用于治療和預防纖維化的、炎癥的和新血管生成的病癥的組合物和方法

專利名稱：：用于治療和預防纖維化的、炎癥的和新血管生成的病癥的組合物和方法
技術領域：
：本發明涉及使用免疫誘導部分來治療眼部紊亂的方法，該免疫誘導部分可與作為信號分子在人類和/或動物疾病中發^軍作用的生物活性脂質分子反應。本發明所考慮的特定的一類信號生物活性脂質是溶血脂質(lysolipids)。尤其優選的信號脫脂脂質為1J粦酸鞘氨醇(SIP)和多種溶血磷脂酸(LPA)。針對信號脂質的抗體、及其書于生物和變異體可通過單獨給予包含這種抗體的藥物癥且合物、或與其他治療劑和/或治療聯合用于治療和/或預防眼部疾病或紊亂。
背景技術：
：I.引言以下描述包括可用于理解本發明的信息。但并非承認任何這些信息是本申請發明的現有技術或與本申請發明相關，或者^f壬何明確或潛在引用的出版物是本申請發明的現有技術或甚至與本申請發明凈爭別相關。II.背景本發明涉及減少或減弱異常的新血管生成、血管生成、異常的纖維生成、纖維4b和瘢痕形成、以及炎癥和免疫反應的方法。在i午多疾病和病癥中都分別包括或共同包括這些過程。這些疾病或病癥可以是系統性(全身性的)的或者可以是相對局部的，例如位于皮膚或位于眼睛。A.目艮^卩疾病和病癥病理的或異常的血管生成/新血管生成、異常重塑、纖維化和瘢痕形成以及炎癥的發生與一見網膜和眼部缺血疾病例如年齡相關性黃斑變性(AMD)、糖尿病浮見網膜病變(DR)、早產兒^L網膜病變(ROP)以及其他發育障礙相關[Eichleretal.(2006),CurrPharmDes,vol12:2645-60],也是眼部感染和枳4成性損傷的結果[Ciullaetal.(2001),CurrOpinOphthalmol,vol12:442-9andDartetal(2003),Eye,vol17:886-92]。在多種臨床病癥中，病理性眼部血管生成是導致失明的主要原因。脈絡膜新生血管(CNV)發生在許多眼部疾病中，其中最普遍的是滲出型或濕型AMD。由于不斷增加的老齡化人口，AMD成為現代流行病并且是導致西方世界超過60歲患者失明的主要原因。盡管視力喪失的流行病是由AMD導致的，僅有少數治療(主要是基于抗VEGF的)能夠減纟爰AMD的發展，甚至更少的治療能夠逆轉視力喪失[BylsmaandGuymer(2005),ClinExpOptom,vol88:322-34，Gryziewicz(2005)，AdvDrugDelivRev,vol57:2092-8andLiuandRegillo(2004),CurrOpinOphthalmol,vol15:221-6.]。因;t匕，發現病理性新血管生成的新的治療方法是非常重要的。這里使用AMD僅僅是為了在描述涉及異常血管生成/新血管生成、異常重塑、纖維化和瘢痕形成、以及炎癥的眼部病癥中起解釋說明的目的，如在本文中公開和要求保護的其他的眼部疾病和紊亂中也發現這些病癥。AMD涉及年齡相關性病理性變化[Tezel，BoraandKaplan(2004),TrendsMolMed,vol10:417-20andZarbin(2004),ArchOphthalmol,122:598-614]。雖存在多種理i侖，j旦AMD準確的病原學與發病機理仍未完全了解。老化與累積的氧化損傷、玻璃膜的變厚以及玻璃疣的形成相關。氧化應激導致^L網膜色素上皮(RPE)細胞的損傷，而且在一些情況下，導致對"永絡血管的損傷[Zarbin(2004),ArchOphthalmol,vol122:598-614andGorinwa/.(1990),MolVis,,vol5:29]。RPE損傷可能引發玻璃膜和月永絡膜內的'f曼'l"生炎癥反應[Johnson"(2000)，ExpEyeRes，.vol70:441-9]。這種損傷和炎癥通過刺激CNV和萎縮而促進和增強一見網膜損傷[Zarbin(2004),ArchOphthalmol,vol122:598-614andWitmer"(2003)，ProgRetinEyeRes,vol22:1-29]。CNV導致可能^皮i人為是創傷的缺陷和滲漏血管(BV)[KentandSheridan(2003),MolVis,vol9:747-55]。創傷愈合由脈絡膜產生并穿過玻璃膜和RPE4曼入^見網膜下腔。創傷愈合反應的特征在于典型的早期炎癥反應、顯著的血管生成反應以及組織形成，所有涉及因素的終末期成熟隨后發生。因而，創傷重塑可以不可逆地損害光感受器和RPE，因此，i正實了佳:用4元血管生成治療以外的治療方法來治療CNV的需要[LaCour,KiilgaardandNissen(2002),DrugsAging，vol19:101-33.12]。由于CNV相關性纖維化、水胂和炎癥單獨或累積導致的正常視網膜和視網膜下結構的改變，引起AMD相關性視力喪失[TezelandKaplan(2004),TrendsMolMed，vol10:417-20andAmbatiWa/.(2003),SurvOphthalmol,vol48:257-93]。與、滲出4生AMD有關的多種細胞和細胞因子的相互作用使尋找有效的治療大大地復雜化。盡管通過抗VEGF治療可部分地控制CNV和水腫，而減輕瘢痕形成和炎癥的有效治療還未得到充分的闡明[BylsmaandGuymer(2005)，ClinExpOptom，vol88:322-34andPauleikhoff(2005),Retina,vol25:1065-84]。只要新血管復合物保持完好(如在用抗VEGF劑治療的患者的情況下所表現的)，^L網膜下纖維化和將來的一見力喪失的可能性持續存在。在滲出性AMD的治療中，抗VEGF-A治療代表最新的，重大的進展。然而，哌加他尼(PEGAPTANIB)(—種高親和性適體，選擇性抑制VEGF-A的165亞型)的III期—見力實-瞼，表明一^殳患者繼續喪失視力，且只有小比例患者獲得一見力[Gragoudas"a/.(2004)，NEnglJMed,vol351:2805-16]。通過抗體片斷蘭尼單抗(RANINIZUMAB)對VEGF-A的所有亞型的承卩制作用(完全的VEGF承P制作用)產生i午多更加顯著的歲文果[Brownetal.NEngMed,2006355:1432-44,Rosenfeldetal.NEngJMed2006355:1419-31]。2年的MARINA實驗和1年的ANCHOR實驗證明大約40%的患者獲得一些視力。盡管這些結果表明我們治療滲出性AMD的能力有重大的進步，但還表明60%的患者沒有得到視力改善。此夕卜，這些患者必須滿足嚴格限定的納入標準和排除標準。在更多的患者人群中的結果可能沒有如此有歲文(lessrobust)。還有一個已充分確定的需要就是開發其他的耙向CNV進展的其他步驟以及最終導致光感受器毀壞的過程的治療劑。首先，脈絡膜BV的生長涉及許多介質間而不只是VEGF的協調的(orchestrated)相互作用，這提供了調節或抑制整個過程的機會。第二，滲出性AMD是由血管和血管外成分組成的。血管成分包括血管內皮細月包(EC)、EC前體和周細胞。血管外成分，從體積上看是最大的成分，是由炎性細胞、神經膠質細胞和-現網膜色素上皮(RPE)細月包和成纖維細"包組成的。組織損害可由4壬一成分產生。當前的才元VEGF治療未闡明病理過程的這些其他方面。靶向與AMD相關的血管生成〉暴布級聯凌丈應(angiogeniccascade)中的其j也成分可為治療才是供更加有效和增歲文的途徑[SpaideRF(2006)，AmJOphthalmol,vol141:149-156]。l.眼部疾病中的炎癥有越來越多的證據表明炎癥，特別是巨噬細胞以及補體系統[Kleina/.(2005)，Science,vol308:385-9andHagemana/.(2005):ProcNatlAcadSciUSA,vol102:7227-32]在滲出性AMD的發病才幾理中發揮重要的作用。外科手術切離的脈絡膜新血管膜的組織病理學表明巨噬細月包幾乎到處存在[GrossniklausW(1994)，Ophthalmology,vol101:1099-111andGrossniklausd(2002),MolVis，vol8:119-26]。有封片(mounting)表明，巨噬細月包通過包4舌能損害細胞和降解玻璃膜的酶的分泌以及釋放促血管生成細胞因子的多種4乍用[OtaniW"/，(1999)，OphthalmolVisSci，vol40:1912-20andAmin，PuklinandFrank(1994),InvestOphthalmolVisSci,vol35:3178-88]，在介導CNV形成和增生中可能發揮活性作用[Grossniklaus"a/.(2003)，MolVis,vol8:119-26;Espinosa畫Heidmann,(2003),InvestOphthalmolVisSci,vol44:3586-92;Oha"/，(1999),InvestOphthalmolVisSci,vol40:1891-8;Cousins"a/,(2004)，ArchOphthalmol,vol122:1013-8;Forrester(2003)，NatMed，vol9:1350-1andTsutsumi(2003)，JLeukocBiol,vol74:25-32]。在損傷位置，巨噬細胞表現活化的^f鼓形態的標志，例如脫粒[Oh"a/，(1999),InvestOphthalmolVisSci,vol40:1891-8andTrautmann&fl/,(2000),JPathol,vol190:100-6]。因而認為，限制巨噬細胞滲透入脈絡膜新血管復合物中的分子可幫助限制CNV形成。2.目艮部疾病中的月7Jc絡月莫新血管生成和血管成熟血管生成是正常的創傷愈合的重要部分，因為它向炎癥細力包運專lT氧和營養物且幫助去除死細月包[Lingen(2001)，ArchPatholLabMed,vol125:67-71]。漸進的血管生成由兩個不同的步驟組成階段I:響應鄰近的刺激，血管EC遷移至毛細血管的末端，并在那里增殖且形成腔結構；以及階段II:修剪血管網絡并優化脈管系統[Guo"(2003)，AmJPathol,vol162:1083-93]。階,殳I:新血管生成。血管生成經常幫助創傷愈合。然而，新血管，當不受控制時，通常是有缺陷的且促進滲漏、出血和炎癥。通過耙向促血管生成GF來減少功能紊亂性和滲漏性BV，已證實具有一些延ICAMD進展的能力[Pauleikhoff(2005),Retina,vol25:1065-84.14andvanWijngaarden,CosterandWilliams(2005),JAMA,vol293:1509-13]。階^敬II:血管成熟和藥物脫每丈。完全的VEGF抑制作用似乎主要通過導致視網膜內和視網膜下水腫消退的抗滲透作用，而發揮其有利作用，因為實際的CNV損傷不會明顯恢復[Presentation.atAngiogenesis2006Meeting.2006.BascomPalmerEyeInstituteMiami:Florida]。沒有明顯的CNV恢復，可能部分是因為新形成的血管由于周細力包的覆蓋而成熟的結果。周細力包在血管組織的形成和維持中破壞了它們抑制血管生成的能力[BergersandSong(2005)，Neuro-oncol，vol7:452-64;YamagishiandImaizumi(2005),IntJTissueReact,vol27:125-35;Armulik,AbramssonandBetsholtz(2005)，CircRes,vol97:512-23;IshibashiWa/.(1995)，ArchOphthalmol,vol113:227-31]。對周細胞的聚集具有抑制作用的制劑可能破壞血管通道的形成和脈絡膜新血管通道的成熟，因而維持了它們對抗血管生成劑的敏感性。血管網絡的重塑涉及BV密度的調整以滿足營養需求[GarianoandGardner(2005),Nature,438:960-6]。BV成熟期對應于新血管發4軍作用^f旦還未獲得周細月包覆蓋的時期[Benjamin，HemoandKeshet(1998),Development,125:1591-8andGerhardtandBetsholtz(2003),CellTissueRes,2003,314:15-23]。這種延遲是重要的，它為根據視網膜或脈絡膜的營養需求形成脈管系統的微調提供了一個可塑性窗(windowofplasticity)。生物活性脂質1-磷酸鞘氨醇(S1P)、VEGF、PDGF、血管生成素(Ang)以及其他生長因子(GF)促進血管的生長并向幼稚血管聚集平滑力幾細力包(SMC)和周細胞，這促進了新生血管的重塑[AllendeandProia(2002)，BiochimBiophysActa,vol582:222-7;GarianoandGardner(2005),Nature,vol438:960-6;Grosskreutza/.(1999)，MicrovascRes，vol58:128-36;NishishitaandLin(2004),JCellBiochem，vol91:584-93andErberetal.(2004),FASEBJ,vol18:338-40.32]。周細胞很可能是在EC產生時由間充質前體細胞在原位分化產生的，或由動3永平滑力幾細力包遷移并去分化而產生，周細力包與EC密切相關并插入(ensheath)EC，導致總體血管的成熟與存活[Benjamin,HemoandKeshet(1998)，Development,vol125:1591-8]。近來的研究表明細胞表面運輸和細胞-細胞粘附分子N-鈣粘蛋白的活化涉及S1P、以及SIP受體[Paik"a/.(2004)，GenesDev，vol18:2392-403]。N-4丐粘蛋白對于EC、周細胞和壁細胞(其促進穩定的血管床的形成)間的相互作用是重要的[GerhardtandBetsholtz(2003),CellTissueRes，vol314:15-23]。S1P1基因的整體缺失導致壁細胞插入新生BV的異常，而壁細胞插入新生BV在胚胎發育過程中對BV的穩、定性是必需的[AllendeandProia(2002)，BiochimBiophysActa,vol1582:222畫7]。局部注射4十義于S1P1的siRNA抑制了腫瘤異種移植模型中血管的穩定性[Chae"a/.(2004)，JClinInvest,vol114:1082-9]。轉基因小鼠研究表明VEGF和PDGF-B促進了新BV的成熟和穩定[Guo"(2003),AmJPathol,162:1083-93andGarianoaridGardner(2005)，Nature,vol438:960-6.50]。VEGF上調Ang畫l(mRNA和蛋白質)[Asahara"a/.(1998),CircRes，vol83:233-40]。Ang-1通過周細胞在聚集和維持內皮周支持中發揮主要作用[[AsaharaW(1998)，CircRes,vol83:233-40]。VEGF的眼內注射促進了EC叢的周細胞覆蓋[Benjamin,HemoandKeshet(1998),Development,vol125:1591-8]。PDGF隱B擊夾失的小鼠胚胎擊夾少微血管周細胞，這導致水肺、微動脈瘤和致死性出血[Lindahle"/.(1997)，Science,vol277:242-5]。鼠科的產前研究表明血管床成熟的所有VEGF刺激和PDGF刺激需要額外的信號。以上述SIP的轉移活化為基礎，這種因子可以是SlP[Erber"a/.(2004),FASEBJ,vol18:338-40]。血管穩定和成熟與可塑性減少和不存在VEGF的衰退和其他GF的消退以及對于抗血管生成治療的抗性相關[ErberWa/.(2004)，FASEBJ，vol18:338-40andHughesandChan-Ling(2004)，InvestOphthalmolVisSci,vol45:2795-806]。BV對血管生成抑制劑的抗性是由最初穩定成熟血管的周細胞以及那些一經治療就聚集到未成熟的血管的那些細胞貝武予的[Erber"a/.(2004),FASEBJ,vol18:338-40]。在插入未成熟的EC后，周細月包表達^f呆護EC不受促細月包凋亡劑(pro-apoptoticagents)作用的4卜4嘗'〖生存活因子(Arg-1和，PDGF-B)。3.水腫和血管通透性CNV膜由有孔的血管EC組成(該有孔的血管EC趨向于將它們的血管內成分滲漏至周圍空間內)導致視網膜下出血、滲出液和積液[GerhardtandBetsholtz(2003),CellTissueRes,vol14:15-23]。多年來，CNV組織本身以及最近—見網膜內新血管生成暗示是與AMD相關的視敏度(visualacuity)下降的原因。然而，現在認為，由血管通透性(VP)的提高與隨后的血視網膜屏障(BRB)的分解而導致的黃斑水肺，在與AMD和其他眼部疾病相關的S見力喪失中發揮主要作用[HughesandChan-Ling(2004)，InvestOphthalmolVisSci，vol45:2795-806;FelinskiandAntonetti(2005),CurrEyeRes，vol30:949-57;JoussenWa/.(2003)，FASEBJ，vol17:76-8andStromW(2005),InvestOphthalmolVisSci，vol46:3855-8]。4.纖維化、纖維生成和瘢痕形成:規網膜下纖維化的形成導致對光感受器的不可逆的損傷和永久的視力喪失。只要新血管復合物保持完好，如在用抗VEGF劑治療患者的情況下所表現的，視網膜下纖維化和將來的視力喪失的可能性就持續存在。在最新的蘭尼單抗(RANINIZUMAB)的PRONTO研究中，發現那些喪失浮見力的患者是由于4見網膜下纖維化或RPE石皮裂而喪失一見力的[Presentation,atAngiogenesis2006Meeting.2006.BascomPalmerEyeInstituteMiami,Florida.]