽極 20b，以及陽極20b和陰極22b的電極對)從側面包圍。(還提供電極膜 24a-24f)。每一分離空間含有樣品入口 40a、 40b、 40c;陽極穩定 介質入口 28a、 28b、 28c;陰極穩定介質入口 30a、 30b、 30c;和分離 介質入口 26a、 26b和26c。因此，由第一端壁14、第二端壁12和側 壁16與18以及兩塊平行板(未示出)確定的分離腔室，含有三個分離
亞空間，所述分離亞空間允許同時發生三個分離操作。在每一亞空間 內，如上所述，基于例如其等電點， 一部分注入的樣品在與流動方向
相反的方向上分離。通過與第二端壁相鄰地排列的收集出口 32a、 32b、 32c收集分離的餾分。典型地收集的分析物通過單獨的管道導出到單 獨的收集容器、壁、微濾(microfUer)板或類似物(未示出)上。腔室 形狀典型地為矩形，其中端壁12、 14和側壁16、 18形成矩形并支持 形成分離空間而緊密地隔開的相反的平行板。在腔室內與側壁平行地 排列電極。
根據本發明的實施方案，可在單一的陽極和單一的陰極之間產生 多個分離亞空間。以下的實施方案涉及具有單一陽極和陰極的分離腔 室，但例如可具有多個陽極和陰極，其中多個分離亞空間在每一陽極 -陰極對之間。
圖2圖示了根據本發明的實施方案進行平行和同時無載流子分離 的分離腔室100。類似于現有技術的腔室構造分離腔室100，但包含在 腔室100的相對側壁處平行地排列的僅僅單一的陽極120和單一的陰 極122。在腔室內的分離空間被分成三個單獨的分離亞空間 136a-136c，且通過元件138鑒定邊界。每一亞空間具有樣品入口 140a-140c,分離介質入口 126a-126c,陽極穩定介質入口 128a-128b 和陰極穩定介質入口 130a-130c。還提供被分離的餾分出口 132a-132c。箭頭示出了從入口開始流動的方向。
正如以下更詳細地描述的，通過陰極穩定介質和陽極穩定介質， 例如入口 130a和128b,和入口 130b和128c的相鄰流動，來確定在 兩個相鄰的亞空間之間的邊界138。所有介質典型地通過它們各自的 入口經泵，例如多通道蠕動泵引入。電極膜124a和124b典型地導電， 且隔開電極空間與分離空間，以防止因流體動力學流動引起的介質交 換。(膜典型地非常靠近電極布置，但為了清楚起見，附圖示出了與電 極隔開的膜)。
上述實施方案的方法能提供兩個電極分離腔室，其中x個單獨的 分離亞空間被x+l個電極穩定介質流體從側面包圍。根據一個實施方
案，為了在分離腔室內產生分離亞空間，提供s-l對相鄰的陽極/陰極
穩定介質入口，提供至少s個注入樣品的入口，提供至少s個分離介 質入口 ，和提供至少s個，典型地至少3s個分級出口 。取決于分離腔 室的尺寸，所產生的分離亞空間s的數量可以是2-7個。顯然將因此 調節引入樣品的泵、分離介質和電極穩定介質的數量，以及在每一泵 內包括的通道數量。
根據本發明的實施方案，通過選擇用于陽極和陰極介質的單質子 酸和一元堿，可降低不同的分離亞空間之間的橫向污染(例如，跨過邊 界138的污染)。通常有用的是提供具有高分子量和低電泳遷移率的這 種酸和堿。
特別地，根據一個實施方案，陽極和陰極介質中的單質子酸和一 元堿的分子量為至少約100,和在另一實施方案中，范圍為約150-約 300。在另一實施方案中，單質子酸和一元堿二者的有效濃度(彼此獨 立的濃度)為至少約50mmo1/1。
根據另一實施方案，陽極穩定介質含有單質子酸，其中所述單質 子酸中的陰離子的電泳遷移率《約4 0 x 10-9m2 / V / s ，和陽極穩定介質含 有一元堿，其中所述一元堿中陽離子的電泳遷移率 < 約40 x 10_9m2/V/s。在進一步的實施方案中，這種陰離子和這種陽離子的電泳 遷移率為約25 x 10—9ra2/V/s -約30 x 10_9m7V/s。
