Na 2C03、5%的乙酸、飽和氯 化鈉、蒸餾水水洗3次，產物純度為96%，收率為69%。或者用硅膠柱色譜法純化（二氯甲 烷和甲醇的混合物，梯度洗脫（v/v = 97 :3至9 :1))，產物純度為97%，收率為67%。
[0082] ^-NMRCCDC^) : δ = 8. 65 (1H, bs, H-7), 8. 15 (1H, m, CONHGlu), 7. 70, 6. 70 (4H, 2m, 芳香 H)，7. 36 (2H, s, NH)，4. 80 (2H, s, 9-CH)，4. 25 (4H, q, 2CH)，4. 23 (2H, m, 2a-CH)，3. 20 (3H, s)，1. 79-1. 75 (4H, m)，1. 69 (4H, s, 3CH)。
[0083] LC-MS :C30H39N709, m/z (M-H) 674. 6131。
[0084] 實施例4
[0085] 在此實施例中合成了化合物e，其合成過程如下：
[0086] Π
[0087] 在通氮氣和攪拌的情況下，將實施例1合成的化合物a(661mg，lmmol)、硼氫化鈉 (18911^，5111〇1)溶于201^的01^，室溫下反應30分鐘。然后加入51^5%的鹽酸和1001^乙 酸乙酯，然后用5 %的冰醋酸、10 %的Na2C0#P飽和氯化鈉溶液洗滌，濾過，濾液減壓抽干， 得到黃色粗品，乙醇重結晶得目標化合物e，黃色固體，純度為97%，收率為81 %。或者，濾 液減壓抽干后溶于50mL已酸乙酯，用50mL飽和Na2C03、5%的乙酸、飽和氯化鈉、蒸餾水水 洗3次，產物純度為92%，收率為83%。或者用硅膠柱色譜法純化（二氯甲燒和甲醇的混 合物，梯度洗脫（v/v = 97 :3至9 :1))，產物純度為97%，收率為79%。
[0088] i-NMlUCDCU : δ = 8. 71 (1H，bs，H-7)，8. 19 (1H，m，CONHGlu)，7. 63, 6. 71 (4H，2m， 芳香 H)，7. 31 (2H, s, NH)，4. 82 (2H, s, 9-CH)，4. 22 (4H, q, 2CH)，4. 22 (2H, m, 2a-CH)，3. 83 (ddl H)，3. 20 (3H，s，），1. 8 - 1. 76 (4H，m)，1. 61 (4H，s，3CH)。
[0089] LC-MS :C3QH4QN70s，m/z (M-H) 660. 5803。
[0090] 實施例5
[0091] 在此實施例中合成了化合物d，其合成過程如下：
[0092]
[0093] 在通氮氣和攪拌的情況下，將實施例2合成的化合物b(643mg，lmmol)、硼氫化鈉 (189mg，5mol)溶于20mL的DCM，室溫下反應30分鐘。然后加入5mL的5%的鹽酸和100mL 的乙酸乙酯，然后用5 %的冰醋酸、10 %的Na2C0jP飽和氯化鈉溶液洗滌，濾過，濾液減壓抽 干，得到黃色粗品，乙醇重結晶得目標化合物d，黃色固體，純度為97 %，收率為79 %。或者， 濾液減壓抽干后溶于50mL已酸乙酯，用50mL飽和Na2C03、5%的乙酸、飽和氯化鈉、蒸餾水 水洗3次，產物純度為93%，收率為81 %。或者用硅膠柱色譜法純化（二氯甲燒和甲醇的 混合物，梯度洗脫（v/v = 97 :3至9 :1))，純度為96 %，收率為75 %。
[0094] 4-匪1?(0)(：13) : δ = 8. 67 (1H，bs，H-7)，8. 16 (1H，m，CONHGlu)，7. 71-7. 65 (4H，2m， 芳香 H)，7. 36 (2H，s，NH)，4. 80 (2H，s，9-CH)，4. 25 (4H，q，2CH)，4. 23 (2H，m，2a-CH)，3. 81 (ddl H)，3. 20 (3H，s)，1. 79-1. 75 (4H，m)，1. 45 (4H，s，2CH)。
[0095] LC-MS :C29H35N70s，m/z (M-H) 642. 5637。
[0096] 本發明所提供的化合物或其藥學上可接受的鹽、酯、水合物、溶劑化物或代謝中間 體均可實現本發明所述的技術效果，尤其是實施例1~5所制得的化合物a-e具有更明顯 的技術效果。
[0097] 本發明對化合物a-e進行了細胞保護活性實驗，并與未進行修飾的葉酸、丁酸鈉、 甲基四氫葉酸以及已有的泛Caspase抑制劑Z-VAD-fmk進行比較。Caspase檢測試劑盒包 括的抑制劑（Z-VAD-fmk)和Caspase活化產物是購自美國普羅麥格公司（Promega)公司的 分析級試劑。
