專利名稱：一種測定過氧化氫含量的方法
技術領域：
本發明涉及一種測定過氧化氫含量的分析方法，特別是一種四羧基鐵酞菁催化氧化羅丹明B熒光猝滅法測定過氧化氫含量的方法。
背景技術：
過氧化氫是一種常用的化學試劑，可作為消毒劑、殺菌劑、脫氧劑、漂白劑、聚合反應的引發劑等。近年來，過氧化氫在自然界也廣泛存在，且是酸雨形成的重要原因之一，因此測定過氧化氫對于環境監測和臨床分析具有很重要的意義。目前，測定過氧化氫的方法主要有滴定法、分光光度法、電化學法、化學發光法、色譜法、共振散射光譜法、熒光光度法、 原子吸收光譜法等。其中利用酶催化體系測定H2O2具有靈敏度高，檢出限低的優點，常需要
使用過氧化物酶-辣根過氧化物酶(HRP)。然而HRP不但價格較高,且易失活變性而不易
保存，為了保持它的活性，實驗條件和儲存環境都很苛刻。因此，為了克服HRP的這些不足， 人們開始研究用其模擬酶來替代HRP。目前已見報道的過氧化物模擬酶主要是金屬卟啉類化合物及氯化血紅素、血紅蛋白等。金屬酞菁類化合物的結構與卟啉極其相似，也具有過氧化物模擬酶的性質，且該類化合物具有良好的光、熱穩定性，易于合成，作為過氧化物模擬酶具有很大發展前景。四羧基鐵酞菁(FeC4Pc)可作為一種過氧化物模擬酶，但目前應用四羧基鐵酞菁催化氧化羅丹明B熒光猝滅法測定過氧化氫含量的方法尚未見報道。
發明內容
本發明的目的是提供一種四羧基鐵酞菁催化氧化羅丹明B熒光猝滅法測定過氧化氫含量的方法。具體步驟為(I)于 10 支 5. OmL 比色管中依次加入 0. 0、0. 02、0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、I. O、I. 3、
1.4、1.5mL 0. 5 2. 5X10_5mol/L的H2O2，再在每個比色管中分別加入0. I 0. 6mL 3. 5 6. 5X l(T6mol/L的羅丹明B溶液、0. 3 I. 5mL 0. 5 2. 0X 10_4mol/L的四羧基鐵酞菁，以不加H2O2為試劑空白；(2)將步驟⑴所得的10支比色管中的溶液均用超純水稀釋至5. OmL刻度，搖勻， 反應70 90min，然后在熒光光度計上用Icm石英比色皿，設置激發波長為554nm，發射波長為575nm，激發和發射狹縫均為5nm，電壓為600V，分別測定加有H2O2的溶液的熒光值F和不加H2O2的試劑空白的熒光值H)，計算差值AF = Ftl-F,過氧化氫濃度在6. 48XlO^mol/ L 4. 86X10_6mol/L范圍內與575nm波長的熒光降低值AF成線性關系，其回歸方程為AF =8. 646X 107c+14. 30，相關系數 0. 9992，檢出限 5. 44Xl(T8mol/L ；(3)另取雨水0. 5 2. OmL，用上述方法測定其熒光值，計算出雨水中過氧化氫的含量。本發明反應的原理四羧基鐵酞菁(FeC4Pc)作為過氧化物模擬酶，催化過氧化氫反應產生羥自由基，羥自由基使羅丹明B發生熒光猝滅反應。
本發明測定方法靈敏度高、選擇性好、簡便。
圖I為實施例空白與1.62X10_6mol/L過氧化氫的熒光光譜圖。
具體實施例方式實施例(I)于 10 支 5. OmL 比色管中依次加入 0. 0、0. 02、0. 05、0. 1、0. 2、0. 5、I. O、I. 3、