此處所使用的電泳遷移率(EM)是指在電場內，在給定的場強下， 在含水介質內單位時間中陰離子和陽離子的遷移速度。可如下所述計 算電泳遷移率u:
u=s/H x t
其中s表示遷移距離(m) , H表示電場強度(V/m)和t表示時間(s)。 在本發明的一些實施方案中，陽極穩定介質(它典型地含水)含有 選自葡糖酸、葡糖醛酸、乙酰基水楊酸、2-(N-嗎啉基)乙磺酸(MES) 和兩性離子緩沖液(也稱為Goods緩沖液-參見Good等人的 Biochemistry5，467 (1966))中的酸。在本發明的 一些實施方案中，陰 極穩定介質(它典型地含水)含有選自N-曱基-D-葡糖胺、三-異丙醇胺
和2-[雙(2-羥乙基)氨基]-2- (羥甲基)丙-1， 3-二醇(BISTRIS)中的械。
圖3示出了圖2所反映的工藝效果，其中示出了分離亞空間136b 和136c的各方面。粗的虛線138描述了在亞空間之間的邊界，其中較 輕的虛線示出了來自各種入口處的介質流動路徑。術語REC表示介質 的相對導電率。圖3示出了陽極120和陰極122。陽極穩定介質通過 入口 128b和128c引入，陰極穩定介質通過入口 130b和130c引入， 和分離介質通過入口 126b和126c引入，其中流動如箭頭所示的方向。
正如圖3所反映的，控制陰極穩定介質中的陽離子(B+)和越過空 間136a和136b之間(在陽極和陰極分離介質的相鄰流線之間)的界面 的陰離子(A—)的交叉(crossover),從而維持單獨的分離亞空間的完整 性。特別地，如上所述，選擇具有相對低電泳遷移率的陰離子和陽離 子的單質子酸和堿將降低交叉。
另外，如圖3中的REC圖表所反映的，介質的相對導電率也可有 助于分離亞空間的完整性。在一個實施方案中，來自入口 128c和130c 的陽極和陰極穩定介質的導電率是來自入口 126c的分離介質的導電 率的至少5倍，且有助于維持在分離介質內的樣品流動。然而，當選 擇較高的導電率穩定介質時，可遇到較高的熱量耗散和增加的密度與 粘度(和因此較低的流速)。于是，通常達成各種參數和考慮因素之間 的平衡。
在IEF模式的情況下，有用地選擇具有特定pH值的介質，以促進 感興趣的組分分離。 一般地，基于感興趣的一種或多種組分的等電點， 選擇pH值，以確保合適地分離各組分。在一些實施方案中，有用地提 供比分離介質的最低pH成分的pH小約0.5-約3個pH單位的陽極穩 定介質。類似地，有用地提供比分離介質的最高pH成分的pH高約0. 5 -約3個pH單位的陰極穩定介質。在一些實施方案中，這些范圍為約 0. 8-約2個pH單位。在圖3所反映的實施方案中，對于亞空間136c 來說，橫跨來自入口 126c的分離介質，在來自入口 130c的陰極穩定 介質和來自入口 128c的陽極分離介質之間，產生pH梯度152。典型
地，橫跨分離介質產生的梯度152的pH跨度可在約0. 3至約8. 5之間 變化。
再次參考圖2,在分離腔室的第二端處，在每一單獨的分離腔室 內在不同路徑上流動的單獨的分離分析物通過收集出口 132a-132c收 集，所述收集入口 132a-132c通常沿著垂直于流動方向的線排列。典 型地，每一分離亞空間含有相同的收集出口布局。若分離相同的樣品 和希望相同的餾分，則可合并來自每一分離亞空間的含有相同分析物 的收集出口流出液。
單獨的分析物經多個收集出口 132a-132c流出分離腔室，且通常 經單獨的管線導出到任何合適類型的單獨的收集容器中。在收集容器 中， 一起收集分析物與分離介質和逆流介質。在一列收集出口的單獨 收集出口之間的距離通常應當盡可能小，以便提供合適的分級/分離。 從收集出口中心處測量的單獨的收集出口之間的距離可以是約0. lmm 一約2mm，更典型地約0. 3mm-約1. 5mm。
