一種巧克力及其制備方法與應用
【專利摘要】本發明涉及保健食品領域，尤其涉及一種巧克力及其制備方法與應用。本發明將動物內臟提取物添加入巧克力中，以可可粉和香料的濃郁香氣掩蓋動物內臟提取物的不良氣味，提高了所得產品的適口性。實驗表明，本發明提供的巧克力能夠提高T細胞活性，故而，其能夠提高人體免疫力。
【專利說明】
一種巧克力及其制備方法與應用
技術領域
[0001] 本發明涉及保健食品領域，尤其涉及一種巧克力及其制備方法與應用。
【背景技術】
[0002] 免疫力是人體自身的防御機制，是人體識別和消滅外來侵入的任何異物(病毒、細 菌等），處理衰老、損傷、死亡、變性的自身細胞，以及識別和處理體內突變細胞和病毒感染 細胞的能力。免疫力可分為非特異性免疫和特異性免疫：1、先天性免疫，是人一生下來就有 的；2、獲得性免疫，是人生下來以后在生活過程中自然獲得的，或者用人工輔助的方法被動 得到。
[0003] 機體免疫系統的一些特殊細胞能將入侵體內的細菌、病毒和體內已衰老死亡的細 胞、已突變的細胞以及引起變態反應的物質，統統地加以吞噬和消滅，從而維持體內環境的 穩定，保持機體健康。但機體免疫功能在30歲左右就開始減遲，這種變化是悄然、緩慢、持續 地進行。當人體免疫功能失調，或者免疫系統不健全時，免疫系統不能正常發揮保護作用。 在此情況下，極易招致細菌、病毒、真菌等感染，因此免疫力低下最直接的表現就是容易生 病。經常患病，加重了機體的消耗，所以一般有體質虛弱、營養不良、精神萎靡、疲乏無力、食 欲降低、睡眠障礙等表現;此外，需要很長時間才能病愈，而且常常反復發作。長此以往會導 致身體和智力發育不良，還易誘發重大疾病。導致上述現象發生的深層原因是免疫力低下 或免疫力不健全。
[0004] 現代社會，環境問題越來越突出，人們工作壓力大、缺乏鍛煉，進而導致人的免疫 力越來越差，提高免疫力稱為現代人關心的熱門話題，大量的具有提高免疫力功能的保健 品應運而生。但是，這些保健品通常存在著口感差、氣味不佳的缺陷，往往使人不愿服用。
[0005] 巧克力是以可可粉為主要原料制成的一種甜食。它不但口感細膩甜美，而且還具 有一股濃郁的香氣，是深受消費者喜愛的食品之一。巧克力含有蛋白質、Ca、P、Mg、Fe、Zn、 Cu、Vb等人體所需元素，因此具有很高的營養價值。并且含有豐富的多元苯酚復合物，還可 降低膽固醇。巧克力含有可可堿，能刺激大腦皮層，幫助人們提高記憶力。含有的蛋白質和 礦物質，幫助加強牙齒健康。有潤澤皮膚作用。起到化妝品的功效，有保濕劑、再生劑、光滑 作用和滋養作用。此外，可可和巧克力產品具有高濃度的類黃酮，在體內和體外有潛在的抗 氧化作用。
[0006] 將具有保健功能的活性物質添加入巧克力的配方中，制備成具有保健功能的巧克 力具有良好的市場前景。
【發明內容】
[0007] 有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供一種巧克力及其制備方法與應用， 本發明提供的巧克力配方合理，具有提高免疫力的功能，且巧克力香味濃郁、甜而不膩。
[0008] 本發明提供的巧克力中包括可可脂、可可粉、甜味劑、香料和動物內臟提取物。
[0009] 在本發明的實施例中，動物內臟提取物為脾臟提取物和/或肝臟提取物。