[0098] 在以下的實施例中進行Caspase活性測定以及體外細胞存活實驗，每種實驗重復 三次，每個濃度設三復孔。計量資料以均值土標準差表示，組間比較采用單因素方差分析， 計數資料采用X 2檢驗，組間累計生存率的比較采用Kaplan-Meier分析，當p值〈0. 05時， 認為差異有統計學意義。統計分析使用SPSS11. 0軟件。
[0099] 試驗例1
[0100] 1.體外實驗
[0101] 1)采用比色法無細胞系統測定化合物對Caspase-ι和Caspase-3的抑制活性
[0102] 按照試劑盒說明書進行操作。具體來說，實驗在96孔酶標板中進行，將上述合成 的化合物 a-e(0. 10、0· 5、2· 50、12· 5 μΜ)以及 Caspases 抑制劑 Z-VAD-fmk(陽性對照）分 別與活化的Caspases-Ι和Caspase-3以及pNA標記的底物直接加入孔內，于37°C下反應 1小時后，在酶標儀上用405nm波長測0D值。同時使用未加入細胞保護劑的樣本進行空 白對照，將各實驗結果測量值與空白對照相比較，得出Caspase活性被抑制的程度，計算其 IC5。（ μ M)，即Caspase活力被抑制一半所需化合物的濃度。結果見表1的第2列和第3列。
[0103] 2)對Caspase-3激活導致細胞凋亡的保護
[0104] 將四環素誘導的活化的Caspase-3穩定轉染的細胞（HEK293-Caspase_3, HEK293 細胞購自克隆技術實驗室有限公司（Clontech Laboratories, Inc.))接種在96孔細胞 培養板中（5000細胞/孔），培養24小時后，將上述合成的化合物a-e(0. 5、2. 5、12. 5、 62. 5 μΜ)和Caspases抑制劑Z-VAD-fmk、葉酸、甲基四氫葉酸、丁酸鈉、甲基四氫葉酸+ 丁 酸鈉分別與四環素（用于誘導Caspase-3表達從而導致細胞凋亡）一起直接加到細胞培養 基中，培養48小時后，用MTT法測0D值以反映細胞存活情況：各孔加 MTT 0. lmg(100 μ 1)， 培養3小時后棄上清液，向每孔加入二甲基亞砜（DMSO) 150 μ 1，振蕩后用酶聯儀測0D值 (450nm)，細胞存活率=(試驗組0D值-空白對照組0D值）八對照組0D值-空白對照組 0D值）。對照組：不加藥物；空白對照組：培養液、MTT、DMS0,沒有細胞。根據細胞存活率計 算其1(： 5。（以1)(50%細胞保護所需的計量），結果見表1的第4列。
[0105] 由表1可知，葉酸及其衍生物和丁酸鈉無論多高的濃度都沒有任何直接抑制 Caspase-Ι或3的功能，本發明的化合物a-e體外也無直接抑制Caspase-Ι或3活性的功 能，但能有效抑制活化的Caspase-3引起的細胞凋亡。
[0106] 表1本發明的化合物對Caspase的抑制效果
[0107]
[0108] 注表示無抑制活性
[0109] 3)對心肌細胞體外缺血再灌注損傷的保護
[0110] 將大鼠原代培養的心肌細胞接種在96孔細胞培養板中（10000細胞/孔），在完全 培養基（含10%的小牛血清）中培養24小時后，換用無血清培養基繼續培養8小時（缺 血細胞模型），然后換用完全培養基繼續培養（造缺血再灌注損傷的細胞模型）。在缺血后 的3小時，將化合物a-e和對照藥物（Z-VAD-fmk、丁酸鈉、葉酸及葉酸衍生物（5-甲基四氫 葉酸））加到細胞培養基中，培養48小時，用MTT法（同上）檢測細胞存活率，結果見圖1。 由圖1可知，葉酸在劑量超過25 μΜ時能保護缺血再灌注引起的體外培養的心肌細胞損傷， 然而當葉酸濃度低于10 μΜ時不能有效保護缺血再灌注引起的心肌細胞損傷（ρ>0. 05); 丁酸鈉濃度低于2000 μ Μ時對細胞無明顯保護作用（ρ>0. 05)，葉酸與丁酸鈉合用時并沒 有達到降低劑量仍然能有效保護細胞的目的（Ρ〈〇. 05)，但是在各自有效劑量下，呈現協同 保護效應；本發明的化合物a-e，特別是a和b與對照藥物Z-VAD-fmk等相比，其保護效應 產生了驚人的增強：當濃度達5 μΜ時，幾乎可阻斷缺血再灌注引起的心肌細胞損傷（達 到80%)的保護（ρ〈0. 001);單用葉酸或四氫葉酸時，濃度達50 μΜ時才有一定的保護效 果；而Z-VAD-fmk當濃度高達25 μ Μ時，其保護效應僅能提高10-15%，當Z-VAD-fmk濃度 超過50μΜ時，反而顯著促進細胞死亡（結果未顯示）。引人注目的是，即使在缺血后的3 小時，給予本發明的化合物a、b、c、d或e仍能有效保護缺血再灌注引起的心肌細胞損傷 (ρ〈0·05)，結果見圖1。
[0111] 4)對神經細胞缺氧損傷的保護
[0112] 將大鼠神經細胞（PC12)接種在含有載玻片的12孔細胞培養板中，在完全培養基 (含10%的小牛血清并含l〇ng/ml的NGF)中培養24小時后，換用低氧環境（3%氧）繼續 培養12小時，然后在正常環境中繼續培養。在缺氧后的3小時，將化合物a、b和對照