l)20分鐘（總共3次，每次使用20分鐘氣霧）。將A組小鼠暴露于霧化鹽水。氣霧由 與小鼠所在的macrolon籠相連的 Jet噴霧器（Pari IS-2，Pari-Werk GmbH, Starnberg， Germany，粒徑2~3微米)產生。
[0083] 從第28天開始至第42天結束，每天如下經口處理小鼠：A組和B組的小鼠接受200μ1 NaCl/天。C組的小鼠接受200μ1鹽水中IO9CFU短雙歧桿菌M16-V; D組的小鼠接受與C組同樣 量的細菌，不同在于D組所接受的細菌在90°C熱滅活10分鐘。組合物C包含低于每克干重 IO3Cfu的活的短雙歧桿菌（即低于檢測限）。組合物C包含其量相當于IO9Cfu短雙歧桿菌的失 活短雙歧桿菌。
[0084] 在第41 天，使用彈黃式卡尺(Mitutoyo ,Veenendaal ,The Netherlands)測定基礎 耳厚度。隨后，在利用異氟烷、O2和N2O麻醉動物后，通過向雙耳的耳廓皮內注射20μ1 0VA(40 μg/ml，在PBS中）來激發小鼠。在動物麻醉狀態下，在OVA激發前以及激發后I、6和24小時對 雙耳進行Duplo測量。結果顯示于表1中。
[0085]與陽性對照(設定其為100%)相比，陰性對照顯示耳厚度增加約20%。用活的短雙 歧桿菌處理顯示耳厚度僅增加45%。這表明，與陽性和陰性對照相比，過敏反應減少約 70%。非活的短雙歧桿菌導致耳厚度增加60%。這表明，與陽性和陰性對照相比，過敏反應 減少約52%。這些結果表明，非活的短雙歧桿菌具有與活的短雙歧桿菌細胞相當程度（約 75%)的抗過敏和/或免疫改善作用。這是出人意料的，因為由于非活的短雙歧桿菌不能通 過改善菌群來起作用因而未預計到它具有這些作用。
[0086]表l:balb/c小鼠中由針對卵清蛋白之過敏反應所致的耳厚度增加百分比。
[0088] *與陽性對照相比，ρ〈0·05。
[0089] 實施例2:與單一組分相比，非活的短雙歧桿菌和非消化性寡糖的組合具有增強的 抗過敏作用。
[0090] CH3/He0uJ小鼠（3-5周齡)從Charles River獲得。使用隨意提供的半合成、不含牛 乳蛋白質的食物和水，將小鼠單獨飼養在II型籠中。將小鼠分成不同的處理組A_E(N = 6)2 周。所述不同的處理組A_E(N = 6)包括陰性對照組(A組）、陽性對照組(B組）、接受每克飲食2 X IO9CFU短雙歧桿菌Ml6-V(在90°C熱滅活10分鐘）的組(C組）、接受每克飲食20mg非消化性 寡糖（T0S(來自Vivinal G0S，Borculo Domo)和lcFOS(Raftilin HP，0rafti)，重量比為9/ 1)的組(D組）以及接受熱滅活短雙歧桿菌和非消化性寡糖的組(E組）。因此，C組和D組的飲 食包含其量相當于每克飲食2 X IO9CFU的失活短雙歧桿菌。所述組合物包含每克飲食低于1 X IO3Cfu活的短雙歧桿菌(其低于檢測限）。
[0091 ]在第 14、21、28、35、42和49天用0.51111乳清蛋白（0]\^11^61'11&1:;[0仙1，￥68]161，每暈 升PBS中含40mg乳清蛋白，每毫升PBS中含20μg/ml霍亂毒素作為佐劑)通過胃內強飼進行主 動致敏。用含有作為佐劑之霍亂毒素的PBS(磷酸鹽緩沖液)對陰性對照組(A組)的小鼠進行 致敏。
[0092]在第54天，用20μ1乳清蛋白（每毫升PBS中含有0.5mg蛋白質)經真皮內注射入左耳 廓來激發A、B、C、D和E組的小鼠。在作為對照的右耳中注射I3BS。在t = 0和t = 1時，使用數字 測微器(Mitutuyo ,Veenendaal)測量耳厚度兩次。從t = l時左耳測量的厚度中減去t = 0時 和對照右耳的腫脹。
[0093] 結果顯示于表2中。與陽性對照的159.9μπι(其被設為100%)相比，陰性對照顯示耳 厚度增加36. Ομπι(設為0 % )。用非活的短雙歧桿菌處理顯示，耳厚度僅增加116. Ομπι。這表明 與陽性和陰性對照相比，過敏反應減少約35%。使用非消化性寡糖導致耳厚度增加103.8μ m。這表明與陽性和陰性對照相比，過敏反應減少約45%。非活的短雙歧桿菌和非消化性寡 糖的組合導致耳厚度僅增加80.4。這表明與陽性和陰性對照相比，過敏反應出人意料地減 少 64 %。
[0094]表2:小鼠中由針對乳清蛋白之過敏反應所致的平均耳厚度增加。
[0096] *與陽性對照相比，ρ〈0·05。
