美容方法、護膚用組合物、菌體及干燥菌體的制作方法
【專利摘要】本發明提供一種能夠輕松地應對皮膚環境的個體差異、副作用等不良影響少、并能夠通過選擇性地增殖有用菌來實現皮膚常駐菌群的健全化的、新穎且安全的美容方法，護膚用組合物，及在該護膚用組合物制造中適用的干燥菌體。本發明提供的美容方法具有獲取在人體的皮膚表面生息的細菌的步驟，使所獲取的細菌中能夠在人體的皮膚表面增殖、從而改善皮膚的健康狀態的一種或多種有用菌得以選擇性地增殖的步驟，將含有選自由所增殖的有用菌的菌體、菌體成分及所述有用菌的生成物質所構成的群組中的一種或多種的組合物投入到人體皮膚的步驟。本發明提供的護膚用組合物含有通過上述步驟選擇性增殖的有用菌和/或該有用菌的生成物質。
【專利說明】美容方法、護膚用組合物、菌體及干燥菌體
【技術領域】
[0001]本發明涉及與皮膚環境的個體差異無關的、可以適用于每個人且幾乎沒有副作用等的美容方法，護膚用組合物，以及在該護膚用組合物制造中適用的菌體及干燥菌體。
【背景技術】
[0002]已知在人類皮膚的表面生息著數十種左右的皮膚常駐菌。在皮膚常駐菌中，除了存在如金黃色葡萄球菌等的對人體有害的菌體以外，也存在著在保持健全的皮膚狀態方面有用的有用菌，而使常駐菌保持正常狀態對于改善皮膚或皮膚表面的狀態而言是有利的。例如，表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)通過生成甘油來對皮膚的保濕功能、隔離功能的維持起到很好的輔佐功效的同時，還通過生成有機酸來使皮膚的表面保持在弱酸性，從而在抑制有害菌的繁殖方面也產生了很大的功效(例如，參照非專利文獻I)。此外，表皮葡萄球菌還可以生成抑制有害菌、即金黃色葡萄球菌的生殖的抗菌肽。
[0003]為了預防食物中毒或流感等傳染病、或痤瘡等皮膚疾病，有必要保持皮膚表面的清潔并抑制有害菌的繁殖。因此，肥皂等清洗劑得到了普遍應用。然而，如果過多使用這些清洗劑，則在導致神經酰胺等皮膚的保濕成分流失的同時，還會導致殺傷了有用菌而產生反作用的情況。 [0004]各菌種在皮膚常駐菌群中所占的存在比例受到各種因素的影響，如果由于一些因素使有用菌的生殖受到抑制，則會導致有害菌占優的情況，從而會引起各種疾病。因此，出于使皮膚常駐菌群健全化的目的，對于不影響有用菌而僅對有害菌顯示選擇性殺菌作用或抑菌作用的化合物進行了研究開發。例如，專利文獻I中公開了一種以黃連提取物作為有效成分的制劑，其作為皮膚常駐菌正常化劑在皮膚常駐菌中只對增殖的痤瘡丙酸桿菌(丙酸桿菌屬)發揮有效作用，而對好氧菌不產生作用，從而能夠維護皮膚常駐菌的平衡并使之處于健康正常的狀態。專利文獻2中公開了一種皮膚常駐菌群改善劑，其中含有多個糖以β糖苷鍵結合而形成的水溶性糖類。專利文獻3中公開了一種皮膚常駐菌的生態系統平衡調節劑，其含有檜木醇配糖體作為活性成分，對金黃色葡萄球菌起到抑菌、殺菌功效，并使表皮葡萄球菌增殖。專利文獻4中公開了一種皮膚常駐菌的生態系統平衡調節劑，其含有從毛草龍及露兜樹屬植物提取物中選出的一種或兩種以上提取物和鹽鹵作為活性成分，對表皮葡萄球菌不顯示殺菌作用，而對金黃色葡萄球菌具有殺菌或增殖抑制作用。
[0005]現有技術文獻
[0006]專利文獻
[0007]專利文獻1:日本特開2010-202604號公報
[0008]專利文獻2:日本特開2008-50322號公報
[0009]專利文獻3:日本特開2007-246411號公報
[0010]專利文獻4:日本特開2007-153800號公報
[0011]非專利文獻
