- I -SiRNA的實驗組外周血中造血 干/祖細胞數量比對照組（未注射anti-Mffi：- I -SiRNA的實驗組）少，每微升血液中有 0. 80-2. 50個，結果表明anti-MHC- I -SiRNA對器官移植免疫排斥反應有抑制效果。
[0153] 5. anti-M肥-I -SiRNA對腎臟移植大鼠的細胞因子比-2R的影響
[0154] 利用Real-time PCR檢測注射anti-M肥-I -SiRNA的實驗組和對照組（未注射 anti-MHC- I -SiRNA的實驗組）血清中IL-2R的含量。具體操作步驟如實施例2所述，不 同的是，檢測的是細胞因子IL-2R的結果。
[01巧]Real-time PCR檢測表明，注射anti-M肥-I -SiRNA血清中IL-2R的含量比對照 組少。一般，T細胞激活后可釋出IL-2R，在急性排斥和病毒感染時IL-2R的血清含量升高， W巨細胞病毒感染時增高最明顯。結果表明，anti-MHC- I -SiRNA降低了免疫排斥的炎性 反應，對器官移植免疫排斥反應有抑制效果。
[0156] 實施例 4.特異性載體 anti-HLA-A-siRNA、anti-HLA-B-siRNA、 anti-HLA-DR-siRNA的構建及應用
[0157] 利用SiRNA技術使供體受體不匹配的HLA-A、HLA-B、HLA-DR等位基因表達降低，從 而抗原抗體不結合，不產生免疫應答反應。
[0158] 1. HLA-A、HLA-B、HLA-DR 基因的 S iRNA 質粒構建
[0159] 針對 HLA-A、HLA-B、HLA-DR 的 cDNA 序列，分別設計 SiRNA :
[0160] 選擇HLA-A (在美國國立圖書館的GE肥BANK數據庫檢索的序列號為U41057)起始 密碼下游 345bp 處 TTCTCACACCATCCAGATGATGT (沈Q ID NO. :8)作為祀序列。
[0161] SiRNA 的祀序列：TTCTCACACCATCCAGATGATGT (沈Q ID NO. : 8)
[016引 anti-HLA-A-siRNA 的序列：
[0163] 正義鏈：5'-CUCACACCAUCCAGAUGAUUU-3'（沈Q ID NO. : 9)
[0164] 反義鏈：3'-UU GAGUGUGGUAGGUCUACUA-5'（SEQ ID NO. :10)
[0165] 選擇HLA-B (在美國國立圖書館的GE肥BANK數據庫檢索的序列號為L76931)起始 密碼下游 190bp 處 CACAGATCTCCAAGACCAACACA(SEQ ID NO. :11)作為祀序列。
[0166] SiRNA 的祀序列：CACAGATCTCCAAGACCAACACA(SEQ ID NO. :11)
[0167] anti-HLA-B-siRNA 的序列：
[016引 正義鏈：5'-CAGAUCUCCAAGACCAACAUU-3'（沈Q ID NO. :12)
[0169] 反義鏈：3'-UU GUCUAGAGGUUCUGGUUGU-5'（沈Q ID NO. :13)
[0170] 選擇HLA-DR(在美國國立圖書館的GE肥BANK數據庫檢索的序列號為M35730)起 始密碼下游 224bp 處 CAGACACAACTACCAGTTGGAGC (沈Q ID NO. :14)作為祀序列。
[0171] SiRNA 的祀序列：CAGACACAACTACCAGTTGGAGC (SEQ ID NO. : 14)
[0172] anti-HLA-DR-siRNA 的序列：
[0173] 正義鏈：5'-GACACAACUACCAGUUGGAUU-3'（沈Q ID NO. :15)
[0174] 反義鏈：3'-UU CUGUGUUGAUGGUCAACCU-5'（沈Q ID NO. :16)
[01巧]具體操作步驟如實施例1所述。不同的是，將分別針對HLA-A、HLA-B、HLA-DR基 因，設計 S iRNA 序列，ant i-HLA-A-S iRNA、ant i-HLA-B-S iRNA、ant i-HLA-DR-S iRNA。
[0176] 實施例 5.特異性載體 anti-HLA-A-siRNA、anti-HLA-B-siRNA、 ant i-HLA-DR-S iRNA對腎移植排斥的影響
[0177] 選取腎移植志愿者（16例），患者術后分別采用anti-HLA-A-siRNA (4例）、 anti-HLA-B-siRNA (4 例）、anti-HLA-DR-siRNA (4 例）、H聯（環抱菌素 A/ 普樂可復 + 硫哇 嘿嶺/親悉+潑尼松）免疫抑制劑（4例）方案預防排斥反應。排斥反應發生時則連續5d 靜脈滴注抗淋己細胞球蛋白（lOOmg/d)。最后對比分析腎移植志愿者術后2個月的早期排 斥反應。