。可卩條^f氐成纟f纟,纟田月包滲透和膠原沉積程度的制劑可能是有價值的。成纖維細胞、特別是成力幾纖維細胞，是在響應細胞損傷和炎癥的瘢痕形成中的關4建性細月包成分[Tomasek"a/.(2002),NatRevMolCellBiol,vol3:349-63andViragandMurry(2003)，AmJPathol,vol163:2433-40]。成肌纖維細胞的膠原基因表達是重塑的標志并且是痕痕開J成戶斤'義、需的[Sunand\Veber(2000)，CardiovascRes，vol46:250-6andSunandWeber(1996),JMolCellCardiol,vol28:851-8]。SIP通過活化的成纖維細月包的遷移和增殖而促進創傷愈合，同時增力口了月交原的產生[Sun""/.(1994)，JBiolChem,vol269:16512-7]。由受損的細胞局部產生的SIP是與重塑和瘢痕形成相關的不適應的創傷愈合的原因。因此認為S1P抑制劑對于至少部分特征為異常的纖維生成或纖維化的疾病或病癥中是有用的。在本文中，"纖維生成"定義為成纖維細胞過度的活性或數量，而"纖維化"定義為成纖維細胞過度的活性或數量，這導致過多的或不適當的膠原生產和瘢痕形成，生理組織結構的破壞和/或基質不適當的收縮，如視網膜脫離或其他導致器官功能障礙的過程中的病理學表現。B.其他疾病或病癥S1P和LPA的生物活性4言號脂質的作用并不局限于眼部疾病和病癥。因為在許多過程中包括新血管生成、血管生成、異常的纖維生成、纖維化和瘢痕形成、以及炎癥和免疫反應中涉及生物脂質信號，認為這些生物活性脂質基于抗體的抑制劑在與一個或多個這些過考呈片目關的多種疾病和病癥中是有用的。這些疾病和病癥可以是系統寸生的(如系統性石更皮病)或局部^f立于一個或多個4爭定的才幾體部分或器官的(如皮膚、肺或眼睛)。C.生物活性信號脂質目前認為脂質和其衍生物是醫學研究中的重要靶標，而不只是細胞膜中簡單的結構成分或|3-氧化、糖酵解或其他代i射過程的能量來源。尤其是，一些生物活性脂質在動物與人體疾病中作為信號傳導介質而發揮重要的功能。盡管原生質膜脂質的大多數只起結構作用，而它們中的小部分參與延緩細胞外刺激進入細胞內。"脂質信號傳導，，是指任何的使用細胞膜脂質作為第二信使的多個細胞信號傳導途徑，也指脂質信號分子與其自身的特異受體的直接相互作用。脂質信號傳導途徑可被多種胞外刺激(從生長因子到炎癥細胞因子)活化，調節細胞的命運(fatedecision),例如細月包凋亡、分化和增殖。對于生物活性脂質信號傳導的研究是熱門的科學探究的領域，因為已鑒別出越來越多的生物活性脂質，并鑒別了它們的作用。生物活性脂質的實例包括類二十烷酸(包括大麻素、白細月包三烯、前列^^素、脂氧素、環氧二十^1三烯酸、以及異二十;^克酸類(異花生酸類，isoeicosanoids))、非二十烷酸類大麻素介質、石岸脂及其衍生物例如磷脂酸(PA)和^壽脂酰甘油酯(PG)、血小板活化因子(PAF)和心肌磷脂，以及溶血磷脂例如溶血磷脂酰膽^咸(LPC)和多種溶血磷脂酸(LPA)。生物活性的信號脂質介質還包括鞘脂，例如鞘磷脂、神經酰胺、神經酰胺-l-磷酸、鞘氨醇、磷酸膽堿鞘氨西事(sphingosylphosphorylcholine)、二氣革肖氛醇、l-石粦f臾二氛華肖氛西孚(二氫-SlP)以及l-磷酸鞘氨醇。鞘脂類及其衍生物表現為一組對重要的細胞過程具有多效作用的胞外和胞內信號分子。生物活性信號脂質的其他實例包括磷脂酰絲氨酸(PS)、磷脂酰肌醇(PI)、磷脂酰乙醇胺(PEA)、甘油二酯(DG)、石危苷脂、神經節苷脂以及腦苷酯。D.溶血脂質溶血磷脂(LPL)也稱作溶血脂質，是低分子量(通常小于大約500道爾頓)的脂質，它包含一個碳氫化合物骨架和包含磷酸基團的極性頭基團。一些溶血脂質是生物活性信號脂質。醫學上重要的生物活性溶血脂質的兩個特定實例是LPA(甘油骨架)和S1P(鞘氨基醇骨架)。下面給出了選擇的LPA、S1P、以及二氫S1P的結構。LPA^ft4)LPA(1S^LPA(1&茍IPA(1攻"LPA(1&C^SIP0ydc>S1PLPA不是一種分子體而是具有不同長度和飽和度的脂肪酸的內源結構變異體(或變體)的集合(Fujiwara"a/(2005)，JBiolChem,vol.280:35038-35050)。LPA的結構骨架來自以甘油為基礎的磷脂，例如卵磷脂(PC)或磷脂酸(PA)。在溶血鞘脂諸如SIP的情況下，缺少神經酰胺骨架的脂肪酸。S1P、二氫S1P(DHS1P)、以及磷酸月旦石威革肖氛酉孚(sphingosylphosphorylcholine)(SPC)的結才勾骨架是以來源于鞘磷脂的鞘氨醇為基礎的。LPA和S1P通過結合同類多^爭膜結構域G蛋白偶聯(GPCR)受體來調節多種細胞信號傳導途徑(ChunJ，RosenH(2006),CurrentPharmDes,vol.12:161-171andMoole腿rWH(1999),ExperimentalCellResearch,vol.253:230-238)。SIP受體分為SIP丄、S1P2、S1P3、S1P4和S1P5(以前為EDG國1、EDG畫5/AGR16、EDG-3、EDG畫6以及EDG-8)而LPA受體分為LPA、LPA2、LPA3(以前為EDG-2、EDG-4以及EDG-7)。這個家力矣的第四種LPA受體i人定為LPA(LPA4),并且也已經報道了這些溶血磷脂的其他公認的受體。E.l-磷酸鞘氨醇纟田月包^]亡(Maceykaa/.(2002)，BBA,vol1585:192-201andSpiegelS."a/.(2003),NatureReviewsMolecularCellBiology,vol4:397-407)。已經提出神經酰胺/鞘氨醇(CER/SPH)的水平與SIP之間的平衡4是供了一種可變調節才幾制(rheostatmechanism)，它決定了細胞是直接進入死亡途徑，還是保護細胞避免凋亡。可變調節枳i制的關4建調節酶是鞘氨醇激酶(SPHK)，它的作用是將促進死亡的生物活性信號脂質(CER/SPH)轉換為促進生長的S1P。SIP有兩種結果S1P可^皮S1P裂解酶降解，該酶將S1P裂解為^粦酸乙醇胺和十六醛，或者較為不常見的，S1P被S1P磷酸酶水解為SPH。SIP大量產生并儲存在血小板中，血小板包含高水平的SPHK而缺少用于S1P降解的酶。當血小板活化時，分泌S1P。此外，認為其4也細胞類型，例如肥大細胞也能夠分泌S1P。SIP—旦分泌就認為其以高濃度結合在載體蛋白例如血清白蛋白和脂蛋白上。發現S1P以高濃度存在于血漿中，已報道濃度在0.5-5pM的范圍內。然而也已暗示了S1P主要的細月包夕卜、細月包內活性(見，如，SpiegelS,KolesnickR(2002)，Leukemia,vol.16:1596-602;Suomalainen,etal(2005),AmJPathol,vol.166:773-81)。細胞表面SIP受體的廣泛表達允許SIP影響不同范圍的細胞反應，包括增殖、粘附、收縮、運動、形態發生、分化、以及存活。這種反應類型似乎耳又決于細月包和組織系統中SIP受體的重疊表達或不同的表達(distinctexpression)才莫式。此外，進來已闡明了SIP和生長因子信號通路(包括血小板衍生生長因子(PDGF)、血管內皮生長因子(VEGF)、轉化生長因子(3(TGFP)和石咸性成纖維生長因子(bFGF))之間的相互作用(參見例如Baudhuin，eta1(2004),FASEBJ，vol.18:341-3)。由于包括SIP的多種細胞過程的調節刈-于神經元信號傳導、血管緊張度、創傷愈合、免疫細胞運輸、復制、以及心血管功能具有特別的影響，其中認為改變S1P在這些系鄉克中的內源水平會產生有害的影響，引發多種病理生理病癥，包括癌癥、心力衰竭、眼部疾病和感染以及自身免疫性疾病。我們提出一種用于治療與AMD相關的CNV的潛在有效的方法是減少生物可利用的SIP的細力包外水平。申請人開發了一種鼠科的單克隆4元體(SPHINGOMAB，抗SIPmAb)，其對于SIP是特異的。SPHINGOMAB代表第一個成功制成的針對生物活性信號鞘脂靶標的單克隆抗體。SPHINGOMAB發揮分子海綿的作用，從胞外液體中選擇性地吸收S1P,降低了S1P的有效濃度。它在生物基質中以皮克摩爾的親和力(picomolaraffinity)選擇性i也結合并中和SIP。我們提出SPHINGOMAB將去除眼睛中成纖維細胞、周細胞、以及內皮、炎癥和免疫細月包重要的生長和存活因子，乂人而革巴向導致光感受器和視敏度喪失的多種AMD不適應的過程。同時靶向脈絡膜新血管反應的多種成分的治療具有比"單靶向"治療更有效的潛能。如在本文中使用的，"l-磷酸鞘氨醇"或"SIP"是指l-磷酸鞘氨醇[鞘氨醇(sphingene)-l-磷酸；D-赤-l-磷酸鞘氨醇；l-磷酸鞘氨醇(sphing-4-enine-l-phosphate);(E,2S,3R)畫2-氨基畫3-羥基-十/\烷_4_烯氧基]碌酸；CAS26993-30-6]及其變異體、SIP和DHSIP(二氫l-磷酸鞘氨醇[l-磷酸鞘氨醇；[(2S,3R)-2-氨基-3-羥基-十八氧]磷酸；D-赤-二氫-D-l-磷酸鞘氨醇；CAS19794-97-9]以及磷酸膽石咸鞘氨醇。S1P和LPA的變異體，如在本文中使用的，分別包括SIP和LPA的類似物和書亍生物，與母體分子(parentmolecule)相比，發揮相似的作用，或被認為發揮相似的作用。越來越多的證據表明SIP參與與滲出性AMD相關的不適應的一見網力莫重塑的早期和晚期階^殳。SIP具有顯著的非VEGF依賴的促血管生成的作用。S1P還刺激多種細胞類型包括成纖維細胞、EC、周細月包和炎癥細胞(參與;參出性AMD的多種不適應過程的相同的細胞)的遷移、增殖和存活。SIP與包括在滲出性AMD的發病枳j制中的VEGF、bFGF、PDGF以及其j也生長因子(GF)的產生和;舌化相關。最后，SIP可調節新生血管系統的成熟，該過程導致了乂于抗血管生成劑敏感性的喪失。抑制SIP的作用是滲出性AMD的有效治療方法，它可纟是供比單獨的抗VEGF方法重要的優勢或可與抗VEGF方法發4軍f辦同作用而作用于最終導致與AMD相關的—見力喪失的復雜過程和多個步驟。越來越多的證據表明SIP是炎癥事件中重要的調節因子[OliveraandRivera(2005)，JImmunol,vol.174:1153-8]。在凝固和炎癥事件后，活化的血小板、中性粒細胞、巨噬細胞以及肥大細月包作為SIP的豐富來源[Yatomi"a/.(2000)Blood,vol96:3431-8]。由于這些細胞是炎癥反應和組織損傷中的重要成分，SIP可通過控制炎癥纟田月包的功肯巨來^周節這些事寸牛[Tezel(2004),TrendsMolMed，vol10:417-20]。由肥大細胞釋放的SIP是在炎癥的實驗性動物模型中大多凄t反應的原、因[Jolly"a/.(2004),JExpMed，vol.199:959-70andJolly"a/.(2005)，Blood,vol.105:4736-42]。用SPHINGOMAB中和SIP可為限制有害的炎癥反應提供有效的新方法，而炎癥反應加劇了與AMD相關的CNV的眼部組織損害。多種證據表明S1P和受體的S1P補體在血管生成過程中發4軍主要的調節^(乍用[AllendeandProia(2002),BiochimBiophysActa,vol.1582:222-7;Spiegel(1993),J.LipidMed，vol.8:169-175andArgraves"(2004),JBiolChem,vol279:50580-90]。首先，SIP促進DNA合成與局部和骨髓衍生的血管EC向新血管生成的位點的趨化性運動，同時誘導與早期BV形成一致的多細胞結構的分4匕[Leeefa/.(1999),BiochemBiophysResCommun，vol264:743-325andAnnabi""/，(2003)，ExpHematology,vol.31:640-649]。第二，S1P通過活化SlPi和S1P3，以及SIP誘導的EC粘附連接裝置來促進血管EC的組裝和完整性的形成和維持[PaikWa/.(2004),GenesDev,vol18:2392-403andLee"(1999)，Cell,vol99:301-12]。針對這些SIP受體的反義寡核苷酸減少SIP誘導的血管EC的聚集和細月包屏障的完整性[English,"a/.(1999),JHematotherStemCellRes，vol8:627-34andLee"a/.(2001),MolCell,vol8:693-704]。第三，已闡明由SIPi秀導的毛細血管形成是比bFGF或VEGF更有歲文的促血管生成刺激[Wangfl/.(1999)，J.Biol.Chem,vol274:35343-50andLee"(1999)，BiochemBiophysResCommun,vol264:743-325]。最后，已表明SIP具有與VEGF、EGF、PDGF、bFGF和IL-8的協同作用以促進體內血管網絡的形成[Wang"a/.(1999)，J.Biol.Chem，vol274:35343-50]。SIP4黃向活化(trans-activate)EGF和VEGF2受體[Tanimoto,JinandBerk(2002),JBiolChem,vol277:42997-3001]而VEGF上調SIP受體[Igamshi"(2003),ProcNatlAcadSciUSA,vol100:10664-9]。用VEGF處理血管EC可明顯4吏S1P1表達上調，并增強S1P介導的導致一氧化氮合酶(eNOS)內皮亞型活化的信號通路[Leeetal.(2001)，MolCell,vol8:693-704andTanimoto，JinandBerk(2002),JBiolChem，vol277:42997-3001andIgarashiandMichel(2001),JBiolChem,vol276:36281-8]。eNOS的活性在不同的細胞反應和重要的血管功能包括抑制細胞凋亡、抑制血小板聚集和血管生成中發揮關鍵作用[Kwonetal.(2001)，JBiolChem,vol276:10627-33;Huang(2003)，CurrHypertensRep,vol5:473-80;Dantas,IgarashiMichel(2003),AmJPhysiolHeartCircPhysiol,vol284:H2045畫52;Rkitake(2002),ArteriosclerThrombVaseBiol,vol22:08-114andKimuraandEsumi(2003),ActaBiochimPol，vol50:49-59]。暴露于bFGF和SIP4尋至'J的血管纟吉沖勾比由單3蟲暴露于bFGF而得到的血管結構分化更明顯，表明SIP對于bFGF和VEGF發揮完全的活性可能是必需的[English"a/.(2000),FASEBJ，vol14:2255-65]。因此，SPHINGOMAB可通過中和協同促血管生成GF和乂人與CNV相關的炎癥細胞的代謝性應激過程中可能產生的過量的S1P,來減輕異常的BV生長。SPHINGOMAB不<又才中制SIP誘導的EC遷移/滲透和BV形成，而且還通過它對SIP的作用而中和bFGF和VEGFi秀導的血管生成。SPHINGOMAB由于它中和SIP的能力，導致經SIP的多效作用的多種GF的中和，比單一靶向治療具有更大的優勢。通過SPHINGOMAB的SIP的直接中和與VEGF和PDGF-B的間接中和可防止周細胞的聚集、BV成熟并且減緩對于抗血管生成藥物的抗性的形成。靶向周細胞，致在擴大或增強對于抗血管生成劑的易感性，它表現為在治療具有活動的CNV損傷的患者方面引人關注的長期治療方法并可促進血管復合物的萎縮[Erberetal.(2004),FASEBJ,vol18:338-40]。SIP幫助組織激動蛋白至皮質環中并加強月包內和細胞-基質的粘附[McVerryandGarcia(2005)，CellSignal,vol17:131-9andMcVenyandGarcia(2004),JCellBiochem，vol92:1075-85]。這些結構的變化與降低血管通透性相關[Hla(2004),SeminCellDevBiol,vol15:513-20]。已表明封閉SIP的功能增加了腎、肺系統和腫瘤中的血管通透性[LaMontagneWa/.(2006)，CancerRes,vol66:221-31;Sanchez"(2003),JBiolChem,vol278:47281-90andAwad"a/.(2006),AmJPhysiolRenalPhysiol,vol290:F1516-24]。然而，關于不同器官系統(例如腦和眼睛)中SIP的滲透性作用卻了解4艮少。腦和可能眼睛中的導管EC形成比肺動脈EC，并且4艮可能比腎和肺瘤EC更力口緊密的、對流體和溶質更不可滲透的屏障[SchnitzerWa/.(1994)，BiochemBiophysResCommun,vol199:11-19]。分4匕的屏障功能有助于形成明顯更多的焦點粘著復合體[Schnitzer"(1994)，BiochemBiophysResCommun,vol199:11-19]。才艮才居這些區另廿，SIP誘導的眼部血管通透性的變化可能比較沒有影響。VEGF和PDGF可破壞血視網膜屏障(BRB)的完整'性SPHINGOMAB中和VEGF和PDGF的SIP沖黃向活化的能力可i正明它在減輕與AMD相關的黃斑水肺的有效性[SanchezWa/.(2003)，JBiolChem,vol278:47281-90;Saishin&a/.(2003)，JCellPhysiol,vol195:241-8and\%iores(2000)，GenPharmacol,vol35:233-9]。