] 此處以共包埋長春新堿和熒光材料FITC的辛酰半乳糖酯修飾的微乳為例。取對 數生長期細胞，用胰蛋白酶消化使其脫壁，用10%FBS的RPMI1640培養液重懸成單細胞懸 液，并進行細胞計數，用10 %FBS的RPMI1640培養液稀釋至細胞1X105個/mL，吹打均勻， 接種于24孔細胞培養板，每孔培養液400yL，在37°C、5%C02培養箱中孵育24h。移去孔內 原培養液，將上述500yM游離FITC(FreeFITC)、FITC-長春新堿薏苡仁組分微乳物理混合 物（FITC-mixture)、FITC-長春新堿薏苡仁組分微乳（FITC/VCR-C-MEs)以及FITC-長春新 堿半乳糖酯修飾的薏苡仁組分微乳（FITC/VCR-Gal-C-MEs)用不完全培養基稀釋至5yM， 每孔400yL給藥。然后移入細胞培養箱繼續培養2h。孵育結束后，快速棄去培養基，加入 冷的PBS終止細胞攝取，并沖洗細胞三遍。于熒光倒置顯微鏡下觀察并比較各孔的細胞形 態及細胞熒光強度及流式檢測細胞攝取情況，結果見圖2。
[0071] FITC/VCR-Gal-C-MEs與細胞孵育后，細胞內熒光強度顯著提高，表明微乳可以顯 著增強人源性肝腫瘤細胞IfepG2的細胞攝取。
[0072] 3.各制劑的Caco-2細胞定性及定量攝取考察
[0073] 此處以共包埋長春新堿和熒光材料FITC的辛酰半乳糖酯修飾的微乳為例。取對 數生長期細胞，用胰蛋白酶消化使其脫壁，用10%FBS的DMEM培養液重懸成單細胞懸液， 并進行細胞計數，用10 %FBS的DMEM培養液稀釋至細胞1X105個/mL，吹打均勻，接種于 24孔細胞培養板，每孔培養液400yL，在37°C、5%C02培養箱中孵育24h。移去孔內原培 養液，將上述500yM游離FITC(FreeFITC)、FITC-長春新堿薏苡仁組分微乳物理混合物 (FITC-mixture)、FITC-長春新堿薏苡仁組分微乳（FITC/VCR-C-MEs)以及FITC-長春新堿 半乳糖酯修飾的薏苡仁組分微乳（FITC/VCR-Gal-C-MEs)用不完全培養基稀釋至5yM，每 孔400yL給藥。然后移入細胞培養箱繼續培養2h。孵育結束后，快速棄去培養基，加入冷 的PBS終止細胞攝取，并沖洗細胞三遍。于熒光倒置顯微鏡下觀察并比較各孔的細胞形態 及細胞熒光強度及流式檢測細胞攝取情況，結果如圖3,FITC/VCR-Gal-C-MEs與Caco-2細 胞孵育后，細胞內熒光強度顯著提高，表明微乳可以顯著增強Caco-2細胞的攝取。
[0074] 實施例11體內抗腫瘤活性
[0075] 此實施例以VCR-Gal-C-MEs為例。按常規方式進行腫瘤模型的建立。隨機將裸 鼠分為生理鹽水陰性對照組、康萊特注射液陽性對照組、長春新堿薏苡仁組分微乳物理混 合物（mixture)、Gal-C-MEs及VCR-Gal-C-MEs給藥組共5組，每組6只。每天測定裸鼠體 重，觀察并記錄動物進食、活動狀態及死亡情況，并用游標卡尺檢測瘤體的長徑和短徑，根 據公式計算瘤體積。于第八天給藥，康萊特注射液陽性對照組每日腹腔注射，其余組每日 灌胃，每次0. 2mL。給藥14d后，繼續記錄裸鼠體重及腫瘤體積7天，之后摘眼球取血，血樣 于3000rpm離心5min，-20°C冷凍保存備用，脫頸椎處死裸鼠。剝離腋下腫瘤、肝臟和脾臟， 并稱取裸鼠腫瘤、肝臟及脾臟的重量，根據公式計算腫瘤抑制率、肝指數及脾指數。抑瘤率 (% )=(模型組腫瘤指數-給藥組腫瘤指數）/模型組腫瘤指數X100% ;模型組腫瘤指 數=模型組腫瘤重量（mg)/裸鼠體重（g)，給藥組腫瘤指數=給藥組腫瘤重量（mg)/裸鼠 體重（g);肝指數=肝臟重量（mg)/裸鼠體重（g);脾指數=脾臟重量（mg)/裸鼠體重（g)。 結果如圖4所示，各組中VCR-Gal-C-MEs抑制腫瘤生長能力最強，并且在治療期間及治療后 一定時間內，肝脾指數均未發生異常變化。
[0076] 實施例12活體成像觀察VCR-Gal-C-MEs體內吸收分布
[0077] 此實施例以包埋了近紅外試劑Cy5的VCR-Gal-C-MEs(Cy5/VCR-Gal-C_MEs)為例。 取游離Cy5組、Cy5/VCR-薏苡仁組分混懸液、Cy5/VCR-C-MEs組、Cy5/VCR-Gal-C-MEs組各 0. 2mL，灌胃給藥于裸鼠后，麻醉裸鼠，將麻醉后的裸鼠俯臥位平放于小動物活體成像系統 的記錄暗箱中，不同時間點成像，時間點分別為1、2、4、6、8、12、24、48h，并于48小時解剖各 組裸鼠腫瘤組織，觀察腫瘤組織中熒光分布情況，結果見圖5。VCR/Cy5-Gal-C-MEs在體內 的滯留時間以及瘤內的聚集能力顯著高于其他給藥組，表明制劑具備一定的腫瘤靶向性和 腸道黏附性能。
