茶樹油抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的用圖
【技術領域】
[0001] 本發明屬生物醫藥領域，具體涉及茶樹油作為抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的 用途。
【背景技術】
[0002] 金黃色葡萄球菌屬于革蘭氏陽性球菌，廣泛分布于自然界，是引起化膿性疾病的 重要病原菌，也是引起食品污染和細菌性食物中毒的一種重要細菌。食品受金黃色葡萄球 菌污染后，不僅會腐敗變質，而且部分菌株產生金黃色葡萄 球菌腸毒素而引起食物中毒，由金黃色葡萄球菌腸毒素引起的食物中毒占整個細菌性 食物中毒的首位。近年來，由金黃色葡萄球菌所致醫院感染的發病率呈上升趨勢，其耐 藥性也逐年增加。細菌感染已成為感染性疾病的主要原因之一，嚴重威脅到了人類和動物 的健康，引起了基礎和臨床研宄的極大關注。金黃色葡萄球菌分泌的外毒素主要包括以及 腸毒素等。金葡菌分泌的溶血素是其致病力構成的重要因素之一，而其中又以α-溶血素 最為常見，毒性最強，該毒素分泌至細胞外可與宿主體內的紅細胞、內皮細胞、免疫細胞等 大部分細胞膜結合，也是廣受人們關注的一類毒力因子。腸毒素主要是指在特定條件下由 金黃色葡萄球菌所產生的一類結構相似、毒力相似、而抗原性各不相同的胞外單鏈小分子 蛋白質，具有很高的熱穩定性，此外還具有的超抗原活性，屬于超抗原蛋白，可以刺激非特 異性T細胞增殖。
[0003] 茶樹油，又名茶樹精油，是由桃金娘科白千層屬灌木樹種互葉白千層的新鮮枝葉 經水蒸氣蒸餾得到的芳香精油，具有廣譜的抗菌、抗真菌能力和抗氧化能力，中國衛生部于 2003年已將茶樹油列入食品香料名單。
[0004] 本發明采用茶樹油作為抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的物質，為研宄開發新型 的金黃色葡萄球菌外毒素食品防腐奠定基礎。
[0005] 茶樹油為本發明提供的一種抗金黃色葡萄球菌外毒素分泌的天然植物精油
【發明內容】
： 本發明的目的是為解決金黃色葡萄球菌變異，耐藥性逐漸增強的，食品防腐劑不能有 效抑制食品中金黃色葡萄球菌的生長，而產生毒素，引起食品中毒的問題，而提供一種抑制 金黃色葡萄球菌外毒素分泌的抑制劑。
[0006] 茶樹油抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的用途。
[0007] 一種食品防腐劑，它包括：茶樹油和抗金黃色葡萄球菌素； 一種食品防腐劑的使用方法，茶樹油添加量為每克食品中添加0. 25-32 mL ; 所述的茶樹油添加量為每克食品中添加〇. 25-3mL ; 所述的茶樹油添加量每克食品中添加〇. 25-0. 5mL。
[0008] 本發明提供了茶樹油抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的新用途，本發明人利用微 量稀釋法藥物敏感性實驗，測定茶樹油對金黃色葡萄球菌懸浮菌的最低抑菌濃度（MIC)和 最低殺菌濃度（MBC)，進而證明茶樹油對金黃色葡萄球菌浮游菌抑制效果。通過溶血實驗 來測定茶樹油對金黃色葡萄球菌中α -溶血素分泌的抑制作用，為了使實驗結果更具有說 服力，我們除了定性觀察結果，還可以通過對吸光度值的測定來進一步定量測定。除此之 夕卜，蛋白免疫印跡實驗可以進一步驗證茶樹油的抑菌效果。由于腸毒素會刺激巨噬細胞產 生腫瘤壞死因子TNF-α，所以通過測定TNF-α來間接測定腸毒素。在基因水平上，利用 real-time RT-PCR技術對sea, 三種基因轉錄水平的考察來探宄茶樹油抑制外毒 素分泌的作用機制，說明茶樹油對抑制金黃色葡萄球菌外毒素的分泌具有良好的作用。本 次試驗采用金黃色葡萄球菌ATCC 29213以及食品分離株作為實驗菌株。
[0009] 茶樹油對具有廣譜的抗菌、抗真菌能力和抗氧化能力，茶樹油對金黃色葡萄球菌 最低抑菌濃度在8-32mL/L，該濃度茶樹油的存在可能改變了某些食品的口味和口感。我們 在溶血實驗中發現，在0. 125 -0.5mL/L時(見圖1)，抑制了金黃色葡萄球菌外毒素的分泌。 茶樹油與其它抗金黃色葡萄球菌素配合做為食品防腐劑，在不能有效抑制耐藥金黃色葡萄 球菌菌株生長時，可有效地抑制金黃色葡萄球菌外毒素的分泌。防止金黃色葡萄球菌外毒 素中毒。為預防外毒素中毒，多一個安全保障。同時也為在食品調制中，使用茶樹油提供了 更廣闊的空間。