轉基因小鼠過量表達VEGF表明在CNV的區域內發生BRB的分解，與在AMD和并唐尿病^L網月莫病變中所見到的類似[Vinores(2000),AdvExpMedBiol,vol476:129-38]。PDGF受體激酶的氺卩制劑減少了由前列腺素誘導的BRB分解所導致的滲漏[LindahlW(1997),Science,vol277:242扁5]。最后，如在本申"i青實施例中描述的，在鼠科的基質膠塞模型(Matrigelplugmodel)中所測定的，SPHINGOMAB減專5生物體內bFGF和VEGF的作用。SIP和成纖維細力包增殖及其4呆護細胞避免死亡成纖維細力包通過增加DNA合成來對SIP的處理作出反應；壽爭染鞘氨醇激酶1(sphKl)的成纖維細月包顯示細月包增殖增力口[HammerW(2004)，JCellBiochem，vol91:840-51]。與SIP對多種其他的成纖維細胞類型(Swiss3T3，肺和心臟)的作用相似，SlP可刺^t眼部成纖維細月包的增殖(以及隨后的分化)。填加SIP可直4妄保護成纖維細月包不發生凋亡，而sphKl的抑制劑促進細月包凋亡[Olivera(1999)，JCellBiol,vol147:545-58]。SIP阻止細月包色素C釋力文和隨后的半月光天冬酵的-舌^f匕[OliveraW(1999)，JCellBiol,vol147:545-58andICang"a/.(2004),CellDeathDiffer,vol11:1287-98]。已確定sphKl上調Akt，因jt匕i周節Bcl-2家力矣成員[Limayea/.(2005)，Blood,vol105:3169-77]并避免成纖維細l包凋亡。S1P和成纖維細胞遷移SIP活化包括Rho的信號系統，產生由Rho/Rac/Cdc42系統控制的收縮性肌動蛋白絲組裝，并導致細月包遷牙多的實際歲丈果[Radeff-HuangW(2004)，JCellBiochem，vol.92:949-66]。通過SIP對Rho和RhoGTPases的活化可能是眼部成纖維細胞遷移至創傷處的原因，并從而促進纖維化。SIP和成纖維細胞膠原的表達SIP促進靜態成纖維細胞分4匕為活性成肌纖維細胞，其在瘢痕形成中表現為月交原表達增強[Urataetal.(2005)，KobeJMedSci，vol51:17-27]。在成纖維纟田胞增殖和向瘢痕區域遷移的同時，成纖維細胞沉積形成一個主要由骨橋蛋白和纖連蛋白組成的臨時顆粒網全各[SunandWeber(2000),CardiovascRes,vol46:250-6]。當重塑進行時，臨時基質^皮吸收且形成月交原網絡[SunandWeber(2000),CardiovascRes,vol46:250-6]。我們已證實S1P促進成肌纖維產生膠原。TGFp，一種熟知的纖維化調節因子已表明上調多種促纖維化蛋白，將成纖維細胞轉化為成肌纖維細月包并可能通過SIP肌動蛋白刺激炎癥蛋白表達[SquiresW(2005)，JMolCellCardiol,vol39:699-707andButt,LaurentandBishop(1995),EurJCellBiol,vol68:330-5]。TIMP1(TGF(3刺j:敫的成纖維細月包向成月幾纖維細胞的分化中涉及的信號分子)的上調是由針對sphKl的siRNA去于閉的[Yamanaka"a/.JBiolChem.2004Dec24:279(52):53994一4001]，表明SPHINGOMAB可減輕TGFP的促纖維化作用，并且減輕S1P本身的纖維生成作用。通過S1P的中和最小化不適應的瘢痕形成可以是有益的并通過限制一見網l莫下纖維化的范圍和隨后的光感受器損害來阻止不可逆的視敏度喪失。F.溶血磷酸(LPA)早已經知道LPA是在真核細月包和原核細月包中石粦脂生物合成的前體，但近年來LPA才作為由活化的細胞、特別是血小板快速產生并釋放的信號分子，通過對特異細胞表面受體作用來影響把細胞(參見，例如，Moole謹rwa/.(2004),BioEssays，vol.26:870-881andvanLeewen"a/.(2003)，BiochemSocTrans,vol31:1209-1212)。除了在內質網中合成并加工為更加復雜的磷脂外，LPA可通過細月包活化后水解預先存在的石粦脂而產生；例如，sn-2位由于脫酰作用通常丟失脂肪酸殘基，僅留下sn-3羥基酯化為脂肪酸。此外，產生LPA的關4建酶，自分泌運動因子(溶血PLD/NPP2),可為致癌基因的產物，因為許多肺瘤種類上調自分泌運動因子(Brindley(2004)，JCellBiochem，vol.92:900-12)。已才艮道LPA在人體血漿和血清中的濃度，包括〃使用靈敏和特異的LC/MS方法測定的(Bakeretal.(2001),AnalBiochem，vol292:287-295)。例如，在允許置于25。C下1小時的新鮮制備的人體血清中，LPA的濃度評估為大約1.2pM,其中LPA類似物16:0、18:1、18:2、以及20:4為主要的種類。相似地，在允許置于25°C下1小時的新鮮制備的人體血漿中，LPA的濃度i平估為大約0.7pM,其中18:1、18:2是LPA主要的種類。LPA影響大范圍的生物反應，包括"i秀導細月包增殖、刺激細月包遷移和神經突回縮、關閉間隙連接、甚至趨化粘菌(Goetzl.wa/.(2002)，ScientificWorldJournal,vol2:324-338)。隨著越來越多的細胞體系才企-驗LPA應答性，關于LPA生物學的知識體系(bodyofknowledge)繼續增長。例如，已知除了刺激細胞生長和增殖外，LPA促進細胞拉伸和細胞表面纖連蛋白結合，這在創傷修復和再生中是重要過程(Moole腿r"a/.(2004),BioEssays,vol.26:870-881)。近來，已將抗細胞凋亡活性歸因于LPA,并且近來已才艮道過氧化物酶體增殖受體Y是LPA的受體或輩巴標(Simon"(2005)，JBiolChem，vol280:14656-14662)。近來，申請人已開發了針對LPA的多種單克隆抗體，如抗SIP抗體，抗LPA抗體可中和多種LPA并減輕它們的生物學和藥物學作用。對于眼部疾病和病癥的應用，可預期抗LPA抗體在以下過禾呈中發揮治療作用。CNV和BV成熟自分泌運動因子，一種分泌的負責產生LPA的溶血磷脂酶D，對于在發育過程中血管的形成是重要的[vanMeeteren"a/.(2006),MolCellBiol,vol26:5015-22]。》匕夕卜，不十包和LPA被認為是血管平滑肌細胞去分化誘導的主要貢獻者[Hayashia(2001),CircRes,vol89:251-8]。水腫和血管通透性LPA誘導小鼠體內的血漿滲出和組胺釋^:[Hashimotoetal.(2006),JPharmacolSci,vol100:82-7]。炎癥LPA作為炎癥調節介質在人體角膜上皮細胞中發揮作用[Zhang"a/(2006)，AmJPhysiol,June7]。LPA參與角膜創傷愈合[LiliomK"/(1998)，Am.J.Physiol，vol274:C1065-C1074]并刺;敫晶;)犬體纟且織中ROS的釋方文[Rao(2004),MolecularVisions,vol10:112-121]。LPA還可再活化兔角膜中的HSV-l[Martinaa/.(1999):MolecularVisions,vol5:36-42]。纖維化和瘢痕形成LPA在皮膚成纖維細胞中通過ERK依賴的途徑抑制TGFP介導的I型月交原mRNA穩定性的刺激[SatoW(2004),MatrixBiol,vol23:353-61]。jt匕夕卜，LPA具有一些通過刺5效膠原基因表達和成纖維細胞的增殖的直接的纖維生成作用[Chen，Wa/.(2006)FEBSLett.580(19):4737-45]。3.定義在詳細描述本發明之前，將對本發明上下文中使用的多個術語進行定義。除這些術語之外，如需要，在說明書中其他地方對其他術語進行定義。如果本文不另外定義，在本說明書中使用的技術術語將具有該領域公認的含意。"免疫誘導部分(或免疫原性部分，immune-derivedmoiety)，，是指任意的多克隆抗體或單克隆抗體或抗體片斷、變異體、或衍生物。"抗S1P抗體"或"與S1P反應的免疫誘導部分"是指任意的結合S1P的4元體或#元體書亍生分子(antibodyderivedmolecule)。"抗LPA抗體"或"與LPA反應的免疫誘導部分"是指任意的結合所有LPA或一個或多個LPA的抗體或抗體書t生分子。"生物活性脂質"是指脂質信號分子。通常，當生物活性脂質發揮其信號作用時，不存在于生物膜中，也就是說盡管這種脂質種類可存在于生物膜的一些位點(例如，細胞膜、細胞器膜等等)，當與生物膜結合時，它不是"生物活性脂質"而是"結構脂質"分子。生物活性脂質與結構脂質(如，膜結合磷脂)的區別在于它們介導胞外和/或胞內信號傳導并因而通過調節分化、遷移、增殖、分泌、存活、以及其他過程而參與控制多種類型細胞的功能。在體內，可在細胞外液中發現生物活性脂質，在那里它們可與其^f也分子，例如血清蛋白諸如白蛋白和脂蛋白復合，或以"自由"形式，例如，不與其他分子類型復合。作為胞外調節因子，一些生物活性脂質通過活化膜結合的離子通道或G蛋白偶聯受體來改變細胞信號傳導，然后又活化復雜的信號系統而導致細胞功能或細胞存活的改變。作為月包內調節因子，生物活性脂質可通過直4妄與月包內成分，例如酶和離子通道相互作用而發揮其作用。生物活性脂質的典型實例包括LPA和S1P。術語"治療劑，，是指一種制劑，能夠減輕血管生成和/或新血管生成，如CNV和BV成熟；與眼部疾病和病癥相關的或為其部分基礎病理學的水肺、血管通透性和纖維化、纖維生成和瘢痕形成。術語"聯合治療"是指治療方案，該方案包括提供至少兩種不同的治療以獲得必要的治療效果。例如，一種聯合治療可包括給予兩種或多種化學上不同的活性成分，例如，抗LPA抗體和抗S1P抗體。可替換地，聯合治療可包括給予與生物活性脂質反應的免疫誘導部分以及使用一種或多種其他化學治療制劑。眹合治療可^l換地包括與給予其他治療(例如放射治療和/或手術)一起而使用抗脂質抗體。另外，聯合治療可包括與一種或多種其他生物制劑(如，4元VEGF、TGFP、PDGF、或bFGF齊'J)一起鄉會予4元月旨質才元體。在使用兩種或多種化學上不同的活性成分的聯合治療的情況下，應理解為活性成分可能作為部分相同組分或不同組分給予。當作為分開的組分給予時，該組分包括不同活性成分的組合物，可在相同或不同時間、以相同方式或不同方式、4吏用相同^合藥方案或不同給藥方案，所有都根據特定的情況要求的并且由主治醫生確定。同樣地，當一種或多種抗脂質抗體類型，例如，抗LPA抗體，單獨或與一種或多種化學治療劑聯合，可與例如方文射和/或手術結合，可在手術或放射治療前或后給藥。"單一治療"是指基于給予一種治療上有效的化合物的治療方案，無i侖其是單次給藥還是隨時間多次給藥。根據本發明的"可取得專利"的組合物、方法、機器、或制造的制品(articleofmanufacture)是指在進4亍分析時該主題滿足所有的可取得專利的法定要求。例如，關于新穎性，非顯而易見性等等，如果后來的研究表明一項或多項片又利要求包括一個或多個不符合新穎性、非顯而易見性等的實施方式，該受"可取得專利"實施方式的定義限制的權利要求，特別排除非專利性的實施方式。同樣，這里所附權利要求應解釋為既提供了最大的合理的范圍又保護了它們的有效性。另外，從本申請提交或作為專利發行之時，如果可取得專利的一條或多條法定要求修改，或者用于評估是否滿足可取得專利的特定法定要求的標準發生改變，一項或多項所附;f又利要求的有效性得到質疑之時，在這些情況下，權利要求應這樣解釋(l)保護了它們的有效性并且(2)提供了最大的合理的解釋。術語"藥學上可接受的鹽類"是指保留了本發明的制劑和化合物的生物有效性和特性的鹽類且其并非是生物學上的或不需要的。在許多情況下，本發明的制劑和化合物能夠借助帶電基團例如，帶電氨基和/或羧基或與其類似的基團形成酸和/或石咸鹽。藥學上可"l妄受的酸加成鹽可由無機酸和有機酸制備，而藥學上可接受的石咸加成鹽可由無機堿和有機堿制備。關于藥學上可接受的鹽類的綜述(參見Berge,etal.(1977)J.Pharm.Sci.，vol.66，1畫19)。術語"分開的"、"純化的"、"分離的"等等，是指包含在樣品寸呆存管中的沖羊品的一個或多個組分凈皮或已經凈皮物理地M人管中存在的一個或多個其他樣品組分中去除，或在其中^皮稀釋。在分離或純化過程中可被去除或稀釋的樣品組分包括化學反應產物、未反應的化學成分、蛋白質、碳水化合物、脂質以及未結合的分子。本文中在多種情況下使用的術語"種類"，例如特定種類的化學治療劑。在每種情況下，該術語是指在特定情況下所提及的一類在化學上4皮此相同的一群分子。"特異地結合"和"特異的結合"等是指兩種分子間特異的、非隨才幾的相互作用，這種相互作用依賴于結構、疏水性/親水性、和/或靜電特性的存在，其允許分子間進行適合的化學或分子相互作用。這里，"穩定的"是指兩種分子間的相互作用(例如，抗LPA或抗SIP抗體與其耙標生物活性脂質的結合)，這種相互作用足夠強可保持這些分子用于所需的目的或處理。"受試者，，或"患者"是指通過用本發明的分子對其治療可以見歲文的動物。該動物可具有一種疾病或病癥、或具有患一種疾病或病癥的危險性或祐^人為具有或具有患一種疾病或病癥的危險'1"生，該疾病或病癥可用本發明的組合物和/或方法來治療。可4艮據本發明治療的動物包括脊推動物，其中諸如牛、犬、馬、貓、綿羊、豬、以及靈長類(包括人和非人靈長類)的哺乳動物為特別優選的實例。"治療有效量"(或"有效量")是指活性成分的量，例如根據本發明的制劑當給予受試者或患者時，足以使治療有效。因此，根據本發明的組合物的治療有效量的組成可由本領域中普通技術人員容易地確定。在眼部治療的情況下，"治療有效量"是產生與治療眼部疾病或病癥相關的一個或多個參lt(包4舌與眼部疾病或病癥相關的一個或多個基因的表達的增加或減少、細胞凋亡或其他細胞死亡^4圣的誘導、癥狀的臨床改善、異常的新血管生成或炎癥的減輕等等)的客觀的可測量到的變化。當然，治療上有效量將才艮據被治療的特定受試者和病癥、受^式者的體重和年齡、疾病病癥的嚴重程度、選擇的特定化合物、所要遵循的給藥方案、給藥的時間、給藥的方式等等而變化，所有這些可由本領域中普通技術人員容易地確定。可以i人為在聯合治療的情況下，特定活性成分的治療上的有效量的組成可與單一治療給予的活性成分的治療上的有效量的組成不同(即，仫使用一種化學分子作為活性成分的治療方案)。術語疾病或紊亂的"治療"或"處理"，包纟舌防止或避免疾病或紊亂(即使臨床癥狀不發展)；抑制疾病或紊亂(即阻止或減輕臨床病癥的發展；和/或緩解疾病或紊亂(即導致臨床病癥的消退)。正如理解的，并非在任何情況都可區分"阻止"和"減低"疾病或紊亂，因為最終誘導的一個事件或多個事件可能是未知的或潛伏的。因此，術語"預防"將理解為其構成一種包才舌"阻止"和"減輕"二者的"治療"。術語"治療"因此包4舌"預防"。術語"治療方案"是指使用化學治療藥物、放射治療、手術、基因治療、DNA疫苗禾口治療、包括siRNA治療的基于反義的治療抗血管形成治療、免疫治療、骨髓移植、適體和其他生物體例如抗體和抗體變異體(或變體)、誘騙受體以及其他基于蛋白質的治療來治療疾病或紊^L。