【主權項】
1. 一種半乳糖酯修飾的中西藥共載口服肝靶向微乳遞送系統，其特征在于，該微乳遞 送系統由中藥油類組分、中藥多糖類組分、半乳糖酯片段、西藥抗腫瘤化療藥物、乳化劑、助 乳化劑與水組成。2. 根據權利要求1所述的一種半乳糖酯修飾的中西藥共載口服肝靶向微乳遞送系統， 其特征在于，所述的中藥油類組分選自薏苡仁油、莪術油、亞麻籽油、荊芥油、白術油、鴉膽 子油中的一種或幾種；所述的中藥多糖類組分選自靈芝多糖、薏苡仁多糖、香菇多糖、黃芪 多糖、枸杞多糖中的一種或幾種；所述的抗腫瘤化療藥物選自順鉑、環磷酰胺、紫杉醇、阿霉 素、依托泊甙、長春新堿或氟尿嘧啶中的一種或幾種。3. 根據權利要求1所述的一種半乳糖酯修飾的中西藥共載口服肝靶向微乳遞送系統， 其特征在于，所述的半乳糖酯片段與微乳的整合原理為疏水鍵作用力：硬脂酰半乳糖酯、辛 酰半乳糖酯、丁酰半乳糖酯或乙酰半乳糖酯，及不同飽和鏈長的半乳糖酯；或者所述的半 乳糖酯片段與微乳的整合原理為JT-JT堆積：4-(6'_半乳糖M-芐基丁二酰酯、4-(6'_半 乳糖)-1_(2'_甲基芐基）丁二酰酯、4- (6'-半乳糖)-1-(4'_甲基芐基）丁二酰酯、4-半 乳糖-1-芐基丁二酰酯；或者所述的半乳糖酯片段與微乳的整合原理為氫鍵作用力：聚賴 氨酸半乳糖酯、聚精氨酸乳糖酯及含有氫鍵供體(受體）聚合物的半乳糖酯結構；或者所述 的半乳糖酯片段與微乳的整合原理為范德華力：聚乙二醇半乳糖酯、聚氧乙烯半乳糖酯、聚 乙烯醇半乳糖酯。4. 根據權利要求1所述的一種半乳糖酯修飾的中西藥共載口服肝靶向微乳遞送系統， 其特征在于，所述的中藥油類組分、中藥多糖類組分、西藥抗腫瘤化療藥物、半乳糖酯、乳化 劑、助乳化劑與水七者之間的重量比是100: 60~120: 4~16: 0. 25~0. 75: 50~75: 15~25: 200-500〇5. 根據權利要求1-4中任一項權利要求所述的一種半乳糖酯修飾的中西藥共載口服 肝靶向微乳遞送系統，其特征在于，所述微乳遞送系統的中藥油類組分為薏苡仁油；中藥多 糖類組分為薏苡仁多糖；抗腫瘤化療藥為長春新堿；所述的半乳糖酯是基于疏水作用力整 合原理的辛酰半乳糖酯；所述的乳化劑為RH40 ;所述的助乳化劑為PEG400。6. 根據權利要求5所述的一種半乳糖酯修飾的中西藥共載口服肝靶向微乳遞送系 統，其特征在于，其中薏苡仁油、薏苡仁多糖、長春新堿、辛酰半乳糖酯的比例為：300~400: 50-150: 2~10: 30-50〇7. 權利要求1所述的一種半乳糖酯修飾的中西藥共載口服肝靶向微乳遞送系統的制 備方法，其特征在于，將中藥油類組分與化療藥物充分混勻后，再加入乳化劑和助乳化劑攪 拌至勻質狀態，最后以多糖水溶液勻速滴入的方式制備微乳。8. 根據權利要求7所述的一種半乳糖酯修飾的中西藥共載口服肝靶向微乳遞送系統 系統的制備方法，其特征在于，具體制備方法包括以下步驟： 1) 取乳化劑組分與半乳糖酯加入至助乳化劑中，室溫磁力攪拌2-4h至完全混勻，備 用； 2) 取中藥油類組分及抗腫瘤化療藥物加入至上述制備的混合體系中，室溫磁力攪拌 2-4h直至混勻，備用； 3) 將中藥多糖組分加入水相中形成中藥多糖水溶液，然后將中藥多糖水溶液恒速、緩 慢并定量的滴入上述制備混合體系中，并不斷勻速攪拌體系，直至出現透亮澄明的體系。
【專利摘要】本發明公開了一種半乳糖酯修飾的中西藥共載口服肝靶向微乳遞送系統及其制備方法和應用，以具有抗腫瘤作用的中藥多糖類和中藥油類組分作為功能性輔料，構建微乳載體，包埋難溶性抗腫瘤藥物，并采用半乳糖酯進行修飾。本發明實現了口服藥物的肝靶向，增強了藥物的組織特異性、提高了療效、減少對其他組織器官損傷；不但可用于難溶性組分（中藥油類、難溶性抗腫瘤藥物）的增溶，控制藥物釋放，而且可以在水中形成納米級乳劑；微乳藥用組分憑借納米乳的體內吸收特性，顯著增強口服吸收利用度；大幅度減少了常規輔料的用量，提高了載藥量，減少體內潛在的毒性。
【IPC分類】A61P35/00, A61K47/44, A61K36/8994, A61K36/55, A61K36/9066, A61K31/337, A61K33/24, A61K9/107, A61K47/48, A61K31/475, A61K31/7048, A61K36/284, A61K36/185, A61K47/36
【公開號】CN105168134
【申請號】
【發明人】陳彥, 瞿鼎, 劉明健
【申請人】江蘇省中醫藥研究院
【公開日】2015年12月23日
【申請日】2015年9月8日