降低組織和/或器官移植性免疫排斥的方法及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明屬于生物技術領域。具體地，本發明涉及一種抑制組織或器官移植后免疫 排斥反應的方法和藥物組合物。
【背景技術】
[0002] 反應免疫體系中各成員（抗原、免疫分子、免疫細胞、免疫組織）之間相互依賴，相 互影響和相互作用的一種免疫學現象。免疫反應可分為非特異性免疫反應和特異性免疫反 應。非特異性免疫構成人體防衛功能的第一道防線，并協同和參與特異性免疫反應。特異 性免疫反應可表現為正常的生理反應，異常的病理反應W及免疫耐受。按介導效應反應免 疫介質的不同，特異性免疫反應又可分為致敏T細胞介導的細胞免疫反應和抗體介導的體 液免疫反應。
[0003] 當病原體或異物侵入人體后，激化人體內的淋己細胞產生體液免疫和細胞免疫。 表現為免疫細胞分裂繁殖，產生淋己因子，合成并分泌抗體，也可表現為免疫耐受性、超敏 反應、移植排斥等。B淋己細胞通過產生針對外來抗原的免疫球蛋白抗體實施體液免疫。送 些抗體包括IgMJ曲、IgGJ姐和IgA五種。一般說來，感染早期先產生IgM,然后出現IgG, 送一時間順序有助于區別近期感染和既往感染。如可W推測甲肝病毒或己肝病毒核必抗原 IgM抗體陽性者的感染發生在6個月W內。IgA抗體可對黏膜表面的病原體產生中和作用， 而I姐常常涉及過敏反應和對寄生蟲感染的免疫。
[0004] T淋己細胞是免疫系統中不可或缺的調節細胞。細胞表面具有CD4+標記的T淋己 細胞可通過與細胞的直接結合，或分泌能促進細胞增殖的細胞素（cytokine)來激活B淋己 細胞、單核細胞和其他T細胞，從而促進免疫反應。表面具有CD8+的細胞毒性T細胞可溶解 帶有外來蛋白質的細胞或病毒，同樣，送類細胞也能通過抑制效應細胞的活性來調控免疫。
[0005] 移植免疫是指在組織移植或器官移植中，受者接受供者的移植物后，受者的免疫 系統與供者的移植物相互作用而發生的免疫應答。
[0006] 免疫排斥是指機體對移植物（異體細胞、組織或器官）通過特異性免疫應答使其 破壞的過程。一般是指移植術后，受者可識別移植物抗原并產生應答，移植物中免疫細胞 也可識別受者抗原組織并產生應答。在同種異體移植中，排斥反應有兩種基本類型：宿主 抗移植物反應化OSt versus graft reaction, HVGR)和移植物抗宿主反應（graft versus host reaction, GVHR)，臨床最多見的是前者。
[0007] 受者進行同種異體組織或器官移植后，外來的組織或器官等移植物作為一種"異 己成分"被受者免疫系統識別，后者發起針對移植物的攻擊、破壞和清除，送種免疫學反應 就是移植排斥反應。
[0008] 器官移植已成為治療多種終末期疾病的有效手段，但也面臨若干亟待解決的難 題。目前臨床上主要從嚴格選擇供者、抑制受者免疫應答、誘導移植耐受W及加強移植后的 免疫監測等來防治移植排斥反應發生。送些非特異性的免疫抑制治療方案雖然對防治急性 排斥反應有較好效果，但對防治慢性排斥并無明顯療效。此外，非特異性免疫抑制劑的服 用同時也直接導致了對正常免疫系統的破壞，從而造成服用免疫抑制劑的移植術后患者時 時刻刻面臨人為的免疫力低下的危險境況，送不但對其健康本身有著很大的威脅，高昂的 免疫抑制劑費用更是器官移植術后患者沉重的經濟負擔。
[0009] 因此，在供器官嚴重不足、臨床器官移植排斥治療方案又不能確保少數能得到供 器官的移植受者及移植物長期存活的情況下，如何在控制急性排斥反應的同時有效防治 慢性排斥，提高受者及移植物長期存活和受者生活質量，是器官移植面臨的巨大問題。故本 領域迫切需要開發一種不影響患者本身免疫力的改善術后免疫排斥的方法。
【發明內容】
[0010] 本發明提供了一種通過降低供體組織相容性抗原免疫原性從而改善移植免疫排 斥的方法及其應用。
[0011] 本發明第一方面，提供了 一種主要組織相容性復合物（major histocompatibility complex, MHC)基因或其蛋白的抑制劑的用途，用于（a)制備治療組 織和/或器官移植性免疫排斥的藥物組合物；和/或化）制備降低組織和/或器官移植供 體主要組織相容性復合物基因表達量的藥物組合物。
[0012] 在另一優選例中，所述的組織和/或器官包括在體的、和/或離體的。
[0013] 在另一優選例中，所述的主要組織相容性復合物基因或其蛋白來源于哺乳動物， 較佳地，來源于人、鼠或兔；更佳地，當來源于人時，所述的主要組織相容性復合物為人類白 細胞抗原（Human Leuko巧te Antigen, HLA)。
