專利名稱：染色質重塑蛋白4A在增強缺氧誘導因子1a穩定性及轉錄活性中的應用的制作方法
技術領域：
本發明涉及染色質重塑蛋白4A(CHMP4A)在促進腫瘤細胞生長中的應用，特別是 CHMP4A增強缺氧誘導因子1 α (HIF-1 α )穩定性及轉錄活性中的應用；以及CHMP4A在篩選 能夠抑制腫瘤細胞生長的先導化合物中的應用。
背景技術：
腫瘤缺氧是實體瘤常見現象，缺氧可觸發機體產生一系列應急性保護反應，使得 腫瘤細胞適應缺氧微環境。缺氧誘導因子1 (hypoxia inducible factor 1，HIF-1)是迄 今發現與缺氧關系最為密切的轉錄因子，由α亞基和β亞基組成異二聚體(例如參見 Ye Hong 等· The structrure，function，regulation and the relation to the hypoxia signal transduct of hypoxia inducible factor 1.Progress OfPhysiology science, 2001,32(1) :62-64)。近年來，HIF-1 α在腫瘤的發生，侵襲，存活，耐藥性產生中的關鍵調 控作用日益受到人們的重視。實驗證明在19種類型的人實質性腫瘤中，有13種出現了 HIF-I α的高表達，尤其是在結腸癌，肺癌，前列腺癌中，HIF-I α的高表達占90%以上。而 在相應的正常組織中則無表達。其結果顯示HIF-I α的高表達與腫瘤的惡性，臨床分期，浸 潤和轉移有明顯的相關性(例如參見Zhong H等Over-expression of hypoxia-inducible factor Ια in common human cancers and their metastasis. Cancer Res,1999, 8(59) :5830-5839)o因此，HIF-1 α的表達水平的監測有助于腫瘤的早期診斷，判斷腫瘤 的惡性程度及患者的預后，并且HIF-1 ex已成為一個腫瘤治療的重要的靶標。國外已有 報道利用HRE-LUC雙螢光素酶報告基因來篩選抑制缺氧誘導因子Icx活性的小分子化 合物作為新的候選抗癌藥物(例如參見Giovanni Melillo. Identification of Small Molecule Inhibitors of Hypoxia-inducible Factor !Transcriptional Activation Pathway.Cancer Research.，2002，4316-4324. ；Chau NM 等 Identification of novel small molecule inhibitors of hypoxia-inducible factor—lthat differentially block hypoxia-inducible factor一1 activity and hypoxia-inducible factor一lalpha induction in response to hypoxic stress and growth factor. Cancer Research. 2005， 65(11) :4918-4928)。但利用此系統來篩選影響缺氧誘導因子1的蛋白多肽未見報道。本發明人構建了用于篩選參與腫瘤缺氧反應的相關功能基因的篩選體系，在利用 所述篩選體系進行高通量篩選時，令人驚訝地發現染色質重塑蛋白4A能夠增強缺氧誘導 因子1 α (HIF-1 α )穩定性及轉錄活性。人染色質重塑蛋白4Α與酵母Snf 7ρ蛋白同源，屬于小環狀卷曲(smal 1 coil-coiled)蛋白家族。