腑之精的功能體現。源于父母的先天之精在胚 胎的形成、發育及分化過程中的功能與機體干細胞的作用有相通之處。首先，兩者在胚胎的 形成發育和成長過程中具有重要作用。先天之精是生命產生的本原，是構成胚胎的原始物 質，具有促進機體的發育成長及人體臟腑器官的形成作用。先天之精所化生先天元氣的不 斷激發促進生命的形成、發育生長和臟腑組織器官四肢百骸的分化形成。胚胎干細胞可分 化為神經細胞、心肌細胞、軟骨細胞等各種細胞類型，并進一步形成機體的全身組織器官， 是干細胞分化全能性的體現。其次，兩者在調節機體生殖繁衍功能方面也有相似之處。稟受 與父母的生殖之精，在生命個體形成及繁衍方面發揮著關鍵性作用，攜帶著父母的遺傳信 息。人體繁衍生命的功能主要是由生殖干細胞完成的，當然胚胎干細胞也起著一定的作用， 因為兩者都攜帶著來自于父母的遺傳信息。再次，兩者均具有調控生長發育和機體損傷修 復的功能，以保證機體正常的正常生命活動順利進行。來源于父母的先天之精可以化生先 天之氣，與后天之氣共同組成人體的一身之氣。人體之氣具有激發和促進精血津液的生成 及運行輸布，促進人體生長發育和繁衍生殖功能，以保證人體生命活動的正常程序性運行。 因此，先天元氣的推動作用是機體生長發育功能的前提。由此可見，在機體實現損傷修復和 調控生長發育方面，又有許多相通之處。以基因調節為主的干細胞的增殖分化與先天之精 的生長發育功能相關，干細胞在人體分布十分廣泛，調控著人體的生長發育和疾病的發展 過程，是順利完成機體生長發育繁衍、損傷修復功能和組織更新的前提。人體生長發育出現 不正常是由成體干細胞生理功能得不到正常發揮引起的。
[0058]中醫認為："精血同源"是指精血之間可以互相轉化。如《類經》曰："腎之精液入心 化赤而為血。"明代孫一奎在《赤水玄珠·調經門》提及："夫血者，水谷之精氣也，和調五臟， 灑陳六腑，男子化而為精，女人上為乳汁，下為經水。"清代醫家張貓在《張氏醫通·諸血門》 中提到，"氣不耗，歸精于腎而為精，精不泄，歸精于肝而為清血。"以上記載充分說明精血同 源，相互資生互相轉化。肝能夠儲藏血液、調節血量以供人體的需要，血液也可化生為精、滋 養腎精，使腎精不斷充盛。肝血的化生有賴于腎中精氣的推動；腎精的充盛有賴于肝中血液 的滋養。精足血自旺，血旺精自足，精血相互滋生，共同生存。在病理上，腎精不足則可導致 肝血的虧虛；同樣，肝血不足則可導致腎精的虧虛，最后肝腎精血兩虛。
[0059] 腫瘤為外邪、飲食不節、七情內傷、臟腑功能失調等多種病因均可使機體陰陽平衡 受到破壞，經絡氣血的正常運行出現障礙，導致氣滯血瘀，痰凝、毒蘊、濕聚等，形成腫瘤。中 醫學認為，腫瘤的形成與正氣不足，無力抗邪，外邪進入引起臟腑功能紊亂，進一步導致病 理產物的積聚有著密切的關系。《內經》提出了"正氣存內，邪不可干，邪之所湊，其氣必虛" 這一精辟的論述。《靈樞》說："故邪之所在，皆為不足。"《外科醫案匯編》亦說："正虛則為 巖。"《外科啟玄》曰："癌發四十歲以上，血虧氣衰。"故癌癥的發生與機體正氣不足，臟腑失 調及氣血失榮密切相關。
[0060] 炎癥導致細胞惡性轉化以及腫瘤的起始均為機體"正氣不足而邪氣盤踞，正虛邪 實，正不勝邪"的結果。扶正祛邪，恢復平衡一直是防治腫瘤的基本原則。不同于化療藥對病 灶和正常細胞都有殺滅作用，中藥及其復方制劑通過扶助正氣進一步抗御和祛除病邪，不 僅能殺滅腫瘤細胞，而且還能增強和調動機體細胞自身的抗癌應答能力，具有毒副作用小 的優勢。
[0061] 當歸為傘形科植物當歸的干燥根，為甘肅的道地藥材之一，味甘辛，性溫，具有補 血活血、扶正祛邪等功效，品質優良。當歸通過補血達到血旺，血旺則精足，從而起到維持干 細胞遺傳穩定性的作用，進一步達到預防干細胞惡化的作用。現代研究發現，當歸含有有機 酸、揮發油、多糖和黃酮等成分，其中當歸多糖(ASP)是當歸抗腫瘤的主要活性成分之一。大 量研究發現當歸多糖可通過多種途徑調控造血支持、免疫促進、腫瘤抑制、各種因素刺激導 致的細胞損傷及表型轉變等較為廣泛的藥理作用。ASP體外作用于⑶34+⑶38-LSC，具有明 顯的增殖抑制作用，能有效抑制LSC自我更新能力，誘導其衰老。ASP能阻止K562細胞由G0/ G1期向S，G2+M移行。
[0062] 本發明通過篩選的ASP最佳濃度（50 yg/mL)對炎性因子誘導組進行干預，倒置相 差顯微鏡下觀察發現，IL-6+ASP組細胞為成纖維樣，排列較整齊；IL-6+TGF-m+ASP組細胞 為成纖維樣，排列分布較均勻。激光共聚焦下觀察發現IL-6+ASP組細胞微絲排列整齊，偶見 散亂分布，IL-6+TGF-m+ASP組細胞微絲平行排列，部分散亂分布。
