包含以下步驟
[0067]①消毒處理:將步驟I中選取的果實先用質量百分比濃度為85%的酒精浸泡50s后，用無菌水沖洗干凈I遍，接著進行二次消毒；所述二次消毒是將果實先倒入質量百分比濃度為0.02%的吐溫20溶液，搖晃15s后，用鑷子夾出果實，置于質量百分比濃度為15%次氯酸鈉溶液中消毒12min ;
[0068]②萌發培養處理:將步驟①消毒處理過的果實用無菌水沖洗干凈后用無菌解剖工具剖開果實，取出白色漿狀或粉狀種胚接種到胚萌發培養基上，將接種后的培養瓶置于溫度20-28 °C的培養室內進行無光照培養20天，誘導種胚萌發成原始球莖，再轉入溫度20-25°C、光照強度為22001x的條件下培養30天以強壯原始球莖，同時誘導種胚繼續萌發原始球莖；
[0069]所述的胚萌發培養基由以下組分配置而成:MS基本培養基+ 土豆泥20g/L+椰子水80ml/L+脯氨酸5mg/L+鹿糖30g/L+瓊脂或卡拉膠5.0g/L, pH值為5.0 ；
[0070]3)原始球莖的增殖培養:將上述步驟2中獲得萌發的原始球莖轉入原始球莖增殖培養基中進行增殖培養，在培養溫度25°C，光照強度15001x，光照時間12h/天的條件下，培養30天以誘導原始球莖的增殖；所述的增殖培養基由以下組分配置而成:MS基本培養基+6-BA或6-糠氨基嘌呤KT2.0mg/L+NAA0.2mg/L+椰子水30ml/L+白糖20g/L+瓊脂或卡拉膠 5.5g/L，pH 值為 5.0 ;
[0071]4)分化與壯苗培養:將上述步驟3中獲得的原始球莖轉入分化與壯苗培養基中，培養溫度20-28°C，光照強度20001x，光照時間12h/天，培養90天，使得原始球莖分化形成健壯的具根、莖、葉的完整血葉蘭植株；
[0072]所述的分化與壯苗培養基由以下組分配置而成:1/2MS基本培養基+NAA0.2mg/L+香蕉泥50g/L+白糖20g/L+活性炭0.5g/L+瓊脂或卡拉膠8.0g/L, pH值為5.2。
[0073]在上述所有的步驟中，椰子水為從新鮮椰子中取出的椰子水經三層紗布過濾加入培養基中。所述的香蕉泥是由香蕉去皮后用豆漿機打碎而成的。
[0074]綜上所述，采用本申請的血葉蘭種子組織培養快速育苗方法，可以使血葉蘭現種苗的快速繁殖，能夠有效用于挽救和保護血葉蘭資源。用實施例1-實施例4所述的培養方法得到的84%以上血葉蘭種子萌發，血葉蘭原始球莖的增殖系數達到10.3倍，且不出現玻璃化及愈傷組織化。原始球莖分化形成成小芽的分化率高達93%及以上，且小苗健壯。
[0075]本申請所述的血葉蘭快速育苗方法并不只僅僅局限于上述實施例，凡是依據本申請原理的任何改進或替換，均應在本申請的保護范圍之內。
【主權項】
1.一種血葉蘭種子的組織培養與快速育苗方法，其特征在于:其步驟包括， 1)選擇培養材料:于血葉蘭開花期，選擇生長健壯的優良株系進行同株或異株授粉，授粉25-40天后，摘取果實外表顏色為白色或淡黃色且未開裂的果實作為培養材料用于組織培養；或者用野外采集到的野生血葉蘭植株上的果實外表顏色為白色或近黃色且未破裂的蒴果用于組織培養； 2)原始球莖的誘導培養:包含以下步驟 ①消毒處理:將步驟I中選取的果實先用質量百分比濃度為80-95%的酒精浸泡30-50s后，用無菌水沖洗干凈，接著進行二次消毒；所述二次消毒是將果實先倒入質量百分比濃度為0.01-0.02 %的吐溫20溶液中，搖晃10-20S后，夾出果實，置于質量百分比濃度為10-15%次氯酸鈉溶液中消毒8-12min，或者將果實置于吐溫20和次氯酸鈉的混合溶液中消毒8-12min并用無菌水沖洗干凈，所述吐溫20和次氯酸鈉的混合溶液中，吐溫20的質量百分比濃度為0.01-0.02%，次氯酸鈉的質量百分比濃度為10-15% ; ②萌發培養處理:將步驟①消毒處理過的果實用無菌水沖洗干凈后用無菌解剖工具剖開果實，取出白色漿狀或粉狀種胚接種到胚萌發培養基上，將接種后的培養瓶置于溫度20-28°C的培養室內進行無光照培養20-30天，誘導種胚萌發成原始球莖，再轉入溫度20-25°C、光照強度為1600-22001x的條件下培養15-30天以強壯原始球莖，同時誘導種胚繼續萌發原始球莖； 所述的胚萌發培養基由以下組分配置而成:MS基本培養基+ 