含有非活的雙歧桿菌和非消化性寡糖的營養物的制作方法
【專利說明】
[00011 本申請是中國專利申請CN200880025644.9的分案申請，原申請是國際申請號PCT/ NL2008/050376于2010年1月21日進入中國國家階段的申請。
技術領域
[0002] 本發明涉及嬰兒和/或幼童營養物的領域。特別地，本發明涉及包含非消化性寡糖 和非活的(non-viable)雙歧桿菌的嬰兒和/或幼童營養物。這樣的營養組合物有利地用于 治療或預防過敏(優選食物過敏)和/或特應性疾病(包括特應性皮炎和/或哮喘）。
【背景技術】
[0003] 人乳喂養的人類嬰兒在出生后會形成富含產乳酸細菌的腸道微生物群。這是因為 在人乳中存在非消化性糖類，而這些糖類可被產乳酸細菌(尤其是雙歧桿菌)特異性發酵。 [0004]富含雙歧桿菌的微生物群是有益的，這是因為它具有預防以下病癥的作用:感染、 腹瀉、便秘、胃腸炎癥、腸道成熟（intestinal maturation)、過敏特別是食物過敏、特應性 疾病包括特應性皮炎以及哮喘，并且它對免疫系統具有有益作用。
[0005] 可使針對幼兒的配方模擬人乳的促雙歧桿菌生長效應(bifidogenic effect)。冊 2005039319公開了使用活的短雙歧桿菌(Bifidobacterium breve)和兩種不同的非消化性 糖類的混合物以改善用配方喂養之嬰兒的微生物群。該文獻公開了雙歧桿菌在屬的水平和 在種的水平上的相關性。W020070046698公開了使用包含非消化性寡糖的組合物來制備向 剖腹產嬰兒腸道施用的組合物。共施用活的乳酸細菌以增加剖腹產嬰兒腸道中微生物的多 樣性和/或數量。JP 01242532公開了使用活的或非活的短雙歧桿菌作為刺激集合淋巴小結 (Peyer ' s patch)的免疫強化劑，從而預防腸道內感染和過敏。該文獻未涉及用于嬰兒和/ 或幼童的營養配方。
【發明內容】
[0006] 已知活的短雙歧桿菌細胞可改善微生物群并從而改善過敏。然而，優選使用非活 的短雙歧桿菌。這具有如下優點：
[0007] 1)包含非活的短雙歧桿菌的產品儲存更容易并且成本降低，這是因為不需要做特 殊的事先準備來維持短雙歧桿菌細胞可接受水平的生存力。這在水活度高于0.3的產品中 尤為需要。
[0008] 2)沒有后酸化(post-acidification)發生，這是因為具有高水活度之儲存產品中 的短雙歧桿菌不存在發酵能力，和/或在用水重溶之后、食用之前期間的嬰兒配方中的短雙 歧桿菌不存在發酵能力。
[0009] 3)生產后，包含非活的短雙歧桿菌的最終營養組合物可進行巴氏消毒和/或滅菌， 從而減少污染有害微生物(例如坂崎腸桿菌(E.sakazakii))的機會。所以，本發明使得能夠 制備并在室溫儲存包含非活的短雙歧桿菌的液體、即用型配方。
[0010] 4)需要時，可使用溫度高于37°C的水來重溶包含非活的短雙歧桿菌的粉末產品。
[0011] 5)每個嬰兒和/或幼童所接受的短雙歧桿菌細胞劑量可更容易控制，這是因為液 體產品中不再發生任何生長，嬰兒腸道中也不再發生生長。后者是取決于個體腸道環境的 可變因子，并從而導致各嬰兒中有益作用程度的不同。
[0012] 本發明人出人意料地發現，可以在包含非消化性寡糖的嬰兒和/或幼童營養物中 有利地添加非活的短雙歧桿菌細胞以對食物過敏和/或其它特應性疾病具有預防和/或治 療作用。組合物中非活的短雙歧桿菌的作用與活的短雙歧桿菌細胞的作用相當。所觀察到 的失活短雙歧桿菌的抗過敏作用不能用直接的益生菌作用（例如通過改善菌群的作用）來 解釋，這是因為這些細胞不再是活的并因此不會增加微生物群中短雙歧桿菌細胞的數目。 迄今，短雙歧桿菌的有益作用被認為依賴于存在活細胞。
[0013] 非活的短雙歧桿菌細胞的作用與活的短雙歧桿菌相當但是略低。本發明人出人意 料地發現，非活的短雙歧桿菌的作用還可通過非消化性寡糖的存在而進一步改進。這些是 預料不到的，因為通常在共生制備物（synbiotic preparation)中存在的非消化性寡糖刺 激存在的益生細菌并從而顯示改善的作用。本發明人出乎意料地發現，在包含失活短雙歧 桿菌的制備物(其不能使用和得益于存在的非消化性寡糖）中，也發現所述組合相比于單一 化合物具有改進作用。
[0014] 非消化性寡糖刺激嬰兒和/或幼童的腸內微生物群，尤其是雙歧桿菌和/或乳酸桿 菌的數量。施用非活的短雙歧桿菌的同時通過非消化性寡糖改善用配方喂養的嬰兒和/或 幼童的微生物群，導致對預防和/或治療以下病癥的作用增強，例如對感染、腹瀉、便秘、胃 腸炎癥、腸道成熟、過敏特別是食物過敏、特應性皮炎和/或哮喘的預防作用。
