通過具有 含氨基的離子交換基，可提高本發明的多孔性纖維素粒子的離子交換相互作用。
[0037] 含丁基的疏水性基只要至少含有丁基，且可導入到纖維素粒子的羥基上，則并無 特別限制。例如可舉出分子內具有反應性官能基與丁基的化合物等。具體可舉出：利用丁 基縮水甘油醚的縮水甘油基而導入的3- 丁氧基-2-羥基丙基等。通過含有丁基，可提高多 孔性纖維素粒子的疏水性相互作用。
[0038] 本發明的多孔性纖維素粒子中的氮原子含量優選lmg/g~10mg/g的范圍，更優選 2mg/g~5mg/g，進而優選3mg/g~4mg/g的范圍。若氮原子含量為所述范圍，貝lj可使目標 物以低鹽濃度吸附，且保持低鹽濃度的狀態使用表面活性劑等使之溶出。另外，在將本發明 的多孔性纖維素粒子特別用于乙型肝炎病毒（HBV)的病毒樣顆粒（VLP)的純化的情況下也 合適。
[0039] 本發明的多孔性纖維素粒子中的丁基含量并無特別限制，多孔性纖維素粒子中的 丁基含量優選為以下的量：將纖維素粒子所含的羥基的一部分經含丁基的疏水性基取代 后、且經含氨基的離子交換基取代前的多孔性纖維素粒子填充到管柱中，以含有2mol/L的 硫酸銨的〇.2mol/L磷酸緩沖液（pH值為7.0)使該管柱平衡化，使溶解在該緩沖液中的溶 菌酶（lysozyme)吸附，并以含有硫酸銨的0.2mol/L磷酸緩沖液（pH值為7.0)使之溶出的 情況下，溶菌酶在硫酸銨濃度1. 2mol/L以上且小于2. Omol/L的范圍內溶出的量。多孔性 纖維素粒子中的丁基含量與目標物的吸附量及溶出性有關，因此優選的是調整為溶菌酶在 所述硫酸銨濃度的范圍內溶出的量。
[0040] 另外，關于本發明的多孔性纖維素粒子中的丁基含量，優選的是在利用實施例1 中記載的方法進行評價時，以作為標準蛋白質的溶菌酶的溶出峰值在12分鐘~20分鐘的 范圍內出現的方式調整，更優選的是以所述溶出峰值在12. 5分鐘~15. 0分鐘的范圍內出 現的方式調整。
[0041] 可用作本發明的多孔性纖維素粒子的基質載體的纖維素粒子只要通常被用作色 譜載體，則并無特別限制。其中，優選的是經交聯劑交聯而成的交聯纖維素粒子。成為原料 的纖維素可為結晶纖維素也可為非晶纖維素，從強度高的方面來看，優選結晶纖維素。
[0042] 纖維素粒子例如可通過將結晶纖維素粉末再生而獲得。具體來說，使結晶纖維素 粉末直接溶解在硫氰酸媽（calcium rhodanate)溶液中，使該溶液分散在鄰二氯苯等高沸 點溶劑中，由此制成水/油（W/0)型的水性液滴，在其中添加甲醇等醇，由此可由結晶纖維 素粉末來再生多孔質纖維素粒子。像日本專利特公昭63-62252號公報中所示那樣，由該方 法所得的纖維素粒子非常多孔質且硬度高，顯示出圓球狀的形狀，因此適合用于色譜用填 充劑。
[0043] 纖維素粒子的交聯方法并無特別限制，本發明中所用的交聯纖維素粒子優選的是 使用含有至少一個環氧化物基的多元交聯劑進行交聯而成，其中優選的是使用表氯醇進行 交聯而成。關于纖維素粒子的交聯方法，優選的是在纖維素粒子的懸浮液中，在既定量的 無機鹽的存在下，以既定的摩爾比用既定時間以上連續滴加或分批添加交聯劑與堿進行交 聯。例如優選的是在未經交聯的纖維素粒子的懸浮液中，在纖維素單體的摩爾數的6倍 量~20倍量的選自由鹽酸鹽、硫酸鹽、磷酸鹽及硼酸鹽所組成的組群中的至少一種無機鹽 的存在下，用3小時以上連續滴加或分批滴加纖維素單體的摩爾數的4倍量~12倍量的交 聯劑、與交聯劑的摩爾數的〇. 1倍量~1. 5倍量的堿。通過該方法，可獲得機械強度高、耐 流速性優異的交聯纖維素粒子。更具體來說，可參考日本專利特開2009-242770號公報中 公開的方法。由該方法所得的交聯纖維素粒子的機械強度高，可在高流速的條件下使用，因 此可提供生產性高的色譜載體。
[0044] 纖維素粒子的形狀并無特別限制，從機械強度高、凝膠沉降性優異、可制作均勻的 填充床的方面來看，優選球狀。該情況下，纖維素粒子的圓球度優選0.8~1.0。這里，"圓 球度"是指纖維素粒子的短徑/長徑。