發明內容才艮據本發明，提供了通過給予藥物組合物用于治療眼部疾病或病癥的方法，該藥物組合物包括與生物活性脂質反應的免疫i秀導部分(如抗體)，為了減小有效濃度因此生物活性脂質完全或部分地抑制其引發不需要的效果。在一些實施例中，免疫誘導部分為單克隆抗體或片斷、變異體或其衍生物。在一些實施例中，免疫誘導部分可與溶血脂質，例如S1P或LPA反應。還提供用于減少或預防異常的纖維生成、纖維化或瘢痕形成；炎癥；或異常的新血管生成；調節眼部的外科手術和外傷創傷愈合反應；或用于減弱眼部免疫反應的方法。進一步提供了用于降低生物活性脂質的有效的眼部濃度或活性的方法。還提供了使用可與生物活性脂質(例如溶血脂質S1P或LPA)反應的免疫"i秀導部分治療石更皮病的方法。典型的生物活性脂質包括鞘脂類及其變異體，例如1-磷酸鞘氨醇(S1P)、鞘氨醇、磷酸膽堿鞘氨醇、二氫鞘氨醇。其他生物活性溶血脂質包括溶血磷酸酸(LPA)及其變異體。本發明的另一個方面涉及藥物組合物或獸藥組合物，包括給予眼部的那些組合物，該組合物包括載體和分離的免疫誘導部分，例如可與生物活性脂質反應的單克隆抗體或抗體片斷、變異體、或衍生物。優選的載體，特別是當該組合物意在人體內為了治療使用時，它包括藥學上可接受的那些載體。對于非人體的治療應用(例如，在伴生動物、家畜、魚類、或家禽的治療中)，可^f吏用獸醫上可接受的載體。才艮據本發明的免疫誘導部分的示例性給藥途徑，優選為作為治療組合物的一部分，包括系統(或全身性)給藥、非腸道給藥(例如，通過經靜脈、肌內、或皮下途徑的注射)、經皮膚、皮內或經粘膜給藥、眼內或眼周注射、粘膜或局部給藥或通過吸入給藥。在以下部分，將對本發明的這些方面和其他方面以及本發明的實施方式進4亍更力O詳纟田的i寸{侖。本專利申請包含至少一個彩色制圖。一旦要求和支付必要的費用時，可提供具有彩色附圖的本專利申請的拷貝。圖1:SPHINGOMAB減少眼部損傷中CNV和瘢痕形成。用SPHINGOMAB或同型匹配的非4爭異mAb治療小鼠。CNV損傷由玻璃膜的激光破裂誘導。(A)示出了來自每個治療組的用若丹明(rhodamine)和荒麻凝集素I(R.communisagglutininI)染色的用于顯示血管生成的損傷的圖和典型圖像，(B)示出了來自每個治療纟且的用曼力，氏三色法(Masson'sTrichrome)染色的用于顯示月交原瘢痕形成的損傷的圖和典型圖像。圖la示出了SPHINGOMAB在激光誘導的玻璃膜破裂后14天和28天顯著減弱了脈絡膜的新血管生成。圖lb示出了SPHINGOMAB在激光誘導的玻璃膜破裂后28天顯著降低了與CNV損傷相關的纖維化。圖2:通過i秀導HUVEC管的形成和遷移，SIP促進新血管生成，并通過SPHINGOMAB被減少。圖A:4妄種在基質膠且培育6小時以評^f介血管形成的HUVEC的顯樣t照片。圖B:在基質膠細胞侵染室(細胞培養小室)中，用1|liMSIP士SPHINGOMAB(lpg/ml)處理HUVEC6小時。遷移至基質月交膜的細胞數量以5個獨立的區域計凄t。圖3:SPHINGOMAB中和SIP、VEGF、bFGF誘導的新血管生成。A:來自基質膠栓子士GF的典型FITC染色的BV。B:SIP刺激EC滲透。C:來自由VEGF或bFGF刺激的基質月交栓子的相對熒光定量，作為新血管生成的指示。當用lmg/kg或25mg/kg的SPHINGOMAB系統性治療小鼠時，SIP、VEGF與bFGF的作用被抑制。圖4:SPHINGOMAB中和SIP刺激的瘢痕形成。成纖維細胞為血清饑J我的，然后用0、0.1、0.5或ljaMS1P+/-l|ug/mlSPHINGOMAB處理12-24小時。SIP刺激Swiss3T3成纖維細月包的增殖，如3H胸腺嘧咬核香摻入法測量的(A)，在劃痕實驗中(scratchassay),刺激了鼠心臟的成纖維細胞的遷移(B)，在來自表達月交原GFP的轉基因小鼠的分離的心臟成纖維細胞中膠原基因表達(相對熒光)(C)并且通過降低的細胞增殖和提高的a-SMA表達所測量的WI-38細胞分化為成肌纖維細胞(D);SPHINGOMAB中和了SIP的每種作用。SPHINGOMAB降低了永久性心肌梗塞的鼠類模型體內的血管周纖維化(E)。圖5.S1P促進了眼部上皮細胞和成纖維細力包轉〗匕為可收縮的、瘢痕組織形成的成肌纖維細胞。SIP對多種人體眼部細胞系的成肌纖維細胞轉化的作用進行了分析。發現S1P刺激人視網膜色素上皮細胞(圖5A)和人結膜成纖維細胞(圖5B)產生a平滑肌肌動蛋白(a-SMA;成肌纖維細胞標記)。這些凄t據第一次表明，SIP是促進眼部上皮細胞和成纖維細胞轉化為可收縮的產生瘢痕組織的成肌纖維細胞的因子之一。還才企測了S1P對于血纖維蛋白溶酶原活化劑的抑制劑(PAI-1)在人結膜成纖維細胞中的表達的效果。增加的PAI-1的表達與連4妾組織的蛋白水解的降解作用的減少相關并且在多種包括瘢痕形成增加的纖維化疾病中凈皮上調。如圖5C中所示，S1P促進了劑量依賴方式(dose-independentmanner)的PAI-1的表達。圖6:SPHINGOMAB降低了體內免疫細胞創傷滲透。對小鼠實施了Ml,手術后用鹽或25mg/kgSPHINGOMAB處理48小時，然后在第四天處死。SPHINGOMAB減少了巨p藍細月包(A)和月巴大細胞(B)滲透入創傷。數據表現為鹽處理數值的成倍降低。圖7:SPHINGOMAB對SIP高度特異。基于竟爭性EUSA的曲線圖表明與其他生物活性脂質相比，SPHINGOMAB對SIP的特異性。SPHINGOMAB表明與鞘氨醇(SPH)、SIP或溶血石舞酸(LPA)的直接代謝前體、與SIP在結構上和功能上相似的重要的胞外信號分子不發生交叉反應。SPHINGOMAB不識別其他結構上類似的脂質和代謝物，包括神經酰胺-l-磷酸(ClP)、二氫鞘氨醇(DH-SPH)、磷脂酰絲氨酸(PS)、石粦脂酰乙醇胺(PE)、或鞘石粦脂(SM)。SPHINGOMAB與二氬1-磷酸鞘氨醇(DH-S1P)發生交叉反應，與石粦酸膽》咸鞘氨醇(SPC)在相對小的程度上發生交叉反應。SPHINGOMAB對SIP的親和力(Kd)<100pM，遠高于大多凄t治療抗體，特別是其他分子海綿。具體實施方式1.化合物術語"免疫i秀導部分"包括抗體(Ab)或免疫^求蛋白(Ig),是指免疫球蛋白基因來源的、模擬或編碼的肽、多肽的任意形式，或能夠結合抗原或表位的這種肽或多肽的片斷[參見，如，Immunobiology,5thEdition,Janeway，Travers,Walport,Shiomchiked.(editors),GarlandPublishing(2001)]。在本發明中，該抗原是生物活性的脂質分子。抗體分子或免疫球蛋白為較大的糖蛋白分子，具有大約150kDa的分子量，通常由兩種不同類型的多肽《連組成。一種多肽鏈，稱為"重，，鏈(H)，大約為50kDa。另一個多肽，稱為"輕"鏈(L),大約為25kDa。每個免疫J求蛋白分子通常由兩條重《連和兩條輕4連組成。兩條重鏈通過二石克4建互相連4妄，二石JU建的凄t量在不同免疫球蛋白亞型的重鏈之間變化。每條輕鏈通過一個共價二碌u4定與一條重鏈連接。在任意給定的天然存在的抗體分子中，兩條重鏈和兩條輕鏈是同樣的，具有兩個同樣的抗原結合位點，并因此被稱為是二價的，即具有同時結合兩個相同分子的能力。來自任意脊推動物種的抗體分子的"輕"鏈可歸為基于其恒定區的氨基酸序列的兩種明顯不同的類型，K(k)和X(l)中的一種。輕鏈的兩種類型的比例在種與種間變^R:。作為舉例方式，k與l的比例的平均值在鼠中是20:1，在人中是2:1而在牛中是1:20。來自任意脊推動物種中的抗體分子的"重"鏈可歸為基于其恒定區的氨基酸序列的五種明顯不同的類型中的一種，稱為同種型。一些同種型具有多種亞型。免疫球蛋白的五種主要類型為免疫球蛋白M(IgM)、免疫王求蛋白D(IgD)、免疫^求蛋白G(IgG)、免疫球蛋白A(IgA)、以及免疫球蛋白E(IgE)。IgG是最豐富的同種型且具有多個亞型(在人類中IgGl、2、3和4)。Fc片斷和4交鏈區在不同的同種型抗體中有所不同，因而確定它們的功能特性。然而，域的整體組織在所有同種型中是類似的。術語"可變區，，是指抗體分子的N-端部分或其片斷。通常，四條鏈中的每一個在其氨基端部分具有有助于抗體結合位點的可變(V)區，且具有決定同種型的恒定(C)區。輕鏈通過許多非共價相互作用以及二石克4建與重鏈結合且抗體分子的每個臂中的重鏈和輕鏈的V區配對從而產生兩個相同的抗體結合位點。人們認為一些氨基酸殘基在輕鏈和重鏈的可變區之間形成一個界面[參見Kabat""/，(1991)，SequenceofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,NationalInstituteofHealth,Bethesda,Md.andClothiad(1985),J.Mol.Biol，vol186:651]。值得注意的是，變異性并非均勻地分布在抗體的可變區中，而是集中在三個部分，稱為"互補決定區，，(CDR)或"高變區，，，二者均存在于輕鏈和重鏈的可變區中。可變區的較高^f呆守部分稱為"框架區"(FR)。天然重鏈和輕鏈的可變區均包括由三個CDR連接的四個FR區。每條鏈中的CDR通過FR區、與來自另一條鏈的CDR緊密靠近地保持在一起，形成了抗體的抗原結合位點[參見Kabata/，(1991)，SequenceofProteinsofImmunologicalInterest,FifthEdition,NationalInstituteofHealth,Bethesda,Md.]。6CDR均有助于抗體分子對抗原的結合特性。然而，即使單個可變區(或^f又包含三個對抗原特異的CDR的一半Fv)具有識別和結合抗原的能力[參見Pluckthun(1994)，inThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,vol.113，RosenburgandMooreeds.,Springer-Verlag，NewYork,pp.269-315]。術語"恒定區"是指抗體重鏈或輕鏈的C-端區。通常，恒定區不直接參與抗體分子結合抗原的特性，但表現多種效應器功能，例如抗體參與抗體依賴的細胞毒性。這里，"效應器功能"是指通過Fc區和免疫系統蛋白之間的分子相互作用聚集的免疫細胞介導的抗體的不同生理步文應(如調理作用、細月包溶解、月巴大纟田月包、嗜堿性粒細胞和嗜酸性粒細力包脫粒，以及其他作用)。重鏈的同種型決定抗體的功能特性。它們不同的功能特性由重鏈的羧基部分所才是供，此處它們不與輕鏈結合。如在本文中使用的，"抗體片斷"是指完整抗體的一部分，包括抗原結合位點或完整抗體的可變區，其中該部分可無完整抗體的Fc區的重鏈恒定區(例如，CH2、CH3、以及CH4)。可4齊換地，重鏈恒定區(例如CH2、CH3以及CH4)部分可包括在"抗體片Fab'、F(ab')2、Fd以及Fv片斷；雙鏈抗體；三鏈抗體；單鏈抗體分子(sc-Fv);樣i型抗體、納米抗體以及由抗體片斷形成的多特異抗體。通過舉例方式，Fab片斷還包含輕鏈的恒定區和重鏈的第一恒定區(CH1)。術語"變異體(或變體)"是指與抗體的天然氨基酸序列至少有一個氨基酸殘基或修飾不同的氨基酸序列。天然的或親本的或野生型氨基酸序列是指在自然界中發現的抗體的氨基酸序列。抗體分子的"變異體(或變體)"包括，4旦不限制于，在輕鏈和/或重鏈的可變區或恒定區，包4舌高變區或CDR區、Fc區、Fab區、CHi區、CH2￡、CH3區以及4交鏈區中的變化。術語"特異的"是指抗體與其目標表位選擇性結合。抗體分子可通過在纟合定的環境下通過比4交抗體與所需抗原的結合和抗體與無關的抗原或相似抗原或抗原混合物的結合，而4全測抗體分子結合的特異性。優選地，才艮據本發明的抗體將缺少與無關抗原、甚至目標抗原的類似物的明顯結合。這里，術語"抗原"是指^^皮抗體分子或結合抗原的免疫i秀導部分識別并結合的分子。由抗體結合的抗原的特異部分稱為"表位"。"半抗原"是指在多數情況下，只有當與載體分子(例如，蛋白質、聚乙二醇(PEG)、膠體金、石圭^^等等)連接時才引起免疫反應(即像抗原發揮作用)的一種小分子。載體可以是自身也不引發免疫反應的物質。使用術語"抗體"是指其最廣泛的含義，并且包括單克隆、多克隆、多特異性(例如，雙特異的，其中抗體的每個臂可與不同的表位或相同或不同的抗原反應)、樣t型抗體、復共輒對配合物(heteroconjugate)、雙鏈抗體、三鏈抗體、嵌合抗體、和合成抗體，以及具有所需結合特性和/或生物學活性的特異結合抗原的抗體片斷。術語"單克隆抗體"(mAb)是指抗體、或相似抗體群，其由基本上同種的抗體群獲得，并且不能解釋為其要求通過任何特定的方法來制備抗體。例如，單克隆抗體可由雜交瘤細胞方法(首次由KohlerandMilstein(1975),Nature,vol256:495-497描述)、或重組DNA方法制4尋。術語"嵌合"抗體(或免疫球蛋白)是指一種包括重鏈和/或輕鏈分子，該重鏈和/或輕鏈與來源于一個特定種或屬于特定抗體類型或亞類的抗體中的相應序列相同或同源，該鏈的剩余部分與來源于另一種或屬于另一抗體類型或亞類的抗體、以及這種抗體的片斷(只要它們表現所需的生物活性)中的相應序列相同或同源[Cabillyef(1984),infra;Morrison"/.,Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.81:6851]。術語"人源化抗體"是指包含來自非人(如，鼠科)抗體以及人抗體序列的抗體形式。人源化抗體可包括保守的氨基酸的取代或來自相同或不同種的非天然的殘基，這不明顯改變它的結合和/或生物活性。這種抗體為嵌合抗體，包含來源于非人免疫球蛋白的最小序列。對于多凄t部分，人源化抗體為人免疫球蛋白(受者抗體)，其中來自受者的互補決定區(CDR)的殘基被來自非人種(供者抗體)例如小鼠、大鼠、駱駝、牛、羊或兔具有所需特性的CDR殘基取代。此外，人源化抗體可包括既不能在受者抗體也不能在引入的CDR或框架序列中發現的殘基。進行這些修飾以進一步改進和優化抗體的性能。因此，通常人源化抗體將包括至少一個，以及一方面兩個可變區的全部，其中與非人免疫球蛋白對應的全部高變環或高變環中的全部與全部FR區或基本上全部FR區為人免疫球蛋白序列。人源化抗體選擇性地還將包4舌免疫球蛋白恒定區(Fc)的至少一部分，或人免疫5求蛋白的至少一部分。參見，如，Cabillye/"/.,U.S.Pat.No.4，816，567;Cabilly"a/.，EuropeanPatentNo.0，125，023Bl;Boss"a/.，U.S.Pat.No.4,816，397;Boss"EuropeanPatentNo.0,120,694Bl;Neuberger,M.S."WO86/01533;Neuberger,M.S."<a/.,EuropeanPatentNo.0，194,276Bl;Winter，U.S.Pat.No.5,225,539;Winter,EuropeanPatentNo.0，239，400Bl;Padlan,E.A.a/.，EuropeanPatentApplicationNo.0,519,596Al;Queen&a/.(1989)Proc.Nat'lAcad.Sci.USA,vol86:10029-10033)。術語"雙特異抗體"是指具有與至少兩個不同的表位結合特性的抗體、或單克隆抗體。在一個實施方式中，表位來自相同的抗原。在另一個實施例中，表位來自兩個不同的抗原。制備只又特異抗體的方法在本領域是已知的。例如，雙特異抗體可使用兩種免疫3求蛋白的重鏈/輕鏈對的共表達而重組制備。可替換地，雙特異抗體可使用化學4定合而制備。雙特異抗體包括雙特異的抗體片斷。術語"復共軛對配合物抗體"是指兩個共〗介連^妄的抗體。這種抗體可使用合成蛋白化學中的已知方法，包括使用交聯劑制備。如本文中^f吏用的，術語"配合物"是指由一個或多個抗體片斷或與一個或多個聚合物分子結合的部分共Y介連接形成的分子。術語"生物活性的"是指能夠結合所需表位，并在某些方面發揮生物學作用的抗體或抗體片斷。生物學作用包括，4旦不局限于生長信號的調節、抗細胞凋亡信號的調節、細胞凋亡信號的調節、效應器功能級聯的調節、以及其他配體相互作用的調節。術語"重組DNA"是指表達由人設計、創造、或^f奮飾的核酸和基因產物。"重組"多肽或蛋白是通過重組DNA技術，例如由外源DNA結構(編碼所需的多肽或蛋白質)轉化的細胞制成的多肽或蛋白質。"合成"多肽或蛋白質是通過化學合成法制備而成的。術語"表達盒"是指能夠在與這種序列相容的宿主中，影響結構基因(即蛋白編碼基因，例如本發明的抗體)表達的核苷酸分子。表達盒包4舌至少一個與多肽編石馬序列，以及可選拷，i也，與其〗也序列例如轉錄終止信號，可4喿作地連4妾的啟動子。還可4吏用另外的影響表達必需的或有益的調節元件，例如增強子。因此，表達盒包括質粒、表達載體、重組病毒、任意形式的重組"棵露DNA"載體等等。2.應用本發明致力于使用一種或多種改變不需要的生物活性脂質、或其前體或^^射物的活性或濃度的一種或多種治療劑，治療或預防眼部疾病和病癥的《且合物和方法。本發明的治療方法和癥且合物通過改變特定的不需要的生物活性脂質的有效濃度，即完全的、相對的、有效的和/或可獲得的濃度和/或活性而起作用。降低生物活性脂質的有效濃度可被稱為"中和"靶標脂質或其不需要的作用，包括下游作用。這里，"不需要的"是指由于其在疾病過程中例如作為信號分子參與，而為不希望的生物活性脂質，或指當其過量時促成疾病的生物活性脂質的不希望的量。不希望^皮任何特定理論所束縛，i人為不適合的脂質例如S1P和/或LPA和/或它們的^R^射物或下游步文應器的濃度，可導致或促成多種眼部疾病和紊亂的形成。同樣，該組合物和方法可用于治療這些眼部疾病和紊《L,尤其是通過減少纟爭定目標脂質，例如S1P和/或LPA的有效體內濃度。特別地，認為本發明的組合物和方法在治療至少部分特征為異常的新血管生成、血管生成、纖維生成、纖維化、瘢痕形成、炎癥、以及免疫反應的眼部疾病中是有用的。下面對4艮據本發明4寺治療的多種類型的眼部疾病的實例進行描述。可以理解許多疾病和病癥的特征在于，至少部分地，在于多種病理作用(例如，病理的新血管生成和瘢痕形成)，并且本文提供的分類是為了描述方便并不限制本發明。與病理性新血管生成相關的缺血性^L網力莫病變和以一見網力莫外層的和或一見網膜下的膜形成為特4正的疾病缺血性視網膜病變(IR)是一組以受損的視網膜血流為特征的不同的紊亂。IR的實例包括糖尿病視網膜病變(DR)、早產兒視網膜病變(ROP)、鐮狀紅細胞視網膜病變以及視網膜靜脈閉塞癥。所有這些紊亂可與VEGF驅使的病理視網膜新血管生成的增殖(其最終導致眼內出血、視網膜外膜形成和牽拉性視網膜脫離)相關。原發性4見網膜外膜(ERM)，也稱為黃斑皺褶或玻璃紙樣一見網膜病變，可導致次于視網膜結構畸變的視力減弱。這些膜盡管進行了手術移除，有時也會復發，且有時與視網膜局部缺血相關。VEGF和其受體位于ERM。VEGF存在于與增生性糖尿病視網膜病變、增生性玻璃體視網膜病變以及黃斑皺褶相關的膜中，進一步說明這種細胞因子在缺血性視網膜疾病的血管生成中和在增生性玻璃體視網膜紊亂中的膜生長中發揮重要作用。此外，在ERM中在細胞上還鑒別出VEGF受體，VEGFR1和VEGFR2。這些數據表明VEGF可為自分泌和/或旁分泌刺激劑，其可促成有血管和無血管的ERM的發展。已描述了具有增生性視網膜疾病[Cassidyetal.(1998)，BrJOphthamol;vol82:181-85andFreybergeretal.(2000)，ExpClinEndocrinolDiabetes,vol108:106-109]的目艮中的PDGF和其受體[Robbinsetal.(1994)，InvestOphthalmolVisSci;vol35:3649-3663]。這些發現表明PDGF配體和受體在不同來源的增生性視網膜膜中廣泛存在并表明ERM發病4幾理中包4舌PDGF的自分泌和旁分泌刺激。如TGF染色和免疫反應所i兌明的，ERM的形成中涉及轉4b生長因子P(TGF-P)[Pournarasetal.(1998),KlinMonatsblAugenheikd,vol212:356-358]。此夕卜，TGF-(3受體II在糖尿病和PVR膜的ERM成肌纖維細胞中表達。這些結果說明在視網膜和ERM的多種細胞類型中產生的TGF-P，是治療PVR、糖尿病和二級ERM有吸引力的耙標。已報道增生性糖尿病浮見網膜病變(PDR)中的人玻璃體中的白細胞介素畫6(IL畫6)增力口[LaHeijetal.(2002)，AmJOphthal，134:367-375]且在一項研究中100%所研究的糖尿病ERM表達IL-6蛋白[Yamamotoetal.