【具體實施方式】
[0015] 本發明涉及包含非消化性寡糖A和/或B以及一定量非活的短雙歧桿菌(相當于每 克嬰兒和/或幼童營養物干重至少IO3Cfu)并包含一定量的活的短雙歧桿菌(每克嬰兒和/ 或幼童營養物干重小于IO 3Cfu)的嬰兒和/或幼童營養物。
[0016] 本發明的一方面涉及喂食嬰兒和/或幼童的方法。本發明的另一方面涉及治療和/ 或預防過敏(優選食物過敏)和/或特應性疾病(包括特應性濕疹和/或哮喘）的方法，所述方 法包括向對象施用本發明的嬰兒和/或幼童營養物。本發明的又一方面涉及治療和/或預防 感染的方法，所述方法包括向對象施用本發明的嬰兒和/或幼童營養物。
[0017]本發明的另一方面涉及治療和/或預防尿布皮炎(diaper dermatitis)的方法，所 述方法包括向對象施用本發明的嬰兒和/或幼童營養物。
[0018] 換句話說，本發明涉及嬰兒和/或幼童營養物制備用于治療和/或預防過敏(優選 食物過敏）、特應性疾病(包括特應性濕疹和/或哮喘）的組合物或營養物的用途，或者也就 是說，本發明涉及用于治療和/或預防過敏(優選食物過敏）、特應性濕疹和/或哮喘的本發 明嬰兒和/或幼童營養物。
[0019] 作為替代地，本發明涉及嬰兒和/或幼童營養物制備用于治療和/或預防感染的組 合物或營養物的用途，或者也就是說，本發明涉及用于治療和/或預防感染的本發明嬰兒 和/或幼童營養物。
[0020] 作為替代地，本發明涉及嬰兒和/或幼童營養物制備用于治療和/或預防尿布皮炎 的組合物或營養物的用途，或者也就是說，本發明涉及用于治療和/或預防尿布皮炎的本發 明嬰兒和/或幼童營養物。
[0021] 短雙歧桿菌
[0022] 短雙歧桿菌是革蘭氏陽性、厭氧的、分枝桿狀細菌。與短雙歧桿菌的模式菌株ATCC 15700相比，本發明短雙歧桿菌的16S rRNA序列優選地具有至少95 %的一致性，更優選至少 97%的一致性（Stackebrandt&Goebel，1994，Int · J. Syst .Bacteriol ·44:846-849)。本發明 的組合物、方法和用途中涉及的雙歧桿菌優選地與短雙歧桿菌探針雜交并在5'核酸酶測定 法中產生信號，如WO 2005039319所述。
[0023]優選的短雙歧桿菌菌株是從用健康人乳喂養的嬰兒的糞便中分離的菌株。通常， 這些可以從乳酸細菌生產者處購得，但是也可以直接從糞便中分離，鑒定，表征和制備。根 據一個優選的實施方案，本發明的組合物包含至少一種選自以下的短雙歧桿菌:短雙歧桿 菌Bb_03(Rhodia/Danisco)、短雙歧桿菌M-16V(Morinaga)、短雙歧桿菌R0070( Institute Rosell，Lallemand)、短雙歧桿菌BR03(Probiotical )、短雙歧桿菌BR92(Ce 11 Biotech)、 DSM 20091和LMG 11613。最優選地，所述非活的短雙歧桿菌是非活的短雙歧桿菌M-16V (Morinaga)。最優選地，所述非活的短雙歧桿菌來自保藏于法國巴黎CNCM的短雙歧桿菌菌 株1-2219。
[0024] 本發明的組合物包含一定量非活的短雙歧桿菌（相當于每克組合物干重至少 IO3Cfu)。本發明的組合物優選包含相當于每克本發明組合物干重IO3~IO13集落形成單位 (cfu)短雙歧桿菌的非活的短雙歧桿菌，優選IO 4~1012、更優選IO5~1011、最優選相當于每 克本發明組合物干重IO 5~IO1t3Cf u短雙歧桿菌。優選地，本發明的組合物包含相當于每克總 的非消化性寡糖IO4~1〇13、優選IO 5~1〇12、最優選相當于IO6~5X IO11集落形成單位(Cfu) 短雙歧桿菌。本發明非活的短雙歧桿菌的劑量優選地以相當于IO4~1〇 14、更優選IO5~1〇13、 更優選IO6~1〇 12、最優選IO8~5X IO11集落形成單位(Cfu)的日劑量來施用。當組合物為液 體時，該組合物優選地包含相當于每100mL本發明組合物IO 4~IO14集落形成單位(cfu)的非 活的短雙歧桿菌，優選IO5~1〇 13、更優選IO6~1〇12、最優選相當于每100mL本發明組合物IO 6 ~IO11Cfu的短雙歧桿菌。
[0025] -定量的相當于每克干重至少IO3Cfu的非活的短雙歧桿菌是指相當于每克干重 至少IO 3Cfu短雙歧桿菌之量的非活的短雙歧桿菌。
[0026] 可