[0012]非專利文獻1:出來尾格、服部正平共同編著，“與人體共生的100兆個細菌”，Newton(株式會社Newton press發行)，2010年11月號，第68~75頁
【發明內容】
[0013]發明要解決的問題
[0014]但是，就通過投入外源性的化合物來實現皮膚常駐菌群健全化的專利文獻I~4的方法而言，在有害菌獲得耐藥性、或因個體皮膚環境的不同等導致構成皮膚常駐菌群的各菌種發生變異，從而導致藥物感受性發生改變等時，存在著無法發揮健全化效果的問題。而想要根據這些變化從多種候選化合物中量身定制地選出最適宜的藥劑時，則往往伴隨著難以預料的困難。
[0015]鑒于上述問題，本發明提供一種能夠輕松地應對皮膚環境的個體差異、副作用等不良影響少、并能夠通過選擇性地增殖有用菌來實現皮膚常駐菌群的健全化的、新穎且安全的美容方法，護膚用組合物，及在該護膚用組合物制造中適用的干燥菌體。
[0016]解決問題的方法
[0017]即，本發明通過提供如以下[1]~[7]所述的美容方法、[8]~[12]所述的護膚用組合物、[13]~[17]所述的菌體及[18]所述的干燥菌體解決了上述問題。
[0018][I]美容方法，其具有獲取在人體的皮膚表面生息的細菌的步驟，使所述細菌中能夠在人體的皮膚表 面增殖、從而改善皮膚的健康狀態的一種或多種有用菌得以選擇性地增殖的步驟，將含有選自由所述增殖的有用菌的菌體、菌體成分及所述有用菌的生成物質所構成的群組中的一種或多種的組合物投入到人體皮膚的步驟。
[0019][2]如上述[1]所述的美容方法，其中，在所述投入步驟中，對在獲取所述細菌時作為對象的同一個體進行所述組合物的投入(回投)。
[0020][3]如上述[1]或[2]所述的美容方法，其中，所述細菌為皮膚常駐菌。
[0021][4]如上述[1]~[3]中任意一項所述的美容方法，其中，所述使一種或多種有用菌得以選擇性地增殖的步驟包括
[0022]用培養基培養獲取的所述細菌的預培養步驟，
[0023]從所述培養的細菌中篩選出所述有用菌的篩選步驟，
[0024]培養所述篩選出的有用菌的培養步驟。
[0025][5]如上述[1]~[4]中任意一項所述的美容方法，其中，所述細菌是在人體的健全狀態的皮膚表面生息的細菌。
[0026][6]如上述[1]~[5]中任意一項所述的美容方法，其中，所述有用菌是凝固酶陰性葡萄球菌。
[0027][7]如上述[6]所述的美容方法，其中，所述有用菌是表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)。
[0028][8]護膚用組合物，其含有選自由有用菌的菌體、菌體成分及所述有用菌的生成物質所構成的群組中的一種或多種物質，所述有用菌是從自人體的皮膚表面獲取的細菌中分離并選擇性增殖的、能夠在人體的皮膚表面增殖并改善皮膚的健康狀態的一種或多種有用菌。
[0029][9]如上述[8]所述的護膚用組合物，其中，所述細菌是皮膚常駐菌。
[0030][10]如上述[8]或[9]所述的護膚用組合物，其中，所述細菌是在人體的健全狀態的皮膚表面生息的細菌。
[0031][11]如上述[8]~[10]中任意一項所述的護膚用組合物，其中，所述有用菌是凝固酶陰性葡萄球菌。
[0032][12]如上述[11]所述的護膚用組合物，其中，所述有用菌是表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)。