前期的研究表明該蛋白與細胞內多泡體的形成有關，參與細胞 內吞膜受體的降解(例如參見 Peck JW 等· Structure and function of human Vps20 and Snf7 proteins. Biochem J, 2004,377(Pt 3) :693_700· ；Tsang HT 等 A systematic analysis of human CHMPprotein interactions !additional MIT domain-containingproteins bind to multiple components ofthe human ESCRT III complex. Genomics. 2006,88(3) :333_346.)。尚沒有其與細胞缺氧的關系及對缺氧誘導因子1 α的 蛋白穩定性及轉錄活性的影響報道。腫瘤細胞在缺氧的情況下，缺氧誘導因1 α蛋白穩定及轉錄活性的增加會導致腫 瘤細胞耐受缺氧環境，侵蝕能力增強，因此通過抑制人染色質重塑蛋白4Α的活性來間接抑 制缺氧誘導因子Ia，可以達到抑制腫瘤細胞生長的目的。
發明內容
本發明的一個目的在于提供氨基酸序列為SEQ ID NO :2所示的染色質重塑蛋白 4Α在促進腫瘤細胞生長中的應用。優選的是，所述染色質重塑蛋白4Α可以增強缺氧誘導因子1 a (HIF_1 a )在腫瘤 細胞中的穩定性和轉錄活性。所述腫瘤細胞為HIF-I α高表達的實體瘤，包括骨髓瘤、淋巴瘤、腦瘤、脊髓瘤、腎 癌、肺癌、結腸癌、膀胱癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌。所述腫瘤細胞優選為 Hela細胞。本發明的另一個目的在于提供氨基酸序列為SEQ ID NO :2所示的染色質重塑蛋白 4A在篩選能夠抑制腫瘤細胞生長的物質中的應用。所述能夠抑制腫瘤細胞生長的物質能夠通過抑制人染色質重塑蛋白4A從而抑制 缺氧誘導因子1 α (HIF-1 α )的穩定性和轉錄活性。能夠利用本發明的染色質重塑蛋白4Α來篩選腫瘤細胞生長抑制劑的腫瘤細胞為 HIF-I α高表達的實體瘤，包括骨髓瘤、淋巴瘤、腦瘤、脊髓瘤、腎癌、肺癌、結腸癌、膀胱癌、 肝癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌和胰腺癌。所述腫瘤細胞優選為Hela細胞。本發明的另一個目的是提供一種用于篩選影響缺氧誘導因子1的物質的篩選體 系。所述篩選體系包括質粒pHRE-LUC、pRL-TK-LUC和pCDB-HIF-l α。本發明的另一個目的是提供一種利用上述篩選體系篩選可影響缺氧誘導因子1 的蛋白多肽。所述篩選體系包括質粒pHRE-LUC、pRL-TK-LUC和pCDB-HIF-l α。
圖IHRE-LUC的構建圖譜。圖 2pCDB-HIF_l α 的構建圖譜。圖3HIF-1 α真核表達質粒的酶切鑒定。圖4規模化篩選HRE-Luc活性相關基因。圖5CHMP4A對HRE-LUC相對螢光素酶活性的活化。圖6免疫印記(Western blot)檢測CHMP4A對HIF-1 α穩定性的影響。圖7RT-PCR檢測CHMP4A對腺苷酸激酶(ΑΚ3)的影響。
具體實施例方式本發明的篩選體系為了高通量篩選參與腫瘤缺氧反應的相關功能基因，我們將HIF-I α的順式反應元件HREOlypoxia-responsible element)序列構建到螢光素酶報告基因載體的多克隆位 點上，構建了含有報告基因HRE-LUC的載體pHRE-LUC (如附圖2中所示)。將pHRE_LUC 轉染 Hela 細胞，同時共轉染內參質粒 pRL-TK-LUC(thymidine kinase romoter-Renilla luciferase)以便歸一化數據，消除細胞的存活情況以及細胞的轉染效率對實驗造成的誤 差，增加數據的可靠性。同時，轉染p⑶B-HIF-la作為陽性對照。在正常氧濃度下篩選增 強Hela細胞HRE-LUC活性的人類功能基因，在氯化鈷化學模擬缺氧條件下篩選抑制Hela 細胞HRE-LUC活性的人類功能基因。利用此篩選體系，對本實驗室克隆得到的409個未知 功能的人類基因進行了常氧和氯化鈷化學模擬缺氧條件下的規模化細胞篩選，得到一個明 顯增強HRE-LUC相對螢光素酶活性的基因CHMP4A(實施例3)。