[0010]動物脾臟提取物為從健康豬脾臟中提取的多肽、氨基酸和多核苷酸等。脾臟提取 物具有傳遞特異性細胞免疫的作用，還能非特異地增強一般細胞免疫作用。脾臟提取物的 作用發生迅速，維持時間也較長，可達數月至一年以上。由于脾臟提取物是小分子成分，無 抗原性，長期應用機體也不產生抗體。近年來研究證明，脾臟提取物作用無種屬特異性，生 化指標、生物活性及臨床效果均與人脾臟提取物相似，且無毒，不引起過敏反應。并且，研究 表明，脾臟提取物對中性粒細胞和巨噬細胞具有較強的趨化活性、且能夠促進胸腺細胞分 化和調節淋巴細胞mRNA的合成、促進體液免疫，促進B細胞活化，增加抗體滴度。本發明中， 脾臟提取物中含有轉移因子。本發明對脾臟提取物的制備方法不作限定，凡采用脾臟提取 物制備巧克力皆在本申請的保護范圍之內。本發明中，所述脾臟提取物參照專利號為 ZL201110298591.1，發明名稱為"動物用轉移因子可溶性粉制備方法"的專利制備，其生產 廠家為杭州華締集團生物科技有限公司。
[0011]動物肝臟提取物為從乳豬新鮮肝臟中提取的小分子多肽類活性物質，能刺激正常 肝細胞DNA合成，促進肝細胞再生，能降低ALT，促進肝臟病變細胞的恢復。現臨床上用于治 療肝炎病人以促進肝細胞生長的肝細胞生長因子大多是從動物肝臟中提取。其可刺激血管 內皮細胞的迀移和增殖，形成新生血管，促進局部血液循環而加速創面愈合，刺激皮膚角質 細胞運動和增殖，加速創面的再表皮化，促進毛囊的形成。研究表明，動物肝臟提取物能夠 刺激肝細胞DNA的合成、減少膠原纖維形成和纖維組織增生，發揮抗纖維化作用，對肝細胞 膜具有保護作用。本發明中，肝臟提取物中含有促肝細胞生長素。本發明對肝臟提取物的制 備方法不作限定，凡采用肝臟提取物制備巧克力皆在本申請的保護范圍之內。本發明中，所 述肝臟提取物參照專利號為ZL2004 1 0075012.7,發明名稱為"促肝細胞生長素腸溶膠囊 制備工藝"的專利制備，其生產廠家為杭州華締集團生物科技有限公司。
[0012] 本發明將動物內臟提取物添加入巧克力中，以可可粉和香料的濃郁香氣掩蓋動物 內臟提取物的不良氣味，提高了所得產品的適口性。并且，其制得的巧克力能夠具有良好的 外形和光澤度，軟硬適中，口感順滑不黏膩，具有香草的獨特芳香。且富含各種營養成分，不 僅具有抗氧化作用，還能提高人體免疫力。
[0013] 本發明的實施例中，動物內臟提取物的質量分數為1 %~3%。
[0014] 本發明的實施例中，可可脂、可可粉、甜味劑、香料和動物內臟提取物的質量比為 (30~40):(15~30):(10~26):(15~20):(1~3)。
[0015]本發明中，甜味劑選自蔗糖或蜂蜜。
[0016] 一些實施例中，甜味劑為蜂蜜。
[0017] 一些實施例中，香料為香草香精。
[0018] 甜味劑和香料皆不采用人工添加劑，從而避免人工添加劑對人體造成的不良影 響。
[0019] -些實施例中，動物內臟提取物為脾臟提取物，其質量分數為3%。
[0020] 在此實施例中，可可脂、可可粉、甜味劑、香料和動物內臟提取物的質量比為40: 27:10:20:3。
[0021] 此實施例中，甜味劑為蜂蜜，香料為香草精。
[0022] -些實施例中，動物內臟提取物為肝臟提取物，質量分數為2%。
[0023]在此實施例中，可可脂、可可粉、甜味劑、香料和動物內臟提取物的質量比為35: 25:23:15:2。
[0024] 此實施例中，甜味劑為蜂蜜，香料為香草精。
[0025] -些實施例中，動物內臟提取物為脾臟提取物，質量分數為1 %。
[0026]在此實施例中，可可脂、可可粉、甜味劑、香料和動物內臟提取物的質量比為30: 22:25:20:1〇
[0027] 此實施例中，甜味劑為蜂蜜，香料為香草精。
[0028] -些實施例中，動物內臟提取物為肝臟提取物，質量分數為2%。