[0033][13]菌體，其是在自人體的皮膚表面獲取的細菌中使能夠在人體的皮膚表面增殖、從而改善皮膚的健康狀態的一種或多種有用菌選擇性地增殖而得到的菌體。
[0034][14]如上述[13]所述的菌體，其中，所述細菌為皮膚常駐菌。
[0035][15]如上述[13]或[14]所述的菌體，其中，所述細菌是在人體的健全狀態的皮膚表面生息的細菌。
[0036][16]如上述[13]~[15]中任意一項所述的菌體，其中，所述有用菌是凝固酶陰性葡萄球菌。
[0037][17]如上述[16]所述的菌體，其中，所述有用菌為表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)。
[0038][18]干燥菌體，其是將如上述[13]~[17]中任意一項所述的菌體進行干燥而得的干燥菌體。
[0039]發明的效果
[0040]就從人體皮膚獲取的細菌、尤其是皮膚常駐菌而言，在人體固有的皮膚環境下特別容易增殖。因此，如果將含有在自人體的皮膚表面獲取的細菌中選擇性增殖的一種或多種有用菌、或者促進其增殖的有用菌的菌體成分或生成物質的組合物投入到人體的皮膚表面，則通過有用菌在皮膚表面形成優勢，能夠有效地抑制有害菌的繁殖，并能夠適宜地保持皮膚常駐菌群的平衡。其結果，能夠切實地保持或改善皮膚的健康狀態。因此，本發明提供的美容方法及護膚用組合物能夠有效地保持健全的皮膚狀態。并且，在本發明的美容方法及護膚用組合物中由于不使用藥劑，因此具有安全、且副作用等不良影響少的優點。
[0041]特別是，從個體的皮膚獲取的細菌、尤其是皮膚常駐菌與皮膚環境的個體差異相適應，在該個體固有的皮膚環境下特別容易增殖。因此，在自個體的皮膚表面獲取的細菌中只選擇性地增殖有用菌，并將該增殖的有用菌投入(回投)到該個體的皮膚表面后，有用菌將會與皮膚環境的個體差異無關地在皮膚表面形成優勢，從而能夠更有效地抑制有害菌的繁殖，并能夠更切實地確保皮膚常駐菌群的平衡。
【專利附圖】
【附圖說明】
[0042]圖1是表示自身的皮膚常駐菌來源的表皮葡萄球菌的回投操作對于皮膚表面的表皮葡萄球菌數的影響的圖。
[0043]圖2是表示自身的皮膚常駐菌來源的表皮葡萄球菌的回投操作對于表皮水分量的影響的圖。
【具體實施方式】
[0044]以下，對本發明的實施方式(僅為示例，并不限定本發明的范圍)進行說明。
[0045]作為本發明的一個實施方式所涉及的美容方法(以下，有簡稱為“美容方法”的情況)，具有以下步驟，即，從個體的(人個體)的皮膚表面獲取在該表面生息的皮膚常駐菌(細菌的一個例子)的步驟，使皮膚常駐菌中能夠在個體的皮膚表面增殖、從而改善皮膚的健康狀態的一種或多種有用菌得以選擇性地增殖的步驟，將含有選自由所增殖的有用菌的菌體、菌體成分及有用菌的生成物質構成的群組中的一種或多種的護膚用組合物投入(回投)到個體皮膚的步驟。
[0046]作為美容方法中使用的護膚用組合物，含有選自由從自個體的皮膚表面獲取的細菌中分離并選擇性增殖的一種或多種有用菌的菌體、菌體成分及有用菌的生成物質所構成的群組中的一種或多種，并通過包括從個體的皮膚獲取在該表面生息的細菌的步驟、和在獲取的細菌中只選擇性地增殖一種或多種有用菌的步驟的方法來制得。以下，對制造護膚用組合物的各步驟進行更具體的說明。
[0047](I)細菌的獲取
[0048]皮膚表面存在著以數十種皮膚常駐菌為代表的細菌。作為制造護膚用組合物時所使用的細菌，只要能夠有效地維護健全的皮膚狀態，就可以單獨使用它們中的任意一種、或適當地組合并使用任意的兩種以上。作為在護膚用組合物制造中適用的細菌，可以列舉人體的皮膚常駐菌，作為其具體例子，可以列舉表皮葡萄球菌(Staphylococcusepidermidis)。
