專利名稱：耐高溫釀酒酵母及其分離培養方法
技術領域：
本發明涉及釀酒酵母及分離培養方法，具體涉及一種耐高溫釀酒酵母及其分離培養方法。
背景技術：
芝麻香型白酒以糧食為原料，大曲、麩曲等為糖化發酵劑，利用自然界微生物開放式發酵，霉菌、酵母、細菌協同作用，融入醬香堆積工藝優勢，形成具有獨特風格的白酒。一 般芝麻香型白酒麩曲采用細菌、酵母、霉菌等多菌種純培養后混合應用于釀酒生產，微生物菌種的性能對芝麻香型酒的品質具有重要的影響。
發明內容
本發明的目的在于提供一種耐高溫釀酒酵母及其分離培養方法，通知該分離培養方法篩選出一種耐高溫且發酵性能、產酯能力較好的酵母，提高芝麻香型白酒的質量與產量。本發明的技術解決方案是該釀酒酵母240 Saccharomyces cerevisiae菌株是從濃香型發酵酒醅中分離篩選得到的，已于2011年11月29日在北京市朝陽區北辰西路I號院3號，中國科學院微生物研究所，中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，菌種編號為CGMCC No. 5511。所述釀酒酵母240的分離培養方法是取濃香型釀酒窖池中已發酵15-20天的酒醅適量，然后稱取酒醅10克，于裝有90mL無菌水的三角瓶中，震蕩30min獲得菌懸液；用無菌吸管吸取菌懸液1.01^，放入盛有91^無菌水的試管中，依次用10倍法稀釋至不同稀釋度；取10 —3、10 —4、10 —5稀釋度的樣品各ImL加入直徑為90mm無菌培養皿中，倒入融化保溫的培養基25 mL，搖勻待凝固后放入培養箱于28°C _32°C倒置培養2_3天；其中，培養基由12° BX麥芽汁中加入其質量1%的瓊脂粉組成；挑取培養皿內形態規則的菌落，在固體培養基上劃線培養，進行多次反復的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，篩選出釀酒酵母，保藏于麥芽汁瓊脂斜面備用；經菌種鑒定后，對釀酒酵母進行耐溫試驗，取一株活力較強釀酒酵母，命名為釀酒酵母240。本發明獲得的菌種與實驗室保藏的酵母菌株進行性能對比試驗，通過發酵性能對比試驗，結果表明該菌株耐溫性能較好，在45°C溫度下依然能夠保持良好的發酵性能，而且具有較好的發酵性能和酯化能力，用該菌種生產的麩曲用于芝麻香型白酒生產對提高自產酒的優質品率及出酒率具有重要的意義。
具體實施例方式下面結合具體實施例進一步說明本發明的技術解決方案，這些實施例不能理解為是對技術解決方案的限制。實施例I :依以下步驟分離培養釀酒酵母240取濃香型釀酒窖池中已發酵15天的酒醅適量，然后稱取酒醅10克，于裝有90mL無菌水的三角瓶中，震蕩30min獲得菌懸液；用無菌吸管吸取菌懸液I. OmL，放入盛有9mL無菌水的試管中，依次用10倍法稀釋至不同稀釋度；取10 — 3、10 —4、10 — 5稀釋度的樣品各ImL加入直徑為90mm無菌培養皿中，倒入融化保溫的培養基25 mL，搖勻待凝固后放入培養箱于28°C倒置培養3天，每個稀釋度同時做3個平行；其中，培養基由12° BX麥芽汁中加入其質量1%的瓊脂粉組成；挑取培養皿內形態規則的菌落，在固體培養基上劃線培養，進行多次反復的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，篩選出釀酒酵母，保藏于麥芽汁瓊脂斜面備用；經菌種鑒定后共有3株釀酒酵母，進行耐溫試驗，獲得一株活力較強釀酒酵母，命名為釀酒酵母240。實施例2 :依以下步驟分離培養釀酒酵母240
取濃香型釀酒窖池中已發酵18天的酒醅適量，然后稱取酒醅10克，于裝有90mL無菌水的三角瓶中，震蕩30min獲得菌懸液；用無菌吸管吸取菌懸液I. OmL，放入盛有9mL無菌水的試管中，依次用10倍法稀釋至不同稀釋度；取10 — 3、10 —4、10 — 5稀釋度的樣品各ImL加入直徑為90mm無菌培養皿中，倒入融化保溫的培養基25 mL，搖勻待凝固后放入培養箱于30°C倒置培養2. 5天，每個稀釋度同時做3個平行；其中，培養基由12° BX麥芽汁中加入其質量1%的瓊脂粉組成；挑取培養皿內形態規則的菌落，在固體培養基上劃線培養，進行多次反復的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，篩選出釀酒酵母，保藏于麥芽汁瓊脂斜面備用；經菌種鑒定后共有3株釀酒酵母，進行耐溫試驗，獲得一株活力較強釀酒酵母，命名為釀酒酵母240。實施例3 :依以下步驟分離培養釀酒酵母240
