[0093] (al)用苯基測酸醋處理表面經娃焼化試劑功能化的介孔氧化娃納米粒子，進行再 次功能化；
[0094] (a2)將步驟（al)所得的介孔氧化娃納米粒子分散在含有功能活性分子的溶劑 中，使所述介孔氧化娃納米粒子裝載所述功能活性分子；和
[0095] (a3)將表面官能化的納米粒子堵孔劑加到步驟姐）的反應溶液中，在允許堵孔 劑將介孔堵上的條件下進行反應，從而得到所述基于介孔氧化娃的納米粒子。
[0096] 可采用水熱法制備介孔氧化娃納米粒子。示范性的制備介孔氧化娃納米粒子可參 見本申請的實施例7。也可直接使用現有技術已知的（如市售的）各種氧化娃介孔材料。
[0097] 根據本發明的實施例，介孔氧化娃納米粒子在表面被修飾前，在50-40(TC(例如 100-30(TC、100-25(rC不等）條件下，靜置至少8小時。然后用例如含異氯酸醋基的H烷氧 基娃焼對該介孔氧化娃納米粒子進行表面修飾。含異氯酸醋基的H烷氧基娃焼中的烷氧基 可W是例如C1-C4烷氧基，該官能化試劑的一個例子是3-異氯酸醋基丙基H己氧基娃焼。 對介孔氧化娃納米粒子的表面進行官能化的方法是本領域周知的，在本申請實施例9中予 W舉例說明。
[009引可采用水熱法制備表面功能化納米粒子堵孔劑，可W采用一步制備法，也可先制 備納米粒，再進行功能化修飾。示范性的制備表面功能化納米粒子堵孔劑可參見本申請的 實施例2, 3,4。也可直接使用現有技術已知的（如市售的）各種尺寸與介孔尺寸相匹配的 納米粒子。
[0099] 用苯基測酸醋對介孔氧化娃表面修飾前，可先使苯基測酸醋與適當的接頭分子 (例如含異氯酸醋基的H烷氧基娃焼）反應，然后再使其與介孔氧化娃納米粒子反應，從而 通過接頭分子上的反應性官能團（例如娃烷氧基部分）共價連接到介孔氧化娃納米粒子 上。或者，也可先用接頭小分子對介孔氧化娃納米粒子進行修飾，使其與介孔氧化娃納米粒 子共價連接，然后，再使苯基測酸醋連接到經接頭分子修飾的介孔氧化娃納米粒子上。示范 性的苯基測酸醋、接頭分子W及經苯基測酸醋功能化的介孔氧化娃納米粒子的例子可見本 發明的實施例1、9、10等。
[0100] 獲得經苯基測酸醋功能化的介孔氧化娃納米粒子，可在溶劑中使其與表面功能化 納米粒子堵孔劑反應，通過苯基測酸醋上活性基團與納米粒子表面功能化基團相互結合而 將介孔堵上。
[0101] 對步驟曰2和曰3中所用的溶劑并無特殊限制，通常可選用甲苯、二甲基甲醜胺、二 氯甲焼、己醇、甲醇、水、基于水溶液的各種緩沖液中的一種或它們的混合物。
[0102] 同樣地，本發明對步驟al到a3的反應物的用量、反應時間、溫度等并沒有特殊的 限制。技術人員可根據實際的制備情況選擇適當的反應條件。示范性的制備過程可見本申 請實施例部分。在一個具體實施例中，步驟a2在所用的溶劑為抑值約為7. 40的磯酸鹽緩 沖液，在(TC左右避光反應。在一個具體實施例中，步驟a3在低于4(TC的溫度（例如室溫） 下反應。
[0103] 可采用不同的方法測試本發明控釋納米粒子或系統的性能。例如，可將本發明的 介孔氧化娃納米粒子均分分散于相應的測試體系中，然后與相應的刺激源（底物濃度）經 充分接觸，使介孔打開，內載物即功能活性成分釋放。根據本發明，可用英光標記的膜島素 作為負載分子用于表征，但不僅限于此。
