和組培效果。
【具體實施方式】
[0019] 現結合如下實例對本發明作進一步的解釋說明。
[0020] 實施例1:一種花櫚木組培消毒滅菌配方，包括70%酒精、0. 1%升汞、70%酒精和向 增值培養基中添加〇. 5ml/L植物組織培養抗菌劑。
[0021] 實施例2:-種花櫚木組培消毒滅菌配方，包括70%酒精，50mg/L利福平和50mg/L氯霉素混合液以及0. 1%的升汞。
[0022] 實施例3 : -種花櫚木組培消毒滅菌配方，包括70%酒精，50mg/L利福平和50mg/L 氯霉素混合液以及0. 1%升汞。
[0023] 實施例4:一種花櫚木組培方法，該方法包括以下步驟： (1) 外植體的采集：采用苗齡10天的花櫚木籽苗莖段外植體； (2) 清洗：采用洗滌劑浸泡15分鐘，用流水沖洗30分鐘； (3) 消毒：將步驟（2)中洗凈的外植體拿入無菌工作臺內，采用實施例1 一種花櫚木組 培消毒滅菌配方進行消毒，依次采用70%酒精、0. 1%升汞和70%酒精浸泡，其浸泡時間分別 為0. 5分鐘、8分鐘和0. 5分鐘，每次消毒處理后均用無菌水沖洗4-5次； (4) 接種：將步驟（3)中清洗后的外植體接種在誘導培養基上，所述誘導培養基包括MS 培養基及附加成分，并向誘導培養基中添加〇. 5ml/L植物組織培養抗菌劑（PPM); (5) 培養：將步驟（4)中放置在誘導培養基中的外植體放入到培養箱中進行培養，采用 培養條件為：溫度23-27°C，光強2500-30001x，白天光照12小時。
[0024] 實施例5:-種花櫚木組培方法，該方法包括以下步驟： (1) 外植體的采集：采用當年生花櫚木播種幼苗的帶頂芽莖段、帶側芽莖段或葉片外植 體，采集時間為4月份； (2) 清洗：采用洗滌劑浸泡30分鐘，用流水沖洗1小時； (3) 消毒：將步驟（2)中洗凈的外植體拿入無菌工作臺內，采用實施例2 -種花櫚木組 培消毒滅菌配方，依次采用70%酒精、50mg/L利福平和50mg/L氯霉素混合液以及0. 1%的升 汞浸泡，針對葉片其浸泡時間分別為0. 5分鐘、30分鐘和6分鐘，針對莖段其浸泡時間分別 為0. 5分鐘、30分鐘和8分鐘，每次消毒處理后均用無菌水沖洗外植體4-5次； (4) 接種：將步驟（3)中清洗后的外植體接種在誘導培養基上，所述誘導培養基包括MS 培養基及附加成分； (5) 培養：將步驟（4)中放置在誘導培養基中的外植體放入到培養箱中進行培養，采用 培養條件為：溫度23-27°C，光強2500-30001x，白天光照12小時。
[0025] 實施例6 :-種花櫚木組培方法，該方法包括以下步驟： (1) 外植體的采集：采用多年生花櫚木成年植株當年生葉片，采集時間為4月份； (2) 清洗：采用洗滌劑浸泡1小時，用流水沖洗2小時； (3) 消毒：將步驟（2)中洗凈的外植體拿入無菌工作臺內，采用采用實施例3 -種花櫚 木組培消毒滅菌配方進行消毒，依次采用70%酒精、50mg/L利福平和50mg/L氯霉素混合液 以及0. 1%升萊的浸泡，其浸泡時間分別為0. 5分鐘、30分鐘和12分鐘，每次消毒處理后均 用無菌水沖洗外植體4-5次； (4) 接種：將步驟（3)中清洗后的外植體接種在誘導培養基上，所述誘導培養基包括MS 培養基及附加成分； (5) 培養：將步驟（4)中放置在誘導培養基中的外植體放入到培養箱中進行培養，采用 培養條件為：溫度23-27°C，光強2500-30001x，白天光照12小時。
[0026]作為優選的，上述實施例4-6中MS培養基成分如下： 硝酸鉀KN03 1 900mg/L 硝酸銨NH4N03 1 6 50mg/L 七水硫酸鎂MgS04. 7H20 370mg/L 磷酸二氫鉀KH2P04 1 70mg/L 二水氯化鈣CaC12. 2H20 440mg/L 四水硫酸錳MnS04. 4H20 22. 3mg/L 七水硫酸鋅ZnS04. 7H20 8. 60mg/L 硼酸H3B03 6 . 20mg/L 碘化鉀KI 0. 83mg/L 二水鉬酸鈉NaMo04. 2H20 0. 25mg/L 五水硫酸銅CuS04. 5H20 0. 025mg/L 六水氯化鈷CoC12. 6H20 0. 025mg/L 乙二胺四乙酸二鈉Na2-EDTA 37. 30mg/L 四水硫酸亞鐵FeS04. 4H20 27. 80mg/L 甘氨酸 2.OOmg/L 鹽酸硫胺素 0?lOmg/L 鹽酸吡哆醇 0? 50mg/L 煙酸 0? 50mg/L 肌醇 lOOmg/L; 附加成分為 6-BA(6-節胺基噪呤，6-Benzylaminopurine)2.0mg/L，NAA(萘乙酸，I-Naphthylacetic) 1. 0mg/L，瓊脂 8g/L，鹿糖 30g/L。