取濃香型釀酒窖池中已發酵20天的酒醅適量，然后稱取酒醅10克，于裝有90mL無菌水的三角瓶中，震蕩30min獲得菌懸液；用無菌吸管吸取菌懸液I. OmL，放入盛有9mL無菌水的試管中，依次用10倍法稀釋至不同稀釋度；取10 — 3、10 —4、10 — 5稀釋度的樣品各ImL加入直徑為90mm無菌培養皿中，倒入融化保溫的培養基25 mL，搖勻待凝固后放入培養箱于32°C倒置培養2天，每個稀釋度同時做3個平行；其中，培養基由12° BX麥芽汁中加入其質量1%的瓊脂粉組成；挑取培養皿內形態規則的菌落，在固體培養基上劃線培養，進行多次反復的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，篩選出釀酒酵母，保藏于麥芽汁瓊脂斜面備用；經菌種鑒定后共有3株釀酒酵母，進行耐溫試驗后獲得一株活力較強釀酒酵母，命名為釀酒酵母240。實施例4 :菌種優化對比試驗
將上述實施例1-3獲得的釀酒酵母240與實驗室保藏的自編號的五株釀酒酵母207、102、JP、NN、AW001進行對比，將酵母菌接入到12° BX的麥芽汁培養基中，于不同溫度250C、30°C、35°C、40°C、45°C恒溫培養，對比釀酒酵母的發酵性能，測定酵母的發酵力、酒精度、總酸和總酯，確定酵母的發酵性能指標。⑴不同溫度下發酵過程CO2失重量對比 表I 25°C發酵
權利要求
1.耐高溫釀酒酵母，其特征在于該釀酒酵母240Saccharomyces cerevisiae菌株是從濃香型發酵酒醅中分離篩選得到的，已于2011年11月29日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，菌種編號為=CGMCC No. 5511。
2.耐高溫釀酒酵母的分離培養方法，其特征在于分離培養方法包括以下步驟取濃香型釀酒窖池中已發酵15-20天的酒醅適量，然后稱取酒醅10克，于裝有90mL無菌水的三角瓶中，震蕩30min獲得菌懸液；用無菌吸管吸取菌懸液I. OmL，放入盛有9mL無菌水的試管中，依次用10倍法稀釋至不同稀釋度；取10 —3、10 —4、10 —5稀釋度的樣品各ImL加入直徑為90mm無菌培養皿中，倒入融化保溫的培養基25 mL,搖勻待凝固后放入培養箱于28°C -32°C倒置培養2-3天；其中，培養基由12° BX麥芽汁中加入其質量1%的瓊脂粉組成；挑取培養皿內形態規則的菌落，在固體培養基上劃線培養，進行多次反復的分離純化，獲得單個純種菌落，鏡檢確定為酵母菌后采用26S rDNA序列同源性分析，篩選出釀酒酵母，保藏于麥芽汁瓊脂斜面備用；經菌種鑒定后，對釀酒酵母進行耐溫試驗，取一株活力較強釀酒酵母，命名為釀酒酵母240。
全文摘要
本發明公開了一種耐高溫釀酒酵母及其分離培養方法，通過本發明的分離培養方法獲得的釀酒酵母240 Saccharomyces cerevisiae菌株是從濃香型發酵酒醅中分離篩選得到的，已于2011年11月29日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心保藏，菌種編號為CGMCCNo.5511。本發明的分離培養方法工藝簡單，獲得的釀酒酵母240耐高溫，且發酵性能、產酯能力較好，適應能力強，易培養，提高芝麻香釀酒質量和產量。
文檔編號C12R1/865GK102634464SQ20121005966
公開日2012年8月15日 申請日期2012年3月8日 優先權日2012年3月8日
發明者吳建峰, 孫瑩, 季方, 楊艷 申請人:江蘇今世緣酒業股份有限公司