[0045] 球狀纖維素粒子例如可通過將結晶纖維素或包含結晶區域與非晶區域的纖維素 溶解并再生而容易地獲得。球狀纖維素的制造方法例如可舉出：日本專利特公昭55-39565 號公報、日本專利特公昭55-40618號公報等中記載的經由乙酸酯的方法；日本專利特公昭 63-62252號公報等中記載的由使用硫氰酸鈣鹽的溶液來進行造粒的方法；日本專利特開 昭59-38203號公報等中記載的由三聚甲醛（paraformaldehyde) ·二甲基亞砜溶液來進行 制造的方法；另外日本專利第3663666號公報中記載的由使纖維素溶解在含氯化鋰的酰胺 中而成的纖維素溶液來進行成形的方法等。
[0046] 球狀的交聯纖維素粒子可通過使用上文所述的方法等將球狀纖維素粒子交聯而 獲得。
[0047] 本發明中所用的多孔性纖維素粒子及作為其基質載體的纖維素粒子的粒徑優選 30 μπι~200 μπι的范圍，更優選50 μπι~150 μπι的范圍。另外，平均粒徑優選30 μπι~ 200 μπι的范圍，更優選40 μπι~150 μπι，進而優選50 μπι~100 μπι的范圍。
[0048] 本說明書中，關于多孔性纖維素粒子及作為其基質載體的纖維素粒子的粒徑，可 使用卡尺（nonius)等來測量由光學顯微鏡所拍攝的圖像的粒徑，根據拍攝倍率求出原本 的粒徑，由根據光學顯微鏡照片所求出的各粒徑的值通過下述式來算出平均粒徑。
[0049] 體積平均粒徑（Μν) =Σ (nd4)/ Σ (nd3)
[0050] [式中，d表示根據光學顯微鏡照片所求出的各粒徑的值，n表示所測定的粒子的 個數]
[0051] 多孔性纖維素粒子及作為其基質載體的纖維素粒子的粒徑可具有微孔尺寸的特 性而帶有特征。表示微孔尺寸特性的一個指標有凝膠分配系數Kav。微孔尺寸與粒子的物 理強度或成為純化對象的目標物質的粒子內的擴散性有關，因此對載體的流速特性或動態 吸附容量造成影響。因此，必須根據目的來進行最佳設計。從動態吸附容量的觀點來看，尤 其本發明中所用的多孔性纖維素粒子及作為其基質載體的纖維素粒子的微孔尺寸優選的 是在重量平均分子量為1. 5X 105Da的標準聚環氧乙烷中，使用純水作為流動相時的凝膠分 配系數Kav為0. 15~0. 6的范圍，更優選0. 2~0. 55,進而優選0. 3~0. 5的范圍。
[0052] 凝膠分配系數Kav可根據具有特定分子量的標準物質（例如聚環氧乙烷）的溶出 體積及管柱體積的關系通過下式而求出。
[0053] Kav = (Ve-V〇)/ (Vt-V〇)
[0054] [式中，Ve表示樣品的保持容量（mL)，Vt表示空管柱體積（mL)，V。表示藍色葡聚 糖（blue dextran)保持容量（mL)]
[0055] 凝膠分配系數Kav的測定方法例如是記載在L.費歇爾（L. Fischer)著的生物化 學實驗法2《凝膠色譜》第1版（東京化學同人）等中。本發明中所用的纖維素粒子的凝 膠分配系數Kav例如可通過控制粒子形成時的纖維素的溶解濃度而調整。
[0056] 本發明的多孔性纖維素粒子可通過將眾所周知的反應組合而制造。例如在纖維素 粒子所含的羥基的一部分上導入含丁基的疏水性基，然后在該羥基的另一部分上導入含氨 基的離子交換基，由此可獲得本發明的多孔性纖維素粒子。或者，也可先導入含氨基的離子 交換基。
[0057] 在纖維素粒子所含的羥基的一部分上導入含丁基的疏水性基的方法例如可舉出： 使用含有丁基與反應性官能基的化合物的方法等。其中，優選的是使含有丁基與縮水甘油 基的化合物和纖維素粒子反應的方法。根據該方法，可在不使用有毒物質的情況下，利用簡 便的方法在纖維素粒子中導入含氨基的離子交換基。
[0058] 在纖維素粒子所含的羥基的另一部分上導入含氨基的離子交換基的方法例如可 舉出：使用多官能性的試劑來導入氨基的方法等。其中，優選的是使表氯醇與纖維素粒子反 應，將其他羥基的一部分環氧化，然后與氨反應的方法。根據該方法，可在不使用有毒物質 的情況下，利用簡便的方法在纖維素粒子中導入含丁基的疏水性基。
[0059] 本發明的優選形態中，本發明的多孔性纖維素粒子是交聯纖維素粒子所含的羥基 的一部分經3-氨基-2-羥基丙基（_CH 2CH2 (OH) CH2NH2)取代、且該羥基的另一部分經3- 丁 氧基-2-羥基丙基（-CH2CH2(0H)CH20C 4H9)取代而成。所述多孔性纖維素粒子的機械強度高， 分離特性優異，特別適合作為色譜載體。另外，可在不使用有