[0049]皮膚常駐菌等各種細菌存在于全身的皮膚表面，尤其是在臉部或腋下等的表面大量存在。因此，優選從這些部位獲取。尤其是，當作為化妝品使用護膚用組合物時，優選從臉部的皮膚表面獲取如皮膚常駐菌的細菌。皮膚常駐菌的平衡由于在健康的皮膚表面得到了恰當的維護，因此皮膚常駐菌的獲取優選在健康的(健全狀態的)皮膚表面進行。
[0050]獲取細菌時，可以采用從皮膚表面獲取細菌、及能夠分離任意的菌株的任意的方法。例如，可以采用以下列舉的方法，即，用根據需要在生理鹽水或緩沖液中潤濕并滅菌后的棉棒、紗布、無紡布、紙、海棉等任意的器具擦拭皮膚表面來獲取的方法，將滅菌后的瓊脂培養基按壓在皮膚表面，使細菌從皮膚表面轉移到培養基表面的方法，通過水、生理鹽水等液體與皮膚表面接觸而使皮膚表面存在的細菌懸浮在液體中，進而與液體一同回收的方法等。由于獲取的細菌中所含有的菌種及它們的數量比是診斷皮膚的健康狀態時的指標，因此細菌的獲取優選在皮膚上的一定面積進行。當通過用滅菌棉棒擦拭皮膚表面的方法來獲取細菌時，為了確保滅菌棉棒擦拭的面積是一定的，可以將由合成樹脂或玻璃等構成、且兩端開口的圓筒狀、橢圓筒狀、或棱柱狀的獲取工具輕輕地貼在皮膚上，通過對開口的內部無遺漏地進行擦拭來獲取細菌。通過這種方法，通常能夠從規定的面積范圍內的皮膚表面獲取細菌。
[0051]另一方面，當采用將滅菌后的瓊脂培養基按壓在皮膚表面的方法來獲取細菌時，通過使用具有規定面積(半徑)的培養基，通常能夠從一定面積范圍內的皮膚表面獲取細菌。對于能夠在細菌的獲取中使用的培養基沒有特別的限定，但作為在皮膚常駐菌的獲取中使用的培養基的具體例子，可以列舉常規的活菌培養用的標準瓊脂培養基或胰蛋白胨大豆瓊脂培養基、蛋黃加甘露醇食鹽培養基或食鹽蛋黃瓊脂培養基等葡萄球菌用的選擇分離培養基。此外，由于在細菌的獲取中使用的培養基與皮膚表面接觸，因此優選使用由不含有可能成為過敏原的物質的成分制成的培養基。
[0052](2)有用菌的選 擇性增殖[0053]如上所述，在從皮膚表面獲取的細菌中既含有有用菌也含有有害菌。在其中只選擇性地增殖所期望的一種或多種有用菌。作為選擇性增殖的方法，有分離出有用菌后進行培養的方法，在只增殖所期望的有用菌的條件下進行培養的方法，可以采用任意一種方法。
[0054]作為前者的方法的一個例子，選擇性地增殖有用菌的步驟可以包括下述(i)~
(iii)的步驟。
[0055](i)在培養基上培養獲取的細菌的預培養步驟
[0056](ii)對培養的細菌進行鑒定，從而篩選出有用菌的篩選步驟
[0057](iii)對篩選出的有用菌進行培養的培養步驟
[0058](i)預培養步驟
[0059]將用滅菌棉棒等獲取的細菌利用磷酸緩沖生理鹽水(PBS)等稀釋液稀釋到規定的倍率(例如，10~100000倍)，涂布在培養用的培養基表面后進行培養。培養條件可以根據作為分離對象的有用菌的種類、或所使用的培養基等的條件來適當設定。[0060]此外，當通過將培養基按壓在皮膚表面的方法來獲取細菌時，預培養步驟可以在完成了獲取的培養基的表面直接進行，但也可以將從培養基表面用滅菌棉棒等進行再獲取的細菌進行稀釋，涂布在培養用的培養基表面后，通過和上述相同的步驟來進行預培養。作為培養用的培養基，可以列舉胰蛋白胨大豆瓊脂培養基(TS培養基)等常規細菌用的培養基、或上述的葡萄球菌用的選擇分離培養基等。
[0061](ii)篩選步驟
