專利名稱：一種鑒別黃姑魚精子活力的方法
技術領域：
本發明屬于水產養殖技術領域，尤其涉及到一種鑒別黃姑魚精子活力的方法。
背景技術：
在生產實踐中，魚類精子活力的好壞是反應受精率高低的重要指標之一，因此，客 觀準確評價魚類精子的活力具有非常重要的理論意義與應用價值。在評價魚類精子活力 時，目前主要有以下幾種方法一、利用普通顯微鏡觀察記錄精子的活動狀況和運動時間， 這種方法受人為因素的影響較大，不能客觀反應精子的活動狀況；二、利用魚類精子直接開 展受精試驗，統計受精率、孵化率、出膜率等，這種方法受外界環境因子較多，且隨著不同魚 類的早期發育時間的長短試驗周期會有較大變化；三、最近又開發出一套計算機輔助分析 系統(CASA)，用于分析精子的運動速率和運動距離等，這種方法能客觀反應精子的活動情 況，但儀器設備較為昂貴。
發明內容
本發明需要解決的問題是提供一種避免受人為因素、外界環境因子的影響，能客 觀準確評價、鑒別黃姑魚精子活力的方法。本發明配備試劑盒、紫外分光光度計，在黃姑魚的繁殖季節，分批采集一定量的 精子，用試劑盒分別測定不同批次精子中總ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶 和酸性磷酸酶的活性，如果精子中ATP酶的活性高于6. 34士 1. 41U/ml，肌酸激酶的活性高 于7. 86士0. 36U/ml，琥珀酸脫氫酶的活性高于5. 67士 1. 15U/ml,乳酸脫氫酶的活性高于 2120. 53士 101. 26U/L，酸性磷酸酶的活性高于14. 74士 1. 70U/100ml,為精子活力較好；如 果精子中ATP酶的活性介于0. 32士0. 07U/ml和6. 34士 1. 41U/ml之間，肌酸激酶的活性介 于6. 24士0. 31U/ml和7. 86士0. 36U/ml之間，琥珀酸脫氫酶的活性介于1. 83士0. 29U/ml和
5.67士 1. 15U/ml 之間，乳酸脫氫酶的活性介于 522. 22士45. 07U/L 和 2120. 53士 101. 26U/ L之間，酸性磷酸酶的活性介于7. 59士0. 75U/100ml和14. 74士 1. 70U/100ml之間，為 精子活力一般；如果精子中ATP酶的活性低于4. 18士0.81U/ml，肌酸激酶的活性低于
6.24士0. 31U/ml,琥珀酸脫氫酶的活性低于1. 83士0. 29U/ml,乳酸脫氫酶的活性低于 522. 22士45. 07U/L，酸性磷酸酶的活性低于7. 59士0. 75U/100ml，則鑒別為精子活力差。本發明針對不同活力的黃姑魚精子，相關能量代謝酶的活性的差別，對不同批次 的精子進行酶活性檢測，根據酶活性的高低建立了不同活力的黃姑魚精子相關能量代謝酶 的活性數據，并提供了鑒別黃姑魚精子中總ATP酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶、肌酸激酶 和酸性磷酸酶的活性的相應區分數據，通過精子相關能量代謝酶活性檢測，根據酶活性的 高低，用本方法的區分數據來鑒別黃姑魚精子的活力。本方法與現有方法相比，不僅減少了 通過人為觀察判斷的主觀因素，可檢測樣本數量大，所需時間短，而且鑒別準確率達到98% 以上的顯著效果，利用本方法鑒別出的不同活力的精子開展受精試驗，活力好的精子受精 率可達到95%以上，活力一般的精子受精率只有50%左右，活力差的精子基本無受精能力。本方法所用儀器設備簡單，只需一臺普通的分光光度計，成本低廉，不需要昂貴的儀器 設備。
具體實施例方式
