黑莓籽有效成分在制備降血脂保健品或藥物上的應用的制作方法

黑莓籽有效成分在制備降血脂保健品或藥物上的應用的制作方法
【專利摘要】本發明屬于植物提取物應用【技術領域】，具體涉及黑莓籽有效成分的另一種新應用，具體涉及其在具有調節脂質代謝和抗脂質過氧化作用的降血脂保健品或藥物上的應用。本發明研究證實了黑莓籽石油醚部位、正丁醇部位和黑莓籽油對高脂血癥小鼠具有調節脂質代謝和抗脂質過氧化作用，能改善脂質在小鼠肝臟和脾中的蓄積，減少氧化應激，推測其是黑莓籽有效成分降血脂的作用機制之一。
【專利說明】黑莓籽有效成分在制備降血脂保健品或藥物上的應用
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【技術領域】 本發明屬于植物提取物應用【技術領域】，具體涉及一種黑莓籽有效成分在制備降血脂保 健品或藥物上的新應用。
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【背景技術】 隨著人們生活水平的提高和醫學科學的進步，人們的健康水平得到很大的提高，在控 制感染性疾病方面得到了很大的進步。血脂異常俗稱高脂血癥。近年來，隨著生活習慣和 飲食習慣改變等因素影響，高脂血癥發病率有明顯增長趨勢，已經成為危害人類身體健康 的重大疾病之一，是引發動脈粥樣硬化的最主要因素，動脈粥樣硬化所致的心血管疾病是 當前危機人類健康和生命的主要疾病之一。心腦血管病具有發病率高、致殘率高、死亡率高 和復發率高的特點。這類病在全世界已成為危害人類健康的"頭號殺手"。美國心肺血研究 院進行7年的冠心病防治研究證實，降血脂藥的應用可減少心臟病死亡率24%，減少非致 死性心臟病發作率19%。降脂藥能延緩或減輕AS病變的發展，并促進其消退。
[0003] 目前國外開發的新型降血脂藥物多是人工合成的化合物，并且多以他汀類降脂藥 為主，但有肝臟和肌肉毒副作用，嚴重者可導致橫紋肌溶解癥。我國的降血脂藥物多是天然 的、無毒的或無毒副作用的。目前有三十多種中藥被用于高脂血癥的治療當中，已報道的中 藥降脂活性成分包括蛋白質、黃酮類、皂苷類、活性多糖、不飽和脂肪酸、酚類成分、蒽醌類、 生物堿類和萜類等。中藥降脂藥療效肯定、持續、副作用小。隨著現代科技手段的不斷進 步，眾多中外學者對中藥中具有降脂活性的成分進行研究發現中藥的降脂作用主要從抑制 膽固醇的吸收、調節血脂代謝、促進膽固醇排泄來體現，科學地解釋了中藥的治療機制，為 應用中藥治療高脂血癥提供了理論依據。
[0004] 在當今時代，為預防和治療世界上日益增多的高血脂及其相關的心腦血管病患 者，深入研究具有降脂功能的食物和藥用植物，努力發現和開發降脂作用顯著、沒有任何毒 副作用的降血脂藥物或保健食品成為國內外的研究熱點。
[0005] 黑莓spp. Blackberry)屬于薔薇科（Rasaceae)懸鉤子屬聚合果類植 物，其果實具有很高的營養價值和藥用價值，具有改善人體新陳代謝、清除自由基、延緩衰 老、增強免疫力等功能，特別具有降低膽固醇含量、防治心臟疾病、抗癌（降低化療引起的 毒副作用）和抗血栓的功效。
[0006] 黑莓籽是黑莓果酒、黑莓汁等加工產品的副產物，含有豐富的多酚類化合物，多年 來被大量遺棄，造成資源的大量浪費。近幾年，技術人員從黑莓籽中提取了黑莓籽油。
[0007] 研究表明，黑莓籽油含有較高的不飽和脂肪酸，如棕櫚酸、硬脂酸、油酸、亞油酸和 亞麻酸等，能夠提供給人體基本的脂肪酸，而且這些脂肪酸不能通過任何已知的化學途徑 合成，必須從食物中獲取。另外，籽油具有有效清除自由基、有效抑制H 202誘導的小鼠紅細 胞氧化溶血和VC- FeS04體系誘導的小鼠肝組織丙二醛生成及VC-FeS04體系誘導的小鼠肝 線粒體腫脹的作用，與其抗心血管脂氧化和抗癌活性息息相關；此外，還發現黑莓籽經脫脂 后的主要有效成分為原花青素，是由單體黃烷-3-醇以不同聚合度連接而成的多酚類化合 物，具有高效的清除自由基的能力，具有治療動脈硬化、消炎防腫、抗突變和預防癌癥等廣 泛用途。未見黑莓籽對調節血脂代謝和抗脂質過氧化，用于治療高脂血癥作用的報道。
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【發明內容】
本發明為了擴大黑莓籽的應用領域，通過灌胃高脂乳劑誘導小鼠高脂血癥，測定血清 中TG、TC、HDL-C和LDL-C的含量評價其調節血脂的作用，測定血清中MDA的含量和S0D的 活力，評價其體內抗脂質過氧化的作用，為合理開發和利用黑莓籽資源提供科學依據，提供 了黑莓籽在調節血脂和抗脂質過氧化方面的新應用。
[0009] 本發明為實現上述目的，采用以下技術方案： 黑莓籽有效成分在制備降血脂保健品或藥物上的應用，所述黑莓籽有效成分為黑莓籽 的石油醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