進一步的蛋白免疫印記結 果表明CHMP4A的過表達能明顯增加細胞內HIF-1 a蛋白量(實施例5)，RT-PCR結果說明 CHMP4A能明顯增強HIF-1下游靶基因腺苷酸激酶3的轉錄水平(實施例6)。所述HRE(Hypoxia Response Element，乏氧反應元件)為一段啟動子或增強子序 列，與HIF-1結合后可以上調多種基因表達，如EPO、iNOS、VEGF等，從而增強了腫瘤細胞對 葡萄糖的攝取和酵解，促進腫瘤的血管形成和細胞增殖，使腫瘤細胞更具有侵襲和對放化 療的抗拒能力。本發明中的各種質粒可以通過本領域普通技術人員已知的各種方法來制備。例 如，PCR可擴增出目的片段，利用分子克隆技術將其構建到載體上。由于本發明的篩選體系可篩選對缺氧誘導因子1 a的蛋白穩定性及轉錄活性有 影響的基因，因此對研究腫瘤細胞的生長和缺氧誘導因子la在腫瘤細胞生長中的機制具 有―眉、o染色質重塑蛋白4A在本發明中，CHMP4A包括CHMP4A基因或CHMP4A蛋白等。所述CHMP4A蛋白為如 SEQ ID NO :2所示的氨基酸序列，其具有265個氨基酸。所述CHMP4A基因為編碼本發明的 SEQ ID NO :2的多核苷酸序列，其可以為SEQ ID NO :2所示氨基酸的編碼序列，或者除了上 述氨基酸序列的編碼序列之外，還可以包括非編碼序列，例如內含子、編碼序列5 ‘或3 ‘ 端的非編碼序列等。所述多核苷酸序列可以是DNA或RNA，其中DNA包括cDNA、基因組DNA 以及合成的DNA。其中優選的基因為SEQID N0 :1所示的多核苷酸，其序列全長1505個核 苷酸，編碼序列為第412 1209位核苷酸。或者，更優選一種分離的核苷酸序列，其只包含 編碼CHMP4A蛋白序列，例如SEQ ID NO :1所示的編碼序列核苷酸412 1209。本領域普 通技術人員已知，本發明的CHMP4A的核苷酸序列可以完全相同于如SEQ ID NO :1所示的編 碼序列，也可以由于遺傳密碼的簡并性，不完全等同于上述核苷酸的編碼序列。本發明的CHMP4A核苷酸序列可以依據標準的PCR擴增技術將cDNA、mRNA或者基 因組DNA作為模板，并選取合適的寡核苷酸引物擴增得到。這樣得到的多核苷酸可以克隆 到合適的載體中，并用DNA分析技術進行序列描述。也可以通過標準DNA合成技術得到。本 發明的CHMP4A蛋白可以通過常規方法獲得，例如通過轉化宿主細胞并在被轉化的宿主細 胞生長到適當的細胞密度后，用適當的方法(如溫度變動或化學特質誘導)誘導啟動子，然 后繼續培養。培養完成后，可用離心法收集細胞，并用任何已知的方法，如凍融法、超聲處理 法、溶菌酶溶解法或機械破碎法破碎細胞。可以用各種已知的方法從宿主細胞培養物中回 收和純化本發明的CHMP4A蛋白，這些方法包括硫酸銨或乙醇沉淀法、酸萃取法、超濾法、離
5子交換層析法、磷酸纖維層析法、疏水相互作用層析法、凝膠過濾法、親和層析法及高壓液 柱層析法。本發明CHMP4A在篩選腫瘤生長抑制劑中的應用由于本發明CHMP4A可以增強缺氧誘導因子1 a (HIF-1 a )在腫瘤細胞中的轉錄和 表達，并促進腫瘤細胞生長，因此可以將該染色質重塑蛋白4A作為抑制腫瘤細胞生長的新 靶點，例如提供抑制本發明CHMP4A的基因或蛋白，用于治療腫瘤。本發明通過抑制人染色 質重塑蛋白4A的活性來間接抑制缺氧誘導因子1 a來達到抑制腫瘤細胞生長的目的。本發明CHMP4A可以促進Hela細胞生長；本發明的實施例證明這種促進作用是通 過增強HIF-1 a的轉錄和表達而實現的，因而CHMP4A可以促進HIF-1 a高表達的實體瘤的 生長，例如骨髓瘤、淋巴瘤、腦瘤、脊髓瘤、腎癌、肺癌、結腸癌、膀胱癌、肝癌、前列腺癌、乳腺 癌、卵巢癌和胰腺癌。由于本發明CHMP4A可以增強缺氧誘導因子1 a (HIF-1 a )在腫瘤細胞中的轉錄和 表達，并促進腫瘤細胞生長，因此可以利用該染色質重塑蛋白4A來篩選能夠以染色質重塑 蛋白4A為靶點抑制腫瘤細胞生長的物質。