(2001)AmJOphthal，vol132:369-377]。已表明堿性成纖維生長因子(bFGF)的外源給藥誘導內皮細胞的增殖和VEGF表達[Stavrietal.(1995)，Circulation,vol92:11-14]。與這些7見察一致，在來自PDR患者的3皮璃體樣品中bFGF濃度增加[Sivalingametal.(1990),ArchOphthalmol,vol108:869-872andBoultonetal.(1997)，BrJOphthalmol,vol81:228-233]。ERM的形成中也涉及bFGF[Hueberetal.(1996),Int.Ophthalmol,vol20:345-350]，表明所研究的PDR膜10個中有8個為bFGF。此夕卜，這些工作者發現對相應受體FGFR1的陽性染色。也表明了在非血管原發性ERM中對bFGF的免疫反應。這些結果i兌明在有血管和無血管ERM的形成有bFGF[Haradaetal,(2006),ProginRetinalandEyeRes，vol25:149-164]。已4企觀'J至'JROP患-者血5青中bFGFi曾力口[Becerriletal.(2005)，Ophthalmology,vol112,2238]。確定S1P已知的多效作用及其與VEGF、bFGF、PDGF、TGF-(3和IL-6的相互作用，人們i人為結合、對抗、抑制SIP的作用或生產的制劑對于在視網膜缺血和以有血管或無血管ERM的形成為特征的后萃殳疾病中減輕病理性^L網膜新血管形成是有效的。其他至少相關性黃斑變性、角膜移植排斥、新血管性青光眼、隱形眼鏡過度磨損、角膜感染，包括單純性皰疹、帶狀皰疹和原蟲感染、翼狀胬肉葡萄膜炎、慢性視網膜脫離、激光損傷、鐮狀紅細胞視網膜病變、靜脈閉塞疾病、脈絡膜新血管生成、視網膜血管瘤增殖、以及原發性息肉狀月永全各月莫血管病變。增生性玻璃體碎見網膜病變(BVR)在自發性孔源性視網膜脫離后和損傷性視網膜脫離后觀察到PVR。它是視網膜脫離手術失敗的主要原因。其特征在于，在視網膜兩個面上、在后玻璃體表面和玻璃體基底上的細胞膜的生長和收縮。眼睛中這種過度的瘢痕組織形成可導致牽拉性視網膜脫離的形成，因此旨在抑制或阻止增生性玻璃體視網膜病變(PVR)的治療是處理一見網月莫脫離的邏輯原理。組織病理學上PVR的特4正為過度的月交原產生、^欠縮以及細月包增歹直[Michels,RetinalDetachment2ndEdition.WilkinsinCP,RiceTAEds,Complicatedtypesofretinaldetachment,pp641-771，MosbyStLouis1997]。在PVR膜中鑒別的細胞類型主要包括視網膜色素上皮細胞、成纖維細胞、巨噬細胞以及血管內皮細月包[JerdanJAetal.(1989),Ophthalmology,vol96:801-10andVidinovaetal.(2005),KlinMonatsblAugenheilkd;vol222:568-571]。這種過度的瘢痕反應的發病機理似乎是由許多細胞因子介導的，包括血小板衍生的生長因子(PDGF)、轉化生長因子(TGF)P、石咸性成纖維細胞生長因子(bFGF)、白細胞介素-6(IL-6)、白纟田胞介素-8(IL-8)[Nagineni"(2005),JCellPhysiol,vol203:35-43;LaHeij"a/(2002),AmJOphthalmol,134:367-75;Planck"(1992),CurrEyeRes;vol11:1031-9;Canataroglu"a/.(2005)OculImmunolInflamm;vol13:375-81andAndrews(1999)OphthalmolVisSci;vol40:2683-9]。這些細月包因子的才中制，fe口果及時給予，可幫助防止PVR的發展或限制其嚴重性[Akiyama"a/(2006)，JCellPhysiol,vol207:407-12andZhengY"(2003)，JpnJOphthalmolm,vol47:158-65]。1-磷酸鞘氨醇(SIP)是具有多效作用的生物活性溶血脂質。它是促血管生成、促炎癥(刺激巨噬細胞和肥大細胞的聚集)以及促纖維化(刺激瘢痕形成)的。SIP通常刺激細胞增殖和遷移且為抗細月包凋亡的。SIP通過其與多種細月包因子和生長因子相互作用來達到這些生物學上的多種功能。已表明通過單克隆抗體(SPHINGOMAB)對SIP的抑制阻礙血管內皮生長因子(VEGF)、bFGF、IL-6和IL陽8的功能[VisentinBWa/.(2006),CancerCell,vol9:1-14]。S1P與SlPi受體的結合還可增加PDGF產生；因此結合SIP的制劑祐j人為也可減少PDGF的產生[MilstienandSpifgel(2006),CancerCell,vol9:148-150]。如在下面實例中所示，已表明在體外SIP將人RPE細胞轉化為與在PVR中見到的類型相似的成肌纖維細胞樣的表型。已給定最終在PVR中見到的過度瘢痕形成的病理生理學以及SIP只于這些相同的重要介導因子的已知作用，人們認為結合、對抗、或抑制SIP的作用或生產的制劑對于減輕或最小化PVR的形成發展及其對眼睛的嚴重損傷作用是有效的。葡萄膜炎葡萄膜炎是眼睛的葡萄膜的炎癥疾病。它可影響眼睛的前l殳(anterior)或后段(posterior)或二者都影響。它的病因可能是先天的或感染的并可威脅一見力。先天性葡萄膜炎與前房中l是高的CD4+表達相關[Calderetal.(1999)，InvestOphyhalmolVisSci，vol40:2019-24]。數據還表明T淋巴細胞以及化學引誘物IP-10在葡萄膜炎發病才幾理中的病理作用[AbuEl-Asrar(2004)，AmJOphthalmol,vol138:401-11]。在急性前葡萄月莫炎中的其他趨^f匕因子包^fe巨噬細胞炎癥蛋白、單核細胞化學引誘物蛋白-1以及IL-8。這些細胞因子在急性前葡萄膜炎中的白細胞聚集中可能發揮重要作用[Vermaetal.(1997),CurrEyeRes;vol16:1202-8]。已給定SIP信號級聯的深刻和多效作用，認為降低生物活性脂質有效濃度的SPHINGOMAB和其他免疫分子可作為降低或調節與葡萄膜炎相關的眼內炎癥的有效方法而發揮作用。屈光手術角膜創傷愈合反應對于屈光手術程序具有特別的意義，因為它是安全性和有效性的主要決定因素。這些手術用于治療近視、遠視和散光而進行。準分子激光原位角膜磨鑲術(LASIK)和屈光性角膜切除術(PRK)為最普遍的屈光手術，然而已開發了試圖克服并發癥的其他纟喿作。這些并發癥其中包括的過校正、欠纟交正、退化和的生物反應中具有其根源。角膜生物學中最大的挑戰之一是通過再生而不是纖維化來促進組織修復。認為再生和纖維化之間的選擇取決于成纖維細月包活4b的控制[Strameretal(2003)，InvestOphthalmolVisSci;vol44:4237-4246andFini(1999)ProgRetinEyeRes,vol18:529-551]。稱為成"幾纖維細力包的細月包在手術或損傷后1-2周，可出現在上皮下基質中。成肌纖維細胞大4既是在TGF-(3影響下來源于角膜基質細胞[Jesteretal(2003)ExpEyeRes，vol77:581-592]。角月莫混濁和基質瘢痕形成是以降低的角膜透明度為特征的且可與成纖維細胞和成肌纖維細胞再生相關。原位和體外研究已表明TGF-P和PDGF在刺激成肌纖維細胞分化過程中是重要的[Folgeretal.(2001)，InvestOphthalmolVisSci;42:2534-2541]。在凈爭定十青;兄下的LASIK后，可在中心界面中發現混濁。這些包括彌漫性板層角膜炎、圓環形薄片、以及界面上的上皮死細月包的滯留。可能所有這些都與TGF-P/人上皮細月包進入活化的角月莫基質細胞的增加有關[Nettoetal.(2005)，Cornea,vol24:509-522]。退化4艮可能是由于加強的上皮基質創傷愈合的相互作用引起的，例如由角膜成纖維細胞和或成肌纖維細月包生產的上皮調節生長因子增力口[Nettoetal.(2005),Cornea,vol24:509-522]。已表明用局部#元TGF-P4元體抑制TGF-P與受體結合減少由PRKi秀導的混濁[Jesteretal.(1997)，Cornea,vol16:177-187]。已給出抗生物活性脂質的抗體對纖維化過程和TGF-(3的已知作用，我們i人為其可幫助治療屈光手術的一些并發癥，例如混濁、基質瘢痕形成和退化。音光眼濾過手術的調節傳統認為青光眼是一種疾病，由此提升的眼內壓導致視神經的損害且最終損害3見野和或視4t度。青光眼的其他形式存在于碎見神經損害發生在普通壓力環境中，或者所謂的"正常眼壓性青光眼"。對于許多患者來說，藥物治療能夠控制他們的疾病，但對于其他患者而言，需要進4亍青光眼濾過手術，由此在眼內手術產生瘺管以允許液體排出。這可通過小梁切除術、醫療設備的插入或外^1"手術治療的其他方法來完成。青光眼濾過手術由于以成纖維細胞增殖和最終的瘢痕形成為特征的創傷愈合作用而失敗。抗代i射物，例如5-氟尿嗜p定和絲裂霉素C可減少隨后的瘢痕形成；然而，即4吏長期佳:用這些藥物加強效果表明手術失敗仍然是一個嚴重的臨床問題[MutschandGrehn(2000),GraefesArchClinExpOphthalmol;vol238:884-91andFontanaetal.(2006)，Ophthalmology,vol113:930-936]。人眼球筋膜成纖維細胞的研究表明它們具有合成bFGF和PDGF以及TGF-(3的能力并且這些生長因子涉及在青光眼濾過手術后的組織修復過程，這促使了手術的失敗[Trpathietal.(1996)，ExpEyeRes,vol63:339-46]。其他研究也涉及后濾過創傷反應中的這些生長因子[Denketal.(2003),CurrEyeRes;vol27:35-44]，推定PDGF的不同型為青光眼濾過手術后眼^求筋膜成纖維細胞增殖的主要刺激劑，而TGF-P對于眼球筋膜成纖維細胞轉化為成肌纖維細胞是重要的。我們已證明SIP存在于人眼球筋膜/結膜成纖維細胞中并且S1P在創傷愈合反應中強烈表達。S1P還刺激了多種成纖維細胞類型的促纖維化功能和成肌纖維細胞表型向膠原產物的轉化。已給出SIP的特定多效作用及其與bFGF、PDGF和TGF-|3之間已知的相互作用，認為結合、對抗、抑制S1P或可能其他生物活性脂質例如LPA的作用或其產生的制劑，對于調節創傷愈合和/或纖維化反應(其導致青光眼手術的失敗)是有效的，且將成為提高手術成功結果的有效治療方法。可預見的是，這種制劑可通過，例如，玻璃體內或結膜下注射或局部給藥。角膜移植角膜移植(穿透性角膜移植(PK))是人體最成功的組織移植手術。然而在美國每年進行的47，000例角膜移植中，角膜移植排斥仍然是角膜移植失敗的主要原因[IngJJetal.(1998)，Ophthalmology,vol105:1855-1865]。目前，我們還沒有足夠的能力防止異體移植排斥，盡管免疫抑制和免疫調節可能是一種有前途的方法。近年來，已發現CD4(+)T細胞在角膜異體移植排斥中直接如效應細胞一樣發揮功能而不是發揮輔助細胞的功能[HegdeSetal.(2005)，Transplantation,vol79:23-31]。對鼠的研究已表明經歷排斥的角膜基質中的中性粒細胞、巨噬細胞和肥大細胞的數量增加。巨噬細胞是主要的浸潤細胞類型，隨后是T細胞、肥大細胞和中性粒細胞。在高風險角膜移植中的早期趨化因子表達是IL-8的小鼠同源部分(巨噬細胞炎癥蛋白2)和單核細胞趨化蛋白-l(MCP-l)[YamagamiSetal.(2005),MolVis,vol11,632-40]。FTY720(FTY)是一種豸斤型免疫水卩制藥物，它通過改變'淋巴細胞運輸發揮作用；導致外周血淋巴球減少癥和淋巴結中淋巴細胞數目增多。FTY通過結合在淋巴細胞上表達的一些SIP受體來介導其免疫調節4乍用[BohlerTetal.(2005),Transplantation,vol79:492-5]。這種藥物是口服給藥的且一次口服給藥可減少外周淋巴細胞個數的30-70%。FTY減少T細月包亞群CD4(+)細月包多于CD8(+)細月包[Bohleretal.(2004),NephrolDialTransplant,vol19:702-13]。FTY治療小鼠表明當口服給藥時原位角膜移植存活可顯著延長[Zhangetal.(2003),Transplantation,vol76:1511-3]。FTY口服治療還顯著延遲了排斥反應并減小了角膜異體移植的大鼠至小鼠模型中的嚴重性[Sedlakovaetal.(2005)，Transplantation,vol79,297-303]。結合數據已給出異體移植排斥的已知發病機理，該數據表明調節SIP信號傳導作用可促進角膜移植的存活，認為減少生物活性脂質的有效濃度的免疫部分，例如SPHINGOMAB，在免疫病癥例如異體移才直排斥的治療中也是有用的，例如通過減弱免疫反應，因此將可能在PK后改善角膜移植的存活。該藥物還可具有更多的優勢，除系統給藥外，可以局部《合藥，例如通過局部眼周或眼內給藥是可能的。其^也具有炎癥或免疫成分的眼部疾病包^^曼性JE皮璃體炎、感染包括單純性皰滲、帶狀皰滲和原蟲感染、以及眼部網狀內皮細胞真菌病。以瘢痕形成為特4正的前,殳疾病i人為4吏用以生物活性脂質為輩巴標的抗體治療也對多種以眼睛前革殳部分瘢痕形成為特4正的病癥是有益的。這些病癥包括創傷角膜，作為眼睛最前端結構，暴露于多種危險中，從大氣中散落物至可導致才幾械性損傷的鈍性損傷。眼睛的角膜和前表面還可能暴露于來自手術、和化學的例如酸性和》咸性、創傷的其他形式的損傷。這些類型的損傷結果可能是破壞性的常常導致角膜和結膜瘢痕瞼球粘連形成。此外角膜新血管生成可相繼發生。中性粒細胞積累、其釋放白細胞三烯以及白細胞介素-1和白細胞介素-6的存在，用于連纟賣聚集炎癥纟田月包(successivewave)[Sotozonoetal.(1997),CurrEyeRes，vol19:670-676],浸潤角膜并釋放蛋白水解酶，其導致角膜組織的進一步損害和分解和角膜融解。此外角膜和結膜成纖維細胞一皮活化并4受入且導致力交原沉積和纖維化。TGF-(3促進過度炎癥和瘢痕形成所不需的作用[SaikaSetal.(2006)，AmJPatholvol168,1848-60]。這種作用導致角膜透明性的損失并損傷4見力。減輕的炎癥，包括減少的中性粒細胞浸潤和降低的纖維化導致鼠模型的堿燒傷角膜中更快且更完全的愈合[Uenoetal.(2005)，OphthalmolVisSci，vol46:4097-106]。眼瘢痕性類天皰瘙(OCP)OCP是一種慢性瘢痕性(瘢痕形成性的)自體免疫疾病，其主要影響結膜。這種疾病為持續漸進的且預后非常差。在其最后階段結膜瘢痕形成和相伴的角膜病導致雙側盲。在組織學上結膜表現粘膜下瘢痕形成和慢性炎癥，其中肥大細胞的參與是極多的[YaoLetal.(2003),OculImmunolInflamm,vol11:211-222]。自身抗原導致自身抗體形成。自身抗體與自身抗原的結合開始了一系列復雜的事件即T淋巴細胞的浸潤(其中CD4(輔助)細胞遠多于CD8(抑制)細胞)。巨噬細胞和肥大細胞浸潤以及促炎癥和促纖維化細胞因子的釋放也相繼發生。細胞因子引發結膜成纖維細胞增殖和活化的結果，結果發生上皮下纖維化(見下文中實例)。研究已表明TGF-P和IL-1在OCP患者的結膜纖維4b中的作用[RazzaqueMSetal.(2004)，InvestOphthalmolVisSci，vol45:1174-81]。史-約綜合癥(SJS)和中毒性表皮壞死松解癥(TEN)SJS和TEN是藥物治療威脅生命的副反應。這兩個相關病癥的眼部后遺癥可以是嚴重的并涉及球結膜和瞼結膜、眼瞼和角膜的病理變化。藥物和感染是最普遍的促成因素。慢性目艮發現(chroniceyefindings)包4舌瘢痕、瞼球粘連形成、以及由最初炎癥過程導致的結膜瘢痕。這導致瞼內翻形成、倒睫和淚液膜的不穩定。眼部表面的分解導致角膜瘢痕形成、新血管生成、以及嚴重情況下的角質化。如在OCP中結膜的上皮下纖維化發生的。認為旺盛的自體免疫淋巴細胞對藥物或感染的反應在SJS/TEN的發展中發揮作用[Harilaosetal.(2005)，ErythemaMultiforme,StevensJohnsonSyndrome,andToxicEpidermalNecrolysis,inCornea2ndedition.Krachmer，Mannis,Hollandeds.ElesevierMosbyPhiladelphia]。SJS中的〉'曼潤細月包種群包括巨噬細胞、CD4陽性T細胞、以及CD8陽性T細月包。這種細月包群與化學損傷中看到的細胞群相似[Kawasakietal.(2000),JOphthalmol,vol84:1191-3]。翼狀胬肉臨床上翼狀胬肉為肉質血管塊出現，其發生在眼瞼間裂中。翼狀胬肉體是肉質纖維血管塊。活性翼狀胬肉特征為明顯的血管充血和越來越嚴重的生長。它們堅固地粘著在眼球上。在嚴重的情況下翼狀胬肉侵害角膜并可導致視軸內角膜透明度降低或不規則散光，然后繼發導致:枧力損失。癥狀上，患者可感到異物感，流淚和一見力模糊。組織學表明固有層的上皮下結締組織的玻璃樣變性、成纖維細胞的凄丈量增加以及月巴大細月包增加[Butrusetal.(1995),AmJOphthalmol,vol119:236-237]。翼狀資肉的處理仍是一個問題。夕卜科手術切除常常進行，然而復發率很高[Kragetal.(1992)，ActaOphthalmol,vol70:530]。為了幫助降^氐翼狀胬肉的復發率，已使用多種藥物佐劑，例如絲裂霉素C和道諾霉素。雖然這些可能是有益的，長期數據是受局限的且他們可能與鞏膜變薄和角膜融解有關。