根據本發明的實施方案，可在腔室中使用逆流。例如，在圖2中， 將逆流介質經逆流元件134以與樣品和分離介質引入其內的方向相反 的方向引入到分離腔室中。通過允許在收集出口 132a - 132c處調節和 控制流速與壓力條件，逆流將加快分離。
典型地選擇逆流介質能改性或者超越接近分級出口的分離介質的 緩沖能力，因此它可以是具有相同粘度和密度但不同導電率和/或pH 值和/或其化學成分的材料。典型的逆流和分離介質選自相同組的介 質，并典型地含有諸如脲、甘油、碳水化合物葡萄糖和類似化合物之 類的組分。這種介質通常含有可變等電點的兩性物質的混合物，以便 單獨的組分在腔室內的電場影響下變得有序。這些介質商購于數種來 源，例i口獲自 General Electric的Immobiline 、 Ampholine — Pharmalyte ,獲自SERVA Electrophoresis GmbH的ServalytTM和獲 自Becton， Dickinson and Company的類似材料。
分離介質的流速和逆流介質的流速的有效比值為約1:10到約 10:1，更典型地約1: 3到約3: 1。分離介質和逆流介質的實際流速取
決于各種考慮因素，其中包括儀器的幾何尺寸，所使用的特定的分離
模式(它可在所要求的通行(trans i t)時間內變化)、待分離的樣品、所 使用的分離介質和所使用的一種或多種逆流介質，以便獲得分析物的 最佳分離。在體系內所有介質(穩定和逆流介質)的典型流速因此可寬 泛地在0. 3ml/h - 3000ml/h內變化。
根據本發明的實施方案的裝置進一步包括分離介質用的多通道 泵，樣品用的多通道泵，和一種或多種逆流介質用的多通道泵。該裝 置進一步包括餾分收集出口和出口管道。典型地，泵是多通道的蠕動 泵。
根據本發明的實施方案，可結合該方法與自由流動的電泳工藝和 裝置的變體。例如，可使用多個裝置，然后平行和/或串聯地排列。或 者，在裝置的收集出口處收集的各組分流體可循環回到相應的樣品入 口處，形成可通過增加樣品組分的停留時間來改進離析的循環工藝。
分離腔室的底板和頂板可獨立地由玻璃或者合適的塑料，例如 PVC,聚烯烴，聚碳酸酯，樹脂玻璃，聚卣代烴或LucUe⑧(基本上由
聚合的甲基丙烯酸甲酯組成的丙烯酸類樹脂)制造，其中優選聚合物涂 布的玻璃。頂板和底板典型地通過充當墊圏或密封墊的隔板隔開。
電極典型地由在電場內不容易氧化的金屬，例如鉑構成。電極典 型地通過離子交換的尼龍或乙酸纖維素膜與分離腔室隔開。典型地通 過鹽或緩沖溶液恒定地洗滌電極，以除去在該工藝過程中產生的電解 產物。
分離空間(在板之間的空間)的厚度典型地為約0.1-約1.5mm，優 選約0. 3至約1. Omm。
根據本發明的實施方案，控溫也是有用的。當電流流經電解質溶 液時，根據被稱為焦耳加熱的現象，傳導介質的溫度增加。為了降低 因這種加熱引起的流動介質的層流曲線的干擾，通常希望耗散焦耳熱 量到周圍環境中。在一個實施方案中，分離腔室在金屬載體上與其底 板一起排列，所述金屬載體含有與控溫裝置相連的流體流動腔室，例 如控制分離腔室溫度的恒溫體系。有用的溫度范圍為約2'C至約35°C,
更典型地約5°C -室溫(約25°C)。
本發明尤其適合于，但不限于分析和制備分離離子、肽、生物聚 合物、生物顆粒以及合成聚合物和顆粒。
另外，各種FFE模式是可能的，例如IEF和等速電泳。認為在單 一腔室內的所有亞空間使用單一的FFE模式，或者在相同腔室內的不 同亞空間可使用不同的模式。
上述描述性實施方案僅僅是本發明的例舉，和存在落在本發明范 圍內的許多改性和替代模式，本發明的范圍在所附的權利要求中列出。
權利要求
