專利名稱：用于轉基因擬南芥種苗原位篩培的裝置的制作方法
技術領域：
本實用新型屬于轉基因擬南芥的培育技術領域，特別涉及一種用于轉基因擬南芥 種苗原位篩培的裝置。
二背景技術：
擬南芥為植物科學研究的模式植物，將外源基因過量表達在擬南芥體內，已成為 人們研究基因功能的基本手段之一。蘸花法是獲得轉基因擬南芥的簡便方法之一，它不需 要通過組織培養的手段非常方便地獲得轉基因擬南芥T1代種子(Weigel D, Glazebrook J. 2002. Arabidopsis :A laboratory manual. Cold Spring Harbor Laboratory Press,New York.)。然而該方法篩選轉基因擬南芥T2代種子非常繁瑣，主要有如下缺點1)T2代種子 必須在無菌條件下的卡那霉素生長板上進行篩選。這一步對無菌操作要求較高，萬一不小 心污染了卡那霉素生長板，整個生長板擬南芥幼苗都不能使用。2)Τ2代種子在卡那霉素生 長板生長7天后，一般都要將抗性苗移栽到蛭石為生長介質生長杯中，有一部分苗會在移 栽這一步丟失。同時，這一步也會使幼苗需要較長的適應時間。因此，有必要提供一種篩選 和培養轉基因擬南芥T2代種子的新裝置。
三
實用新型內容發明目的針對上述技術缺陷，本實用新型提供一種用于轉基因擬南芥種苗原位 篩培的裝置，提高了轉基因擬南芥種苗的培育效率，利用該裝置的篩選體系移動方便、便于 操作、容易建立，且設備構建的成本低，尤其對篩培轉基因擬南芥T2代種子的更為方便。技術方案用于轉基因擬南芥種苗原位篩培的裝置，包括培養箱蓋板和箱體，所述 培養箱蓋板上設有培養孔陣列，培養孔內設有種苗管；所述箱體的側壁上設有遮光板，遮光 板與箱體活動連接。上述裝置還包括增氧泵和ρΗ調節裝置，增氧泵與PH調節裝置分別與箱體連接。上述培養箱蓋板表面的相鄰兩條邊上根據孔的位置設有坐標刻度。上述箱體的側壁由透光材料和不透光材料上下拼接而成，箱體四周透光材料側壁 的上下沿設有滑槽，遮光板在滑槽內滑動，透光材料側壁上設有刻度用以測量根系生長長 度；不透光材料側壁上設有增氧泵接口和PH調節裝置接口。上述種苗管為漏斗結構，高10mm，上底面直徑9mm，下底面直徑5mm。上述盛放營養液的容器尺寸為30 X 20 X 20cm。有益效果與傳統裝置和方法相比，新的裝置可以實現原位篩選，裝置與增氧泵和 PH調節裝置聯用，組成了完整的培養系統，可以根據所培養的植物生長要求實時調節培養 條件，培養箱蓋板上設有的坐標系可以方便實驗者記錄實驗細節，準確定位每個培養箱蓋 板上的種苗，箱體由兩種透光性能的材料組成，需要與箱體連接的設備均可以通過下層的 不透光材料進行連接，避免了接口處漏光對植物生長造成的不良影響，透光材料部分可以 方便實驗者觀察植物根系的生長，從而判斷植物的長勢，透光材料部分還附加有遮光板，遮光板有自己獨立滑槽，當實驗人員觀察完畢后，可以還原根系生長所需的黑暗環境，盡可能 少的減少光對植物的影響。
四
圖1原位篩培裝置；圖中培養箱蓋板1、箱體2、培養孔3、種苗管4、透光材料5、不 透光材料6、滑槽7、遮光板8、刻度9、增氧泵接口 10、pH調節裝置接口 11 ；圖2用原位篩培裝置篩選的30天苗齡擬南芥抗性苗體內At_L23a基因的表達； At-L23a基因的表達結果表明Real-time RT-PCR的試驗體系可靠、準確；用原位篩培裝置 獲得的30天苗齡擬南芥抗性苗體內At-L23a基因的表達。REU (相對表達單位)，為At_L23a 基因的拷貝數與看家基因At-ACT2拷貝數的比值再乘以100所得的數值。圖3用原位篩培裝置篩選的30天苗齡擬南芥抗性苗體內TFT7基因的表達；TFT7 基因(番茄的14-3-3基因)的表達結果表明，9株擬南芥抗性苗都含有轉化的外源基因，都 為陽性；用原位篩培裝置獲得的30天苗齡擬南芥抗性苗體內TFT7基因的表達。REU(相 對表達單位)，為TFT7基因的拷貝數與看家基因At-ACT2拷貝數的比值再乘以100所得的 數值。
五具體實施方式