[0010] 黑莓籽有效成分在抗脂質過氧化的應用，所述黑莓籽有效成分為黑莓籽的石油醚 部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
[0011] 黑莓籽有效成分改善脂質在肝腎脾的蓄積應用，所述黑莓籽有效成分為黑莓籽的 石油醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
[0012] 黑莓籽有效成分(石油醚部位、正丁醇部位和黑莓籽油）采用以下方法制得，黑莓 籽用石油醚冷浸脫脂，脫脂后的提取液回收石油醚得到黑莓籽油；脫脂后的黑莓籽殘渣用 乙醇（65-80V%)冷浸，乙醇提取液濃縮得乙醇總浸膏，乙醇總浸膏分散于水中，依次用石油 醚、乙酸乙酯和正丁醇進行萃取，得到的石油醚萃取物、乙酸乙酯萃取物和正丁醇萃取物， 即分別為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0013] 為了提高黑莓籽有效成分的提取效果，可以在石油醚冷浸前將黑莓籽粉碎。
[0014] 石油醚冷浸脫脂時，重復4-5次，每次3-4d，合并提取液；每次石油醚的用量是黑 莓籽質量的8-10倍，冷浸溫度為室溫。
[0015] 乙醇冷浸時，重復2-3次，每次3-4d，合并乙醇提取液；每次乙醇的用量是黑莓籽 殘渣質量的8-10倍，冷浸溫度為室溫。
[0016] 本發明從黑莓籽中提取到了石油醚部位、正丁醇部位和黑莓籽油，并采用灌胃高 脂乳劑誘導高血脂小鼠模型，首次研究黑莓籽對高脂乳劑誘導的高脂血癥小鼠的影響。研 究證實了這些有效部位均具有不同程度的降低血清中TG、TC、LDL-C和MDA的含量、升高 HDL-C的含量及S0D的活力的功效，其中石油醚低劑量組能顯著性地降低血清中TG、TC、 LDL-C和MDA的含量，升高HDL-C的含量及S0D的活力；正丁醇部位中低劑量組均能顯著性 的降低血清中TG、TC、LDL-C和MDA的含量，升高S0D的活力；黑莓籽油高劑量組能顯著性 地降低血清中TG、TC、LDL-C和MDA的含量，升高S0D的活力；黑莓籽油中劑量組能顯著性 地降低血清中TG、TC和MDA的含量，升高HDL-C的含量和S0D的活力；正丁醇部位高劑量 組能顯著性地降低血清中TG和MDA的含量，升高HDL-C的含量及S0D的活力，黑莓籽油低 劑量組能降低血清中TG、TC和LDL-C的含量，升高HDL-C的含量，石油醚部位高（TG和TC)、 中（TC和HDL-C)劑量組能顯著性改變，其他各指標雖不具有顯著性，但與模型組相比，均具 有一定的效果；另外，研究肝腎脾系數發現，除石油醚高劑量組外，其他各組均能不同程度 地顯著性降低肝系數和脾系數；僅有正丁醇低劑量組能顯著性地降低腎系數，這些有效部 位均能改善脂質在小鼠肝臟和脾中的蓄積，減少氧化應激。由以上數據可知，黑莓籽有效部 位具有一定程度的調節血脂代謝和抗脂質過氧化、改善脂質在小鼠肝臟和脾中的蓄積、減 少氧化應激的作用，推測其是黑莓籽降血脂的作用機制之一。
[0017]

【具體實施方式】 實施例1 黑莓籽有效成分的提取方法，步驟如下：500g黑莓籽粉碎，每次使用4000mL石油醚冷 浸脫脂，重復4次，每次4d，過濾，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油145. 04g ; 脫脂后的黑莓籽殘渣341g用2800mL乙醇（70V%)冷浸，重復3次，每次3d，合并乙 醇提取液，乙醇提取液濃縮得乙醇總浸膏，乙醇總浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙 酯、正丁醇進行萃取，得到的石油醚萃取物2. 34g、乙酸乙酯萃取物5. 46g和正丁醇萃取物 13. 42g，即分別為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0018] 實施例2 黑莓籽有效成分的提取方法，步驟如下：500 g黑莓籽粉碎，每次使用5000 mL石油醚 冷浸脫脂，重復5次，每次3 d，過濾，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油162. 50 g ; 脫脂后的黑莓籽殘渣332g用3000mL乙醇（65V%)冷浸，重復2次，每次4d，合并乙 醇提取液，乙醇提取液濃縮得乙醇總浸膏，乙醇總浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙 酯、正丁醇進行萃取，得到的石油醚萃取物2. 02g、乙酸乙酯萃取物5. 