雞肉中妥曲珠利、妥曲珠利砜殘留凍干粉標準樣品的制法
【專利摘要】本發明屬于獸藥殘留檢測的動物源基體標準樣品【技術領域】，公開了一種雞肉中妥曲珠利、妥曲珠利砜殘留凍干粉標準樣品的制備方法，該方法以妥曲珠利對雞進行養殖添加，經代謝后控制時間使雞體內含有妥曲珠利及代謝物妥曲珠利砜，將雞宰殺，取胸部肌肉去皮瀝血，加維生素C溶液勻漿制成肉糜，真空冷凍干燥，粉碎過篩，在厭氧工作站中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋將聚乙烯瓶進行真空封裝，制備得到凍干粉標準樣品。得到的樣品可以在常溫下運輸，保質期長，目標物和基體結合情形與真實檢測樣品一致，可用于相關檢測分析的質量控制，樣品均勻穩定、運輸方便、使用可靠、產品具有顯著的經濟價值和市場競爭力。
【專利說明】雞肉中妥曲珠利、妥曲珠利砜殘留凍干粉標準樣品的制法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于獸藥殘留檢測的動物源基體標準樣品【技術領域】，具體涉及一種雞肉中 妥曲珠利、妥曲珠利砜殘留凍干粉標準樣品的制備方法。
【背景技術】
[0002] 妥曲珠利，中文名稱：甲基三嗪酮，百球清，英文名稱：Toltrazuil，CAS編號： 69004-03-1，分子式 ：C18H14F3N304S，屬三嗪酮化合物，具有廣譜抗球蟲活性，廣泛用于雞球 蟲病。妥曲珠利砜，中文名稱：帕托珠利，帕那珠利，英文名稱：Toltrazuril sulfone， Ponazuril，CAS 號：69004-04-2,分子式：C18H14F3N30 6S。
[0003] 家禽內服妥曲珠利，約有50%以上藥物吸收，吸收后藥物主要匯集于肝臟、腎臟， 迅速被代謝成妥曲珠利砜和妥曲珠利亞砜。妥曲珠利在仔雞可食用組織中殘留時間很長， 停藥24天后在胸肌中仍能測出殘留藥物，因此，美國至20世紀末仍未批準該產品上市。
[0004] 在食品安全檢測體系中，文字標準和實物標準互為補充。基于近年來國際權威機 構對食品安全檢測標準樣品越來越重視，與真實樣品接近的實物標準樣品將是以后發展的 一個非常重要的方向。目前我國的文字標準相對完善，但實物標準特別是食品安全檢測實 物標樣還很匱乏。
[0005] 動物基體獸藥標準樣品對實驗室獸藥殘留檢測質量控制體系有著極其重要的作 用，是評價檢測標準方法精密度和準確度的實物標準，是保證實驗室檢測質量，評價檢測能 力的科學、權威證據。以雞肉為基體的妥曲珠利和妥曲珠利砜標準樣品的研制可以在該類 獸藥殘留檢測中對方法的重復性、重現性和準確度進行檢測確認，確保檢測結果的準確性。
【發明內容】
[0006] 本發明是向動物體內飼喂一種藥物，經動物體代謝，獲得含有兩種藥物殘留：原藥 及代謝物，即妥曲珠利及其代謝物妥曲珠利砜同時存在的實物標準樣品。
[0007] 本發明的目的是提供一種雞肉中妥曲珠利及其代謝物妥曲珠利砜殘留凍干粉標 準樣品的制備方法，通過添加妥曲珠利養殖肉雞，控制養殖時間，獲得樣品材料，并制備成 一種均勻性好、穩定性好、易保存且目標物和基體結合情形與真實檢測樣品一致的標準樣 品；該標準樣品可用于妥曲珠利、妥曲珠利砜等類藥物殘留檢測質量控制、檢測方法評價、 檢測能力評價。
[0008] 本發明雞肉中妥曲珠利及其代謝物妥曲珠利砜殘留凍干粉標準樣品的制備方 法： 1、 采用妥曲珠利對雞進行養殖添加，經代謝后控制時間使雞體內含有妥曲珠利及代謝 物妥曲珠利砜，且兩種藥物濃度保持在同一數量級； 2、 將雞宰殺，取胸部肌肉去皮浙血，加維生素 C溶液勻漿制成肉糜，真空冷凍干燥，粉 碎過篩，在厭氧工作站中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋將聚乙烯瓶進行真空封裝，制備得 到凍干粉標準樣品。