篩選可以通過檢測CHMP4A的下游基因來進行，也可以通過檢測CHMP4A蛋白本身 來進行。可以利用本領域已知的任何方法檢測本發明的CHMP4A的下游基因例如腺苷酸激 酶(AK3)在核酸水平的表達，例如經衍生于PCR方法檢測，例如逆轉錄PCR(RT-PCR)。這些 分析技術包括DNA或RNA印跡分析以及聚合酶鏈反應。這些分析既可間接揭示CHMP4A表 達量方面的情況。也可以在蛋白質水平檢測本發明CHMP4A所影響的缺氧誘導因子la表 達水平。本發明還提供了檢測CHMP4A下游AK3基因的引物，以及其所影響的缺氧誘導因子 la的表達。所述引物如實施例6中所示。檢測方法也是本領域已知的，例如利用本發明缺氧誘導因子1 a蛋白特異性的單 克隆抗體或多克隆抗體，利用直接或間接酶聯免疫吸附試驗、免疫熒光法、免疫印記、免疫 組織化學等進行檢測。免疫印跡是借助十二烷基硫酸鈉(SDS)存在下高分辨率的聚丙烯酰 胺凝膠電泳(PAGE)將抗原根據其分子量大小不同而有效分成許多蛋白區帶，將分離后的 蛋白帶經不同途徑轉移至一種固相支持體如硝酸纖維膜或PVDF膜上，然后以抗體為探針， 與附著于固相支持體的靶蛋白抗原表位發生特異性反應，結合于固相支持體的抗體可用酶 標的二抗如堿性磷酸酶或辣根過氧化物酶偶聯的第二抗體等檢測。免疫印跡可鑒定出混合 物中未知蛋白及其分子質量。免疫組織化學是在組織切片中進行的抗原抗體反應，可以檢 測抗原在組織中的含量和定位。本發明的CHMP4A的基因或蛋白可以作為抑制腫瘤細胞生長的靶標。因此，可以利 用雙報告檢測手段、反轉錄_聚合酶鏈式反應(RT-PCR)、免疫印記等方法或它們的組合，間 接反映體內CHMP4A的表達。下面結合具體實施例進一步闡明本發明。應理解，這些實施例僅用于說明本發明 而不用于限制本發明的范圍。下列實施例中未注明具體條件的實驗方法，按照常規條件如 《分子克隆實驗指南》(2002年第三版[美]薩姆布魯克等著，科學出版社)中所述的條件， 或按照制造廠商所建議的條件。實施例中未標明來源的試劑和材料均可商購獲得。
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實施例1報告基因質粒(pHRE-LUC)的構建將促紅細胞生成素(Erythropoietin，EP0)、誘導型一氧化氮合成酶(inducible nitric oxide synthase, iNOS) ^ifil'Wrti^iffllfi^-lxia^1 (Vascular endothelial growth factor, VEGF)三個基因啟動子區HRE序列組成的3XHRE序列由上海生工合成。正義鏈 (5，-AGCTGCCCTA CGTGCTGTCT CATGCATACG TGGGCTCCAA CAGGTGACTA CGTGCTGCCT AG-3，，含 有Hindlll 的粘末端序列)和反義鏈(5，-TCGACTAGGC AGCACGTAGT CACCTGTTGG AGCCCACGTA TGCATGAGAC AGCACGTAGG GC-3’，含有Xho I的粘末端序列)退火成雙鏈連接到Hindlll和 Xho I雙酶切的pLUC-MCS空載體上，從而得到報告基因質粒pHRE-LUC(如圖1所示)。實施例2HIF-1 a真核表達質粒的構建根據HIF-la 全長序列(GenBank NM_001530)設計，上游引物(5-GAAGACATCG CGGGGACC-3)和下游引物(5-GGGGTACCGAAAAAGCTCAGTTAACTTGATC-3)從人類正常胎肝 cDNA文庫中PCR擴增全長2507個堿基，凝膠回收后連接到T-easy載體。然后用Not I單 酶切連接到具有同酶切位點的pcDNA3. l/myC-His(-)B(p⑶B)上，從而得到HIF_la真核表 達質粒p⑶B-HIF-1 a (圖2)。該質粒大小符合計算值(圖3)。實施例3雙螢光素酶報告系統的檢測Hela細胞常規傳代培養于含10%胎牛血清(HyClone，SH30084. 