Dougherty等人和Lee等人[Doughertyetal.(1996),Cornea,vol15:537-540andLeeetal.(2001)，Cornea,vol20:238-42]首先闡明了VEGF在翼狀胬肉發展中發揮重要作用并在翼狀胬肉上皮中鑒別到VEGF和一氧化氮。這些研究者推測這些以及其他細胞因子是翼狀胬肉纖維血管向內生長特性的原因。已表明在原發和復發翼狀胬肉中存在石咸性FGF和TGF-|3[Kiraetal.(1998),GraefesArchClinExpOphthalmol,vol236:702-8]并且發表的形態和免疫組織化學證據進一步支持血管發生可能在翼狀胬肉形成中發揮作用的想法[Marcovichetal(2002),CurrEyeRes,vol25:17-22]。其他研究已預示IL-6和IL-8以及VEGF作為調節因子，可能與翼狀資肉的發展有關[DiGirolamoetal.(2006),InvestOphthalmolVisSci，vol47:2430-7]。對翼狀胬肉形成和生長有效的制劑可減少手術介入的需要或降低復發率。其他也具有纖維生成、纖維4b或瘢痕成分的眼部疾病和病癥包才舌AMD、糖尿病視網膜病變、早產兒視網膜病變、鐮刀細胞視網膜病變、缺血性視網膜病變、視網膜靜脈閉塞疾病和隱形眼鏡的過度磨損。總之，過度瘢痕形成是許多眼部和非眼部疾病和病癥的病理生理學的基本組成。生物活性脂質l象SIP和LPA的在這個過程中發揮作用并且減少這些制劑濃度的抗體相關治療可能給接受治療的患者帶來治療益處。在一個實施方式中，生物活性脂質的抑制劑，尤其是針對SIP和/或LPA的單克隆抗體，被認為在調節手術和外傷創傷愈合反應中是有用的。用于治療硬皮病的抗SIP抗體和抗LPA抗體本發明的組合物和方法在治療至少部分特4正為異常的新血管生成、血管生成、纖維生成、纖維化、瘢痕形成、炎癥、以及免疫反應的紊亂和疾病中是有益的。一種這樣的疾病是硬皮病，它也被稱為系統性硬化癥。石更皮病是自體免疫性疾病，它導致瘢痕形成或皮力夫的加厚，且有時涉及身體的其他部分，包括肺、心臟和/或腎臟。硬皮病的特征在于皮膚和身體器官中瘢痕組織(纖維化)的形成，這可導致涉及部分的加厚和堅硬，及隨后的功能降低。今天，根據硬皮病基金會統計，大約300,000美國人具有硬皮病。他們中三分之一或更少具有廣泛疾病，而剩余的三分之二主要具有皮力夫癥狀。當該疾病影響肺并導致瘢痕形成時，呼吸可能受限制，因為肺部不再^f象他們應該的而進4于擴張。為測量呼吸能力，醫生〗吏用一種評估最大肺活量(FVC)的設備。在FVC小于預期讀數的50%的人群中，來自硬皮病相關的肺病的10年死亡率為大約42%。死亡率3。it匕之高的一個原因是當前沒有有效的治療。如在本申請實例中所描述的，已有證據表明S1P和LPA為促纖維化生長因子，促纖維化生長因子可促進成纖維細胞的活化、增殖以及與不適應的瘢痕形成和重塑相關的產生的成纖維細力包的活性才是高。此外，S1P和LPA對皮膚和其他類型的成纖維細胞活性的潛在作用已闡明。例如，已表明LPA刺激鼠皮膚成纖維細胞的移動(Hama,etal.,JBiolChem.2004Apr23;279(17):17634-9),而人皮月夫成纖維細胞表達多種SIP受體亞型(Zhang，etal.,Blood.1999Mayl;93(9):2984-90)。除了SIP對成纖維細胞活性的許多直接作用夕卜，S1P對于成纖維細胞活性還可具有許多潛在的間接作用。例如，SIP可幫助其〗也熟知的促纖維4匕因子發4軍作用，例如TGF-P和血小4反源生長因子(PDGF)。TGF-P是最為廣泛地進行研究和認識的纖維化的貢獻者之一(Desmouliere，etal.,/Ce〃Ao/122:103-111,1993)。TGF-(3上調SphKl的表達和活性，導致金屬蛋白酶組織抑制因子1(TIMP-1)-—種抑制ECM降解的蛋白的表達(Yamanaka，etal.,/C&w279:53994-54001，2004)。TIMP畫l表達的增多與心力衰竭患者的間質纖維化和舒張功能障礙相關(Heyman，etal.,爿wJPa^o/166:15-25,2005)。相反，SIP刺激TGF-P的表達和釋力文(Norata,etal.，Ocw/a"ow111:2805-2811,2005)。還存在SIP和PDGF之間相互作用的直4矣i正據。SIP直4妄促進PDGF的表達(Usui,etal.，J^/o/C7^w279:12300-12311,2004)。此夕卜，SIP!受體和PDGF受體互相結合而它們的結合對于下游信號的PDGF活化(其促進了多種細胞類型的增，歹直和遷移)是必需的(Long,etal.,PraW"g/awW朋OAer丄—她Ww80:74-80,2006;Baudhuinetal.，F騰6/18:341-343,2004)。同樣，TGF-P和PDGF對纖維化的作用可能部分是由于與SIP信號通^各的相互作用。同樣，本發明的組合物和方法可用于治療石更皮病，特別是通過減少特定目標脂質例如，SIP和/或LPA在體內的有效濃度。認為針對PDGF受體的刺激性自身抗體可惡化系統性硬皮病(Ba畫i，etal.,NEnglJMed.2006v354(25):2667-76)，而PDGF受體在TGF-(3作用下在石更皮病成纖維細月包中^皮上調(Yamakage,etal.，JExpMed.1992May1;175(5):1227-34)。由于SIP、PDGF和TGF-P葉言號系統中大量的相互作用，用4元S1P劑(如才元SlP的mAb)封閉SIP的生物活性可間4妄減輕PDGF和TGF-P的促硬化作用。此外，^吏用這種^元SIP劑的治療可通過減輕SIP^j"皮力夫和其j也形式的成纖維細胞的直接效果(其促進疾病的發展)而對硬皮病患者有益。3.給藥方法如以上*會出的實例，疾病和病癥的治療可通過<吏用不同制劑和裝置的多種途徑給藥。適合的藥物可接受的稀釋液、載體、和賦形劑在本領域中是熟知的。本領域中技術人員會理解對于任何特定治療方案給藥的量可很容易地確定。預計合適的量落在10/ig/劑量至10g/劑量的范圍內，優選在10mg/劑量至lg/劑量的范圍內。可通過本領i或中已知的4支術給予藥物，包括^旦不局限于系統(全身性)、皮下、皮內、粘膜使用，包括通過吸入、以及局部給藥。粘膜是指沿身體內腔的上皮組織。例如，粘膜包括消化道(包括口、食管、胃、腸、以及肛門)；呼吸道(包括鼻道、氣管、支氣管、以及肺)；以及生殖器。對于本i兌明書的目的，粘力莫還可包括眼的外表面，即角膜和結膜。局部給藥(與系統給藥相對)可以是有益的，因為這種方法可限制潛在的系統方面的副作用，但仍然具有治療作用。在本發明中使用的藥物組合物包括但不局限于溶液、乳液、以及包含脂質體的制劑形式。這些組合物可由多種成分制成，其包括但不局限于預成形脂、自乳化固體和自乳化半固體。本發明中使用的藥物制劑可根據制藥業中熟知的傳統技術制備。這種技術包括將活性成分與藥物載體或賦形劑結合的步驟。優選的載體包括那些藥物可接受的載體，尤其是當旨在將組合物用于人體時。對于非人的治療應用(如在伴生動物、家畜、魚、或家禽的治療中)，可使用獸醫可接受的載體。通常這種制劑通過將活性成分與液態載體或精細分割的固態載體或者與二者均勻且緊密地結合而制成，然后如果需要，將產品成形。本發明的組合物可形成多種可能的劑量形式中的任何一種，例如但不局限于片劑、膠嚢、液態糖漿、軟膠、栓劑以及灌腸劑。本發明的組合物還可制成在水性、非水性或混合介質中的懸浮液。水性懸浮液可進一步包含提高懸浮液粘度的物質包括例如羧甲基纖維素鈉、山梨糖醇和/或葡聚糖。該懸浮液還可包含穩定劑。在一個實施例中該藥物《且合物可以;故形成泡沫并作為泡沫<吏用。藥物泡沫包括制劑例如但不局限于乳劑、微乳劑、乳脂、膠狀物和脂質體。盡管在性質上基本相似，這些制劑在最終產品的成分和稠度上不同。關于這種組合物和制劑制備的專業知識，通常對于制藥和制劑領域中的技術人員是已知的并且可應用于本發明的組合物的制劑中。在一個實施例中，可將免疫i秀導部分經例如局部滴劑或藥膏、眼周注射，通過植入式投藥系統經前眼房注射至前房或玻璃體、或通過注射或口服給藥系統地運送至眼睛。使用的抗體的數量可由本領域中技術人員容易地確定。將治療藥物輸送至眼睛的傳統方法包括局部應用、系統給藥后再分配至眼睛或直4妄的眼內/目艮周注射[Sultanaetal.(2006),CurrentDrugDelivery,vol3:207-217;GhateandEdelhauser(2006)，ExpertOpinion,vol3:275-287andKaurandKanwar(2002)，DrugDevelopIndustrialPharmacy,vol28:473-493]。抗S1P、抗LPA或其4也抗生物活性脂質的抗體治療將可能與任何這些方法一起使用，雖然全部具有特定的認識到的優點和缺點。局部滴劑是方便的，但主要因為鼻淚引流而經常流出應用的藥物的少于5%至眼睛的前部，該劑量甚至更少的部分運送至眼球后段。除了滴劑之外，噴霧提供另一種局部給藥的模式。第三種模式是眼藥膏或乳劑，可用于延長制劑與眼部表面的接觸時間，然而視力模糊和眼瞼的覆蓋可能是令人苦惱的。這種局部方法仍然是優選的，因為治療眼部紊亂的治療藥物的系統性給藥，將整個才幾體暴露于潛在的藥物毒性中。眼睛后l殳的治療在醫藥上是重要的，因為年齡相關性黃斑變性、糖尿病視網膜病變、后葡萄膜炎、以及青光眼，在美國和其他發達國家中是視力喪失的主要原因[Mylesetal.(2005),AdvDrugDelivRev;57:2063-79]。將藥物運送至后l殳最有效的才莫式是通過睫狀體平坦部的玻璃體內注射。然而，直接注射要求熟練的醫藥從業才支術人員以實現藥物運送并且可導致許多患者的治療限制焦慮。眼周注射，包括結膜下、眼J求后、目艮^求周和后筋膜注射，比玻璃體內注射，侵入性d、一些。重復的長期的玻璃體內注射可導致并發癥，例如^皮璃體出血、一見網月莫脫離、或眼內炎。抗生物活性脂質的抗體治療還可通過使用一種新型眼部給藥系統給藥[Sultanaetal.(2006)，CurrentDrugDelivery,vol3:207-217andGhateandEdelhauser(2006),ExpertOpinion,vol3:275-287],包括持續的或受控的釋放系統，例如(a)眼部插入物(可溶的、可侵蝕的、非可侵蝕的或基于水凝膠的)，角膜保護膜，如，基于膠原的繃帶和隱形眼鏡，其提供藥物向眼睛的控制輸送，(b)原位凝膠系統，其提供像滴劑一樣給藥的便利性，它在眼睛內轉化為凝膠形式，由此提供眼睛內藥物的持續作用，(c)嚢泡系統，例如脂質體、非離子表面活性劑嚢泡/兩性離子表面活性劑嚢泡(discome)等等，它具有靶向輸送、生物相容性和不使視力模糊的優勢，(d)粘膜粘附系統，它提供眼睛內更好的保留，(e)前藥，(f)滲透增強因子，(g)凍干載體系統，(h)微粒，(i)亞微粒乳劑，(j)電離子透入療法，(k)樹枝狀大分子，(l)微球體，包括生物粘附微球體，(m)納米球體和其他納米顆粒，(n)膠質體(或膠束，collasome)以及(o)藥物給藥系統結合上述一個或多個系統以提供添加的、或甚至是增效的、有益的效果。大多這些方法耙向眼睛前^殳并可能對治療前^史疾病是有益的。然而，一個或多個這些方法對于影響眼睛后段中生物活性脂質濃度仍然可能是有用的，因為脂質的相對低分子量將可能允許脂質在眼睛內的大量運動。此外，特別是如果以較低分子量抗體變異體(例如Fab片斷)制備時，眼睛前段中引入的抗體能夠在整個眼睛中移動。還可使用用于后段的持續^^藥系統，例如那些已凈皮^:準的或正在開發中的給藥系統(見上述參考文獻)。如前面所述，后^L網力莫、月永纟各力莫、以及黃斑疾病的治療在醫學上是非常重要的。在這點上，經鞏膜離子導入[Eljarrat-BinstockandDomb(2006)，ControlRelease,110:479-89〗是一個重要的進步并可為運送抗體至眼睛的后段提供有效的途徑。還可向制備的抗體中加入多種賦形劑以改善治療的效果，使治療更加方便或者以清楚地確保制備的抗體僅用于其期望的、被批準的目的。賦形劑的實例包括控制pH的化學物質、抗-微生物劑、防腐劑以防止抗體效力的喪失，染料以鑒別僅用于眼部的制劑、助溶劑以提高抗體在制劑中的濃度，滲透增強劑以及使用調整等滲性和/或粘度的制劑。可加入抑制劑(例如蛋白酶的抑制劑)以延長抗體的半衰期。在一個實施例中，通過將包括適合眼睛pH的磷酸鹽緩沖液的溶液進4亍3皮璃體內注射而將抗體運送至眼睛。抗體還可進行化學修飾以產生前藥，其以一種上述的制劑或裝置給藥。抗體的活性形式隨后通過內源酶的活化得到釋放。本申請中考慮的可能的眼部酶是多種細胞色素p450、乙醛還原酶、酮還原酶、酯酶或N-乙酰-P-氨基葡萄糖苷酶。抗體的其他化學修飾可提高它的分子量，且結果增加了抗體在眼睛中的滯留時間。這種化學^修飾的一個實例是聚乙二醇化[HarrisandChess(2003),NatRevDrugDiscov;2:214-21]，對于諸如二硫化物[Sha腿ketal.(2006)，NatChemBiol;2:312-3]或石克醇[Dohertyetal.(2005)，BioconjugChem;16:1291-8]的功能基團可能是普遍的或特異的作用。實施例將參照以下具體實施例對本發明作進一步描述。這些實施例絕不應認為限制本發明的范圍。對于下面描述的數據，體外研究進行三重測定并至少重復三次而進行，而體內研究在至少5只鼠中進行。在所有研究中，統計分析4吏用StudentsT-test或ANOVA,用GraphPad4t件進行。在應用時，數據表現為平均值士SEM其中承代表p^0.05。實施例1.SPHINGOMAB顯著減少CNV鼠模型中的CNV和瘢痕形成對雌性C57BL6/J小鼠進行玻璃膜的激光誘導破裂并給予0.5pg的Sphingomab或稀釋在2pl生理鹽水中的同型配對的非特異性(NS)抗體。小鼠在激光破裂后14和28天處死。為誘導CNV損傷，使用眼用托吡卡胺(0.5%)和苯腎上腺素(2.5%)擴張瞳孔。在眼睛上方文置蓋片。OculightGL532nm(Iridex公司，MountainView,CA)與裂隙燈連接，開始以150mW輸送100msec脈沖，其中50|nM的斑點大小用來破裂右眼四分之三圏的玻璃膜，它位于距離視神經盤大約50pM處相對9、12和3點的位置。在所有情況下，左眼作為未損傷的對照。任何與蒸汽泡不相關的損傷或成為融合性的損傷排除在分析之外。為測量CNV損傷的大小，制備鞏膜-脈絡膜-RPE復合物的脈絡月莫平片并只寸血管系纟克(凡comm""z、agg/w"m'",，纟工色)和周細月包(CD140b;綠色)進行染色。使用具有RGBSpot高分辨率數碼相機和激光掃描共聚焦顯孩i鏡(BioRadMRC1024，BioRad7>司，Temecula,CA)的epifluorescenceZeissAxioplan24乾獲凄史字圖4象。對于體積分析，使用z系列捕獲，經過z系列的總損傷區域的總數與z厚度(4fim)相乘獲得損傷體積。為評估月交原沉積，用Masson'Trichrome對工凡月莫-月永纟各月莫-RPE復合物進行染色。將鞏膜-月永絡膜-RPE復合物包埋在石蠟中并隨后連續切片成6微米的厚度。每個損傷評估大約30個切片。膠原沉積體積的定量以CNV損傷體積中所描述的相同方式進4亍計算。使用ImageJ軟件(ResearchServicesBranchNationalInstitutesofHealth,Bethesda，MD)對捕獲的凄t字圖像進行形態學評估。圖1A示出了激光豫導的玻璃膜破裂后14和28天SPHINGOMAB顯著減弱了脈絡膜新血管生成。圖IB示出了在激光誘導玻璃膜破裂后28天SPHINGOMAB顯著降j氐了與CNV損傷形成相關的纖維4b。實施例2.SPHINGOMAB通過包括抑制內皮細胞遷移和管形成的多種機制抑制新血管生成。S1P促進人的臍靜脈內皮細胞(HUVEC)遷移，在基質膠和其他試驗中，促進了體外BV的從頭形成[112];SPHINGOMAB可中和SIP的這些作用。按照Visentin等人所描述的進行試驗(CancerCell2006Mar;9(3):225-38)。圖2A中的數據表明接種在GF減少的基質膠上的HUVEC在存在SIP的情況下，形成多種毛細管樣的結構而在沒有SIP的情況下或當用SPHINGOMAB和SIP共孵育時，不能形成毛細管樣結構。圖2B中的數據表明在基質月交化學4曼染試驗中，0.1-l|aMSIP刺激HUVEC遷移的潛在能力超過未處理的HUVEC，或與SPHINGOMAB共孵育的HUVEC2-2.5倍。同時，這些研究表明SPHINGOMAB可有效地減緩SIP對EC的促血管生成作用。實施例3.SPHINGOMAB通過包括減緩SIP、VEGF和bFGF在體內的效果的多種機制來抑制新血管生成。體內研究表明S1P增力口了內皮毛細血管向皮下植入的基質膠才全子[54]生長，以此為基礎，我們推測SPHINGOMAB可減少體內,人頭形成BV。為對此進行研究，我們運用用于新血管生成的體內基質膠栓子試驗。在一批試驗中，將lpM的SlP，0.5pg/mL的bFGF或lpg/mL的VEGF添加到基質月交中并隨后給小鼠(n=4)注射I.P.。10天后，對小鼠進行肝素治療并注射熒光外源凝集素，異凝集素B4-FITC,其結合由血管EC(形成生長的BV)表達的粘附分子。才全子隨后^皮切除，在OCT中水凍，切片并用于》見察FITC染色的BV。圖3A中的數據表明S1P是比bFGF或VEGF更加有潛力的體內殺斤血管生成刺；敫劑[Lee,etal.，(1999),BiochemBiophysResCommun，.Vol264:743-50]，如在包含SIP的才全子中比包含bFGF或VEGF的纟全子具有大量的FITC染色的BV所顯示的。然后用蘇木精&伊紅對栓子切片進行染色，用于評估EC的滲透(圖3B)。EC的滲透是新血管生成中的關鍵步驟。包含SIP的栓子與只含有基質膠的栓子相比，其EC滲透具有三倍增長。