同病原菌共同培養檢測該菌的拮抗作用。對峙培養:按5點接菌法 在倒好的TOA培養基平板中央接入不同種類的病原菌(本實驗保存），TWC2接種于平板四周， 置于28°C對峙培養5~7d，結果表明篩選獲得的這株細菌對病原菌具有較強的拮抗作用(見 圖6)。測定TWC2與各病原菌的抑菌譜寬度及抑制率，結果見表13。
[0098] 表13TWC2對熱帶植物病原菌的拮抗作用
[0099]
[0100] 7.解淀粉芽孢桿菌TWC2對甘蔗赤腐病菌離體葉片的拮抗效果
[0101] 7.1解淀粉芽孢桿菌TWC2的制備
[0102] 將TWC2菌株接種于LB培養基平板，37°C恒溫培養24h，得到活化的TWC2菌株單菌 落，然后挑取單菌落接種于LB培養基中，37°C、200rpm/min條件下振蕩培養16h即得TWC2種 子液。按7%的接種量將解淀粉芽孢桿菌TWC2種子液接入LB培養基中，34°C，200rpm/min，搖 床培養48h，取培養液測定其0D 6Q() = 2.3(菌液濃度過高可用無菌水稀釋），備用。每片葉片噴 灑2mL菌液。
[0103] 7.2病原菌制備
[0104]將保存于斜面培養基的甘蔗赤腐病病原菌轉接于PDA培養基上，28°C培養3d后，用 5mm打孔器打孔，備用。
[0105]取嫩綠甘蔗葉片，用針刺法刺傷。具體處理如下:①先噴灑TWC2菌液于甘蔗葉片葉 脈。待風干后馬上接病原菌于針刺處;②先接病原菌菌餅于針刺處，后噴灑TWC2菌液;③只 接病原菌于針刺處;④空白，只噴清水于葉片表面。3d后觀察結果，按十字交叉法測病斑直 徑并求出面積，按下式計算病斑抑制率。病斑抑制率（％ )=(對照病斑總面積一處理病斑總 面積)/對照病斑總面積。結果顯示，處理1的病斑面積最低，抑菌率最高，其次是處理2,最后 是處理3(結果見圖6)。結果表明先噴曬生防菌，可誘導葉片產生抗病性。從而達到防治效 果。
[0106] 表14TWC2對對甘蔗赤腐病離體葉片的拮抗作用
[0107]
[0108]
[0109] 本技術領域技術人員可以理解，除非另外定義，這里使用的所有術語(包括技術術 語和科學術語)具有與本發明所屬領域中的普通技術人員的一般理解相同的意義。還應該 理解的是，諸如通用字典中定義的那些術語應該被理解為具有與現有技術的上下文中的意 義一致的意義，并且除非像這里一樣定義，不會用理想化或過于正式的含義來解釋。
[0110] 本領域普通技術人員可以理解:實施例中的裝置中的部件可以按照實施例描述分 布于實施例的裝置中，也可以進行相應變化位于不同于本實施例的一個或多個裝置中。上 述實施例的部件可以合并為一個部件，也可以進一步拆分成多個子部件。
[0111] 最后所應說明的是：以上實施例僅用以說明而非限制本發明的技術方案，盡管參 照上述實施例對本發明進行了詳細說明，本領域的普通技術人員應該理解:依然可以對本 發明進行修改或者等同替換，而不脫離本發明的精神和范圍的任何修改或局部替換，其均 應涵蓋在本發明的權利要求范圍當中。 SEQUENCE LISTING <110>中國熱帶農業科學院環境弓植物保護研究所 <120> 一種解淀粉芽孢桿菌及其?防治甘庶赤腐病中的運用 <130〉說明書 <160> ：3 ? 170 PatentIn version 3, δ <210> I <211> 1511 v212> DMA 解淀粉.芽孢.桿菌TWC2
[0112] <400〉S賄 ID 節.1 agagtttgat cctggctcag gacgaacgct ggcggcgtgc ctaatacatg caagtcgagc 60 ggacagatgg gagcttgctc cctgatgtta gcggcggcicg ggtgagtaac acgtgggtaa 120 cctgcctgta agactgggat aactccggga aaccggggot aataocggat ggttgtctga 180 accgcatggt tcagacataa aaggtggctt cggctaccac ttacagatgg acccgcggcg 24U cattagctag ttggtgaggt aacggctcac caaggcgacg atgcgtagcc gacctgagag 300 ggtgetcggr rarartggga otgagaoaog gorc；agacto c；tacgggagg cagoagtagg 36Q gaatcttceg caalggacga aagtctgacg gagcaacgcc gcgtgagtga tgaaggtttt 420 Gggatcgtaa agctctgt'tg ttaggg：aaga ac:aagt.g：QG.g. ttcaaatag;g gcggeacctt 480 gacggtacct aaccagaaag ccacggctaa ctacgtgcca gcagccgcg.g taatHagtag' 540 .g.tggcaag&g ttgtGc：g.gaa ttattgggog t.aaaggg&ta gcagg：cggtt 1x.ttaagt.ct 600 gatgtgaaag cccccggctc acccggggag ggtcattgga aactggggaa cttgagtgca .6:60: gaagaggaga gtggaattcc E￡；.gtgtagcg gtgaaatgog tagagatgtg gaggaacacc 720 agtggcgaag gegactctet ggtQtgtaaG tgae'gGtgag gagegaaagc gtggggageg 780 aacaggatta gataccctgg tagtccacgc cgtaaacgat gagtgctaag tgttaggggg 840 tttocgcccc ttagtgctgc agctaacgca ttaagcactc cgcctgggga gtacggtcgc 90Q aagactgaaa ctcaaaggaa ttgacggggg cccgcacaag cggtggagca tgtggtttaa 980 ttcgaagcaa cgcgaagaac cttaccaggt cttgacatcc tctgacaatc ctagagatag 1020 gacgtcccct tcgggggcag agtgacaggt ggtgcatggt tgtcgtcagc tcgtgccgtg 1080 agatgttggg ttaagtcccg caacgagcgc aaccctfgat cttagttgcc agcattcagt 1140 tgggcactct aaggtgactg ccggtgacaa accggaggaa ggtggggatg aegtcaaatc 1200 atcatgcccc ttatgacctg ggctacacac gtgctacaat ggacagaaca aagggcagcg 1260 aaaccgcgag gttaagccaa tcecacmaat ctgttctcag tteggatcgc agtetgcaaG 1320 txgactgcgt gaagctggaa tcgctagtaa tcgcggatca gcatgccgcg gtgaatacgt 1380
[0113] tcccgggcct tgtacacacc gcccgtcaca ccacgagagt ttgtaacacc cgaagtcggt 1440 gaggtaacc t t ttaggagcc agcc^ocyaa RRtgggaca^ atgattgggg tgaagtcgta. 1500； acaaggtaac c 1511 ，'210> 2 x21L 2.0 、2D DM <213> 27H <4：〇0> 2 agagtttgat cctggctxag 201 :3 、211 .22.
[0114] <212> DNA <213> 1492R <400> 3 t a c g g c t ac c 11 g11 ac gae tt 22
【主權項】
1. 一種解淀粉芽孢桿菌TWC2，保藏編號為CGMCC No. 11515。2. 根據權利要求1所述解淀粉芽孢桿菌TWC2在防治甘蔗赤腐病中的運用，其特征在于， 利用該菌株制備防治甘蔗赤腐病的生物制劑施用于甘蔗。3. 根據權利要求2所述解淀粉芽孢桿菌TWC2發酵液的制備方法，其特征在于，將TWC2菌 株接種于LB培養基平板，37 °C恒溫培養24h，得到活化的TWC2菌株單菌落，然后挑取單菌落 接種于LB培養基中，37 °C、200rpm/min條件下振蕩培養16h獲得TWC2種子液，按7 %的接種量 將解淀粉芽孢桿菌TWC2種子液接入LB培養基中，34°C，200rpm/min，搖床培養48h獲得解淀 粉芽孢桿菌TWC2發酵液。4. 根據權利要求3所述解淀粉芽孢桿菌TWC2發酵液的制備方法，其特征在于，培養pH為 5 · 0~9·0〇5. 根據權利要求4所述解淀粉芽孢桿菌TWC2發酵液的制備方法，其特征在于，培養pH為 6.0〇6. 根據權利要求3所述解淀粉芽孢桿菌TWC2發酵液的制備方法，其特征在于，所述培養 基組成為:麥芽糖5g/L、果糖1 Og/L、蛋白胨1 Og/L、酵母浸出1 Og/L、氯化鈣1 g/L。
【專利摘要】本發明涉及微生物和發酵技術領域，尤其來說是一種解淀粉芽孢桿菌及其在防治甘蔗赤腐病的運用，一種解淀粉芽孢桿菌TWC2，于2015年10月19日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏編號為CGMCC？No.11515；本發明解淀粉芽孢桿菌TWC2分離自熱帶牧草臺灣草葉片，為甘蔗赤腐病的防治提供了一條環保、簡單、有效的途徑；本發明的解淀粉芽孢桿菌TWC2是一株具良好生防應用前景的菌株，因為該菌株是從植株表面分離獲得，與自然生態具有天然的和諧相融性，與化學農藥相比，對土壤生態無毒副作用、無殘留，因此，在病害的生物防治實踐中具有潛在的商業開發和應用價值。CGMCC No. 1151520151019
【IPC分類】C12R1/07, A01N63/00, C12N1/20, A01P3/00
【公開號】CN105647829
【申請號】
【發明人】梁艷瓊, 吳偉懷, 雷照鳴, 賀春萍, 李銳, 鄭肖蘭, 易克賢, 習金根, 鄭金龍, 唐文
【申請人】中國熱帶農業科學院環境與植物保護研究所
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年1月20日