專利名稱：用于分離小鼠脂肪干細胞的消化液的制作方法
用于分離小鼠脂肪干細胞的消化液本發明涉及動物干細胞的分離技術領域，尤其涉及一種用于分離小鼠脂肪干細胞的消化液。脂肪干細胞具有多向分化的潛能，在體外可定向分化為脂肪、成骨、軟骨、肝臟、心肌細胞等，在人源方面，相比于骨髓干細胞，其具有取材容易、獲取量大、減少取材時供體痛苦的優點，因此在再生醫學上具有重要的意義。小鼠作為一個重要的模式動物，在基礎研究方面有著廣泛的應用，但是小鼠脂肪干細胞的體外培養卻一直是個難題，體現在從分離到培養的各個方面，小鼠脂肪干細胞的分離一般采用酶消化法，作為分離培養的初始階段，若沒有采用合適的消化體系，往往導致細胞后期培養的諸多問題。目前也有一些已報道的消化液，較簡單有用含牛血清白蛋白(BSA)的杜氏磷酸鹽緩沖液(DPBS)溶解，膠原酶終濃度為0. 075%或0. 1%，較復雜的配方有0. 膠原酶， 1-2% BSA、200nM 腺苷酸、50mg/ml 的葡萄糖。上述消化液的不足之處在于前者經實驗發現，在相同條件下，前者原代后傳代4 天即已充分老化無法維持。后者消化液對其可實踐性沒有做詳細探究，但其成分相對復雜， 并且其中腺苷酸的價格高昂，提高了消化液的成本。本發明要解決的技術問題是提供一種成分簡單，效果明顯的消化液，能夠高效的分離出小鼠的脂肪干細胞，使有利于其后期的長期培養。為了解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是，一種用于分離小鼠脂肪干細胞的消化液，所述消化液的組成成分為10%的胎牛血清(FBQ，0.09%的膠原酶I，余量為 DMEM/F12。通過針對現有方案中含1 % BSA的DPBS消化液存在的問題以及添加葡萄糖和腺苷酸進入消化液必要性的綜合考慮，我們認為，前者的主要問題在于將近一個小時的消化過程中，僅僅添加BSA不能很好的維持細胞在此過程中的營養需求以及維持其活性。因此后期的培養過程中細胞在第一代便出現老化，很可能與前期的損傷有關。為此選用基礎培養基，同時添加一定量的FBS來溶解膠原酶以提供細胞在長時間消化過程中的營養消耗，并維持細胞的活性。在此體系中膠原酶以及FBS的濃度對細胞的分離率以及細胞的活性有著重要的影響，FBS的濃度過高或膠原酶濃度過低會影響細胞的分離率，反之則會影響細胞的活性，在代數低的時候也許體現不是很明顯，隨著代數的增加則會明顯的體現出來。本發明的有益效果是1.消化液成分簡單，來源方便、成本低；
2.能夠有效的從小鼠的脂肪組織中分離出脂肪干細胞；3.能夠很好的維持細胞的活性，為細胞的后期培養和進一步的科學研究奠定了基石出。本實施例按各組成成分的不同配比設計了下述三個實驗組，每組取同樣量的脂肪組織，分別用以下三種不同配比的消化液進行消化。三種消化液的具體成分如下(IOml體系)；⑴消化液一
成分比例添加量胎牛血清00膠原酶I0. 1%o.oigDMEM/F12IOml(2)消化液
成分比例添加量胎牛血清10%Iml膠原酶I0. 09%0. 009gDMEM/F129ml(3)消化液三
權利要求
1. 一種用于分離小鼠脂肪干細胞的消化液，其特征在于，所述消化液的組成成分為 10%的胎牛血清，0. 09%的膠原酶I，余量為DMEM/F12。
全文摘要
本發明公開了一種用于分離小鼠脂肪干細胞的消化液。所述消化液的組成成分為10％的胎牛血清，0.09％的膠原酶I，余量為DMEM/F12。本發明的成分簡單，來源方便，成本低；能夠有效的從小鼠的脂肪組織中分離出脂肪干細胞；能夠很好的維持細胞的活性，為細胞的后期培養和進一步的科學研究奠定了基礎。
文檔編號C12N5/0775GK102391987SQ20111036611
公開日2012年3月28日 申請日期2011年11月17日 優先權日2011年11月17日
發明者劉星, 吳蓉花, 周娜汝, 張宇, 張運海, 李運生, 桂濤, 章孝榮, 陳建文, 陶佳, 魏超 申請人:安徽農業大學