03)的DMEM培養 基(HyClone, SH30022. 01B)中，37 °C，5 % C02 孵箱中培養。按照 1. 1X106 細胞/ml 的密 度，接種于96孔板，每孔100 iil，置于孵箱培養18小時 24小時，使細胞密度達到40% 60%，以備轉染。按照說明書，使用VigoFect陽離子轉染試劑(威格拉斯生物技術(北京) 有限公司)將50ng pHRE-LUC, 5ng pRL-TK-LUC和50ng待篩基因或者對照質粒共轉入Hela 細胞。轉染pcDNA3. l/myC-His(-)B空載體的細胞作為空白對照。轉染p⑶B-HIF-1 a和 ING4基因(ING4連接在POTB載體中，作為陽性對照，與HIF-la作用相似)的細胞作為激 活pHRE-LUC表達的陽性對照，轉染空載體作為抑制pHRE-LUC表達的陰性對照。每種待篩 質粒設6個復孔。常氧培養28小時 34小時后檢測螢光素酶活性。對于抑制HRE-LUC表 達的基因篩選，在轉染18小時 24小時后加入250uM的氯化鈷誘導常規培養10個小時， 檢測螢光素酶活性。按照雙螢光素酶報告系統(Promega，E1960)的說明書裂解細胞后，利用多功能微 孔板檢測系統GENios Pro (Tecan)檢測螢光素酶強度。每個待篩基因設置6個復孔，其中 3個復孔為缺氧條件篩選。轉染空載體對照pcDNA3. l/myC-His(-)B的細胞的相對螢光值設 為100%。結果取3個復孔的平均值。結果參見圖4，在常氧情況下篩選了 409個基因對HRE-LUC相對螢光素酶活性的影 響，其中，空載體對照組轉染P⑶B和pHRE-LUC質粒，相對螢光素酶活性為1 ；陽性對照組轉 染p⑶B-HIF-1 a和pHRE-LUC，相對螢光素酶活性為4 ；CHMP4A組轉染CHMP4A (作為構建到 P⑶B載體上的核酸)和pHRE-LUC，相對螢光素酶活性為2. 2。實施例4氯化鈷誘導的HRE-LUC相對螢光素酶活性為了驗證構建的HRE-LUC與HIF_1 a結合的特異性，用pLUC_MCS空載體和陽性對 照質粒HIF-1 a (p⑶B-HIF-1 a )為對照，實驗分為以下幾組pHRE_LUC和p⑶B共轉組簡稱 PCDB 組，pHRE-LUC 和 HIF-1 a (pCDB-HIF-l a )共轉組簡稱 HIF-1 a 組，HRE-LUC 和 CHMP4A 共轉組簡稱CHMP4A組分別用250uM氯化鈷(Sigma公司，批號c8661)誘導10小時。
結果參見圖5，按照雙螢光素酶報告系統的說明書(Promega)裂解細胞后，利用多 功能微孔板檢測系統Tecan GENios Pro 檢測螢光素酶強度。每個待篩基因設置6個復 孔，其中3個復孔為缺氧條件篩選轉染空白對照pcDNA3. l/myC-His(-)B的細胞的相對螢光 值設為100%。結果取3個復孔的平均值。P⑶B組誘導的HRE-LUC相對螢光素酶活性比未 用氯化鈷誘導的升高12. 5士0. 49倍。P⑶B組未用氯化鈷誘導的HRE-LUC的螢光素酶活性 也沒有區別。而HIF-la組未用氯化鈷誘導的HRE-LUC相對螢光素酶活性比P⑶B組未用 氯化鈷誘導的升高4士0. 7倍，CHMP4A組誘導的HRE-LUC相對螢光素酶活性比HRE-LUC組 未用氯化鈷誘導的升高40士0. 8倍(采用單因素方差分析，結果有顯著性差異，P < 0. 05)。 說明HRE-LUC報告基因質粒能特異的反映細胞內HIF-1 a量的多少及轉錄活性的高低。實施例5Hela細胞內HIF-la蛋白的量免疫印記檢測Hela細胞內HIF-la蛋白表達量。根據各自培養要求按轉染試劑說 明書分別將6ug p⑶B、p⑶B-HIF-1 a、CHMP4A(構建在P⑶B載體中)質粒轉染入6孔板的 一個孔Hela細胞中，24小時后提取核蛋白免疫印記檢測HIF-la蛋白水平。各取約100萬 個培養細胞使用100 ill細胞裂解液(1XPBS，1% NP40，0. 