性磁珠。
[0039] S3: l-5g的上述改性磁珠分散到lOOOmL的含有0.2M的碳酸鈉水溶液中，機械攪拌， 加入l-3g亞氨基二乙酸，反應2-4小時，用去離子水和乙醇清洗三次后干燥，得到除雜磁珠。 [0040]實施例2: -種免離心、雙磁珠法質粒DNA提取試劑盒提取方法，其包括除雜磁珠懸 浮液、提取磁珠懸浮液、細菌裂解液、結合緩沖液、清洗液和洗脫液六種組分，各組分的內容 如下：
[0041 ]除雜磁珠懸浮液:所述的除雜磁珠懸浮液包括4mg/mL除雜磁珠和第一分散液，其 中第一分散液組分如下：1.5M鹽酸，3M碳酸鉀，0.03M Tris-HCl緩沖液，0.15mg/mL RNA酶； 本案默認所用溶劑為去離子水。
[0042]除雜磁珠通過實施例1的方法制備而成；
[0043]提取磁珠懸浮液:提取磁珠懸浮液包括50mg/mL娃羥基磁珠和第二分散液，第二分 散液組分如下:0.2M氯化鈉，pH值設為5.0;
[0044] 細菌裂解液:0.8M的氫氧化鉀，0.18%十二烷基硫酸鈉(SDS)，0.01M乙二胺四乙酸 (EDTA)；
[0045] 結合緩沖液:0.03M尿素，0.12M醋酸鈉，0.4%的β-巰基乙醇，5.5M的鹽酸胍；
[0046] 清洗液:55 %異丙醇，1.2Μ異硫氰酸胍；
[0047] 洗脫液：〇.〇〇5M Tris-HCl緩沖液，0.002Μ EDTA;
[0048] 試劑盒的使用方法其包括如下步驟：
[0049]步驟1)菌液準備:取常規法培養過夜的細菌培養液1.5mL，轉移到48孔板中，并做 好記錄；
[0050] 步驟2)菌體裂解：向上述加入菌液的孔板中加入0.16mL細菌裂解液，將上述孔板 在500rpm下禍旋混合2min;
[0051] 步驟3)質粒復性：向上述孔板中的菌液中加入0.2mL的除雜磁珠懸浮液，蓋嚴孔板 硅膠片，上下輕柔翻轉3~5次，使除雜磁珠懸浮液均勾分散于菌液中，將孔板于500rpm下禍 旋2min;
[0052] 步驟4)去除菌體基因組和蛋白：漩渦結束后，磁性分離棄去黑色沉淀，保留澄清透 明菌液。
[0053]步驟5)質粒DNA結合:將菌液中加入lmL結合緩沖液以及0.05mL的提取磁珠懸浮 液，嚴蓋硅膠片，然后將孔板于lOOOrpm下漩渦混合4min，用磁板架至于孔板底部，磁性分 離，去除上清液。
[0054] 步驟6)清洗:每個孔位中加入0.6mL清洗緩沖液，將孔板于lOOOrpm下漩渦40s，磁 性分離，去除上層清液。在每個孔位中加入0.6mL 80 %乙醇水溶液，將孔板于9000rpm下漩 渦40s，磁性分離，去除上層清液，用80 %乙醇水溶液重復清洗一次。
[0055]步驟7)除醇和洗脫:將上述含有磁珠的孔板放入40 °C的真空干燥箱干燥8min，除 去乙醇，在每個孔位中加入0.08mL的洗脫液，lOOOrpm下漩渦lmin，磁性分離去除磁珠，孔板 洗脫液中即含有目標質粒DNA，將此含有質粒DNA的洗脫液轉移至PCR板中，-20°C下保存備 用。
[0056]實施例3: -種免離心、雙磁珠法質粒DNA提取試劑盒提取方法，其包括除雜磁珠懸 浮液、提取磁珠懸浮液、細菌裂解液、結合緩沖液、清洗液和洗脫液六種組分，各組分的內容 如下：
[0057]除雜磁珠懸浮液：除雜磁珠懸浮液包括5mg/mL除雜磁珠和第一分散液，第一分散 液組分如下：1.5M硝酸，2M醋酸鈉，0.025M Tris-HCl緩沖液，0. lmg/mL RNA酶；
[0058] 除雜磁珠通過實施例1的方法制備而成；
[0059] 提取磁珠懸浮液:提取磁珠懸浮液包括40mg/mL娃羥基磁珠和第二分散液，第二分 散液組分如下:0.3M氯化鈉，pH=6;
[0060] 細菌裂解液：1M的氫氧化鉀，0.25%十二烷基硫酸鈉（SDS)，0.015M乙二胺四乙酸 (EDTA)；
[0061 ] 結合緩沖液:0.01M尿素，0.08M醋酸鈉，0.3 %的β-巰基乙醇，6M的碘化鉀；
[0062] 清洗液:60%異丙醇，1Μ鹽酸胍；
[0063] 洗脫液：〇·〇1Μ Tris-HCl緩沖液，0.001M EDTA;
[0064] 試劑盒的使用方法其包括如下步驟：
[0065]步驟1)菌液準備：取常規法培養過夜的細菌培養液1.5mL，轉移到48孔板中，并做 好記錄；
[0066] 步驟2)菌體裂解：向上述加入菌液的孔板中加入0.16mL細菌裂解液，將上述孔板 在500rpm下禍旋混合3min;