下面結合具體實例，進一步闡述本發明。應理解，這些實施例僅用于對本發明進行 說明，并不構成對權利要求范圍的限制，本領域技術人員可以想到的其他替代手段，均在本 發明權利要求范圍內。實施例1 種苗管和用于原位篩培的培養箱裝置，種苗管為倒圓臺形，種苗管覆于盛放營養 液的培養箱裝置之上，其上設有若干圓形培養孔，種苗管可插入并固定在培養孔中；培養箱 底部有增氧泵和pH調節接口，可以接入增氧泵和pH調節計，以不斷向培養箱中營養液充氧 和實時調控營養液的PH值，這樣可以使擬南芥根系生長環境氧氣充足以及生長所需pH值 穩定；培養箱的四面由通明材質制成，每面上標有刻度并由遮光板擋住，當需要監測擬南芥 根系生長時，拉開遮光板就可以直接觀察擬南芥的根系生長情況并根據刻度讀出根系的長 度；用遮光板的目的是擬南芥根系如果長期見光則生長不好，那么平時用遮光板擋住光， 當需要觀察根系生長時，拉開遮光板就可以監測根系生長情況后，然后再關上遮光板。實施例2:用于轉基因擬南芥種苗原位篩培的裝置，包括培養箱蓋板1和箱體2，所述培養箱 蓋板1上設有培養孔3陣列，培養孔內設有種苗管4 ；所述箱體2的側壁上設有遮光板8，遮 光板與箱體活動連接。還包括增氧泵和PH調節裝置，增氧泵與pH調節裝置分別與箱體連 接。所述培養箱蓋板表面的相鄰兩條邊上根據孔的位置設有坐標刻度。所述箱體2的側壁 由透光材料5和不透光材料6上下拼接而成，箱體四周透光材料側壁的上下沿設有滑槽7， 遮光板8在滑槽7內滑動，透光材料側壁上設有刻度9用以測量根系生長長度；不透光材料 側壁上設有增氧泵接口 10和pH調節裝置接口 11。所述種苗管為漏斗結構，高10mm，上底 面直徑9mm，下底面直徑5mm。所述盛放營養液的容器尺寸為30 X 20 X 20cm。上述裝置在轉基因擬南芥種苗原位篩培中應用，方法為將加熱融解的含有
40. 6wt%瓊脂的MS培養基灌入種苗管，待冷卻后用薄膜蓋上放于4°C環境中，用于篩選的種 苗管含有50μ g mL—1卡那霉素；在播種之前，盛放營養液的箱體內裝滿MS培養液，并將種苗 管放于培養箱蓋板上的培養孔中；然后，將轉基因擬南芥種子播于種苗管表面；出苗后，具 有綠葉和長根的擬南芥為抗性苗，黃葉和短根的為非抗性苗；篩除非抗性苗，而含抗性苗的 種苗管繼續放置于裝滿MS培養液培養箱上培養，在此期間可隨時拉開遮光板，監測擬南芥 根系長度，以判斷轉基因擬南芥的生長情況，并開通增氧泵和PH調節計實時調控培養箱中 營養液的氧氣含量和PH值，使pH穩定在5. 8，直到轉基因擬南芥的開花結種。實施例3 Real-time RT_PCR(實時熒光定量 PCR)我們用自己建立的Real-time RT-PCR體系進行試驗分析(Xu and Shi,Annals of Botany, 2006,98 =965-974).所用的引物見表1。At_ACT2是擬南芥體內高度保守的看家基 因，我們將的它的表達水平定為100REU (相對表達單位)。為了驗證我們提取的總RNA是否 降解，我設計At-ACT2基因的兩對引物。另外，我們又選擇了 At-L23a (擬南芥體內另一個 高度保守的看家基因)作為對照。表IReal-time RT-PCR 所用的引物
權利要求用于轉基因擬南芥種苗原位篩培的裝置，其特征在于包括培養箱蓋板(1)和箱體(2)，所述培養箱蓋板(1)上設有培養孔(3)陣列，培養孔內設有種苗管(4)；所述箱體(2)的側壁上設有遮光板(8)，遮光板與箱體活動連接。
2.根據權利要求1所述的用于轉基因擬南芥種苗原位篩培的裝置，其特征在于還包括 增氧泵和PH調節裝置，增氧泵與pH調節裝置分別與箱體連接。
3.根據權利要求1所述的用于轉基因擬南芥種苗原位篩培的裝置，其特征在于所述培 養箱蓋板表面的相鄰兩條邊上根據孔的位置設有坐標刻度。
4.根據權利要求1所述的用于轉基因擬南芥種苗原位篩培的裝置，其特征在于所述箱 體(2)的側壁由透光材料(5)和不透光材料(6)上下拼接而成，箱體四周透光材料側壁的 上下沿設有滑槽(7)，遮光板(8)在滑槽(7)內滑動，透光材料側壁上設有刻度(9)用以測 量根系生長長度；不透光材料側壁上設有增氧泵接口(10)和PH調節裝置接口(11)。
5.根據權利要求1所述的用于轉基因擬南芥種苗原位篩培的裝置，其特征在于所述種 苗管為漏斗結構，高10mm，上底面直徑9mm，下底面直徑5mm。
6.根據權利要求1所述的用于轉基因擬南芥種苗原位篩培的裝置，其特征在于所述盛 放營養液的容器尺寸為30 X 20 X 20cm。
專利摘要用于轉基因擬南芥種苗原位篩培的裝置，包括培養箱蓋板和箱體，所述培養箱蓋板上設有培養孔陣列，培養孔內設有種苗管；所述箱體的側壁上設有遮光板，遮光板與箱體活動連接。與傳統裝置相比，新的裝置可以實現原位篩選，箱體由兩種透光性能的材料組成，需要與箱體連接的設備均可以通過下層的不透光材料進行連接，避免了接口處漏光對植物生長造成的不良影響，透光材料部分可以方便實驗者觀察植物根系的生長，從而判斷植物的長勢，透光材料部分還附加有遮光板，遮光板有自己獨立滑槽，當實驗人員觀察完畢后，可以還原根系生長所需的黑暗環境，盡可能少的減少光對植物的影響。
文檔編號A01G31/02GK201733690SQ2010202610
公開日2011年2月9日 申請日期2010年7月15日 優先權日2010年7月15日
發明者施衛明, 許衛鋒 申請人:中國科學院南京土壤研究所