[0062]對于在上述的預培養步驟中培養的細菌進行菌種的鑒定，從而篩選出有用菌。篩選步驟可以采用任意的公知方法進行，例如，可以按照下述步驟進行。首先，肉眼觀察培養基，對培養基上形成的菌落數進行計數，同時在可能的前提下根據外觀進行預分類。隨后，對各菌落或其中代表性的若干個菌落進行菌種的鑒定。例如，如果是表皮葡萄球菌，則結合顯微鏡觀察、革蘭氏染色及凝固酶活性測定來進行鑒定。尤其是，與金黃色葡萄球菌等病原菌不同，由于表皮葡萄球菌是凝固酶陰性(CNS)的，因此，凝固酶活性的測定在與金黃色葡萄球菌的辨別上是重要的手段。
[0063](iii)培養步驟
[0064]如上所述，對皮膚常駐菌等從細菌中篩選(分離)出的有用菌進行培養。培養可以采用任意的公知方法進行。由此獲得的有用菌與獲取皮膚常駐菌的個體的皮膚表面的環境相適應，因此加入到護膚用組合物中并投入(回投)到個體的皮膚表面后，能夠在皮膚表面增殖并形成優勢，并能夠獲得與之相應的改善皮膚表面的狀態或抑制有害菌增殖等的效果。與預培養步驟時的情況相同，培養時使用的培養基、培養條件可以根據作為分離對象的有用菌的種類或所使用的培養基等的條件來適當設定。另外，當篩選出了多個有用菌時，可以將各菌株進行分離并單獨培養后，在護膚用組合物制造時以規定的比例進行混合來加以使用，但也可以在多種有用菌混合了的狀態下進行培養。
[0065](3)護膚用組合物的配制
[0066]在配制護膚用組合物時，可以直接使用通過上述步驟選擇性增殖的有用菌的活菌，但由于在含有活菌的狀態難以長期保存，因此也可以配制有用菌的假死狀態菌或有用菌的干燥菌體，在使用前通過使其分散在含水的賦形劑中來使有用菌復原，從而配置含有有用菌的護膚用組合物。[0067]作為護膚用組合物的賦形劑，只要有用菌能在其中生存和/或增殖即可，對其沒有特別的限定，可以使用化妝水、乳液、美容液、凝膠、乳膏、潤膚水、噴霧劑等任意的基礎化妝品，面膜等特殊護理品，潤發油、潤發水、生發劑、煽油膏、護發素、護發膜、染發劑等頭皮護理用品或護發用化妝品等。對于單位體積的有用菌的摻混量，可以根據賦形劑及有用菌的種類等適當選擇。
[0068]作為干燥菌體的制作方法，可以采用任意的公知方法，對其沒有特別的限定，作為其具體例子，可以列舉冷凍干燥法、熱風干燥法等。例如，當采用冷凍干燥法制作干燥菌體時，在脫脂牛奶或豆乳等適當的保護劑共存的條件下將有用菌分散在分散劑(通常，使用水)中，利用液氮等進行冷凍后，減壓下利用冷凍干燥機去除水分。由此得到的干燥菌體可以封裝在滅菌了的安瓿瓶等中進行保管。
[0069]此外，當有用菌的死菌體、菌體的超聲波破碎物等菌體成分、或有用菌的生成物質對于有用菌具有特異的增殖促進活性時，在護膚用組合物中也可以含有這些來替代有用菌的活菌。這是由于以下原因，即，除了提供有用菌的活菌之外，代之以向個體的表皮提供在個體的皮膚表面特異性地促進有用菌的增殖的物質時，也能夠增大在皮膚常駐菌群中所占的有用菌的比例，并完整地保持皮膚的健康狀態。當替代有用菌的活菌而使用有用菌的死菌體或有用菌的生成物質時，護膚用組合物可以是含有表面活性劑的洗發水、沐浴露、頭部水療用清洗劑等皮膚清洗劑。
[0070]當護膚用組合物中含有有用菌的活菌時，在不對其制造和/或增殖產生影響的前提下，在化妝品等中可以含有通常所使用的任意的添加劑。作為這種添加劑的具體例子，可以舉出香料、存放劑、抗氧化劑、殺菌劑(僅限于對于有用菌沒有抗菌活性或抗菌活性弱的制劑)、乳化劑、穩定劑等。在護膚用組合物中可以進一步含有特異性促進有用菌的增殖的物質。