[017引具體結果如表1所示。從表1可W看出，腎移植志愿者采用anti-HLA-A-siRNA、 anti-HLA-B-siRNA、anti-HLA-DR-siRNA作為免疫排斥抑制劑，均顯著降低了免疫排斥反 應。由此可見，特異性載體 anti-HLA-A-siRNA、anti-HLA-B-siRNA、anti-HLA-DR-siRNA 對 器官移植的免疫排斥反應有抑制效果。
[0179]表 1 特異性載體 anti-HLA-A-siRNA、anti-HLA-B-siRNA、anti-HLA-DR-siRNA 對腎 移植排斥反應率的影響
[0181] * 代表 f)<0. 05, ' ' 代表 f)<0.0 l。
[0182] 在本發明提及的所有文獻都在本申請中引用作為參考，就如同每一篇文獻被單獨 引用作為參考郝樣。此外應理解，在閱讀了本發明的上述講授內容之后，本領域技術人員可 W對本發明作各種改動或修改，送些等價形式同樣落于本申請所附權利要求書所限定的范 圍。
【主權項】
1. 主要組織相容性復合物（major histocompatibility complex，MHC)基因或其蛋白 的抑制劑的用途，其特征在于，用于（a)制備治療組織和/或器官移植性免疫排斥的藥物組 合物；和/或（b)制備降低組織和/或器官移植供體主要組織相容性復合物基因表達量的 藥物組合物。2. 如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的主要組織相容性復合物基因或其蛋 白來源于哺乳動物；較佳地，來源于人、鼠或兔；更佳地，當來源于人時，所述的主要組織相 容性復合物為人類白細胞抗原（Human Leukocyte Antigen，HLA)。3. 如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的主要組織相容性復合物基因或其蛋 白的抑制劑包括基因的反義核酸、microRNA、或其抗體。4. 如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥物組合物包括作為活性成分的主 要組織相容性復合物基因或其蛋白的抑制劑，和藥學上可接受的載體。5. 如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述的藥物組合物的劑型包括： 片劑、膠囊劑、粉劑、丸劑、顆粒劑、糖漿劑、溶液、混懸液、乳劑、混懸劑、注射液、粉針 劑。6. -種治療組織和/或器官移植性免疫排斥；和/或降低組織和/或器官移植供體主 要組織相容性復合物表達量的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物包括作為活性 成分的主要組織相容性復合物基因或其蛋白的抑制劑，和藥學上可接受的載體；較佳地，所 述的藥物組合物為對離體的待移植組織和/或器官進行預處理從而降低待移植組織和/或 器官免疫原性的的預處理液。7. 如權利要求6所述的藥物組合物，其特征在于，所述的藥物組合物還包括免疫抑制 劑。8. -種體外降低待移植組織和/或器官免疫原性的方法，其特征在于，包括步驟，采用 含有主要組織相容性復合物基因或其蛋白抑制劑的預處理液對離體的待移植組織和/或 器官進行預處理，從而降低離體的待移植組織和/或器官的免疫原性。9. 一種降低移植供體-受體非匹配組織相容性抗原的方法，其特征在于，包括步驟： (a) 對移植供體和受體的組織相容性抗原的匹配程度進行檢測； (b) 篩選出在（a)中所檢測獲得的高表達的非匹配組織相容性抗原； (c) 針對（b)中所獲得的高表達的組織相容性抗原，制備特異性抑制所述高表達的組 織相容性抗原的抑制劑； (d) 將（c)中所述的抑制劑施用于供體和/或受體。10. 如權利要求9所述的方法，其特征在于，所述的施用包括在移植前施用于供體和/ 或受體，和/或在移植后施用于受體。
【專利摘要】本發明公開了一種降低組織和/或器官移植性免疫排斥的方法及其應用，具體地，本發明提供了主要組織相容性復合物(major？histocompatibility？complex)基因或其蛋白的抑制劑的用途，用于(a)制備治療組織和/或器官移植性免疫排斥的藥物組合物；和/或(b)制備降低組織和/或器官移植供體主要組織相容性復合物表達量的藥物組合物。本發明打破了現有的僅以免疫抑制劑來降低免疫排斥的常規，有望開發為一種新的、副作用更少的對抗移植免疫排斥問題的新方法。在此基礎上，完成了本發明。
【IPC分類】A61P37/06, A61K39/395, A61K31/7088, A61K45/06
【公開號】CN105664154
【申請號】
【發明人】張辰宇
【申請人】江蘇命碼生物科技有限公司
【公開日】2016年6月15日
【申請日】2014年11月21日