r>[0101] 然后，以將作為混入物質的蛋白質及核酸保持在所述色譜載體上、且VLP透過所 述色譜載體的方式，調節所述色譜載體的疏水性相互作用，使所述VLP從所述色譜載體中 溶出。這里，VLP優選的是使用基因重組技術制造 HBs抗原的S區域而成。
[0102] 通過在用作流動相的緩沖液中調配表面活性劑，能以減弱色譜載體的疏水性相 互作用的方式進行調節。表面活性劑只要減弱色譜載體的疏水性相互作用，則并無特別限 制。例如可使用：聚氧亞乙基烷基苯基醚、聚氧亞乙基烷基醚、聚氧亞乙基山梨醇酐脂肪酸 酯、聚氧亞乙基壬基苯基醚、酰基山梨醇酐、類固醇系表面活性劑、烷基葡糖苷、烷基醇的硫 酸酯鹽、烷基醇的磺酸酯鹽、溶血卵磷脂（lysolecithin)、烷基β氨基酸等。
[0103] 溶出液視需要可使用微濾?超濾膜等進行最終過濾，將VLP與混入物質分離純化。
[0104] 像以上那樣，可從含有乙型肝炎病毒（HBV)的病毒樣顆粒（VLP)的細胞溶解物或 培養上清液中將VLP分離純化。所得的VLP可用作乙型肝炎用疫苗。
[0105] 視需要也可調節本發明的色譜載體的離子強度，由此使色譜載體中保持的作為混 入物質的蛋白質及核酸溶出。通過使色譜載體中保持的混入物質溶出，可將本發明的色譜 載體再生而重復使用。
[0106] 色譜載體的離子強度例如可通過添加氯化鈉來調節。氯化鈉的濃度優選0. 5M以 上，更優選2. 0M以上。
[0107] [實施例]
[0108] 以下舉出實施例對本發明進行更詳細說明，但本發明不受這些實施例的任何限 定。
[0109] <參考例1 >
[0110] [6 %球狀纖維素粒子（含水）的制造]
[0111] (1)在l〇〇g的硫氰酸鈣60重量％水溶液中添加6. 4g的結晶性纖維素（旭化成化 學股份有限公司制造，商品名：賽奧拉斯（Ce〇luS)PH101)，加熱到110°C~120°C而溶解。
[0112] (2)在該溶液中添加6g的山梨醇酐單油酸酯作為表面活性劑，滴加到預先經加熱 至lj 130°C~140°C的480ml的鄰二氯苯中，以200rpm~300rpm進行攪拌分散。
[0113] (3)然后，將所述分散液冷卻到40°C以下，注入到190ml的甲醇中，獲得粒子的懸 浮液。
[0114] (4)將該懸浮液過濾分離，以190ml的甲醇清洗粒子，并進行過濾分離。將該清洗 操作進行多次。
[0115] (5)進而以大量的水清洗后，獲得球狀纖維素粒子。
[0116] (6)然后，使該球狀纖維素粒子通過日本工業標準（Japanese Industrial Standards，JIS)標準篩規格53 μπι~125 μπι的篩，調整為所需粒徑（實粒子尺寸間隔為 50 μ m~150 μ m，平均粒徑為約100 μ m)，獲得目標的6%球狀纖維素粒子（含水：纖維素溶 解濃度6% )。此外，關于這里的平均粒徑，使用卡尺等來測量由光學顯微鏡所拍攝的圖像 的粒徑，根據拍攝倍率求出原本的粒徑，由各粒徑的值通過下述式算出而求出平均粒徑。
[0117] 體積平均粒徑（Μν) =Σ (nd4)/ Σ (nd3)
[0118] [式中，d表示根據光學顯微鏡照片所求出的各粒徑的值，n表示所測定的粒子的 個數]
[0119] [交聯6%纖維素粒子的制備]
[0120] (1)在100g的上文所得的6%球狀纖維素粒子（含水）中添加121g的純水，一面 攪拌一面加溫。當達到30°C時，添加3. 3g的45重量％的NaOH水溶液與0. 5g的NaBH4，進 行攪拌。初期堿濃度為0.69% (w/w)。
[0121] (2)30分鐘后，將60g的~添加到反應液中，使之溶解。在混合物的溫度達到 50°C的時刻，繼續攪拌2小時。
[0122] (3)在50°C下一面繼續混合物的攪拌，一面每隔15分鐘用大約6小時添加將48g 的45重量％的NaOH水溶液、與50g表氯醇分別25等分所得的量。
[0123] (4)添加結束后，使該混合物在溫度50°C下反應16小時。
[0124] (5)將該混合物冷卻到溫度40°C以下后，添加2. 6g的乙酸進行中和。