[0029]在此實施例中，可可脂、可可粉、甜味劑、香料和動物內臟提取物的質量比為40: 15:26:17:2。
[0030]此實施例中，甜味劑為蔗糖，香料為香草精。
[0031 ] -些實施例中，動物內臟提取物為脾臟提取物，質量分數為3%。
[0032]在此實施例中，可可脂、可可粉、甜味劑、香料和動物內臟提取物的質量比為35: 30:18:15:2。
[0033] 此實施例中，甜味劑為蔗糖，香料為香草精。
[0034] 本發明提供的巧克力配方合理，各組分能夠協調的配合，從而使產品的氣味清香 濃郁，口感舒適，甜而不膩。
[0035]本發明所述巧克力的制備方法，包括：
[0036]步驟1:將可可脂、甜味劑、香料于50°C~60°C混合，制得A成分；
[0037]步驟2:將可可粉與動物內臟提取混合，制得B成分；
[0038] 步驟3:將A成分與B成分混合后，冷卻至25 °C~35 °C后，0 °C以下放置2h~4h，制得 巧克力。
[0039]在一些實施例中，步驟1中混合的溫度為55°C。
[0040] 步驟3中冷卻至溫度為30°C。
[00411 步驟3中放置的溫度為0~-20°C，放置4h。
[OO42 ]本發明提供的巧克力在制備提尚T細胞活性的廣品中的應用。
[0043 ]本發明提供的巧克力中含有豐富的蛋白質和多肽，其對T細胞的活性具有良好的 促進作用。實驗表明，本發明提供的含有脾臟提取物的巧克力能夠T細胞的的活性提高至 15%以上，相對于空白組2.3%具有顯著的差異(p〈0.01KT細胞是人體的免疫細胞之一，本 發明提供的巧克力能夠提高其活性，證明本發明提供的巧克力能夠具有提高免疫力的作 用。
[0044]本發明提供的巧克力在制備保健品中的應用；所述保健品為提高免疫力的保健 品。
[0045] 本發明還提供了一種保健品其中包括本發明提供的巧克力。
[0046] 本發明將動物內臟提取物添加入巧克力中，以可可粉和香料的濃郁香氣掩蓋動物 內臟提取物的不良氣味，提高了所得產品的適口性。實驗表明，本發明提供的巧克力能夠提 高T細胞活性，故而，其能夠提高人體免疫力。
【具體實施方式】
[0047] 本發明提供了一種巧克力及其制備方法與應用，本領域技術人員可以借鑒本文內 容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員 來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的方法及應用已經通過較佳實施 例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本
【發明內容】
、精神和范圍內對本文的方法和應用 進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。
[0048] 本發明采用的儀器皆為普通市售品，皆可于市場購得。
[0049] 下面結合實施例，進一步闡述本發明：
[0050] 實施例1
[00511 在金屬或玻璃碗中加入可可脂40g、蜂蜜IOg和香草精20g，加熱至55°C左右，混合 均勻。在27g可可粉中加入3g的動物脾臟提取物，混合均勻，用面粉篩除去所有塊狀物。一邊 攪拌，一邊緩慢加入可可粉至融化的可可脂、蜂蜜和香草精混合物中。當可可粉充分混勻， 停止加熱，不斷攪拌混合物直到產品冷卻至約30°C左右。把液體倒入需要的模具，在冰箱 中-20°C冷凍放置2小時。
[0052] 實施例2