1.一種電泳方法，該方法包括下述步驟(a)提供含第一端壁、第二端壁、第一側壁、第二側壁和兩塊板的分離腔室，其中端壁、側壁和板確定分離空間；位于分離腔室內分別與第一側壁和第二側壁鄰近的單一陽極和單一陰極；與第一端壁相鄰地布置的至少兩個樣品入口；與第一端壁相鄰地布置的至少兩個分離介質入口；與第一端壁相鄰且與陽極相鄰的第一陽極穩定介質入口；與第一端壁相鄰且與陰極相鄰的第一陰極穩定介質入口；和一個或更多個額外的陽極穩定介質入口和一個或更多個額外的陰極穩定介質入口，其中額外的陽極和陰極穩定介質入口與第一端壁相鄰地布置且進一步位于第一陽極穩定介質入口和第一陰極穩定介質入口之間，(b)通過所述至少兩個分離介質入口引入至少一種分離介質到分離腔室內，(c)通過所述至少兩個樣品入口引入一種或更多種待分離的樣品到分離腔室內，(d)借助陽極和陰極產生電場；和(e)通過第一和額外的陽極穩定介質入口引入陽極穩定介質到分離腔室內，和通過第一和額外的陰極穩定介質入口引入陽極穩定介質到分離腔室內，其中通過陽極和陰極穩定介質經額外的一個或更多個附加陽極穩定介質入口和所述一個或更多個額外的陰極穩定介質入口的相鄰流動，提供確定分離亞空間的一個或更多個邊界。
2. 權利要求1的方法，其中陽極穩定介質包括單質子酸，所述單 質子酸中的陰離子的電泳遷移率<約40x 10—9m2/V/s,和其中陰極穩定 介質包括一元堿，其中所述一元堿中的陽離子的電泳遷移率 < 約40x 1(TWV/s。
3. 權利要求2的方法，其中單質子酸中陰離子的電泳遷移率為約 25 x 10—9m2/V/s -約30 x 10—9m2/V/s，和其中一元堿中陽離子的電泳遷移 率為約25 x 10—V/V/s 一約30 x 10—9m2/V/s。
4，權利要求l的方法，其中陽極穩定介質的pH比分離介質的最低 pH成分的pH小約0. 5 -約3個pH單位，和其中陰極穩定介質的pH比 分離介質的最高pH成分的pH高約0. 5-約3個pH單位。
5. 權利要求1的方法，其中陽極穩定介質包括選自葡糖酸、葡糖 醛酸、乙酰基水楊酸、2-(N-嗎啉代)乙磺酸和兩性離子緩沖液中的酸。
6. 權利要求1的方法，其中陰極穩定介質包括選自N-曱基-D-葡糖 胺、三-異丙醇胺和2-[雙(2-羥乙基)氨基]-2-(羥甲基)丙-l, 3-二醇中 的堿。
7. 權利要求1的方法，其中分離腔室包括s個分離亞空間，s-l 對陽極穩定介質和陰極穩定介質入口 ，至少s個樣品入口 ，和至少s個 分離介質入口，其中s為2-7。
8. 權利要求1的方法，進一步包括下述步驟將逆流介質從與分 離腔室的第二壁相鄰地布置的一個或更多個逆流入口處引入到每一分 離亞空間內。
9. 權利要求1的方法，其中第一和第二端壁，第一和第二側壁和 兩塊板確定矩形腔室。
10. 權利要求9的方法，其中陽極和陰極基本上平行于第一和第二 側壁布置。
11. 權利要求9的方法，其中所述板隔開約0. l匪-約1.5mm的距離。
12. 權利要求l的方法，其中腔室進一步包括與第二端壁相鄰地布 置的多個收集出口。
13. 權利要求l的方法，其中通過等電點聚焦分離所述一種或更多 種樣品。
14. 權利要求l的方法，其中通過等速電泳分離所述一種或更多種 樣品。