細月包滲透被認為是EC,然而我們認為諸如免疫細胞的其他細胞類型也可被染色。小鼠每48小時(在栓子植入前1天開始)系統性給予SPHINGOMAB,表明即使當向基質月交中加入SIP時，EC滲透量減少。這些結果表明SPHINGOMAB抑制體內EC滲透的能力。來自血液和周圍組織的內源性SIP可為創傷提供促血管生成的刺激物。研究了SPHINGOMAB減少創傷中內源S1P的能力。將最優的刺激栓子(補充了0.5|ug/mLbFGF或10mg/mLVEGF的基質月交)植入小鼠中。小鼠在基質膠植入前一天開始每48小時接受25mg/kgSPHINGOMAB或鹽的腹腔內注射。每個處理組(基質膠、基質月交加GF或基質月交加GF以及給予SPHINGOMAB)包括至少6只小鼠。10天后，用肝素處理小鼠，注射異凝集素B4-FITC,4全子切除，包埋入OCT冷凍介質中并進行切片。微血管密度通過外源凝集素-FITC染色的血管進行定性(如圖3C中所示)。BV染色在對照(未處理)栓子中零星出現，而包含bFGF或VEGF的栓子表現出血管生成的重要證據。來自用SPHINGOMAB處理的小鼠的栓子與來自鹽處理的小鼠的bFGF或VEGF栓子相比，表現出BV形成中明顯的減少。染色的血管的定量表明，來自用SPHINGOMAB處理的動物與鹽處理的動物相比，在包含VEGF或bFGF的纟全子的新血管生成中分別有5至8.5倍的減少(圖3C)。這種評價進一步表明內源血清和組織SlP^是高微血管生成的能力以及SPHINGOMAB中和內源S1P的促血管生成效果的能力。實施例4.SPHINGOMAB才中制體內瘢痕形成S1P通過活化成纖維細胞遷移、增殖和膠原生成，對創傷愈合做出了深遠的貢獻；SPHINGOMAB中和這些作用。許多研究，4吏用多種類型的成纖維細月包i正實了S1P促進創傷愈合的能力1)^口4吏用標準方法通過3H胸^，嘧，定脫氧核苷摻入法測量的，S1P增力口了Swiss-3T3成纖維細胞的增殖(圖4A);2)S1P在標準的劃痕創傷愈合試-驗中促進了心臟成纖維細胞的遷移(圖4B);3)如免疫熒光微顯微鏡所表現的，S1P促進了從具有膠原laGFP受體的轉基因小鼠中分離的心臟成纖維細胞中的膠原表達(圖4C);以及4)S1P誘導WI-38肺成纖維細胞分化為成肌纖維細胞，這種細胞在瘢痕重塑中活化，如通過〗吏用免疫雜交分析的成月幾纖維細胞標記蛋白-cc平滑肌肌動蛋白的表達增加所指示的(4D)。在每種試-驗中，SPHINGOMAB中和S1P。可預期到眼部成纖維細胞對S1P和SPHINGOMAB的反應相似。已注意到，心血管疾病和AMD的新血管損傷的相似性包括瘢痕重塑和隨后的不適應的纖維性組織形成[Vineetal.(2005)，Ophthalmology,.Vol112:2076-80andSeddonandChen(2004)，IntOphthalmolClin,.Vol44:17-39];因而i人為SPHINGOMAB將對眼部新血管生成和瘢痕形成具有與在心血管系統中所表明的作用類似的作用。在Lpath的研究評1介了SPHINGOMAB在通過小鼠左降支的冠狀動脈結扎的永久性心肌梗塞(MI)后對減少心臟瘢痕形成的有效性。在手術后48小時開始系統性給藥25mg/kgSPHINGOMAB或鹽類。選擇在48小時給予抗體允許在早期重塑階段中眼部普通的、補償性的瘢痕形成并允許在MI后立即進行有益的、S1P刺激的血管生成。在梗塞后兩周，小鼠被處死且通過曼森氏三色法對心臟組織染色以評價纖維化。才妄受SPHINGOMAB處理的動物表現出血管周纖維化的幾乎完全消失(圖4E)。作為任意非特異性創傷愈合反應的對照，假手術動物經受胸廓切開術而不進4于冠狀動脈結4匕。實施例5:S1P促進眼部上皮細胞和成纖維細胞轉化為可收縮的、生成瘢痕組織的成肌纖維細胞。病理學組織纖維化(瘢痕形成)是多種眼部紊亂(包括年齡相關性黃斑變性、糖尿病視網膜病變、早產兒視網膜病變、增生性磁:璃體視網膜病變以及青光眼手術后果)中主要的促成因子。在許多這些紊亂中，循環的生長因子和趨化因子促進普通眼吾卩細胞轉化為纖維收縮的、生成瘢痕組織的細胞，該細胞已被稱為"成月幾纖維細月包"。通常，成月幾纖維細月包負責損傷后創傷愈合反應的一部分的組織修復。然而，在肝、皮膚、肺、腎、心臟和眼睛中以病理性瘢痕組織形成為特征的疾病中，表現出成肌纖維細胞的數量和功能的改變。在眼睛中，視網膜色素上皮(RPE)細胞轉化為成月幾纖維細胞表型，與纖維收縮膜的形成相關，纖維收縮膜導致視網月莫脫離和隨后的視力損傷。此外，在引發隨后的視力喪失的眼睛損傷生成。盡管已鑒別促進成肌纖維細胞形成的許多眼內循環蛋白因子，關于諸如S1P的溶血脂質在這種過程中的作用一無所知。因此，我們4企測了S1P對許多人眼部細胞系的成肌纖維細胞轉化的作用。如圖5中所示，S1P刺激了人視網膜色素上皮細胞(圖5A)中和人結膜成纖維細胞(圖5B)中a平滑肌肌動蛋白(a-SMA;成肌纖維細胞標記)的生成。這些數據首次表明，S1P是促進眼部上皮細胞和成纖維細胞轉化為可促使視網膜脫離、眼部纖維化和隨后的祁L力損傷的可收縮的，生成瘢痕組織的成肌纖維細胞的循環化學因子之一。在這些試驗中，在視網膜色素上皮細胞和結膜成纖維細胞中，S1P促進ot-SMA表達的能力在濃度依賴方式上有所不同。如所示，在O.OOIjliM的濃度下，觀察到上皮細胞中ct-SMA表達顯著提高，隨后在10pM下降低到基礎水平。相反，結膜成纖維細胞中只有在10jxM濃度下，觀察到ot-SMA表達的顯著提高。這種不同，認為是由于上皮細胞與成纖維細胞相比，S1P受體表達的增加造成的。我們假設，由于S1P受體表達水平的增加，在低濃度下，視網膜色素上皮細胞可能對于S1P更加敏感。相反，在高S1P水平下，受體變得敏化或者甚至可能被內化，導致S1P刺激的減弱。膠原是主要的結構蛋白之一，它支持體內的所有組織并且是瘢痕組織的主要成分之一。在非病理性情況下，在通過成纖維細胞的月交原生成和通過特定酶的月交原降解之間的平纟軒來維持組織中總的月交原成分。許多涉及瘢痕組織水平提高的紊亂，部分地是由于抑制瘢痕形成所需的抑制膠原降解的生理和分子過程。我們假設S1P促進瘢痕組織形成的能力可能是由于抑制膠原降解的能力導致的，從而導致器官內瘢痕組織凈增長。因此，我們檢測了S1P對于人結膜成纖維細胞中血纖維蛋白溶酶原活化劑的抑制劑(PAI-1)表達的4乍用。提高的PAI-1表達與結締組織的蛋白水解的減少相關并且在與涉及增力口瘢痕的"i午多纖維^f匕疾病中上調。如圖5C所示，S1P刺;敫劑量依賴方式的PAI-1的表達。這些數據表明，也可通過刺激抑制其降解的蛋白質的表達來促進瘢痕組織形成，表明S1P通過多種枳J械性途徑發揮作用以促進和維持與眼部疾病相關的病理性瘢痕形成。實施例6:SPHINGOMAB抑制炎癥和免疫細胞、滲透炎癥是重塑過程中的第一個反應[7]。它是由局部缺血和細胞損害而引發的并導致細胞因子表達的上調，這刺激巨噬細胞和中性粒細月包遷移至損傷區i或以吞p藍死亡細月包并進一步上調炎癥反應[Jordanetal.(1999)，CardiovascRes,.Vol43:860-78]。月巴大細月包也是炎癥反應的重要細胞調節因素。由肥大細胞釋放的SIP是炎癥的實驗性動物模型中觀察到的許多有害反應的原因[Jollyetal(2004),JExpMed,.Vol199:959-70andJollyetal(2005),Blood，.Vol105:4736-42]。基于CNV和CVD中免疫和炎癥反應的相似性，在鼠科梗塞才莫型中，對SPHINGOMAB減輕免疫細胞向傷口中滲透的能力進行了評估，其作為SPHINGOMAB減輕AMD過程中這些損害的潛在作用的才示志、[Vineetal.(2005)，Ophthalmology,.Vol112:2076-80andSeddonandChen(2004)，IntOphthalmolClin，.Vol44:17-39]。MI后四天，使用MAC-1和MCG35抗體，分別對有危險的區域內的巨嗟細胞和肥大細胞滲透進行評價。SPHINGOMAB極大地減弱了炎癥巨噬細胞(圖6A)和肥大細胞(圖6B)的密度，這表明SPHINGOMAB可中和AMD過程中的免疫和炎癥損害。實施例7:SPHINGOMAB對于SIP是高度特異的竟爭性ELISA表明與其^f也生物活性脂質相比SPHINGOMAB對于SIP的特異性。SPHINGOMAB表明與鞘氨醇(SPH)，SIP的直接代謝前體或溶血石粦酸(LPA)(—種重要的細胞外信號分子，在結構上和功能上與SIP相似)之間沒有交叉反應。SPHINGOMAB不識別其他結構上相似的脂質和代謝物，包括神經酰胺-l-磷酸(C1P)、二氫鞘氨醇(DH-SPH)、磷脂酰絲氨酸(PS)、磷脂酰乙醇胺(PE)或鞘石粦脂(SM)。SPHINGOMAB與二氫1-石粦酸鞘氨醇(DH-S1P),以及更小的程度上，與磷酸膽堿鞘氨醇(SPC)發生交叉反應(圖7)。實施例8:抗LPA的mAb的開發這些試-驗的總目的是產生和開發對LPA特異的mAb，以開發用于治療LPA相關的疾病，特別是那些涉及過度纖維化的疾病的基于抗體的治療。例如，LPA通過刺激膠原基因表達和成纖維細胞的增殖具有一些直4妄纖維生成的4乍用[Chen,etal.(2006)FEBSLett.580(19):4737-45]。因此，抗LPA的mAb在治療纖維化和以過量成纖維細胞活性為特征的疾病中是有用的。這些疾病包括但不限于多種眼部紊亂、心臟重塑、心臟衰竭和硬皮病。抗體以生物活性脂質，LPA為耙標，這表明在體外試驗和體內試驗中的良好性能特點在治療和it斷應用中將是非常有益的。為了產生針對LPA的單克隆抗體(mAb)，用溶血磷酸的衍生物(LPA,1-酰基-2-溶血-sn-甘油-3-磷酸(l-acyl-2-lyso-sn-glycero-3-phosphate))乂于80只小鼠進4亍免疫。通過在免疫后3個時間點用ELISA分析被免疫小鼠的血清來確定抗LPA抗體的存在。各個小鼠之間的免疫反應無論是在抗體反應時間和獲得水平方面都顯著不同。大體上，在至少一半的小鼠中，觀察到明顯的免疫反應(滴定度>125，000)。選出具有最高抗體滴定度的五只小鼠開始雜交瘤細力包系的形成。在對/人這5種融合而產生的2000多雜交瘤細胞進行初步篩選后，總共29個抗分泌抗LPA的雜交瘤細胞系顯示與LPA結合。在這些克隆中，24個被進一步亞克隆并在ELISA試驗面板中被鑒別。從維持陽性的14個克隆中，選出6個克隆進一步鑒別。mAb的同型是多數抗體的IgGl。在初步篩選中，對所有mAb與12:0LPA和S1P的結合特性進4亍比較。26個mAb中，5個克隆與S1P發生交叉反應。對8個與12:0和18.'0LPA具有4交高結合的抗LPAmAb進一步鑒別其特異性和結合特性。通過使用一系列類似物的竟爭性ELISA充分鑒定了來自6個單個細胞系的mAb的特異性并且在一系列體外試驗中鑒定了它們的結合能力(表1)。多數mAb表現對LPA同型的特異性。估計抗體親和力在皮克摩爾范圍內。在動物才莫型中的進一步測定將確定這些mAb是否可為LPA相關疾病提供有前途的治療的基礎。使用表面等離子體共振，對6種mAb的親和力和動力學進4亍測量(表2)。所有6種mAb以相似的《D值(在0.34至3.8pM范圍內)和相似的動力學參數結合LPA。對于許多這些相互反應，當復合物非常緩慢地分解時，在設定程序中^固定在1x10-6s"。表1還描述了這6種mAb與以不斷增加的濃度結合到ELISA板的小孔中的18:0和12:0的LPA之間的結合。4吏用18:0和12:0LPA作為包#皮抗原，確定mAb表現50%有效濃度的濃度(EC5Q)和最大結合(MB)。ECs。的值通常對于18:0LPA較低。應注意到，mAbB3與其他mAb相比，與18:0LPA比與12:0LPA表現4交高的結合特性。通過確定與一系列LPA變異體和相關生物脂質例如二;更脂酰磷脂酸、溶血磷脂膽堿、S1P、神經酰胺和神經酰胺-l-磷酸的結合，評估抗LPA的mAb的特異性。表3中總結了針對不同LPA相關化合物的6種選才奪的mAb和兩種另外的mAb(504B58-3F8和504B104)的ICso和交叉反應。所有mAb在12:0(月桂酰)、14:0(肉豆蔻酰)、16:0(才宗浙司酰)、18:1(油酰)、18:2(亞油酰)和20:4(花生酰)LPA之間都不同(表3)，雖然它們均不表現與二硬脂酰PA和LPC、LPA的直接代謝前體的交叉反應。此外，其他檢測的脂質例如S1P、神經酰胺和神經酰胺-l-磷酸的抑制效果可以忽略。這些發現清楚i也表明，抗LPA的mAb不識別這種結構上相似的脂質，包括前體脂質，表明抗體對于溶血;粦酸的高特異性。ECso的排名順序是，對于不飽和的18.'2>18:1>20:4，而對于飽和脂質為14:0〉16:O18:0。有趣的是，與18:1LPA的竟爭表明6種mAb的不同性能。在6種mAb中，504B3表現最低的IC50(50%的結合抑制.)。在填力口的具有287nMICm^直的18:1LPA的情況下，mAb504B3與固定的18:1LPA的直接結合被有效地阻止。令人驚訝地，沒有ICso的值接近它們各自的結合LPA的尺j直。ICso的值至少比它們的尺^值高100倍(nM范圍wpM范圍)。如在竟爭實驗中所顯示的，5種mAb表現對18:1LPA的特異性。18:1LPA不與結合于固定的18:1LPA的mAb63竟爭，而它以皮克摩爾范圍內的i^值結合LPA。因此，雖然所有6種mAb以相似的親和力結合LPA,6種mAb中的5種表現出與18:1LPA的有效和特異結合。表l.直接結合的動力學檢測作為包#1抗原用于結合12:0LPA或18:0LPA(O.lpM)的漸增數量的mAb(達40ng/100jul反應混合)。EC5。具有50%最大結合的有效抗體濃度。MB:最大結合(表現為OD450)。<table>tableseeoriginaldocumentpage70</column></row><table>表2，抗LPA的小鼠mAb的結合親和力LPA以150共振儀的密度范圍固定于傳感器芯片上。每種mAb的稀釋液完全覆蓋固定的LPA,通過結合/分離階段的非線性回歸獲得動力學常數。雙份實驗中使用至少三個測定值給出作為標準差的誤差值。表觀親和力由Kcr^/i^確定。Ka=以<table>tableseeoriginaldocumentpage71</column></row><table>IC50:半最大抑制濃度MI:最大抑制(在沒有抑制劑的情況下結合的％)…由于抑制4效弱沒有4企測到材料和方法生物脂質試劑所有生物脂質購自AvantiPolarLipids乂>司，具有由HPLC和質譜儀證實的特性。LPA衍生物在化學系(圣地亞哥州立大學)合成。所有的其他試劑購自Fisher公司，除非另外說明。DLPC:l-棕櫚酰-2-肉豆蔻酰—w-甘油-3-膽石咸石粦酸DASA:1，2-二石更脂酰-^-甘油-3-石粦酸14:0LPA:1-肉豆蔻酰-2-羥基-sw-甘油-3-石粦酸16:0LPA:1-棕櫚酰-2-羥基-s"-甘油-3-磷酸18:0LPA:1-硬脂酰-2-羥基-s"-甘油-3-磷酸18:1LPA:1-油酰-2-羥基-s"-甘油-3-磷酸18:2LPA:1-亞油酰-2-羥基-s"-甘油-3-磷酸20:4LPA:1-花生酰-2-羥基-s"-甘油-3-磷酸S1P:D-赤-l-磷酸鞘氨醇定量ELISA:孩吏量滴定ELISA板(Costar,CatNo.3361)用兔抗鼠IgG、稀釋在1M碳酸鹽緩沖液(pH9.5)中的F(ab')2片斷特異抗體(Jackson,315-005-047)在37°C下包4皮lh。用PBS洗才反并用PBS/BSA/Tween-20在37°C下封閉lhr。對于首次孵育，將非特異的鼠IgG或人IgG的稀釋液、全部分子(用于校準曲線)和待測樣品加入孔中。洗板并特育每孔IOOjliI的1:40,000稀釋的羊抗鼠(H+L)偶聯的HRP(Jackson,catNo115-035-146)在37°C下孵育lhr。洗板后，用四曱基對二氨基聯苯(Sigma,catNoT0440)檢測酶促反應并通過加入1MH2S04終止反應。^使用ThermoMultiskanEX在450nm下測量光密度(OD)。原始數據轉入用于分析的GmphPad軟件。直接ELISA:微量滴定ELISA板(Costar，CatNo.3361)用稀釋在1M石灰酸鹽纟爰沖'液(pH9.5)中的LPA-BSA在37°C下包被lh。用PBS(137mMNaCl、2.68mMKCl、lO.lmMNa2HP04、1.76mMKH2P04;pH7.4)洗板并用PBS/BSA/Tween-20在室溫下封閉lh或在4°C下過夜。待測才羊品,希釋為0.4pg/mL、0.2|tig/mL、0.1jig/mL、0.05fig/mL、0.0125ng/mL、以及0iag/mL，并向每孑L中力口入lOOjal。洗才反并用每孑LlOOpl與羊抗鼠(1:20,000稀釋)(Jackson,catNo115-035-003)偶聯的HRP在室溫下孵育lh。洗板后，用四曱基對二氨基聯苯(Sigma,catNoT0440);險測酶促反應并通過加入1MH2S04終止反應。4吏用ThermoMultiskanEX在450nm下測量光密度(OD)。原始數據轉入用于分析的GraphPad軟件。竟爭實驗mAb的特異性在ELISA試驗中#:測。孩丈量滴定ELISA板(Costar，CatNo.3361)用稀釋在1M碳酸鹽緩沖液(pH9.5)的18:0LPA-BSA在37。C下包#皮lh。用PBS(137mMNaCl、2.68mMKCl、10.1mMNa2HPO4、1.76mMKH2P04;pH7.4)洗板并用PBS/BSA/Tween-20在37。C下封閉lh或在室溫下過夜。對于首次孵育，0.4pg/mL抗LPA的mAb和指定量的(14:0、16:0、18:0、18:1、18:2和20:4)LPA、DSPA、18:1LPC(溶血磷月旨酰膽堿)、S1P、神經酰胺和神經酰胺-l-石粦酸加入ELISA氺反的孑L中并在37。C下卵孚育lh。