[0053] 在金屬或玻璃碗中加入可可脂35g、蜂蜜23g和香草精15g，加熱至55°C左右，混合 均勻。在25g可可粉中加入2g的動物肝臟提取物，混合均勻，用面粉篩除去所有塊狀物。一邊 攪拌，一邊緩慢加入可可粉至融化的可可脂、蜂蜜和香草精混合物中。當可可粉充分混勻， 停止加熱，不斷攪拌混合物直到產品冷卻至約30°C左右。把液體倒入需要的模具，在冰箱 中-20°C冷凍放置4小時。
[0054] 實施例3
[0055] 在金屬或玻璃碗中加入可可脂30g、蜂蜜27g和香草精20g，加熱至55°C左右，混合 均勻。在22g可可粉中加入Ig的動物脾臟提取物，混合均勻，用面粉篩除去所有塊狀物。一邊 攪拌，一邊緩慢加入可可粉至融化的可可脂、蜂蜜和香草精混合物中。當可可粉充分混勻， 停止加熱，不斷攪拌混合物直到產品冷卻至約30°C左右。把液體倒入需要的模具，在冰箱 中-20°C冷凍放置4小時。
[0056] 實施例4
[0057] 在金屬或玻璃碗中加入可可脂40g、蜂蜜26g和香草精17g，加熱至50°C左右，混合 均勻。在15g可可粉中加入2g肝臟提取物溶液，混合均勻，用面粉篩除去所有塊狀物。一邊攪 拌，一邊緩慢加入可可粉至融化的可可脂、蜂蜜和香草精混合物中。當可可粉充分混勻，停 止加熱，不斷攪拌混合物直到產品冷卻至約35°C左右。把液體倒入需要的模具，在冰箱中-25°C冷凍放置2小時。
[0058] 實施例5
[0059] 在金屬或玻璃碗中加入可可脂35g、蜂蜜18g和香草精15g，加熱至60°C左右，混合 均勻。在30g可可粉中加入2g的動物脾臟提取物，混合均勻，用面粉篩除去所有塊狀物。一邊 攪拌，一邊緩慢加入可可粉至融化的可可脂、蜂蜜和香草精混合物中。當可可粉充分混勻， 停止加熱，不斷攪拌混合物直到產品冷卻至約25°C左右。把液體倒入需要的模具，在冰箱 中-15°C冷凍放置4小時。
[0060] 實施例6
[00611對實施例1~5制備的巧克力進行口味評價試驗
[0062]取實施例1~5制得的巧克力，由10名評審員進行官能評價，然后算出平均得分。評 分標準:優4.1-5分，良好3.1-4分，中等2.1-3分，較差1.1-2,差0-1分。評分見表1。
[0063] 對比1:按照實施例2的方法，但是不添加蜂蜜。
[0064] 對比2:按照實施例2的方法，用氫化植物油代替可可脂。
[0065] 表1巧克力評分
[0067] 實施例7
[0068]對實施例1~5制備的巧克力的營養成分進行檢測，檢測采用HPLC法，結果如表2: [0069]表2營養成分檢測結果
[0071] 實施例8
[0072]對實施例1~5制備的巧克力采用脫E受體法測定T細胞活力：
[0073]本法系根據轉移因子可使脫E受體后的胸腺T細胞恢復其E受體功能，從而反映轉 移因子的生物活性。
[0074] 試劑（I )Hank ' s液取0.3 %磷酸二氫鉀溶液，0.76 %磷酸氫二鈉溶液，2 %氯化鉀溶 液及20 %氯化鈉溶液依次按20 : 20 : 20 :40比例混合，加葡萄糖Ig，溶解混勻，用水稀釋至 1000 ml，并用4%碳酸氫鈉溶液調節pH值至7.2~7.3(臨用時配制）。
[0075] (2)阿氏液取氯化鈉0 · 420g，枸緣酸0 ·055g，枸緣酸鈉0 · 766g，葡萄糖2 · 05g，加水 溶解并稀釋至100mL，滅菌。
[0076] (3)分離液為淋巴細胞分離液。
[0077] (4)羊血取綿羊靜脈血5ml，加入5ml阿氏液中，冰箱保存。
[0078] (5)固定液取25 %戊二醛溶液，3.5 %碳酸氫鈉溶液及Hank ' s液依次按1:1:38比例 混合。