15. —種電泳方法，該方法包括下述步驟(a)提供含第一端壁、第二端壁、第一側壁、第二側壁和兩塊板的 分離腔室，其中端壁、側壁和板確定分離空間；位于分離腔室內分別與 第一側壁和第二側壁鄰近的陽極和陰極；與笫一端壁相鄰地布置的至少 兩個樣品入口；與第一端壁相鄰地布置的至少兩個分離介質入口；與第 一端壁相鄰且與陽極相鄰的第一陽極穩定介質入口 ；與第一端壁相鄰且 與陰極相鄰的第一陰極穩定介質入口；和一個或更多個額外的陽極穩定 介質入口和一個或更多個額外的陰極穩定介質入口 ，其中額外的陽極和陰極穩定介質入口與第一端壁相鄰地布置且進一步位于笫一陽極穩定 介質入口和第一陰極穩定介質入口之間，(b) 通過所述至少兩個分離介質入口引入至少一種分離介質到分離 腔室內，(c) 通過所述至少兩個樣品入口引入一種或更多種待分離的樣品到 分離腔室內，(d) 借助陽極和陰極產生電場；和(e) 通過第 一 和額外的陽極穩定介質入口引入陽極穩定介質到分離 腔室內，和通過笫一和額外的陰極穩定介質入口引入陰極穩定介質到分 離腔室內，其中通過陽極和陰極穩定介質經所述一個或更多個額外的陽 極穩定介質入口和所述一個或更多個額外的陰極穩定介質入口的相鄰 流動，提供確定分離亞空間的一個或更多個邊界，其中陽極穩定介質包 括單質子酸，所述單質子酸中的陰離子的電泳遷移率小于或等于約 40m2/V/s,和其中陰極穩定介質包括一元堿，其中所述一元堿中的陽離 子的電泳遷移率小于或等于約40m2/V/s。
16. 權利要求15的方法，其中單質子酸中陰離子的電泳遷移率為 約25 x 10_9m7V/s -約30x 10—9m2/V/s，和其中 一元堿中陽離子的電泳遷 移率為約25 x l(T9m2/V/s -約30 x l(Tm2/V/s。
17. 權利要求15的方法，其中陽極穩定介質的pH比分離介質的最 低pH成分的pH小約0. 5 -約3個pH單位，和其中陰極穩定介質的pH 比分離介質的最高pH成分的pH高約0. 5-約3個pH單位。
18. 權利要求15的方法，其中陽極穩定介質包括選自葡糖酸、葡 糖醛酸、乙酰基水楊酸、2-(N-嗎啉代)乙磺酸和兩性離子緩沖液中的酸。
19. 權利要求15的方法，其中陰極穩定介質包括選自N-曱基-D- 葡糖胺、三-異丙醇胺和2-[雙(2-羥乙基)氨基]-2-(羥甲基)丙-1， 3-二 醇中的減。
20. 權利要求15的方法，其中分離腔室包括s個分離亞空間，s-l 對陽極穩定介質和陰極穩定介質入口 ，至少s個樣品入口 ，和至少s個 分離介質入口，其中s為2-7。
21. 權利要求15的方法，進一步包括下述步驟將逆流介質從與 分離腔室的第二壁相鄰地布置的一個或更多個逆流入口處引入到每一 分離亞空間內。
22. 權利要求15的方法，其中第一和第二端壁，第一和第二側壁 和兩塊板確定矩形腔室。
23. 權利要求22的方法，其中陽極和陰極基本上平行于第一和第 二側壁布置。
24. 權利要求22的方法，其中板隔開約0. 1醒-約1. 5腿的距離。
25. 權利要求15的方法，其中腔室進一步包括與第二端壁相鄰地布置的多個收集出口。
26. 權利要求15的方法，其中通過等電點聚焦分離所述一種或更多種樣品。
27. 權利要求15的方法，其中通過等速電泳分離所述一種或更多種 樣品。
全文摘要
提供一種電泳方法，它涉及在分離腔室(100)內使用多個分離亞空間(136a-136c)的平行和同時的多個工藝。在一個實施方案中，腔室含有在腔室(100)的相對側壁處平行地排列的單一的陽極(120)和單一的陰極(122)。在腔室內的分離空間用邊界(138)分成三個單獨的分離亞空間(136a-136c)。每一亞空間具有樣品入口(140a-140c)，分離介質入口(126a-126c)和陽極穩定介質入口(128a-128b)和陰極穩定介質入口(130a-130c)。還提供分離的餾分出口(132a-132c)。通過陰極穩定介質和陽極穩定介質，例如入口(130a)和(128b)與入口(130b)和(128c)的相鄰流動，確定在相鄰的亞空間內的邊界(138)。
文檔編號G01N27/447GK101184991SQ200680018721
公開日2008年5月21日 申請日期2006年4月27日 優先權日2005年4月29日
發明者G·韋伯 申請人:貝克頓·迪金森公司