土豆泥20-50g/L+椰子水30-80ml/L+脯氨酸5-lOmg/L+蔗糖20_30g/L+瓊脂或卡拉膠5.0-8.0g/L，pH值為5.0-5.4 ； 3)原始球莖的增殖培養:將上述步驟2中獲得萌發的原始球莖轉入原始球莖增殖培養基中進行增殖培養，在培養溫度20-25°C，光照強度1500-20001x，光照時間8_12h/天的條件下，培養30-60天以誘導原始球莖的增殖； 所述的增殖培養基由以下組分配置而成:MS基本培養基+6-BA或6-糠氨基嘌呤KT 0.5-2.0mg/L+NAA 0.2-0.5mg/L+ 椰子水 30_60ml/L+ 白糖 20_30g/L+ 瓊脂或卡拉膠4.5-5.5g/L，pH 值為 5.0-5.4 ； 4)分化與壯苗培養:將上述步驟3中獲得的原始球莖轉入分化與壯苗培養基中，培養溫度20-28°C，光照強度2000-25001x，光照時間8_12h/天，培養60-90天，使得原始球莖分化形成健壯的具根、莖、葉的完整血葉蘭植株； 所述的分化與壯苗培養基由以下組分配置而成:1/2MS基本培養基+NAA 0.2-0.5mg/L+香蕉泥50-80g/L+白糖20-40g/L+活性炭0.5-3.0g/L+瓊脂或卡拉膠5.0-8.0g/L, pH值為 5.2-5.6o2.根據權利要求1所述的血葉蘭種子的組織培養與快速育苗方法，其特征在于:步驟2的第①步消毒處理是將步驟I中選取的果實先用質量百分比濃度為80%的酒精浸泡35s后，用無菌水沖洗干凈，接著進行二次消毒；所述二次消毒是將果實先倒入質量百分比濃度為0.01%的吐溫20溶液中，搖晃15s后，夾出果實，置于質量百分比濃度為10%次氯酸鈉溶液中消毒lOmin，或者將果實置于吐溫20和次氯酸鈉混合溶液中消毒lOmin，所述吐溫20和次氯酸鈉混合溶液中，吐溫20的質量百分比濃度為0.01%，次氯酸鈉的質量百分比濃度為 10% O3.根據權利要求1所述的血葉蘭種子的組織培養與快速育苗方法，其特征在于:步驟2中的原始球莖萌發培養基由以下組分配置而成:MS基本培養基+ 土豆泥50g/L+椰子水30ml/L+脯氨酸8mg/L+蔗糖20g/L+瓊脂或卡拉膠5.8g/L，pH值為5.4。4.根據權利要求1所述的血葉蘭種子的組織培養與快速育苗方法，其特征在于:步驟2中接種后置于無光照條件下以誘導種胚萌發成原始球莖的培養天數為25天，強壯原始球莖使用的光照強度為18001x，培養天數為20天。5.根據權利要求1所述的血葉蘭種子的組織培養與快速育苗方法，其特征在于:步驟3中增殖培養以誘導原始球莖增殖的培養溫度為22±2°C，光照強度為18001x，光照時間為1h/天，培養天數為50天。6.根據權利要求1所述的血葉蘭種子的組織培養與快速育苗方法，其特征在于:步驟3中所述的增殖培養基由以下組分配置而成:MS基本培養基+6-BA或6-糠氨基嘌呤ΚΤ0.8mg/L+NAA0.3mg/L+ 椰子水 50ml/L+ 白糖 30g/L+ 瓊脂或卡拉膠 4.5g/L，pH 值為 5.4。7.根據權利要求1所述的血葉蘭種子的組織培養與快速育苗方法，其特征在于:步驟4中原始球莖轉入分化與壯苗培養基中誘導原始球莖分化形成健壯的完整植株，培養溫度為20-28°C，光照強度為25001x，光照時間為8h/天，培養天數為80天。8.根據權利要求1所述的血葉蘭種子的組織培養與快速育苗方法，其特征在于:步驟4中所述的分化與壯苗培養基由以下組分配置而成:1/2MS基本培養基+NAA0.3mg/L+香蕉泥80g/L+白糖25g/L+瓊脂或卡拉膠6.0g/L, pH值為5.6。
【專利摘要】本申請涉及一種血葉蘭種子組織培養快速育苗方法，步驟包括：1.選擇培養材料；2.原始球莖的誘導培養；3.原始球莖的增殖培養；4.分化與壯苗培養。該發明其解決了血葉蘭在自然狀態下難萌發以及果實發育周期短導致種子成熟度不一致、種子壽命短和大量敗育的問題，開發一種可快速繁殖血葉蘭種苗的方法。該方法取材方便且成功率高，可用于挽救種子發育不一致的血葉蘭果實，生產大量的血葉蘭種苗，更好地保護血葉蘭資源。
【IPC分類】A01H4/00
【公開號】CN105165617
【申請號】
【發明人】陳菁瑛, 劉保財
【申請人】福建省農業科學院農業生物資源研究所
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年10月9日