[0071]通過將含有所獲得的有用菌的菌體、菌體成分及有用菌的生成物質中任意一種或多種的護膚用組合物投入(回投)至個體的皮膚，從而將有用菌投入(回投)到個體的皮膚(作為投入(回投)的部位，可以和獲取皮膚常駐菌時的部位為同一或不同的位置)上后，與該個體的皮膚表面的環境相適應的有用菌在皮膚表面迅速地得到增殖，從而能夠改善皮膚的健康狀態。在這種美容方法中，作為護膚用組合物的投入方法，可以選擇諸如化妝水、乳液、潤膚水等液劑的涂抹，噴霧劑的噴霧，乳膏、凝膠等的涂抹等與護膚用組合物的性狀相符的任意的方法。進行投入時，可用手指等來進行，但也可采用噴霧器、涂抹器等器具來進行。作為護膚用組合物的投入間隔及每回的投入量，可以根據有用菌的種類、投入的部位、皮膚的健康狀態等來適當調節，但為了使有用菌切實地附著在皮膚表面，優選進行持續性地投入。
[0072]此外，在本實施方式的美容方法中，在自個體的皮膚獲取的細菌中僅僅選擇性地增殖了有用菌，并將含有該有用菌的護膚用組合物投入(回投)到同一個體，但也可以投入到與獲取細菌時的個體不同的個體的皮膚表面。或者，也可以投入含有在從多個個體獲取的細菌中選擇性增殖的有用菌(可以含有或不含有來源于自本人獲取的細菌的有用菌)的護膚用組合物。
[0073]實施例
[0074]以下，對于為了確認本發明的效果而進行的實施例進行說明。[0075]實施例1:從皮膚常駐菌中分離表皮葡萄球菌并單獨培養、以及干燥菌體的制作
[0076][I]皮膚常駐菌的獲取
[0077]以下操作是在戴有滅菌手套的狀態下進行。
[0078]將洗凈后經高壓鍋滅菌的聚碳酸酯制的圓筒(內徑25πιπιΦ)輕輕按壓在受試者的額頭的皮膚表面，用在滅過菌的磷酸緩沖生理鹽水(PBS)中浸潰20秒的滅菌棉棒將暴露在圓筒的內部的皮膚表面進行徹底擦拭。移去圓筒，用滅菌棉棒拭取皮膚表面殘留的水分。對于在圓筒的皮膚接觸面的內側附著的水分，同樣也用滅菌棉棒拭取。將這些滅菌棉棒(折掉與采集者的手接觸了的部分。)放入到內裝有滅菌PBS的無菌管內，蓋上蓋子后移入到安全柜中。
[0079][2]預培養
[0080]將通過以上步驟獲得的菌液100 μ L加入至內裝有900 μ L的PBS的微型管中，渦旋振蕩后制得了 10倍稀釋液。用稀釋液替代菌液并重復同樣的操作，從而制得了 100~100000倍稀釋液。在胰蛋白胨大豆瓊脂培養基(TS培養基)及金黃色葡萄球菌用選擇性培養基(以下，稱之為“選擇培養基”)中，分別加入所獲得的各稀釋液50 μ L并使之均勻分散，在37°C培養了 48小時。
[0081][3]表皮葡萄球菌的分離
[0082]肉眼觀察在TS培養基及選擇培養基上形成的菌落，并對各菌落進行了編號。在TS培養基及選擇培養基上，在和上述(2)相同的培養條件對各菌落進行了單獨培養。對形成的各菌落進行編號，在載玻片上滴一滴去離子水，將用鉬絲從菌落挑取的菌體分散后，用噴燈在背面進行烘烤，從而利用火焰固定法將菌體固定在了載玻片的表面。依次用結晶紫溶液、碘液、沙黃溶液進行處理，從而進行了革蘭氏染色。隨后，對于各菌落中所含的菌體，通過顯微鏡觀察確認了染色性及形態。同時，利用API STAPH平板系統進行菌種的鑒定后確認為是表皮葡萄球菌。
[0083][4]表皮葡萄球菌的單獨培養及干燥菌體的制作
[0084]從被鑒定為表皮葡萄球菌的菌落中獲取菌體，在TS培養基上進行了單獨培養。用鉬環從獲得的菌落中挑取菌體(一個Imm直徑的菌落)，分散在作為保護劑的脫脂牛奶中后注入到安瓿瓶，在_80°C超低溫庫中進行了快速冷凍。隨后，用冷凍干燥機處理得到了干燥菌體粉末。
[0085][5]干燥菌體的復原