[0067] 步驟3)質粒復性：向上述孔板中的菌液中加入0.24mL的除雜磁珠懸浮液，蓋嚴孔 板硅膠片，上下輕柔翻轉3~5次，使除雜磁珠懸浮液均勾分散于菌液中，將孔板于500rpm下 禍旋2min;
[0068] 步驟4)去除菌體基因組和蛋白：漩渦結束后，磁性分離棄去黑色沉淀，保留澄清透 明菌液。
[0069] 步驟5)質粒DNA結合:將菌液中加入1.2mL結合緩沖液以及0.06mL的提取磁珠懸浮 液，嚴蓋硅膠片，然后將孔板于1200rpm下漩渦混合5min，用磁板架至于孔板底部，磁性分 離，去除上清液。
[0070] 步驟6)清洗:每個孔位中加入0.7mL清洗緩沖液，將孔板于9000rpm下漩渦50s，磁 性分離，去除上清液。在每個孔位中加入0.8mL 75%乙醇水溶液，將孔板于lOOOrpm下漩渦 45s，磁性分離，去除上清液，用75 %乙醇水溶液重復清洗一次。
[0071] 步驟7)除醇和洗脫:將上述含有磁珠的孔板放入40 °C的真空干燥箱干燥7min，除 去乙醇，在每個孔位中加入0.08mL的洗脫液，SOOrpm下漩渦lmin，磁性分離去除磁珠，孔板 洗脫液中即含有目標質粒DNA，將此含有質粒DNA的洗脫液轉移至PCR板中，-20°C下保存備 用。
[0072] 實施例4: 一種免離心、雙磁珠法質粒DNA提取試劑盒提取方法，其包括除雜磁珠懸 浮液、提取磁珠懸浮液、細菌裂解液、結合緩沖液、清洗液和洗脫液六種組分，各組分的內容 如下：
[0073]除雜磁珠懸浮液：除雜磁珠懸浮液包括6mg/mL除雜磁珠和第一分散液，第一分散 液組分如下：1.5M鹽酸，3.5M醋酸鉀，0.04M Tris-HCl緩沖液，0.2mg/mL RNA酶；
[0074]除雜磁珠通過實施例1的方法制備而成；
[0075]提取磁珠懸浮液:提取磁珠懸浮液包括40mg/mL娃羥基磁珠和第二分散液，第二分 散液組分如下:0.35M氯化鈉，pH值為7;
[0076] 細菌裂解液:0.8M的氫氧化鉀，0.25%十二烷基硫酸鈉(SDS)，0.02M乙二胺四乙酸 (EDTA)；
[0077] 結合緩沖液:0.01M尿素，0.08M醋酸鈉，0.2 %的β-巰基乙醇，4.5M的異硫氰酸胍； [0078] 清洗液:50 %異丙醇，1.2Μ鹽酸胍；
[0079]洗脫液：〇.〇〇8M Tris-HCl緩沖液，0.003Μ EDTA;
[0080]試劑盒提取方法其包括如下步驟：
[00811步驟1)菌液準備:取常規法培養過夜的細菌培養液1.5mL，轉移到48孔板中，并做 好記錄；
[0082] 步驟2)菌體裂解：向上述加入菌液的孔板中加入0.15mL細菌裂解液，將上述孔板 在500rpm下禍旋混合3min;
[0083] 步驟3)質粒復性：向上述孔板中的菌液中加入0.3mL的除雜磁珠懸浮液，蓋嚴孔板 硅膠片，上下輕柔翻轉3~5次，使除雜磁珠懸浮液均勾分散于菌液中，將孔板于500rpm下禍 旋2min;
[0084] 步驟4)去除菌體基因組和蛋白：漩渦結束后，磁性分離棄去黑色沉淀，保留澄清透 明菌液。
[0085] 步驟5)質粒DNA結合:將菌液中加入0.8mL結合緩沖液以及0.06mL的提取磁珠懸浮 液，嚴蓋硅膠片，然后將孔板于900rpm下漩渦混合5min，用磁板架至于孔板底部，磁性分離， 去除上清液。
[0086] 步驟6)清洗:每個孔位中加入0.65mL清洗緩沖液，將孔板于SOOrpm下漩渦30s，磁 性分離，去除上清液。在每個孔位中加入0.68mL 70 %乙醇水溶液，將孔板于1 OOOrpm下漩渦 30s，磁性分離，去除上清液，用70 %乙醇水溶液重復清洗一次。
[0087]步驟7)除醇和洗脫:將上述含有磁珠的孔板放入40 °C的真空干燥箱干燥8min，除 去乙醇，在每個孔位中加入0.08mL的洗脫液，950rpm下漩渦lmin，磁性分離去除磁珠，孔板 洗脫液中即含有目標質粒DNA，將此含有質粒DNA的洗脫液轉移至PCR板中，-20°C下保存備 用。
[0088]實施例5: -種免離心、雙磁珠法質粒DNA提取試劑盒提取方法，其包括除雜磁珠懸 浮液、提取磁珠懸浮液、細菌裂解液、結合緩沖液、清洗液和洗脫液六種組分，各組分的內容 如下：
[0089]除雜磁珠懸浮液：除雜磁珠懸浮液包括6mg/mL除雜磁珠和第一分散液，第一分散 液組分如下：1