【附圖說明】
[0010] 圖1茶樹油對金黃色葡萄球菌中α -溶血素溶血能力影響的實驗結果； 圖2茶樹油對金黃色葡萄球菌中外毒素分泌抑制作用的實驗結果； 圖3茶樹油抑制腫瘤壞死因子釋放的實驗結果； 圖4茶樹油對相關基因表達抑制作用的實驗結果。
【具體實施方式】
[0011] 實施例1 微量稀釋法藥物敏感性實驗-茶樹油對金黃色葡萄球菌懸浮菌的最低抑菌濃度（MIC) 和最低殺菌濃度（MBC)測定：從保存的金黃色葡萄球菌瓊脂板菌株中挑取單菌落，并將菌 落接種于Muller-Hinton肉湯（MHB)培養基中，于37 °C震蕩過夜培養。將菌液濃度用MHB 培養基調整到OD6cJ直為0. 4 (相當于5 X 10 8 CFU/ml )，并進一步稀釋到I X IO6 CFU/ml。用 MHB培養基稀釋茶樹油藥液，使藥液終濃度為256 mg/ml。在無菌96孔微量滴定板的每排第 一孔中加入200 μ?終濃度為256 mg/ml的藥液，在第2孔到第10孔中加入100 μ? MHB培 養基。在執行每排的操作中，用移液器從每排的第一孔中移出100 μ?濃度為256 mg/ml的 藥液加入到各自排的第2孔中進行稀釋混勻，然后再從第2孔吸出100 μ?濃度為128 mg/ ml的溶液加入到第3個孔中，以此類推，直到每排的第10孔，每稀釋混勻一孔換一次槍頭。 在每排第11孔中加入200 μ? MHB培養基作為陰性對照，在每排第12孔中加入100 μ? MHB 培養基和100 μ?稀釋好的菌液作為正常生長對照孔。再在每排第一到第10孔中每孔加入 100 μ?調好的稀釋菌液。這樣每排第一孔到第10孔中藥液濃度分別為：128 mg/ml，64 mg/ml, 32 mg/ml, 16 mg/ml, 8 mg/ml, 4 mg/ml, 2 mg/ml, I mg/ml, 0. 5mg/ml, 0. 25 mg/ml，各孔中DMSO含量均小于I %。將96孔微量滴定板放置在37 °C溫箱內孵育24 h。 通過酶標儀（λ =660 nm)測定其OD值，檢測細菌的生長情況。MIC是能抑制細菌生長的最 低藥物濃度。實驗重復三次，計算MIC。從第一孔到MIC孔中吸取10 μ?液體接種于MHA平 板上，37 °C溫箱中孵育24 h。觀察結果，接種平板中未見菌體生長的最低藥物濃度為MBC。 茶樹油對金黃色葡萄球菌懸浮菌(見表1)
【主權項】
1. 茶樹油抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的用途。
2. -種食品防腐劑，它包括：茶樹油和抗金黃色葡萄球菌素。
3. -種食品防腐劑的使用方法，其特征在于：茶樹油添加量為添加量為每克食品中添 加 0·25-32 mL。
4. 根據權利要求3所述的一種食品防腐劑的使用方法，其特征在于：所述的茶樹油添 加量為每克食品中添加0. 25-3mL。
5. 根據權利要求4所述的一種食品防腐劑的使用方法，其特征在于：所述的茶樹茶樹 油的添加量為添加量為每克食品中添加0. 25-0. 5mL。
【專利摘要】本發明公開了茶樹油抑制金黃色葡萄球菌外毒素分泌的新用途，茶樹油具有廣譜的抗菌、抗真菌能力和抗氧化能力，茶樹油對金黃色葡萄球菌最低抑菌濃度在8-32mL/L，該濃度茶樹油的存在可能改變了某些食品的口味和口感。我們在溶血實驗中發現，在0.125？-0.5mL/L時，抑制了金黃色葡萄球菌外毒素的分泌。茶樹油與其它抗金黃色葡萄球菌素配合做為食品防腐劑，在不能有效抑制耐藥金黃色葡萄球菌菌株生長時，可有效地抑制金黃色葡萄球菌外毒素的分泌。防止金黃色葡萄球菌外毒素中毒。為預防外毒素中毒，多一個安全保障。同時也為在食品調制中，使用茶樹油提供了更廣闊的空間。
【IPC分類】A23L3-3481
【公開號】CN104544469
【申請號】CN201510025162
【發明人】郭娜, 史冊, 趙梓雯, 于錄, 孟日增, 趙星晨, 劉宗慧, 李曉旭, 朱宣直
【申請人】吉林大學
【公開日】2015年4月29日
【申請日】2015年1月19日