[0009] 本發明的顯著優點是：模擬養殖條件下對肉雞添加妥曲珠利后選擇適當時機，將 肉雞宰殺，取肌肉部分加維生素 C溶液勻漿制成肉糜，冷凍干燥，粉碎過篩，充氮氣封裝、均 勻性檢驗、穩定性研究和協同定值檢測，獲得預期含量的目標物結合狀態與實際檢測樣品 一致的含妥曲珠利及代謝物妥曲珠利砜的雞肉陽性材料，采用攪碎和勻化介質相結合的工 藝可以保證材料的均勻性，基質中加入維生素 C、冷凍干燥、充氮氣封裝，可以保證樣品中藥 物不降解、不被氧化。本發明的產品可以在常溫下運輸，保質期長，目標物和基體結合情形 與真實檢測樣品一致，可用于相關檢測分析的質量控制，樣品均勻穩定、運輸方便、使用可 靠、產品具有顯著的經濟價值和市場競爭力。
【具體實施方式】
[0010] 下面結合具體實施例對本發明作進一步詳細的說明。
[0011] 實施例1，一種雞肉中妥曲珠利及其代謝物妥曲珠利砜殘留凍干粉標準樣品的制 備方法，本實施例以控制目標含量水平20-100ug/kg為例，其具體步驟如下： (1)實驗動物的選擇：市購肉雞，要求個體大小均一、均重約2. 5 kg，先確認肉雞未被飼 喂過妥曲珠利，隨機取樣，檢測確認為陰性樣品后進行喂養。正常飼養5天后，剔除受傷不 健康的雞。
[0012] (2)藥物飼養：將妥曲珠利藥粉準確稱量0. 2mg，裝入膠囊中，每只雞每天喂1顆膠 囊，連喂2天，第2天停藥后10小時宰殺，取胸肌肉檢測，此時妥曲珠利及其代謝物妥曲珠 利砜在雞體內濃度相差不大，均為10-20 ug/kg之間。妥曲珠利砜在雞體內代謝很快，時間 掌握不準，兩種藥物的濃度上就會有很大差異，達不到預期理想的濃度。從標準樣品在實驗 室應用的角度來看，兩種藥物的水平最好是控制在同一數量級，才更具實用性，因此藥物的 添加量和時間的控制至關重要。
[0013] (3)攪碎勻漿：將雞肉混合攪勻，每5 kg攪碎雞肉中加 1 kg維生素 C溶液(濃度 為500mg/kg)混勻制成肉糜。維生素 C溶液具有抗氧化作用，有利于樣品的長期保存。
[0014] (4)冷凍干燥：將肉漿放入真空冷凍干燥機內冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速 凍成厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊 干燥。
[0015] (5)粉碎均質：將冷凍干燥后的肉糜用粉碎機粉碎、混勻。
[0016] (6)過篩：勻質后的雞粉過0.5 _孔篩，棄去篩余粗粉； (7)包裝：將厭氧工作站內滅菌、氮氣濃度調整到99%備用。先將包裝瓶放入無菌室 用紫外燈滅菌，在無菌室內將干粉準確稱量到瓶中，每個瓶內雞肉粉重量5±0.5g，扣上蓋 子不擰，將所有裝好干粉樣品的包裝瓶分批移入厭氧工作站中，重新將厭氧工作站氮氣濃 度調整至99%，在厭氧工作站內擰緊包裝瓶的蓋子，完成充氮包裝取出。再用鋁箔袋將包裝 瓶進行真空封裝。得到含有妥曲珠利及其代謝物妥曲珠利砜的雞肉基質凍干粉標準樣品。
[0017] 所制備的標準樣品經均勻性檢驗、穩定性檢驗、協同定值實驗及不確定度合成后， 獲得最終成品。
[0018] 本產品最終定值妥曲珠利：64. 52±0. 89ug/kg，其代謝物妥曲珠利砜： 84. 65±0. 99ug/kg，，最終包裝數為779瓶，每瓶約5±0. 5g，室溫保存。
[0019] 以下是本發明的具體實施實驗和效果數據，以進一步說明本發明，但是本發明不 僅限于此。