[0097] 這些結果表明，與單一組分相比，非消化性寡糖和非活的短雙歧桿菌的組合具有 出人意料的增強作用。這是出人意料的，因為失活短雙歧桿菌不能代謝非消化性寡糖。
[0098] 實施例3:含有短雙歧桿菌的液體兒童乳 [0099]液體的即食成長乳，其每100mL包含：
[0100] -67 千卡
[0101] -1.9g蛋白質（牛乳蛋白質）
[0102] -8. Ig可消化的碳水化合物(其中有7.Sg乳糖）
[0103] _3.0g 脂肪
[0104] _〇.8g非消化性寡糖：
[0105] 0.72來自Vivival GOS的低聚半乳糖
[0106] 0.08g 來自 RaftilinHP 的果聚糖
[0107]-相當于5. IO9Cfu的熱滅活短雙歧桿菌 [0108] pH 約為6.7。
【主權項】
1. 嬰兒和/或幼童營養物，其包含非消化性寡糖A和/或B和非活的短雙歧桿菌，并包含 低于每克所述嬰兒和/或幼童營養物干重l〇 3cfu的一定量活的短雙歧桿菌，所述非消化性 寡糖的聚合度為2~200,所述非活的短雙歧桿菌的量相當于每克所述嬰兒和/或幼童營養 物干重1〇 3~l〇13cfu短雙歧桿菌。2. 根據權利要求1的營養物，其采用即食液體形式。3. 根據權利要求1或2的營養物，其還包含經廣泛水解和/或部分水解的蛋白質來源。4. 根據前述權利要求中任一項的營養物，其在室溫下至少6個月內為貨架穩定的。5. 根據前述權利要求中任一項的營養物，其為未經發酵的嬰兒和/或幼童營養物。6. 根據前述權利要求中任一項的營養物，其中所述營養物的pH為6~8。7. 根據前述權利要求中任一項的營養物，其包含非消化性寡糖A和B，其中所述非消化 性寡糖A和B的不同在于： i)寡糖A的至少一種單糖相對于寡糖A總單糖單元的百分比，所述單糖比寡糖B中同種 單糖的百分比高出至少40 % (數目）；和/或 i i)寡糖A的至少一種糖苷連接相對于寡糖A總糖苷連接的百分比，所述糖苷連接比寡 糖B中同種糖苷連接的百分比高出至少40% ;和/或 iii)寡糖A的聚合度，所述寡糖A的聚合度比寡糖B的聚合度低至少5個單糖單元。8. 根據前述權利要求中任一項的營養物，其中所述非消化性寡糖選自：低聚果糖、非消 化性糊精、低聚半乳糖、低聚木糖、低聚阿拉伯糖、低聚阿拉伯半乳聚糖、低聚葡萄糖、低聚 葡甘露聚糖、低聚半乳甘露聚糖、低聚甘露聚糖、低聚殼糖、糖醛酸低聚糖、唾液酸低聚糖和 低聚巖藻糖。9. 根據前述權利要求中任一項的營養物，其中寡糖A和/或B的總單糖單元中至少60% (數目）是選自半乳糖、果糖和葡萄糖的單糖。10. 根據前述權利要求中任一項的營養物，其包含寡糖A和B，其中寡糖A和B的重量比為 19/1~1/19〇11. 根據前述權利要求中任一項的營養物，其中寡糖A是反式低聚半乳糖，寡糖B是低聚 果糖。12. 根據前述權利要求中任一項的營養物，其包含相對于所述嬰兒和/或幼童營養物干 重來說0.5~10wt. %的非消化性寡糖。13. 根據前述權利要求中任一項的營養物，其還包含二十碳五烯酸(EPA)和/或二十二 碳六烯酸(DHA)和/或花生四烯酸(ARA)。14. 根據前述權利要求中任一項的營養物，其還包含5~50en%脂質、5~50en%蛋白 質、15~90en%碳水化合物。15. 根據前述權利要求中任一項的營養物，其中所述非活的短雙歧桿菌選自非活的短 雙歧桿菌菌株M-16V和短雙歧桿菌菌株1-2219。16. 根據前述權利要求中任一項的嬰兒和/或幼童營養物用于制備向嬰兒和/或幼童提 供營養之組合物的用途。17. 根據權利要求1-15中任一項的嬰兒和/或幼童營養物用于制備治療和/或預防過敏 優選食物過敏和/或特應性疾病包括濕疹和/或哮喘之組合物的用途。18. 根據權利要求1-15中任一項的嬰兒和/或幼童營養物用于制備治療和/或預防感染 之組合物的用途。19.根據權利要求1-15中任一項的嬰兒和/或幼童營養物用于制備治療和/或預防尿布 皮炎之組合物的用途。
【專利摘要】公開了包含非活的短雙歧桿菌(non-viable？Bifidobacterium？breve)和非消化性寡糖的嬰兒和/或幼童營養物及其用途。
【IPC分類】A23L33/00, A23L33/135, A23L33/26
【公開號】CN105639631
【申請號】
【發明人】桑德·胡吉, 阿德里亞努斯·約翰尼斯·瑪麗亞·夫里瑟馬, 約翰·加爾森, 揚·克諾爾
【申請人】努特里希亞公司
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2008年6月13日