[0086]將含有干燥菌體的安瓿瓶開封，加入少量的液體狀的TS培養基來懸浮干燥菌體。將得到的懸浮液分別加入到液體狀的TS培養基、平板狀的TS培養基及甘露醇培養基中，在37°C培養了 48小時后，從每個培養基中都可以檢測到菌體，同時確認了在平板培養基上形成了菌落。對這些菌體進行了鑒定，確認為是表皮葡萄球菌。
[0087]實施例2:臨床試驗
[0088]20~50年齡段的21名女性作為受試者，在試驗的第一天，將從本人的皮膚(額部)獲取的皮膚常駐菌以實施例1所述的步驟進行了分離及單獨培養，從而獲得了來源于自身的皮膚常駐菌的表皮葡萄球菌。向受試者進行投入(回投)后，對皮膚表面的表皮葡萄球菌數及對于表皮水分量的影響進行了研討。
[0089]將21名受試者分為13名的第I組(在圖1及圖2中，標注為“美膚菌回投組”)和8名的第2組(在圖1及圖2中，標注為“空白對照組”)(不告知受試者被分在了哪一組)，并分發了基礎化妝品(不含酒精的化妝水(HORIN公司制)、保濕用凝膠(HORIN公司制)及乳液(HORIN公司制))。同時，給第I組分發了來源于本人的皮膚常駐菌的表皮葡萄球菌的干燥菌體(以下，簡稱為“干燥菌體”)，給第2組則分發了空白對照劑(脫脂牛奶)。對于各組的受試者，在4周時間內依次在臉部的皮膚涂抹化妝水、懸浮有干燥菌體(在凝膠每次使用量中，為約10億個)或空白對照劑的保濕用凝膠、乳液，從而定期(各周的第一天和第四天)實施了投入(回投)來源于自身的皮膚常駐菌的表皮葡萄球菌的操作、或投入空白對照劑的操作(圖1中，標注為“美膚菌回投”。以下，總稱為“回投操作”)。為了探討回投操作的影響，定期(每周I次)測定了額部的皮膚表面的表皮葡萄球菌數及表皮水分量。在表皮葡萄球菌數的測定中，在通過實施例1的[I]、[2]所述的方法從額部的皮膚表面獲取后并進行培養的皮膚常駐菌的菌落中，利用實施例1的[3]所述的方法鑒定出表皮葡萄球菌的菌落，隨后進行了計數。在后者的測定中，使用了 Cutometer MPA580 (皮膚彈性測量儀，德國C+K公司制)及Corneometer探頭(以上為第I輪處置)。
[0090]在第I輪處置結束后的4周時間內，僅以第2組的受試者為對象，除了替代空白對照劑變為分發干燥菌體以外，在和 第I輪處置相同的條件進行了來源于自身的皮膚常駐菌的表皮葡萄球菌的回投操作。為了探討回投操作的影響，定期(每隔兩周)測定了額部的皮膚表面的表皮葡萄球菌數量。對于第I組的受試者，在第I輪處置結束后并經過4周時間時，測定了額部的皮膚表面的表皮葡萄球菌數量(以上為第2輪處置)。
[0091]圖1中示出了將各組在臨床試驗開始前的表皮葡萄球菌數量設為I時的、表皮葡萄球菌數量(標注為“美膚菌相對數量”)隨時間的變化。在第I組中，皮膚表面的表皮葡萄球菌數量在投入(回投)了來源于自身的皮膚常駐菌的表皮葡萄球菌時顯著增多，但在第I輪處置結束并停止回投操作時變為減少。另一方面，在第2組中，相對于在空白對照劑的投入期間大致為一定的情況，當切換到回投來源于自身的皮膚常駐菌的表皮葡萄球菌的操作時，可以觀察到皮膚表面的表皮葡萄球菌數量顯著增多的現象。這些結果表明，(I)通過投入(回投)來源于自身的皮膚常駐菌的表皮葡萄球菌，表皮葡萄球菌可以切實地附著在皮膚表面、(2)由于皮膚表面的表皮葡萄球菌數量在回投操作結束后減少，因此優選繼續進行投入(回投操作)。
[0092]圖2中示出了第I組及第2組在第I輪處置結束前后的額部的表皮水分量(皮膚水分相對值)。由此可以確認，通過在第I輪處置中的為期3~4周的投入(回投)來源于自身的皮膚常駐菌的表皮葡萄球菌的操作，第I組的表皮水分量顯著增多。另一方面，觀察到了第2組在第I輪處置過程中的表皮水分量大致為一定的情況。