[0014] 在另一優選例中，所述的組織和/或器官包括肝臟、腎臟、必臟、肺、脾臟、胸腺、膜 臟、胃、乳腺、宮頸、口腔、咽、食道、小腸、大腸、血管、軟骨、骨、淋己組織、腦、脊髓、腦神經、 脊神經、植物性神經、鼻腔、咽、喉、氣管、支氣管、頸、性腺、輸尿管、膀脫、尿道；較佳地，包括 肝臟、腎臟、必臟、肺。
[0015] 在另一優選例中，所述的主要組織相容性復合物為人類白細胞抗原化Uman leukocyte antigen, HLA)基因。
[0016] 在另一優選例中，所述的主要組織相容性復合物包括其基因全長序列或其cDNA 序列。
[0017] 在另一優選例中，所述的主要組織相容性復合物的編碼序列如SEQ ID NO. :3所示 (大鼠）。
[0018] 在另一優選例中，所述的主要組織相容性復合物的編碼序列如SEQ ID NO. :8、11、 14所示（人）。
[0019] 在另一優選例中，所述的主要組織相容性復合物基因或其蛋白的抑制劑包括基因 的反義核酸、microRNA、或抗體。
[0020] 在另一優選例中，所述的主要組織相容性復合物基因或其蛋白的抑制劑為主要組 織相容性復合物基因的SiRNA或shRNA。
[002。 在另一優選例中，所述的siRNA序列如SEQ ID NO. :4-5所示（小鼠）。
[0022] 在另一優選例中，所述的SiRNA序列如沈Q ID NO. :9-10、12-13、15-16所示（人）。
[0023] 在另一優選例中，所述的藥物組合物包括作為活性成分的主要組織相容性復合物 基因或其蛋白的抑制劑，和藥學上可接受的載體。
[0024] 在另一優選例中，所述的藥物組合物的劑型包括：
[00巧]片劑、膠囊劑、粉劑、丸劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液、混懸液、乳劑、混懸劑、注射液、粉 針劑。
[0026] 在另一優選例中，所述的藥物組合物的劑型還包括噴霧劑、氣霧劑、粉霧劑、揮發 性液體、外用溶液劑、洗劑、德淋劑、搔劑、己布膏劑、膏藥、橡膠膏劑、軟膏劑、硬膏劑、糊劑、 滴眼劑、滴鼻劑、眼用軟膏劑、含漱劑、舌下片劑或栓劑。
[0027] 在另一優選例中，所述的劑型為注射劑，較佳地，為靜脈注射劑、腹腔注射劑。
[0028] 本發明第二方面，提供了一種治療組織和/或器官移植性免疫排斥；和/或降低 組織和/或器官移植供體主要組織相容性復合物表達量的藥物組合物，所述的藥物組合物 包括作為活性成分的主要組織相容性復合物基因或其蛋白的抑制劑，和藥學上可接受的載 體；較佳地，所述的藥物組合物為對離體的待移植組織和/或器官進行預處理從而降低待 移植組織和/或器官免疫原性的的預處理液。
[0029] 在另一優選例中，所述的抑制劑為主要組織相容性復合物的siRNA。
[0030] 在另一優選例中，所述的藥物組合物還包括非特異性免疫抑制劑。
[0031] 在另一優選例中，所述的非特異性免疫抑制劑包括環抱素、雷帕霉素、他克莫司、 霉酪酸醋、咪哇立賓、環磯醜胺。
[0032] 本發明第H方面，提供了一種體外降低待移植組織和/或器官免疫原性的方法， 包括步驟，采用含有主要組織相容性復合物基因或其蛋白抑制劑的預處理液對離體的待移 植組織和/或器官進行預處理，從而降低離體的待移植組織和/或器官的免疫原性。
[0033] 本發明第四方面，提供了一種降低移植供體-受體非匹配組織相容性抗原的方 法，包括步驟：
[0034] (a)對移植供體和受體的組織相容性抗原的匹配程度進行檢測；
[0035] 化）篩選出在（a)中所檢測獲得的高表達的非匹配組織相容性抗原；
[0036] (C)針對化）中所獲得的高表達的組織相容性抗原，制備特異性抑制所述高表達 的組織相容性抗原的抑制劑；
[0037] (d)將（C)中所述的抑巧驚U施用于供體和/或受體。
[0038] 在另一優選例中，所述的抑制劑為非匹配組織相容性抗原編碼序列的siRNA。
[0039] 在另一優選例中，所述的施用包括在移植前施用于供體和/或受體，和/或在移植 后施用于受體。
[0040] 在另一優選例中，所述的移植前包括術前1周維持，較佳地，為術前48小時維持。
[0041] 在另一優選例中，所述的移植后包括術后1周維持，較佳地，為術后48小時維持。
[0042] 在另一優選例中，所述的施用為注射施用。
[0043] 應理解，在本發明范圍內中，本發明的上述各技術特征和在下文（如實施例）中具 體描述的各技術特征之間都可W互相組合，從而構成新的或優選的技術方案。限于篇幅，在 此不再一一累述。
【附圖說明】
[0044] 圖1顯示了血清、肝臟、T細胞、肺組織中anti-M肥-I -SiRNA的表達水平。從 圖1可W看出，anti-MHC- I -SiRNA的表達