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血葉蘭種子的組織培養與快速育苗方法_2

文檔序號:8948335閱讀:來源:國知局
0.3倍,且不出現玻璃化及愈傷組織化。原始球莖分化形成成小芽的分化率高達93%及以上,且小苗健壯。壯苗培養后,即獲得完整的健壯植株。可在短時間內培育出大量適合種植的血葉蘭幼苗,顯著提高了血葉蘭種苗的增殖系數和種苗質量,實現快速、便捷、高效的規模化育苗,能夠滿足血葉蘭種苗的產業化規模化生產需求。
[0027]③該方法使用的設備簡單,只需要簡單的植物組織培養設備即可實現。
【具體實施方式】
[0028]下面對本申請的技術方案進行詳細說明。
[0029]實施例1
[0030]一種血葉蘭種子的組織培養與快速育苗方法的步驟如下:
[0031]I)選擇培養材料:于血葉蘭開花期,選擇生長健壯的優良株系進行同株或異株授粉,授粉33天后,摘取果實外表顏色為白色或淡黃色且未開裂的果實作為培養材料用于組織培養;
[0032]2)原始球莖的誘導培養:包含以下步驟
[0033]①消毒處理:將步驟I中選取的果實先用質量百分比濃度為80%的酒精浸泡35s后,用無菌水沖洗干凈I遍,接著進行二次消毒;所述二次消毒是將果實先倒入質量百分比濃度為0.01%的吐溫20溶液中,搖晃1s后,夾出果實,置于質量百分比濃度為10%次氯酸鈉溶液中消毒8min ;
[0034]②萌發培養處理:將步驟①消毒處理過的果實用無菌水沖洗干凈后用無菌解剖工具剖開果實,取出白色漿狀或粉狀種胚接種到胚萌發培養基上,將接種后的培養瓶置于溫度20-28 °C的培養室內進行無光照培養25天,誘導種胚萌發成原始球莖,再轉入溫度20-25°C、光照強度為ISOOIx的條件下培養20天以強壯原始球莖,同時誘導種胚繼續萌發原始球莖;
[0035]所述的胚萌發培養基由以下組分配置而成:MS基本培養基+ 土豆泥50g/L+椰子水30ml/L+脯氨酸8mg/L+鹿糖20g/L+瓊脂或卡拉膠5.8g/L,pH值為5.4 ;
[0036]3)原始球莖的增殖培養:將上述步驟2中獲得萌發的原始球莖轉入原始球莖增殖培養基中進行增殖培養,在培養溫度22±2°C,光照強度18001x,光照時間1h/天的條件下,培養50天以誘導原始球莖的增殖;
[0037]所述的增殖培養基由以下組分配置而成:MS基本培養基+6-BA或6_糠氨基嘌呤ΚΤ0.8mg/L+NAA0.3mg/L+ 椰子水 50ml/L+ 白糖 30g/L+ 瓊脂或卡拉膠 4.5g/L,pH 值為 5.4 ;
[0038]4)分化與壯苗培養:將上述步驟3中獲得的原始球莖轉入分化與壯苗培養基中,培養溫度20-28°C,光照強度25001x,光照時間Sh/天,培養80天,使得原始球莖分化形成健壯的具根、莖、葉的完整血葉蘭植株;
[0039]所述的分化與壯苗培養基由以下組分配置而成:1/2MS基本培養基+NAA0.3mg/L+香蕉泥80g/L+白糖25g/L+活性炭1.8g/L+瓊脂或卡拉膠6.0g/L, pH值為5.6。
[0040]在上述所有的步驟中,椰子水為從新鮮椰子中取出的椰子水經三層紗布過濾加入培養基中。所述的香蕉泥是由香蕉去皮后用豆漿機打碎而成的。
[0041]實施例2
[0042]—種血葉蘭種子的組織培養與快速育苗方法的步驟如下:
[0043]I)選擇培養材料:將野外采集到的野生血葉蘭植株上的果實外表顏色為白色或近黃色且未破裂的蒴果作為培養材料用于組織培養;、
[0044]2)原始球莖的誘導培養:包含以下步驟
[0045]①消毒處理:將步驟I中選取的果實先用質量百分比濃度為90%的酒精浸泡50s后,用無菌水沖洗干凈I遍,接著進行二次消毒;所述二次消毒是將果實置于吐溫20和次氯酸鈉的混合溶液中消毒8-12min并用無菌水沖洗干凈,所述吐溫20和次氯酸鈉的混合溶液中,吐溫20的質量百分比濃度為0.01-0.02%,次氯酸鈉的質量百分比濃度為10-15% ;
[0046]②萌發培養處理:將步驟①消毒處理過的果實用無菌水沖洗干凈后用無菌解剖工具剖開果實,取出白色漿狀或粉狀種胚接種到胚萌發培養基上,將接種后的培養瓶置于溫度20-28 °C的培養室內進行無光照培養30天,誘導種胚萌發成原始球莖,再轉入溫度20-25°C、光照強度為ISOOIx的條件下培養25天以強壯原始球莖,同時誘導種胚繼續萌發原始球莖;