[0027]下列對比試驗進一步說明本發明實施及其有益效果。
[0028] 1材料與方法 1. 1實驗材料 分別進行了籽苗莖段、幼苗莖段、成年植株莖段和嫩葉的消毒實驗。籽苗外植體取自溫 室內萌發l〇d的籽苗，剪取3cm長莖段做外植體；幼苗外植體取自苗圃當年生播種苗，分別 于4、8、12月份剪取帶頂芽長約6cm的莖段做外植體；成年植株外植體取自苗圃7年生及農 場20年生花櫚木帶頂芽枝條，分別于4、8、12月剪取當年生長約20cm半木質化枝條進行試 驗。將各種莖段剪成1.5cm長帶頂芽或帶側芽莖段，將幼苗和成年植株莖段上的當年生葉 片切成lcmXlcm大小用作外植體。
[0029] 1. 2消毒方法 將采集的籽苗外植體、幼苗外植體、成年植株外植體分別用洗滌劑浸泡15min、30min、 將采集的籽苗外植體、幼苗外植體、成年植株外植體分別用洗滌劑浸泡15min、30min、lh，并 用牙刷輕輕刷洗，成年植株外植體需去除表面絨毛，材料在流水下分別沖洗30min、lh、2h。 之后在超凈工作臺內進行藥劑表面消毒。所有材料先用70%酒精浸泡30s，用無菌水沖洗 2-3次后分別采用表1的措施進行進一步消毒處理。每次處理后均用無菌水沖洗4-5次。
[0030] 1. 3接種方法 將外植體處理后于超凈工作臺上采用增值培養基接種，增值培養基配方為MS+6-BA2.Omg/L+NAAl. 0mg/L+ 瓊脂 8g/L+ 鹿糖 30g/L，pH5. 8-6. 0,每種材料每個處理接種 15瓶，每瓶一個外植體。接種后置于培養溫度（25±2) °C、光照強度30001x下培養，光照 時間12h/天。
[0031] 1.4結果統計方法 接種后每天觀察材料污染情況，并記錄，結果計算公式如下 污染率=(污染數/接種數）X100% 存活率=(存活數/接種數）X100% 誘導率=(成功誘導數/存活數）X100% 滅菌有效值=(1-未污染率）X成活率X誘導率（小數相乘）*100%。
[0032] 2?結果與分析 2. 1籽苗莖段消毒效果分析 由表2可知，用0. 1%升汞浸泡后，再用70%酒精浸泡30s的二次消毒處理（3號、4號） 可以降低籽苗莖段的污染率，同樣處理下用〇. 1%升汞處理8min優于6min。而相同處理條 件下，在培養基中添加PPM的4號處理外植體污染率顯著降低，成活率顯著提高，比3號處 理提高了 26. 66%。因此，對籽苗莖段而言，用70%酒精浸泡30s+0. 1%升汞浸泡8min+70% 酒精浸泡30S+PPM消毒效果最好。不論哪一種消毒處理，保存下來的外植體誘導率均達到 100%〇
[0033] 2. 2幼苗外植體消毒效果分析 2. 2. 1葉片 對幼苗葉片外植體而言，相同消毒處理條件下，4月份采集的幼苗葉片污染率和存活率 相對較低(表3)，但誘導率較高，在50%-100%之間。8月份和12月份采集的葉片盡管存活 率高，但誘導率均為0。用（l〇〇mg/L苯菌靈+100mg/L鏈霉素）混合液浸泡30min(11-13 號處理）和（50mg/L利福平+50mg/L氯霉素）混合液浸泡30min(14-16號處理）均能有效 降低4月份葉片的污染，其未污染率均為100%，高于9號、10號處理，但其存活率會降低。 11-16號處理中，抗菌素用量產生的效果差異不明顯，外植體存活率、誘導率均隨升汞處理 時間增加而降低，以14號處理效果最好，存活率、誘導率分別為33. 33%、60%，滅菌有效值達 到19. 99%。因此，在4月份采集幼苗葉片做外植體，用70%酒精浸泡30s+ (50mg/L利福平 +50mg/L氯霉素）混合液浸泡30min+0. 1%升萊浸泡6min消毒效果最好。
[0034] 2. 2. 2 莖段 試驗表明（表4)，總體上莖段的污染率為：4月份> 8月份> 12月份，但大多數消毒處 理的污染率差異不明顯，9-16號處理的污染率平均值比較接近。與葉片消毒相比，9-16號 處理的消毒方法均可對莖段產生較好效果，可見幼苗莖段外植體對取材月份要求沒有葉片 嚴格。外植體存活率則表現為：12月份>8月份>4月份。這可能與4月份幼苗莖段較幼 嫩有關；誘導率則以4月份最高，平均誘導率70. 86%，12月份次之，平均誘導率58. 67%，最 低的是8月份的莖段，平均誘導率55. 71%。外植體存活率、誘導率均隨升汞處理時間增加 而降低。從材料有效值看，9號、10號、15號處理對不同月份的材料都比較好。需要注意的 是，雖然8月份及12月份的外植體材料有效值高于4月份，但外植體誘導產生的愈傷組織 較少且容易褐化。建議4月份采集的莖段用10號消毒處理，即70%酒精浸泡30s+0. 1%升 汞浸泡6min+培養基中添加PPM;8月份、12月份采集的莖段用15