[0104] 接觸時間W及所使用的介孔氧化娃納米粒子的量可由技術人員根據實際情況而 定，例如根據不同底物在相應體系中的含量等因素而確定接觸時間可粒子的用量。
[0105] 在使刺激源與本發明的介孔氧化娃納米粒子接觸一段時間后，可用離必分離本發 明的介孔氧化娃納米粒子和測試體系，然后通過紫外分光光度計或高效液相色譜來檢測體 系中的紫外吸收強度或釋放內載物即功能活性成分的含量，從而確定負載分子的釋放速率 和釋放量。
[0106] 本發明也包括一種控制釋放的方法，所述方法包括允許本發明的基于介孔氧化娃 納米粒子的控制釋放納米粒子或系統與相應的底物充分接觸，從而達到控制釋放的目的。
[0107] 本發明也包括本發明所述控釋納米粒子或系統在制備控釋藥物組合物中的應用。 該控釋藥物組合物可用于治療各種疾病，送取決于所述控釋納米粒子或系統中所負載的活 性分子。例如當負載膜島素時，所述控釋納米粒子或系統可用于制備治療糖尿病及其并發 癥等疾病，如圖10所示基于血糖濃度范圍的控制釋放。
[0108] 本發明所涉及的基于介孔氧化娃的控制釋放系統可W通過任何合適的藥物制劑 形式，W任何合適的途徑和劑量應用到生物體內。例如，在生物體內應用時，可W通過口服、 局部給藥途徑、靜脈或肌肉注射給藥途徑，植入劑或外源性泉形式等
[0109] 在一具體實施例中，本發明所述的控釋納米粒子或系統在沒有刺激源（底物）存 在時，可達到負載分子（如膜島素）的"零提前釋放"。
[0110] 在一具體實施例中，本發明所述同一苯基測酸醋結構對應的控釋納米粒子或系統 對不同底物具有不同的響應濃度范圍。在實際應用中，技術人員可根據底物的實際濃度范 圍和所需的內載物即功能活性成分含量選擇合適的用量。
[0111] 在一具體實施例中，本發明所述的不同苯基測酸醋結構對應的控釋納米粒子或 系統對同一底物響應程度不同，所釋放的內載物的含量也不同，在實際應用中，技術人員可 根據底物的實際濃度范圍和所需的內載物含量選擇合適的結構與用量。
[0112] 應理解，本申請中，所述的"控釋納米粒子"既包括單個粒子，也包括多個粒子的混 合物。
[0113] 下文將W具體實施例的方式描述本發明，其目的在于更好地理解本發明的內容。 應理解，送些實施例僅僅是闡述性的，而非限制性的。實施例中所使用的試劑，除非另有說 明，否則都是從市場上常規購得。其用法和用量都可根據常規的用法和用量使用。
[0114] 連施例1 [011 引 L/IN丄 A* * *? 丄丄 / 丄口 夕<
[0116]在 50血H口燒瓶中加入甘油（400mg，4. 4mmol)，無水硫酸鋼（1.80g，12. 8mmol)， 4-居甲基苯測酸化08mg，4mmol)和15血的四氨巧喃，室溫密閉反應。24小時后停止反應， 抽濾，用四氨巧喃反復清洗濾餅，旋干濾液，硅膠柱層析分離（PE/化OAc= 1/1，v/v)，得到 黃色液體產物。古NMR(400MHz，DMSO-de) : 5 (卵m) 7. 67 (d，J= 8.OHz，1H)，7. 64 (d，J= 8.OHz，IH)，7. 35 (d，J= 8.OHz，IH)，7. 29 (d，J= 8.OHz，IH)，5. 26-5. 23 (m，IH)，5. 19 (t， J= 5.細z，0. 5H)，4. 97(t，J= 5.細z，0. 5H)，4. 53-4. 50(d，J= 5. 6Hz，2H)，4. 