[0125] (6)將反應混合物過濾而回收凝膠，以純水進行過濾清洗，獲得目標的交聯6%纖 維素粒子。此時，使用崛場制作所股份有限公司的激光衍射/散射式的粒徑分布測定裝置 LA-950進行分析的平均粒徑為85 μπι。另外，在重量平均分子量為1. 5X 105Da的標準聚環 氧乙烷中使用純水作為流動相時的凝膠分配系數Kav為0. 38。
[0126] <參考例2 >
[0127] [陰離子交換體的制造]
[0128] 在容積為0. 5L的玻璃容器中添加70g的參考例1的交聯6%纖維素粒子、及35mL 純水并進行攪拌。將反應液的溫度提高到38°C，投入122g的卡吉奧馬斯達（Catiomaster) (四日市合成）、4. lg的48. 7% (w/w)氫氧化鈉。在將反應溫度維持于40°C ±2°C的狀態 下攪拌6小時。6小時后，利用乙酸將反應液調整為中性，使用減壓過濾并以純水進行凝膠 的清洗。在該凝膠中添加〇.2mol/L鹽酸，攪拌30分鐘。然后，再次使用減壓過濾并以純水 清洗直到變為中性為止。通過減壓過濾將多余的水分除去，獲得61g的濕凝膠。該凝膠的 N含量為7300ppm。
[0129] <實施例1 >
[0130] [混合t旲式載體的制造含丁基的疏水性基的導入（工序a)]
[0131] 在容積為2L的玻璃容器中添加480mL的純水及185g的硫酸鈉。然后，添加250g的 參考例1的交聯6%纖維素粒子，以成為均勻漿料的方式攪拌。在所得的漿料中添加76. 6g 的48. 7% (w/w)氫氧化鈉水溶液，攪拌1小時。1小時后，在反應液中分別添加4. 8g的丁 基縮水甘油醚（日本油脂股份有限公司制造的"艾比奧（Epiol)(注冊商標）B")，將反應液 升溫到50°C。液溫達到50°C后，一面攪拌16小時一面進行反應。16小時后停止攪拌并對 漿料進行抽吸過濾。以純水將所得的濕凝膠清洗5次，以甲醇清洗15次。最后以純水清洗 直到清洗液變為中性為止。所得的濕凝膠是以除去多余水分的狀態而保存。
[0132] 為了確認所得的凝膠中的疏水性基的導入，像以下那樣來確認標準蛋白質溶菌酶 (生化學工業股份有限公司）的吸附。將所述制造的凝膠及作為原料的交聯6%纖維素粒 子分別以成為5cm的方式填塞到內徑6. 6mm的玻璃管柱中，利用含有2mol/L的硫酸銨的 0. 2mol/L磷酸緩沖液（pH值為7. 0)使各管柱平衡化。然后，在各管柱以0. 86mL/分鐘的 流速來流通〇. 5mL的以用于平衡化的緩沖液懸浮的2mg/mL溶菌酶（Lysozyme)溶液，進而 直接使3. 42mL的用于平衡化的緩沖液通過。然后，在同樣地在各管柱中以0. 86mL/分鐘的 流速流通51. 3mL的用于平衡化的緩沖液的期間，根據直線傾斜梯度而將硫酸銨的濃度由 2mol/L降低到Omol/L。此時，溶菌酶（Lysozyme)在填充有交聯6%纖維素凝膠的管柱中 在11. 3分鐘的位置出現溶出峰值，在填充有導入有含丁基的疏水性基的凝膠的管柱中，在 12. 5分鐘~17. 5分鐘的位置出現溶出峰值。通過以上情況，確認到在交聯纖維素粒子中 導入了含丁基的疏水性基。
[0133] [混合模式載體的制造環氧化（工序b)]
[0134] (制造例 lb)
[0135] 在容積為1L的玻璃容器中加入85mL的純水，添加70g的工序a中制造的具有丁 基的纖維素凝膠，攪拌30分鐘。將反應液的溫度調整到28°C~35°C的范圍內，依次添加 38g的48. 7% (w/w)氫氧化鈉水溶液、43g的表氯醇，攪拌2小時。2小時后，添加乙酸直到 反應液變為中性為止。以純水清洗直到上清液的導電率成為10 μ S/cm以下為止，然后進行 抽吸過濾，將所得的86g的濕凝膠回收。所得的凝膠的環氧導入量在每lg干燥凝膠中為 47 μ mol〇
[0136] (制造例 2b)
[0137] 除了代替85mL的純水而使用209mL以外，與制造例lb同樣地進行操作而獲得69g 的濕凝膠。所得的凝膠的環氧導入量在每lg干燥凝膠中為128 μ mol。
[0138] (制造例 3b)
[0139] 除了代替85mL的純水而使用518mL以外，與制造例lb同樣地進行操作而獲得69g 的