在黃姑魚的繁殖季節，分批采集黃姑魚的精子，每批次取5尾魚精子，用試劑盒(南京建成生物工程研究所出品試劑盒)在紫外分光光度計下分別測定不同批次 精子中總ATP酶、肌酸激酶(CK)、琥珀酸脫氫酶(SDH)、乳酸脫氫酶(LDH)和酸性磷酸 酶(ACP)的活性，每個樣重復三次，結果取平均值，運用統計軟件對結果進行分析處理， 如果精子中ATP酶的活性高于6. 34 士 1. 41U/ml，CK的活性高于7. 86 士 0. 36U/ml，SDH 的活性高于5. 67 士 1. 15U/ml，LDH的活性高于2120. 53 士 101. 26U/L，ACP的活性高于 14. 74士 1. 70U/100ml，為精子活力較好；如果精子中ATP酶的活性介于0. 32士0. 07U/ml和 6. 34士 1. 41U/ml 之間，CK 的活性介于 6. 24士0. 31U/ml 和 7. 86士0. 36U/ml 之間，SDH 的活 性介于 1. 83士0. 29U/ml 和 5. 67士 1. 15U/ml 之間，LDH 的活性介于 522. 22士45. 07U/L 和 2120. 53士 101. 26U/L 之間，ACP 的活性介于 7. 59士0. 75U/100ml 和 14. 74士 1. 70U/100ml 之間，為精子活力一般；如果精子中ATP酶的活性低于4. 18士0. 81U/ml, CK的活性低于 6. 24 士0. 31U/ml，SDH 的活性低于 1. 83 士0. 29U/ml，LDH 的活性低于 522. 22 士45. 07U/L，ACP 的活性低于7. 59士0. 75U/100ml，則鑒別為精子活力差。
權利要求
一種鑒別黃姑魚精子活力的方法，配備試劑盒、紫外分光光度計，其特征是在黃姑魚的繁殖季節，分批采集一定量的精子，用試劑盒分別測定不同批次精子中總ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶和酸性磷酸酶的活性，如果精子中ATP酶的活性高于6.34±1.41U/ml，肌酸激酶的活性高于7.86±0.36U/ml，琥珀酸脫氫酶的活性高于5.67±1.15U/ml，乳酸脫氫酶的活性高于2120.53±101.26U/L，酸性磷酸酶的活性高于14.74±1.70U/100ml，為精子活力較好；如果精子中ATP酶的活性介于0.32±0.07U/ml和6.34±1.41U/ml之間，肌酸激酶的活性介于6.24±0.31U/ml和7.86±0.36U/ml之間，琥珀酸脫氫酶的活性介于1.83±0.29U/ml和5.67±1.15U/ml之間，乳酸脫氫酶的活性介于522.22±45.07U/L和2120.53±101.26U/L之間，酸性磷酸酶的活性介于7.59±0.75U/100ml和14.74±1.70U/100ml之間，為精子活力一般；如果精子中ATP酶的活性低于4.18±0.81U/ml，肌酸激酶的活性低于6.24±0.31U/ml，琥珀酸脫氫酶的活性低于1.83±0.29U/ml，乳酸脫氫酶的活性低于522.22±45.07U/L，酸性磷酸酶的活性低于7.59±0.75U/100ml，則鑒別為精子活力差。
2.根據權利要求1所述的一種鑒別黃姑魚精子活力的方法，其特征是分批采集一定量 的精子為每批次取5尾魚精子。
全文摘要
一種鑒別黃姑魚精子活力的方法，涉及水產養殖技術領域，需要提供一種鑒別黃姑魚精子活力的方法，本發明配備試劑盒、紫外分光光度計，其特征是在黃姑魚的繁殖季節，分批采集一定量的精子，用試劑盒分別測定不同批次精子中總ATP酶、肌酸激酶、琥珀酸脫氫酶、乳酸脫氫酶和酸性磷酸酶的活性來區分精子活力較好、一般或活力差。本發明用于鑒別黃姑魚精子的活力。
文檔編號C12Q1/25GK101838680SQ200910047658
公開日2010年9月22日 申請日期2009年3月16日 優先權日2009年3月16日
發明者馮廣朋, 劉鑒毅, 姚志峰, 莊平, 張濤, 江琪, 章龍珍, 趙峰, 閆文罡, 黃曉榮 申請人:中國水產科學研究院東海水產研究所