I.4、I. 5mLl. 624X10_5mol/L的H2O2，再在每個比色管中分別加入0. 4mL5 X l(T6mol/L的羅丹明B溶液、0. 9mL I. OX 10_4mol/L的四羧基鐵酞菁，以不加H202為試劑空白；(2)將步驟⑴所得的10支比色管中的溶液均用超純水稀釋至5. OmL刻度，搖勻， 反應80min,然后在突光光度計(Cary Eclipse型,美國Varian公司)上用Icm石英比色皿，設置激發波長為554nm，發射波長為575nm，激發和發射狹縫均為5nm，電壓為600V，分別測定加有H2O2的溶液的熒光值F和不加H2O2的試劑空白的熒光值Ftl,計算差值AF = F0-F, 其熒光差值AF與過氧化氫濃度c的線性回歸方程為AF = 8.646X 107c+14. 30，相關系數 0. 9992，檢出限 5. 44Xl(T8mol/L。(3)另用干凈容器收集兩份雨水(下了兩天后的雨水)，各取0.5mL的雨水，用上述方法測定雨水中過氧化氫的含量，同時做了加標回收實驗，結果見表I。表I :雨水中H2O2的測定結果(n = 5)
樣品測定值 (X 10'6mol/L)加標量 (X I(T6HIOlZL)測定總量 (X lO^mol/L)回收率 (%)雨水I未檢出1.621.69104.3雨水2未檢出1.621.5998.1權利要求
1.一種測定過氧化氫含量的方法，其特征在于具體步驟為(1)于10 支 5. OmL 比色管中依次加入 0·0、0·02、0·05、0· 1、0· 2、0· 5、I. O、I. 3、I. 4、 I. 5mL 0· 5 2. 5X10_5mol/L的H2O2，再在每個比色管中分別加入0· I 0. 6mL 3· 5 6. 5Χ l(T6mol/L的羅丹明B溶液、O. 3 I. 5mL O. 5 2. OX 10_4mol/L的四羧基鐵酞菁，以不加H2O2為試劑空白；(2)將步驟(I)所得的10支比色管中的溶液均用超純水稀釋至5.OmL刻度，搖勻，反應70 90min，然后在熒光光度計上用Icm石英比色皿，設置激發波長為554nm，發射波長為575nm，激發和發射狹縫均為5nm，電壓為600V，分別測定加有H2O2的溶液的熒光值F和不加H2O2的試劑空白的熒光值F。，計算差值AF = F0-F,過氧化氫濃度在6. 48 X 10_8mol/L 4.86父10_611101/1范圍內與57511111波長的熒光降低值ΛF成線性關系，其回歸方程為AF =·8.646 X 107c+14. 30，相關系數 O. 9992，檢出限 5. 44X l(T8mol/L ；(3)另取雨水O.5 2. OmL，用上述方法測定其熒光值，計算出雨水中過氧化氫的含量。
全文摘要
本發明公開了一種測定過氧化氫含量的分析方法。于10支5.0mL比色管中依次加入0.0、0.02、0.05、0.1、0.2、0.5、1.0、1.3、1.4、1.5mL 0.5～2.5×10-5mol/L的H2O2，再在每個比色管中分別加入0.1～0.6mL 3.5～6.5×10-6mol/L的羅丹明B溶液、0.3～1.5mL 0.5～2.0×10-4mol/L的四羧基鐵酞菁，以不加H2O2為試劑空白，10支比色管中的溶液均用超純水稀釋至5.0mL刻度，搖勻，反應70～90min，然后在熒光光度計上用1cm石英比色皿，設置激發波長為554nm，發射波長為575nm，激發和發射狹縫均為5nm，電壓為600V，分別測定加有H2O2的溶液的熒光值F和不加H2O2的試劑空白的熒光值F0，計算差值ΔF＝F0-F；另取雨水0.5～2.0mL，同法測定其熒光值。本發明測定方法靈敏度高、選擇性好、簡便。
文檔編號G01N21/64GK102590164SQ20121002469
公開日2012年7月18日 申請日期2012年2月3日 優先權日2012年2月3日
發明者凌悅菲, 唐寧莉, 李武生, 蒙興龍 申請人:桂林理工大學