5%脫氧膽酸鈉，0. 1% SDS)裂解 細胞，離心取上清用于免疫印記檢測。按標準的免疫印記程序進行電泳、轉膜、封閉等操作。 一抗使用上述純化的兔抗人HIF-la抗體，二抗使用HRP標記的羊抗兔抗體(Santa Cruz)。 使用Pierce公司的發光檢測試劑盒進行檢測。結果參見圖6所示，圖6中各泳道分別為1P⑶B空載體，2HIF-la過表達， 3CHMP4A過表達。上部分圖片為HIF-1 a的檢測，下部分圖片為內參Beta-ACTIN的檢測。由圖6可以看到CHMP4A明顯增加Hela細胞內HIF-la蛋白的量，而HIF-1 3和 3 -actin的量沒有變化。實施例6腺苷酸激酶(AK3)的檢測將Hela細胞以30萬/孔鋪于六孔板(NEST Biotecl, 703001)中常規培養 18小時，分別將3 ii g pCDB3. 1空載體，HIF-1 a，pCDB3. 1-CHMP4A按照說明書，使用 VigoFect (Vigorous公司)陽離子轉染試劑將1 P g質粒轉入Hela細胞。繼續培養24小 時按Invitrogen逆轉錄試劑盒說明書提RNA，逆轉錄為cDNA，上游引物5-GCTGCTGCGA GCGGTGAT-3 ；下游引物 5-TATTCCAGGA CTGGCTTTGTTTG-3，PCR 擴增條件 94°C，5 分鐘，94°C 變性30s，58°C退火30s，72°C延伸20s，29個循環(圖7)。上部分圖片為腺苷酸激酶(AK3) 的檢測，下部分圖片為內參GAPDH的檢測。由圖7可以看出陽性對照HIF-1 a組和CHMP4A組明顯增強AK3基因轉錄水平，而 內參GAPDH的轉錄水平未受影響。
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權利要求
氨基酸序列為SEQ ID NO2所示的染色質重塑蛋白4A在促進腫瘤細胞生長中的應用。
2.如權利要求1所述的應用，其中所述應用為增強缺氧誘導因子Ia在腫瘤細胞中的 穩定性和轉錄活性。
3.如權利要求1或2所述的應用，其中所述腫瘤細胞為HIF-Iα高表達的實體瘤，包括 骨髓瘤、淋巴瘤、腦瘤、脊髓瘤、腎癌、肺癌、結腸癌、膀胱癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌 和胰腺癌。
4.如權利要求1或2所述的應用，其中所述腫瘤細胞為Hela細胞。
5.氨基酸序列為SEQID NO :2所示的染色質重塑蛋白4A在篩選能夠抑制腫瘤細胞生 長的先導化合物中的應用。
6.如權利要求5所述的應用，其中所述能夠抑制腫瘤細胞生長的化合物能夠通過抑制 人染色質重塑蛋白4A從而抑制缺氧誘導因子1 α的穩定性和轉錄活性。
7.如權利要求5或6所述的應用，其中所述腫瘤細胞為HIF-Iα高表達的實體瘤，包括 骨髓瘤、淋巴瘤、腦瘤、脊髓瘤、腎癌、肺癌、結腸癌、膀胱癌、肝癌、前列腺癌、乳腺癌、卵巢癌 和胰腺癌。
8.如權利要求5或6所述的應用，其中所述腫瘤細胞為Hela細胞。
9.一種用于篩選影響缺氧誘導因子1的物質的篩選體系，所述篩選體系包括質粒 pHRE-LUC、pRL-TK-LUC 和 pCDB-HIF-la。
10.利用如權利要求9所述的篩選體系，所述篩選體系用于篩選能夠影響缺氧誘導因 子1的蛋白多肽。
全文摘要
本發明涉及CHMP4A在促進腫瘤細胞生長中的應用，特別是CHMP4A增強缺氧誘導因子1α(HIF-1α)穩定性及轉錄活性中的應用；以及CHMP4A在篩選能夠抑制腫瘤細胞生長的先導化合物中的應用。本發明利用構建的順式報告基因篩選體系，發現了CHMP4A能在Hela細胞中顯著增強缺氧誘導因子1α穩定性及轉錄活性。
文檔編號C12N15/12GK101974562SQ201010295190
公開日2011年2月16日 申請日期2010年9月28日 優先權日2010年9月28日
發明者李靜, 石太平, 董云巧, 鄧唯唯, 雄英, 馬大龍, 高鵬 申請人:北京諾賽基因組研究中心有限公司