[0093]這些結果說明，通過將來源于自身的皮膚常駐菌的表皮葡萄球菌投入(回投)到自身的皮膚，表皮葡萄球菌可以在皮膚常駐菌群中形成優勢，隨之作為皮膚的健康狀態的一個指標的表皮水分量得到了改善。
【權利要求】
1.美容方法，其特征在于，具有 獲取在人體的皮膚表面生息的細菌的步驟， 使所述細菌中能夠在人體的皮膚表面增殖、從而改善皮膚的健康狀態的一種或多種有用菌得以選擇性地增殖的步驟， 將含有選自由所述增殖的有用菌的菌體、菌體成分及所述有用菌的生成物質所構成的群組中的一種或多種的組合物投入到人體皮膚的步驟。
2.如權利要求1所述的美容方法，其特征在于，在所述投入步驟中，對在獲取所述細菌時作為對象的同一個體進行所述組合物的投入、即回投。
3.如權利要求1或2所述的美容方法，其特征在于，所述細菌是皮膚常駐菌。
4.如權利要求1~3中任意一項所述的美容方法，其特征在于，所述使一種或多種有用菌得以選擇性地增殖的步驟包括 用培養基培養獲取的所述細菌的預培養步驟， 從所述培養的細 菌中篩選出所述有用菌的篩選步驟， 培養所述篩選出的有用菌的培養步驟。
5.如權利要求1~4中任意一項所述的美容方法，其特征在于，所述細菌是在人體的健全狀態的皮膚表面生息的細菌。
6.如權利要求1~5中任意一項所述的美容方法，其特征在于，所述有用菌是凝固酶陰性葡萄球菌。
7.如權利要求6所述的美容方法，其特征在于，所述有用菌是表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)。
8.護膚用組合物，其特征在于，含有選自由有用菌的菌體、菌體成分及所述有用菌的生成物質所構成的群組中的一種或多種物質，所述有用菌是從自人體的皮膚表面獲取的細菌中分離并選擇性增殖的、能夠在人體的皮膚表面增殖并改善皮膚的健康狀態的一種或多種有用菌。
9.如權利要求8所述的護膚用組合物，其特征在于，所述細菌是皮膚常駐菌。
10.如權利要求8或9所述的護膚用組合物，其特征在于，所述細菌是在人體的健全狀態的皮膚表面生息的細菌。
11.如權利要求8~10中任意一項所述的護膚用組合物，其特征在于，所述有用菌是凝固酶陰性葡萄球菌。
12.如權利要求11所述的護膚用組合物，其特征在于，所述有用菌是表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)。
13.菌體，其是在自人體的皮膚表面獲取的細菌中使能夠在人體的皮膚表面增殖、從而改善皮膚的健康狀態的一種或多種有用菌選擇性地增殖而得到的菌體。
14.如權利要求13所述的菌體，其特征在于，所述細菌是皮膚常駐菌。
15.如權利要求13或14所述的菌體，其特征在于，所述細菌是在人體的健全狀態的皮膚表面生息的細菌。
16.如權利要求13~15中任意一項所述的菌體，其特征在于，所述有用菌是凝固酶陰性葡萄球菌。
17.如權利要求16所述的菌體，其特征在于，所述有用菌是表皮葡萄球菌(Staphylococcus epidermidis)。
18.干燥菌體， 其是將如權利要求13~17中任意一項所述的菌體進行干燥而得到的干燥菌體。
【文檔編號】C12N1/00GK103945829SQ201280056675
【公開日】2014年7月23日 申請日期:2012年11月7日 優先權日:2011年11月18日
【發明者】本多英俊, 出來尾格 申請人:生物基因組學, 學校法人九州文化學園