10g和正丁醇萃取物 14. 28g，即分別為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0019] 實施例3 黑莓籽有效成分的提取方法，步驟如下：500 g黑莓籽粉碎，每次使用4500 mL石油醚 冷浸脫脂，重復4次，每次4d，合并提取液，提取液回收石油醚得到黑莓籽油162. 26 g ; 脫脂后的黑莓籽殘渣335g用3300mL乙醇（80V%)冷浸，重復3次，每次4d，合并乙 醇提取液，乙醇提取液濃縮得乙醇總浸膏，乙醇總浸膏分散于水中，依次用石油醚、乙酸乙 酯、正丁醇進行萃取，得到的石油醚萃取物2. 26g、乙酸乙酯萃取物5. 54g和正丁醇萃取物 12. 94g，即分別為黑莓籽的石油醚部位、乙酸乙酯部位和正丁醇部位。
[0020] 效果實驗黑莓籽不同部位對高脂乳劑誘導的高脂乳劑小鼠的影響 實驗原料：將實施例1-3制得的石油醚部位、正丁醇部位、黑莓籽油分別混合作為三種 實驗原料。
[0021] 實驗動物：昆明種小鼠，體重22 ± 2 g，SPF級，由山東魯抗醫藥股份有限公司質 檢中心動物實驗室提供，生產許可證號：SCXD魯20080002。
[0022] 實驗試劑：甘油三酯（TG)測定試劑盒（浙江東甌診斷產品有限公司，Lot : 2014030025);總膽固醇（TC)測定試劑盒(浙江東甌診斷產品有限公司，Lot :2014040011); 丙二醛(MDA)試劑盒(南京建成生物工程研究所，20140324) ;S0D試劑盒(測總）（南京建 成生物工程研究所，20140507);高密度脂蛋白膽固醇（HDL)測定試劑盒(北京化康泰臨床 試劑有限公司，20130718);低密度脂蛋白膽固醇（LDL)測定試劑盒(北京化康泰臨床試劑 有限公司，20130722);決明降脂片（吉林吉春制藥有限公司批號：070501);丙硫氧嘧啶 (Merck, Germany) ;3號膽鹽(北京奧博星生物技術有限公司，批號：100602816);膽固醇(純 度>99. 5%，北京奧博星生物技術有限公司，批號：1029352);豬油（自制)。
[0023] 實驗儀器：LRH-150恒溫培養箱；Multiskan MK3酶標儀；電子天平；旋轉蒸發儀； UV-2000型紫外可見分光光度計；CS-H1型混合器；各規格的微量移液器及槍頭等。
[0024] 實驗方法與結果 1、實驗方法 高脂乳劑的配制：取1 g丙硫氧啼陡、20 g膽固醇和40 g葡萄糖在乳缽中一起研碎， 取豬油40 g (自制豬油先用40°C水浴融化）導入乳缽，研磨，然后再加入1 mL吐溫-80和 2 mL丙二醇，向2 g 3號膽鹽中加入20 mL水配置成10%的溶液，再將膽鹽溶液倒入乳缽中 研磨均勻，最后用蒸餾水定容至100 mL，超聲30 min直至乳劑呈稀奶油狀，密封后放入冰箱 中，用時37°C水浴融化即可。
[0025] 動物分組與處理：取健康昆明小鼠120只（22±2 g)隨機分為12組，每組10只，分 別為空白組，模型組，陽性對照組(決明降脂片），黑莓籽石油醚部位高劑量組（800 mg/kg)、 中劑量組（400 mg/kg)和低劑量組（200 mg/kg)，黑莓籽正丁醇部位高劑量組（600 mg/kg)、 中劑量組（300 mg/kg)和低劑量組（150 mg/kg)，黑莓籽油高劑量組（1000 mg/kg)、中劑量 組（500 mg/kg)和低劑量組（250 mg/kg)。上午除空白組外給小鼠按照0.2 mL/10g灌胃高 脂乳劑進行造模，下午灌胃相應的藥物，于第14d給藥2h后，禁食不禁水12h后，摘除眼球 取血，血漿室溫靜置5min，待血清分離后離心，得到血清，放置于冰箱0-3°C保存，用于測定 TG、TC、HDL-C、LDL-C、MDA和S0D。采用統計軟件SPSS 17. 0對實驗結果進行統計學處理， 所有數據采用i 表示，以One-way AN0VA分析各組別之間的顯著性差異，兩組均數比較 米用?檢驗。
[0026] 2、實驗結果如下： 表1黑莓籽不同部位對高腿血癥小鼠脂質代謝的影響（i±S·，《=10)

【權利要求】
1. 黑莓籽有效成分在制備降血脂保健品或藥物上的應用，所述黑莓籽有效成分為黑莓 籽的石油醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
2. 黑莓籽有效成分在抗脂質過氧化方面的應用，所述黑莓籽有效成分為黑莓籽的石油 醚部位、正丁醇部位和/或黑莓籽油。
【文檔編號】A23L1/29GK104189139SQ201410334901
【公開日】2014年12月10日 申請日期:2014年7月15日 優先權日:2014年7月15日
【發明者】魏金鳳, 周琳, 康文藝, 尹震花 申請人:河南大學