[0020] 1、均勻性檢驗 采用單因素方差分析進行均勻性檢驗，隨機抽取15個樣品，每個樣品平行測定3次， 所有的樣品以隨機次序在重復性條件下測試，按照上述檢測方法對樣品進行均勻性檢測。 標準樣品的特性應當均勻，即在規定的細分范圍內保證其特性不變。在均勻性檢驗過程中， 一般需同時考察組間均勻性及組內均勻性，用方差分析法通過對兩者的比較來判斷各組測 量值之間有無系統性差異，如果兩者的比小于統計檢驗的臨界值，則認為樣品是均勻的。
[0021] 稱取lg樣品，加4. 0ml水還原60min以上，按SN/T 2318-2009《動物源食品中地 克珠利、妥曲珠利、妥曲珠利亞砜和妥曲珠利砜殘留量的檢測高效液相色譜-質譜質譜 法》方法進行檢測，結果如下： (1)妥曲珠利均勻性檢驗數據（ug/kg)
【權利要求】
1. 雞肉中妥曲珠利、妥曲珠利砜殘留凍干粉標準樣品的制法，其特征在于包括以下步 驟： (1) 采用妥曲珠利對雞進行養殖添加，經代謝后控制時間使雞體內含有妥曲珠利及代 謝物妥曲珠利砜，且兩種藥物濃度保持在同一數量級； (2) 將雞宰殺，取胸部肌肉去皮浙血，加維生素 C溶液勻漿制成肉糜，真空冷凍干燥； (3) 粉碎過篩，在厭氧工作站中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋將聚乙烯瓶進行真空封 裝，制備得到凍干粉標準樣品。
2. 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于所述凍干粉標準樣品中妥曲珠利和妥 曲珠利砜濃度為20-100ug/kg。
3. 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟（2)所述冷凍干燥條件：-70°C速 凍成厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊 干燥；所述維生素 C濃度為500mg/kg。
4. 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于步驟（3)所述在厭氧工作站中充氮氣 包裝為：將厭氧工作站內滅菌、氮氣濃度調整到99%備用，先將包裝瓶放入無菌室用紫外燈 滅菌，在無菌室內將干粉準確稱量到瓶中，扣上蓋子不擰，將所有裝好干粉樣品的包裝瓶分 批移入厭氧工作站中，重新將厭氧工作站氮氣濃度調整至99%，在厭氧工作站內擰緊包裝瓶 的蓋子，完成充氮包裝取出，再用鋁箔袋將包裝瓶進行真空封裝。
5. 根據權利要求1所述的制備方法，其特征在于控制目標含量水平20-lOOug/kg的樣 品的制備： (1) 實驗動物的選擇：市購肉雞，要求個體大小均一，先確認肉雞未被飼喂過妥曲珠利， 隨機取樣，檢測確認為陰性樣品后進行喂養，正常飼養5天后，剔除受傷不健康的雞； (2) 藥物飼養：將妥曲珠利藥粉準確稱量0. 2mg，裝入膠囊中，每只雞每天喂1顆膠囊， 連喂2天，第2天停藥后10小時宰殺； (3) 攪碎勻楽：將雞肉混合攪勻，每5 kg攪碎雞肉中加1 kg維生素 C溶液，維生素 C濃 度為500mg/kg,混勻制成肉楽； (4) 冷凍干燥：將肉漿放入真空冷凍干燥機內冷凍干燥，冷凍干燥條件：-70°C速凍成 厚度不超過2cm的凍塊，置于真空干燥倉中，快速升溫至60°C，保持48小時，直至凍塊干 燥； (5) 粉碎均質：將冷凍干燥后的肉漿用中藥粉碎機粉碎、混勻； (6) 過篩：勻質后的雞粉過0. 5 mm孔篩，棄去篩余粗粉； (7) 包裝：快速用聚乙烯瓶分裝，在厭氧工作站中充氮氣包裝，封口后再用鋁箔袋將聚 乙烯瓶進行真空封裝。
【文檔編號】G01N33/00GK104155163SQ201410418914
【公開日】2014年11月19日 申請日期:2014年8月22日 優先權日:2014年8月22日
【發明者】楊麗君, 王靜, 劉玉敏, 胡巧茹, 李兆杰, 王美玲 申請人:威海出入境檢驗檢疫局檢驗檢疫技術中心