一種提高人精子活力的體外培養體系試劑盒及其應用
【技術領域】
[0001]本發明涉及一種提高人精子活力的體外培養體系試劑盒及其應用，屬于XX技術領域。
【背景技術】
[0002]據世界衛生組織數據顯示，全球約15%的育齡夫婦面臨著不孕不育的威脅，我國近期調查結果顯示國內不孕癥者占已婚夫婦人數的10%，而且發病率呈上升趨勢。其中占據人類不孕不育癥患者一半左右的是男性不育癥的患者而弱精癥則是常見男性不育的原因之一。臨床常通過人工授精進行治療，數據顯示，較好的精子動力是提高輔助生殖技術成功率的一個重要條件。
[0003]精液的主要成分是精子和精漿，精子來源于睪丸，是受精的主體，其質膜上含有多種脂肪酸，它們對于精子的活動具有非常重要的作用。在輔助生殖技術操作實施過程中，常規處理精子的方法是洗去精漿，活力低的精子及死精子，然后用人工合成的培養液培養精子，人工合成的培養液包括Bffff、mHTF、臺式液等等。上述培養液主要為精子提供了一個緩沖和基本供能環境，對精子活力的提尚作用不明顯。因此，在臨床上開發一種提尚精子活力的培養體系就顯得尤為重要。
【發明內容】
[0004]為了克服上述問題，本發明進行大量研究，發現精子中的一些脂肪酸對于精子活力的提高具有重要作用，例如Hexadecanoic Acid(十六酸甲酯)、Trans-13_0ctadecenoicAcid(反式-13-十八碳稀酸)、9，12-0ctadecenoic Acid(12-輕基_9_十八碳稀酸)、Arachidonic Acid(花生四稀酸)、Docosahexaenoate Acid(二十二碳六稀酸)。而這些脂肪酸的加入對于提高精子活力具有非常重要的作用。
[0005]本發明的第一個目的是提供一種提高人精子活力的體外培養體系試劑盒，所述試劑盒中含有試劑 Hexadecanoic Acid、Trans-13_0ctadecenoic Acid、9, 12-Octadecenoic、Arachidonic Acid、Docosahexaenoate Acid。
[0006]在本發明的一種實施方式，所述試劑盒中Hexadecanoic Acid、Trans-13-0ctadecenoic Acid、9, 12_0ctadecenoic、Arachidonic AcicInDocosahexaenoateAcid的體積比為5:5:4:6:10。
[0007]在本發明的一種實施方式，所述人精子是離體之后用經精子分離液分離后的精子。
[0008]本發明的第一個目的是提供所述試劑盒在提高離體之后的人精子的活力方面的應用方法。
[0009]所述應用方法是取9mL的Modified Human Tubal Fluid改良后人輸卵管液，簡稱mHTF)、lmL的serum substitute supplement (血清替代物，簡稱SSS)，然后添加試劑盒中的 Hexadecanoic Acid 25 μ 1、Trans-13-0ctadecenoic Acid 25 μ1、9，12-0ctadecenoicAcid 20 μ 1、Arachidonic Acid 30 μ 1、Docosahexaenoate Acid 50 μ 1 制成 10.15ml 的培養液，用該培養液重懸離體之后用精子分裂液分離出來的精子，輕輕混勻，置于37°C放置1?3小時。
[0010]在本發明的一種實施方式，所述應用方法中，37°C放置時間為1.5?2h。
[0011]在本發明的一種實施方式，所述應用方法中，精子按照終濃度1000萬/mL的濃度進行重懸。
[0012]本發明的第三個目的是提供一種人精子體外培養液，所述培養液中含有脂肪酸Hexadecanoic Acid、Trans-13-0ctadecenoic Acid、9, 12-0ctadecenoic、ArachidonicAcid和 Docosahexaenoate Acid。
[0013]在本發明的一種實施方式，所述體外培養液中脂肪酸HexadecanoicAcid、Trans-13-0ctadecenoic Acid、9, 12-Octadecenoic、Arachidonic Acid 和Docosahexaenoate Acid的體積為5:5:4:6:10。所使用的是食品級脂肪酸。
[0014]在本發明的一種實施方式，所述體外培養液中還含有mHTF、SSS。
[0015]在本發明的一種實施方式，所述體外培養液，每10.15ml中含有9mL的mHTF、lmL 的 SSSn25 μ 1 Hexadecanoic Acid、25yl Trans-13-0ctadecenoic Acid、20yl9, 12-0ctadecenoic Acid、30yl Arachidonic Acid、50yl Docosahexaenoate Acid。
[0016]本發明的第四個目的是提供所述體外培養液在提高離體之后的人精子的活力方面的應用，是將離體之后用精子分裂液分離出來的精子，用所述體外培養液重懸、輕輕混勻，置于37°C放置1?3小時。
[0017]在本發明的一種實施方式，所述精子是按照終濃度1000萬/mL的濃度進行重懸。
[0018]本發明的有益效果:
[0019]本發明試劑盒試劑中的Hexadecanoic Acid、Trans-13-0ctadecenoic Acid、9, 12-0ctadecenoic Acid、Arachidonic Acid、Docosahexaenoate Acid 均為食品級月旨肪酸，對于精子本身沒有任何毒害效應，且目前已擁有成熟的大量生產技術，可投入廣泛的臨床及實驗室使用。利用本發明體外培養液處理后的精子其前向運動活力提高顯著，可使正常活力精子的平均前向運動精子比例提高18%左右，弱精子癥患者的精子的平均前向運動精子比例提高12%左右。本發明的試劑盒和體外培養液可以在人工授精和體外受精技術中使用，可以改善妊娠結局，提高受精率；同時對弱精癥患者的治療又提供了新方法。
【附圖說明】
[0020]圖1為正常活力精子標本使用目的培養液前后精子動力改善狀況；
[0021]圖2為弱精子癥患者標本使用目的培養液前后精子動力改善狀況。
【具體實施方式】
[0022]實施例1:
[0023]樣本來源:三份正常活力精子標本(標準按WHO五版)
[0024]精子處理:
[0025]1、預熱10mL含體積分數為10% SSS的mHTF(作為培養前對照組)，2mL Isolate精子分離液和10mL本發明的體外培養液。
[0026]2、將收集有精液的取精杯置于37°C水浴，待液化后取出。
[0027]3、將預熱的含體積分數為10 % SSS的mHTF與液化后精液混勻，緩緩加入到Isolate精子分離液上，300g離心10分鐘。
[0028]4、離心后棄上清，取下層分離后精子鏡檢，記錄精子活力，作為培養前對照組。
[0029]5、將步驟4剩余精