[0047]所述的胚萌發培養基由以下組分配置而成:MS基本培養基+ 土豆泥20_50g/L+椰子水30-80ml/L+脯氨酸5-lOmg/L+蔗糖20_30g/L+瓊脂或卡拉膠5.0-8.0g/L, pH值為
5.0-5.4 ;
[0048]3)原始球莖的增殖培養:將上述步驟2中獲得萌發的原始球莖轉入原始球莖增殖培養基中進行增殖培養,在培養溫度22±2°C,光照強度20001x,光照時間Sh/天的條件下,培養60天以誘導原始球莖的增殖;
[0049]所述的增殖培養基由以下組分配置而成:MS基本培養基+6-BA或6_糠氨基嘌呤KTl.5mg/L+NAA0.5mg/L+ 椰子水 40ml/L+ 白糖 30g/L+ 瓊脂或卡拉膠 5.2g/L,pH 值為 5.2 ;
[0050]4)分化與壯苗培養:將上述步驟3中獲得的原始球莖轉入分化與壯苗培養基中,培養溫度20-28°C,光照強度25001x,光照時間1h/天,培養85天,使得原始球莖分化形成健壯的具根、莖、葉的完整血葉蘭植株;
[0051]所述的分化與壯苗培養基由以下組分配置而成:1/2MS基本培養基+NAA0.5mg/L+香蕉泥60g/L+白糖40g/L+活性炭1.5g/L+瓊脂或卡拉膠7.5g/L,pH值為5.6。
[0052]在上述所有的步驟中,椰子水為從新鮮椰子中取出的椰子水經三層紗布過濾加入培養基中。所述的香蕉泥是由香蕉去皮后用豆漿機打碎而成的。
[0053]實施例3
[0054]I)選擇培養材料:于血葉蘭開花期,選擇生長健壯的優良株系進行同株或異株授粉,授粉25天后,摘取果實外表顏色為白色或淡黃色且未開裂的果實作為培養材料用于組織培養;
[0055]2)原始球莖的誘導培養:包含以下步驟
[0056]①消毒處理:將步驟I中選取的果實先用質量百分比濃度為95%的酒精浸泡30s后,用無菌水沖洗干凈2遍,接著進行二次消毒;所述二次消毒是將向果實倒入質量百分比濃度為0.02%的吐溫20溶液,搖晃20s后,用鑷子夾出果實,置于質量百分比濃度為12%次氯酸鈉溶液中消毒9min ;
[0057]②萌發培養處理:將步驟①消毒處理過的果實用無菌水沖洗干凈后用無菌解剖工具剖開果實,取出白色漿狀或粉狀種胚接種到胚萌發培養基上,將接種后的培養瓶置于溫度20-28 °C的培養室內進行無光照培養20天,誘導種胚萌發成原始球莖,再轉入溫度20-25°C、光照強度為16001x的條件下培養15天以強壯原始球莖,同時誘導種胚繼續萌發原始球莖;
[0058]所述的胚萌發培養基由以下組分配置而成:MS基本培養基+ 土豆泥20g/L+椰子水80ml/L+脯氨酸5mg/L+鹿糖30g/L+瓊脂或卡拉膠5.0g/L, pH值為5.0 ;
[0059]3)原始球莖的增殖培養:將上述步驟2中獲得萌發的原始球莖轉入原始球莖增殖培養基中進行增殖培養,在培養溫度25°C,光照強度15001x,光照時間12h/天的條件下,培養30天以誘導原始球莖的增殖;
[0060]所述的增殖培養基由以下組分配置而成:MS基本培養基+6-BA或6_糠氨基嘌呤ΚΤ0.5mg/L+NAA0.2mg/L+ 椰子水 60ml/L+ 白糖 25g/L+ 瓊脂或卡拉膠 5.5g/L,pH 值為 5.0 ;
[0061]4)分化與壯苗培養:將上述步驟3中獲得的原始球莖轉入分化與壯苗培養基中,培養溫度20-28°C,光照強度22001x,光照時間12h/天,培養60天,使得原始球莖分化形成健壯的具根、莖、葉的完整血葉蘭植株;
[0062]所述的分化與壯苗培養基由以下組分配置而成:1/2MS基本培養基+NAA0.2mg/L+香蕉泥50g/L+白糖20g/L+活性炭3.0g/L+瓊脂或卡拉膠5.0g/L, pH值為5.3。
[0063]在上述所有的步驟中,椰子水為從新鮮椰子中取出的椰子水經三層紗布過濾加入培養基中。所述的香蕉泥是由香蕉去皮后用豆漿機打碎而成的。
[0064]實施例4
[0065]I)選擇培養材料:于血葉蘭開花期,選擇生長健壯的優良株系進行同株或異株授粉,授粉40天后,摘取果實外表顏色為白色或淡黃色且未開裂的果實作為培養材料用于組織培養;
[0066]2)原始球莖的誘導培養:
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