33(t，J= 8. 4Hz，0. 5H)，4. 15-4.ll(m，lH)，3. 99-3. 97(m，0. 5H)，3. 90(d，J= 3.細z，0. 5H)，3. 87(d， J= 3.細z，0. 5H)，3. 59-3. 48(m，lH) ;"CNMR(100MHz，DMS0-de) :5 134. 4,133. 3,125. 7， 125. 5, 77. 4,67. 2,66. 1，64. 6。MS巧I)m/z實測值為 208. 0908,理論值為 208. 0907。 。…]連施例2[011 引
[0119] 在500血H口圓底燒瓶中加入己酸鋒二水合物化95g，18.Ommol)和125血無水 己醇，機械攬拌，加熱至6(TC，使己酸鋒完全溶解。稱取氨氧化鐘（2.IOg, 3. 7mmol)，用65mL 無水己醇完全溶解，轉移至恒壓滴液漏斗中，逐滴滴加至H口燒瓶中，10分鐘內滴加完畢。 滴加過程中溶液由無色透明逐漸變為白色渾濁液，之后又重新變為無色透明液體。維持溫 度6(TC反應3小時，停止加熱，停止攬拌，反應液復變為白色渾濁液。離必分離得白色固體， 用無水己醇洗涂H次，真空干燥箱室溫干燥，得白色固體粉末（氧化鋒納米粒子，ZnONP), 零下35C冰箱保存。
[0120] 連施例3
[0122] 在500血圓底燒瓶中加入200血超純水和琉基丙酸巧30mg，5mmol)，磁力攬拌。取 氧化鋒納米粒（405mg，5mmol)，加入少量己醇，超聲15分鐘使其分散均勻，加入0. 2mL六偏 磯酸鋼溶液（4mol/L)，混勻。然后將氧化鋒混合溶液滴加到劇烈攬拌的琉基丙酸水溶液中。 溶液呈澄清透明狀，劇烈攬拌15分鐘。停止攬拌，加入無水己醇析出白色懸濁物，離必分離 混合液得白色固體，用少量超純水洗涂H次，無水己醇洗涂H次，所得白色固體室溫真空干 燥，得白色粉末即官能化ZnONP(RmctionalZnONP)，零下35°C冰箱保存。
[01巧]在100血H口圓底燒瓶中加入5血己酸鋒水溶液（0.Immol/L)，2血己酸儘溶液 (0.Immol/L)，W及琉基丙酸巧31mg, 0. 5mmol)，加水至45血，調節體系抑至8,通氮氣20分 鐘W排出體系中的空氣。然后，加入5mL硫化鋼水溶液（0.Immol/L)，繼續通氮氣10分鐘。 然后，將體系轉移至5(TC反應器中。兩小時后停止反應，溶液呈黃色乳狀液體，加入己醇析 出大量固體。離必分離（14000r/min，IOmin)，己醇洗涂H次，真空干燥后得褐色固體粉末即 官能化的堵孔劑。
[0128]在IOOmL圓底燒瓶中加入膜島素（200mg)，加入50mL碳酸鋼緩沖溶液（pH= 9. 00)，冰浴條件下磁力攬拌。取2. 5mL異硫氯酸醋基英光素的二甲基亞諷值MS0)溶液 (Img/mL)，黑暗條件下，每次W5UL的量加入到上述膜島素溶液中。滴加完畢后室溫攬拌 2小時。然后加入2. 5mL的氯化倭溶液（Imol/L)渾滅反應，室溫磁力攬拌。1小時后停止 反應。反應液用Millpore超濾離必管（UFC900308,Amiconultra-15，ultrace]_-3)經多用 途高效離必機離必除去大部分水分W及小分子化合物，用磯酸鹽緩沖液（pH= 7. 40)反復 洗涂濃縮液至下層清液無英光，得到少量黃色粘稠濃縮液。將濃縮液轉移至蹤色直形螺口 瓶中