[0063]增殖曲線結果顯示，與IL-6組細胞比較，ASP+IL-6組生長速度顯著緩慢，差異有統 計學意義(P<〇.〇5)，與IL-6+TGF-m組比較，IL-6+TGF-m+ASP組生長速度明顯減慢。蛋白 印跡結果表明，與IL-6組比較，IL-6+ASP組Ras、Bcl-2、STAT3及P-STAT3蛋白表達均下調， Bax和P53蛋白表達升高，差異有統計學意義；與IL-6+TGF-m組比較，IL-6+TGF-m+ASP組 Ras、Bcl-2、STAT3及P-STAT3蛋白表達均下調，Bax和P53蛋白表達升高，差異有統計學意義。 說明ASP可能通過抑制STAT3信號通路的活化，從而起到預防炎性微環境中干細胞遺傳穩定 性變化的作用。
[0064] 綜上所述，50 yg/mL ASP干預炎性因子誘導組后，炎性微環境對BMSCs的增殖促進 作用受到抑制，表明ASP具有維持炎性微環境BMSCs遺傳穩定性的作用，其中的可能機制為 ASP提高了炎性微環境中BMSCs的損傷耐受性，或引起了炎性微環境中的一成分改變，或調 控相關信號傳導通路保護BMSCs。本研究結果顯示，ASP可抑制炎性微環境中Ras、Bcl-2、 STAT3及P-STAT3蛋白表達，抑制炎性微環境引起的BMSCs蛋白表達的異常改變；中醫理論認 為，ASP的這種調控作用，與當歸能夠補血活血，達到血旺精足有關，起到了"扶正祛邪"的作 用，并將干細胞的增殖分化維持在正常平衡狀態，從而起到預防干細胞發生惡性表型轉變 的作用。
[0065]最后應說明的是：以上所述僅為本發明的優選實施例而已，并不用于限制本發明， 盡管參照前述實施例對本發明進行了詳細的說明，對于本領域的技術人員來說，其依然可 以對前述各實施例所記載的技術方案進行修改，或者對其中部分技術特征進行等同替換。 凡在本發明的精神和原則之內，所作的任何修改、等同替換、改進等，均應包含在本發明的 保護范圍之內。
【主權項】
1. 當歸多糖在骨髓間質干細胞中的應用。2. 根據權利要求1所述的應用，其特征在于:所述應用為當歸多糖對炎性因子微環境下 的骨髓間充質干細胞的增殖和遺傳穩定性的保護作用。3. 根據權利要求2所述的應用，其特征在于:所述炎性因子為IL-6和/或TGF-βΙ。4. 根據權利要求2或3所述的應用，其特征在于:所述應用為當歸多糖抑制炎性因子微 環境下的骨髓間充質干細胞的遺傳穩定性變化。5. 根據權利要求2或3所述的應用，其特征在于:所述應用為當歸多糖抑制炎性因子微 環境下的骨髓間充質干細胞的增殖。6. 根據權利要求1-5任一所述的應用，其特征在于:所述當歸多糖的濃度為50μg/ml。7. 根據權利要求6任一所述的應用，其特征在于:所述當歸多糖的制備方法為:將當歸 先醇提，然后水提得到水提液;將水提液去除蛋白后，醇沉得到當歸多糖。8. 根據權利要求7所述的應用，其特征在于:所述醇提是用90-95%乙醇提取兩次，每次 0.5-1.5h，加液重量分別為6倍和4倍。9. 根據權利要求7所述的應用，其特征在于:所述水提是用水煎法提取3次，每次0.5-1.511，加水重量分別為8、6、6倍。10. 根據權利要求7所述的應用，其特征在于:所述醇沉是在去除蛋白質的水提液中加 入95%乙醇至醇體積濃度為75-80%，低溫靜置22-26h后，再次用相同的方法進行沉淀； 作為優選，在醇沉后還包括減壓干燥的步驟。
【專利摘要】本發明提供當歸多糖在骨髓間質干細胞中的應用，具體來說是提供當歸多糖在炎性因子微環境中對骨髓間質干細胞增殖的影響和遺傳穩定性的保護作用。本發明利用IL-6和TGF-β1建立腫瘤相關炎性微環境，觀察IL-6、TGF-β1單獨或聯合對BMSCs的形態、微絲、增殖及增殖基因Bcl-2、癌基因Ras蛋白表達的變化；分析并探討當歸主要有效成分-當歸多糖(<i>Angelica？sinensis？</i>polysaccharide,？ASP)等對腫瘤相關炎性微環境中BMSCs增殖的影響及遺傳穩定性保護作用。
【IPC分類】C12N5/0775
【公開號】CN105647858
【申請號】
【發明人】劉永琦, 張月梅, 何建新, 伍志偉, 蘇韞, 駱亞莉, 武有朋
【申請人】甘肅中醫藥大學
【公開日】2016年6月8日
【申請日】2016年3月24日