洗才反并且每孔用100pl與羊抗鼠偶聯的HRP(1:20,000稀釋液)(Jackson，catNo115-035-003)或與1:50,000稀釋的羊抗人(H+L)偶聯的HRP(Jackson,catNo109-035-003)在37。C下孵育lh。洗板后，用四甲基對二氨基聯苯(Sigma，catNoT0440)檢測酶促反應并通過加入1MH2S04終止反應。使用ThermoMultiskanEX在450nm下測量光密度(OD)。原始數據轉入用于分析的GraphPad軟件。抗體純化單克隆抗體通過將由培養上清液以0.5mL/min穿過蛋白A/G柱(Pierce,Cat.No53133)進4亍純4b。移動相由1xpierceIgG結合緩沖液(Cat.No21001)和0.1M甘氨酸pH2.7(Pierce，洗脫緩沖液，Cat.No21004)組成。在0.1M甘氨酸中的抗體收集物用pH8.0的IM磷酸緩沖液稀釋10%(v/v)，以中和pH。IgGl收集物集中起來并對1xPBS(PierceSlide-A隱LyzerCassette,3,500MWCO，Cat.No66382)進4亍徹底;參透。洗出液用CentriconYM-3(10,000MWCO,AmiconCat.No4203)通過在2，500rcf下離心lh進行濃縮。抗體濃度通過上述〗吏用可商購的骨髓瘤IgGl卞者備液作為標準品通過定量ELISA確定。通過^f吏用單克隆抗體同型^式劑盒(Sigma,ISO-2)的ELISA確定mAb的重型鏈。實施例9:人源4匕抗SIP單克隆抗體-SPHINGOMAB本實施例描述了可與SIP特異反應的特別優選的人源化單克隆抗體。這種稱為LT1009的抗體的結構、合成、純化和;險測，在通常擁有的、共同^f寺決的、同時提交的美國專利申i青序列號-A，-的申請中描述[代理人案號LPT-3010-PV,名為"用于結合鞘氨酸-l-磷酸的組合物和方法"],為了各種內容其全部內容通過引用結合于此。與鼠科抗SIP抗體(LT1009是從其獲得的)相比，人源化形式表現出皮克摩爾范圍內的S1P結合親和力，以及較高的穩定性和在體內的效率。如與天然存在的抗體相比，LT1009在每兩個輕鏈多肽和每兩個重鏈多肽(其包括每個抗體分子)中包括三個互補決定區(每個"CDR")。下面直4妄^合出了這6個CDR中每一個的氨基酸序列("VL"指免疫球蛋白輕鏈的可變區，而"VH"指免疫球蛋白重鏈的可變區)CDR1VL:ITTTDIDDDMN[SEQIDNO:1]CDR2VL:EGNILRP[SEQIDNO:2]CDR3VL:LQSDNLPFT[SEQIDNO:3]CDR1VH:DHTIH[SEQIDNO:4]CDR3VH:GGFYGSTIWFDF[SEQIDNO:5]CDR2VH:AISPRHDITKYNEMFRG[SEQIDNO:6]下面直4妄列出了LT1009的重鏈多肽和輕《連多肽的核苷酸和氨基酸序列LT1009HC核香酸序列[SEQIDNO:7]:1ststgcttgccgccaxrca.tgga這tggagctgggtgrttcctgttctttctgte51ctgaggtgcagetggtgeaigtctggagcag101gcccgggg^gtctctgaagatctcctgtca151tattcactggtgcccgggca201崎gcctggagtggatgggggctatttctcccagacatgatMlaoaatgsgatcsggtcacca301agcacrcgcctact:tgcagtggageagect:gaaggectegg351gtatttctgtggttctac:ggtggtttgact401仁tt:ggggcc這gtcaccgtctteageetccacc紋stgggc451ce為tcggtcttccccctggcsccctcctccctgggggcae501agcggccctgggctgcc:tggcttccccgaacc;ggtgacgg551tgtcgtgg貼ctca歸cgccctgaccagcggcgtgca_c^c!cttcccggct601gtcctacagtcctcaggaicttgaccgtgcc651ctcc這gcsgcttgggcacecagaectacatctgca改cgtg701agcacaggga751gggagggtgtctgctggaagcgctcctgcctggaegcate801ccggctatgcsgtccc的tcegtctgcctc851ggcctctgccatgctcagggagagggtctt901ctggctttttecccaggctctgggcaggc這caggctaggtgcccctaacc951caggccctgcacaicsaatggggcaggtgctgtgecaagage1001catatccgggaggaccctgcccctgaccta這gccca^ccccaaaggcca&a1051cctcagctcggacaccttctctcctcccag1101ctcceaatcttctctctgca^ga^g'GCcaaatcttgtgacaagcc:c這ggtaagcc^gcccaggcctcgccctccagctcaag12QltgcectagaLgrccagggacaggccecagccg1251g訂tgctgacaogtceacc.tctcagc逸cctg'aac仁cctggrgr1301gggaccgtcagtcttcctcttcccccc這sa1351tctcccggscccctgaggtcacatgcgtggtggtggacgt1401ctggtacgtggacggegtggaggtgeataa1451tgccaagac汰tacegtgtgg15Cntcagc:gtcc:tcaccgtcctgggctgaatggcaaggagt改c1551aagftgcaaggagccctcccagecc:ccateg:i60iaaaggtgggacccgtggggtgcgagggc:cacatggacaga1651ggccggctcggctccaiccc;tcgtgac:cgctgtacc這acctc1701■si/""^gggcagcccegagaaccacaggtgta.csccctgcccccet1751.cocgggaggsgcctgacctg1801ggcttcta仁cccagcgacat1851ggaga.acaactacaagaccacgcctcccgtgctggactccgaeggctcet1901tctteetetatageaagrete.accjgtgg"acaagageaggtggeagc'agggg1951aacgtctteteatgcteegtgatgcatgaggretctgeaeaaceactoeae2001gcagaagagcctctccctgtctccgggtaaatagLT1009HC氨基酸序列[SEQIDNO:8]:1mewswvfIffvqlvcjsgaevkkpgeslkiscgsfgyifid511ewntgaisprhditkynatdkssstayi10:1qwsslkasdtamyfcarggfygstiwfdfwgqgtmvtvss151lapsskstsggtaalgclvkdyfpepvtvsvmsgaltsgvhtfpavlqss201giyslssw.tyicnvnhkpsritkv'dkrvapellggpsvf1251isrtpwtcvwdvshedps301eeqynstyrvvsnkalpapiektiskakgg351pr鄰qvytlpvsltclvkgfypsdiavewesngqpeimyk磁ttppvldsdgsfflyskltvfscswihealhnhytgksls451lspgkLT1009LC核芬酸序列[SEQIDNO:9]:1aagtcttgccgccaccatgtc:tgtgcctaoceaggtgetgggactgctget51gctgt節ctgacagacgcecgacagtgacgcagtctccat101ccttectgtctgcatctgtatcaccatcacttgcataacc151ttgatgatgattccagcagg201agcccct關gctcetgatetccg改aggcaeitattcttegtcctggggtcc251cagcagcsgtggatatggca301agcaaatt:ffcagcctgaa$attttgcaacttattaetgtttgcagagtga351ta.actta.ccattcactttcggc:c鋒gggaccaagctgg的atcaa.acgta401c.ggtggctgcttcatcttcecg'ccatctga451.ctgcctctgttgtgtgcctg501agaggccasia這ggtggata紋cgccctccaatcgggtaact551ccc3ggfagagtgtcacagagctac改gcctcSOIagcagcacceacaaagtcta651cgcctgcgaagtcacccatcagggcctgagctcgcccgtcacaaagag'ct701agagtgttagLT1009LC氨基酸序列[SEQIDNO:10]:1msvptgvlgllllwltda.reettv'tgspsf1sasvgdrvtiteitttdid51ddranwfgqepgkapkllisegnilrpgvpsrfsssgygtdftltisklqp101.edfatyyclgsdnlpftfg<igtkleikrtvaapsvfif卯sdeglksgta151swcllnnfypreakvqwkvdnalqsgnsqesvtecjdskdstyslsstlt201lskadyekhkvyacevthq;gljsspv汰sfnrgec權利要求1.一種減少或預防動物眼睛的異常纖維生成、纖維化或瘢痕形成的方法，所述方法包括給予所述動物可與生物活性脂質反應的免疫誘導部分，其中，所述免疫誘導部分能夠減少所述生物活性脂質的有效濃度。2.根據權利要求1所述的方法，其中所述免疫誘導部分是單克隆抗體或其片斷、變異體或衍生物。3.才艮據權利要求1所述的方法，其中，所述生物活性脂質是溶血脂質。4.根據權利要求3所述的方法，其中所述溶血脂質是S1P或LPA或它們的變異體。5.根據權利要求2所述的方法，其中所述免疫誘導部分是可與S1P或LPA或它們的變異體反應的單克隆抗體。6.4艮據權利要求1所述的方法，其中所述動物是人類。7.—種調節動物眼睛的外一牛手術和創傷的傷口愈合反應的方法，所述方法包括鄉會予所述動物可與生物活性脂質反應的免疫誘_導部分，其中所述免疫誘導部分能夠減少所述生物活性脂質的有效濃度。8.根據權利要求7所述的方法，其中所述免疫誘導部分是單克隆抗體或其片斷、變異體或衍生物。9.根據權利要求7所述的方法，其中所述生物活性脂質是溶血脂質。10.根據權利要求9所述的方法，其中，所述溶血脂質是S1P或LPA或它們的變異體。11.根據權利要求8所述的方法，其中所述免疫誘導部分是可與S1P或LPA或它們的變異體反應的單克隆纟元體。12.根據權利要求7所述的方法，其中所述動物是人類。13.—種減少或預防動物眼睛炎癥的方法，所述方法包括:纟會予所述動物可與生物活性脂質反應的免疫"i秀導部分，其中所述免疫誘導部分能夠減少所述生物活性脂質的有效濃度。14.根據權利要求13所述的方法，其中所述免疫誘導部分是單克隆抗體或其片斷、變異體或衍生物。15.根據權利要求13所述的方法，其中所述生物活性脂質是溶血脂質。16.根據權利要求15所述的方法，其中所述溶血脂質是S1P或LPA或它們的變異體。17.根據權利要求14所述的方法，其中所述免疫誘導部分是可與S1P或LPA或它們的變異體反應的單克隆抗體。18.根據權利要求13所述的方法，其中所述動物是人類。19.一種減少或子貞防動物眼睛異常新血管生成的方法，所述方法包括給予所述動物可與生物活性脂質反應的免疫i秀導部分，其中，所述免疫誘導部分能夠減少所述生物活性脂質的有效濃度。20.根據權利要求19所述的方法，其中所述免疫誘導部分是單克隆抗體或其片斷、變異體或衍生物。21.根據權利要求19所述的方法，其中所述生物活性脂質是溶血脂質。22.才艮據4又利要求21所述的方法，其中所述溶血脂質是S1P或LPA或它們的變異體。23.根據權利要求20所述的方法，其中所述免疫誘導部分是可與S1P或LPA或它們的變異體反應的單克隆纟元體。24.才艮據;K利要求19所述的方法，其中所述動物是人類。25.—種用于減弱動物眼部免疫反應的方法，所述方法包4舌纟會予所述動物可與生物活性脂質反應的免疫誘導部分，其中所述免疫誘導部分能夠減少所述生物活性脂質的有效濃度。26.根據權利要求25所述的方法，其中所述免疫誘導部分是單克隆抗體或其片斷、變異體或衍生物。27.根據權利要求25所述的方法，其中所述生物活性脂質是溶血脂質。28.根據權利要求27所述的方法，其中所述溶血脂質是S1P或LPA或它們的變異體。29.根據權利要求26所述的方法，其中所述免疫誘導部分是可與S1P或LPA或它們的變異體反應的單克隆抗體。30.根據權利要求25所述的方法，其中所述動物是人類。31.—種用于減少動物中生物活性脂質的有效眼部濃度或活性的方法，所述方法包括給予所述動物可與生物活性脂質反應的免疫誘導部分，其中所述免疫誘導部分能夠減少所述生物活性脂質的有效濃度。32.根據權利要求31所述的方法，其中所述免疫誘導部分是單克隆抗體或其片斷、變異體或衍生物。33.才艮據權利要求31所述的方法，其中所述生物活性脂質是溶血脂質。34.4艮據權利要求33所述的方法，其中所述溶血脂質是S1P或LPA或它們的變異體。35.根據權利要求32所述的方法，其中所述免疫誘導部分是可與S1P或LPA或它們的變異體反應的單克隆4元體。36.根據權利要求31所述的方法，其中所述動物是人類。37.—種治療受i式者目艮部疾病或病癥的方法，所述方法包括「纟會予所述受試者一種包括可與生物活性脂質反應的免疫i秀導部分的藥物組合物，其中所述免疫誘導部分能夠減少所述生物活性脂質的有效濃度。38.根據權利要求37所述的方法，其中所述免疫誘導部分是單克隆抗體或其片斷、變異體或衍生物。39.根據權利要求37所述的方法，其中所述生物活性脂質是溶血脂質。40.根據權利要求39所述的方法，其中所述溶血脂質是S1P或LPA或它們的變異體。41.根據權利要求38所述的方法，其中所述免疫誘導部分是可與S1P或LPA或它們的變異體反應的單克隆抗體。42.根據權利要求37所述的方法，其中所述受試者是人類受試者。43.根據權利要求37所述的方法，其中所述眼部疾病或病癥至少部分地以異常的纖維生成、纖維化、或瘢痕形成為特^正。44.才艮據權利要求43所述的方法，其中至少部分以異常的纖維生成、纖維化、或瘢痕形成為特征的所述眼部疾病或病癥選自由年齡相關性黃斑變性、糖尿病視網膜病變、早產兒#見網膜病變、鐮狀紅細胞性視網膜病變、缺血性視網膜病變、3見網膜靜脈閉塞疾病、黃斑鈹褶、玻璃紙樣視網膜病變、ERM形成、隱形眼鏡過度磨損、牽拉性視網膜脫離、增生性玻璃體一見網膜病變、創傷損傷、眼瘢痕性類天皰瘡、史-約綜合癥、中毒性表皮壞死爭〉解癥、翼狀胬肉、以及包括屈光手術、^皮璃體+刀開術和青光眼手術的眼部手術的后果組成的組。45.根據權利要求37所述的方法，其中所述眼部疾病或病癥是炎癥或免疫病癥。46.根據權利要求45所述的方法，其中所述炎癥或免疫病癥選自由年齡相關性黃斑變性、葡萄膜炎、玻璃體炎、包4舌單純性皰滲感染、帶狀皰滲感染和原蟲感染的各種感染；角膜移才直排斥以及眼部纟且織力包漿菌病組成的組。47.根據權利要求37所述的方法，其中所述眼部疾病或病癥至少部分地以異常新血管生成為特征。48.根據權利要求47所述的方法，其中至少部分地以異常新血管性、糖尿病視網膜病變、早產兒視網膜病變、角膜移植排斥、新血管性青光眼、隱形眼鏡過度磨損、包括單純性皰滲感染、帶狀皰瘆感染和原蟲感染的角膜感染；翼狀胬肉、缺血性視網膜病變、視網膜靜脈閉塞疾病、感染性葡萄膜炎、t曼性—見網膜脫離、激光損傷、鐮狀紅細胞視網膜病變、靜脈閉塞疾病、脈絡膜新血管生成、視網膜血管瘤增生、以及原發性息肉狀脈絡月莫血管病變組成的組。49.根據權利要求37所述的方法，其中所述免疫誘導部分是通過以下方式給藥的系統的、局部的、通過玻璃體內或眼周注射、電離子透入療法、噴霧或滴劑、或作為原位膠部分、眼部插入物、角膜保護膜或隱形眼鏡、脂質體、非離子表面活性劑嚢泡/discome、粘膜粘附系統、凍干載體系統、微粒、亞微粒乳劑、樹枝狀大分子、孩"求、納米球、或collasome以及它們的組合。50.根據權利要求37所述的方法，其中所述免疫誘導部分是經修飾的、未^務飾的、或作為具有或不具有增強劑和/或滲透增強劑的前藥而4是供的。51.一種藥物組合物，包括在藥物可接受的載體中與生物活性脂質反應的免疫i秀導部分。52.才艮據4又利要求51所述的藥物組合物，適于在眼睛內和/或眼睛上使用。53.根據權利要求51所述的藥物組合物，其中所述藥物纟且合物包4舌;岸酸鹽IC沖液。54.—種治療受試者石更皮病的方法，所述方法包:l舌給予所述受試者包括可與生物活性脂質反應的免疫誘導部分的藥物組合物，其中所述免疫誘導部分能夠減少所述生物活性脂質的有效濃度。55.根據權利要求54所述的方法，其中所述藥物組合物是系統性、皮內、皮下、通過吸入粘膜給藥或局部;也給藥的。56.才艮據4又利要求54所述的方法，其中所述受試者是人類受試者。全文摘要本發明涉及用于預防和治療包括眼部疾病和病癥在內的疾病和病癥的組合物和方法，所述疾病和病癥的特征在于異常的纖維生成或瘢痕形成、炎癥和/或異常的新血管生成或血管生成。本發明的組合物和方法利用能針對生物活性脂質具有特異反應活性并能夠減少所述生物活性脂質的有效濃度的免疫誘導部分。在一些實施例中，該免疫誘導部分是針對1-磷酸鞘氨醇(S1P)或溶血磷脂酸(LPA)具有反應活性的單克隆抗體。文檔編號C12P21/08GK101340929SQ200680048337公開日2009年1月7日申請日期2006年10月27日優先權日2005年10月28日發明者威廉·A·加蘭,格倫·L·斯托勒,羅格·A·薩巴迪尼申請人:勒帕斯公司