[0079] (6)姬姆薩染色液原液取姬姆薩染料0.5g，加甘油33ml，55~60°C加熱至姬姆薩染 料溶解，冷至室溫，加入33ml甲醇，室溫放置24小時后，用濾紙過濾，濾液即為原液，密封室 溫保存。
[0080] (7)染色液取姬姆薩染色液原液2ml，加 Hank' S液6ml，搖勻，以每分鐘1500轉離心 10分鐘，取上清液待用。
[0081 ]操作法（1)脫E受體胸腺T細胞懸液的制備取新鮮豬胸腺，去脂肪并剪碎，加適量 Hank ' s液使成細胞懸液，經100目篩過濾，每分鐘1500轉離心3~5分鐘，棄去上清液，加入少 量Hank's液打勻，將此溶液加入已加有1/3濾液量的分離液的離心管中，以每分鐘2000轉離 心20分鐘，小心吸出中間層的胸腺細胞，放入另一離心管中，加適量Hank's液洗滌，搖勻，以 每分鐘1500轉離心3~5分鐘，棄去上清液，洗滌一次后，在沉淀物中加入適量Hank ' s液，混 勾，45 旦溫水浴保溫30分鐘(每隔5分鐘振搖一次）。以每分鐘1500轉離心3~5分鐘，棄去 上清液，再加入適量Hank's液，混勻后，置45°C恒溫水浴保溫30分鐘，取出后以每分鐘1500 轉離心3~5分鐘，棄去上清液。用Hank ' s液洗滌三次(操作同前），最后用Hank ' s液適當稀釋 并計數，使最終濃度為每1ml中（3 X 106)~(5 X 106)個細胞。
[0082] (2)綿羊紅血球懸液的制備取適量羊血，用適量Hank' s液洗三次（同前）。棄去上清 液，加適量Hank's液稀釋并計數，使最終濃度為脫E受體胸腺T細胞懸液濃度的8~10倍。 [0083] (3)供試品溶液的制備取實施例1~4和對比例1~2制備的巧克力，融化后用Hank' s液配制成每1ml中含Img的溶液。
[0084] (4)測定取小試管6支，其中3支各加 Hank' S液0.1 ml作空白對照管，另3支各加供試 品（實施例1~4和對比例1~2制備的巧克力)溶液0.1 ml作測定管，每管中各加脫E受體胸腺 T細胞懸液0.2ml，37°C保溫1小時后，加入綿羊紅血球懸液0.2ml，搖勻，以每分鐘500轉離心 3分鐘，放入4°C冰箱過夜，次日取出，棄去上清液，每管中各加入固定液一滴，輕輕搖勻，靜 置10分鐘，加入染色液2滴并搖勻，靜置15分鐘后開始計數，顯微鏡視野中淡藍色的較大的 細胞為淋巴細胞，共數計數板16個大方格上所有淋巴細胞的個數(不少于200個），統計其中 的E玫瑰花結形成的細胞數(結合3個以上綿羊紅細胞的淋巴細胞），求得結花百分率，取平 均值。即為供試品管或對照管的平均值。
[0085]樣品活力=供試品管E玫瑰花結百分率一對照管E玫瑰花結百分率 [0086] 結果如表3:
[0087] 表3:細胞活性
[0089] 注，表3對比1為采用脾臟提取物進行試驗，添加量為lmg/mL;
[0090] 對比2采用肝臟提取物進行試驗，添加量為lmg/mL。
[0091] *示與空白組相比，具有顯著性差異，p〈0.01;
[0092] #示與對比1相比，具有顯著性差異，p〈0.05;
[0093] @示與對比2相比，具有顯著性差異，p〈0.05。
[0094] 結果表明，實施例1~5提供的巧克力能夠顯著提高T細胞的細胞活性(p〈0.05)。
[0095] 以上僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來 說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為 本發明的保護范圍。
【主權項】
1. 一種巧克力，其特征在于，包括:可可脂、可可粉、甜味劑、香料和動物內臟提取物。2. 根據權利要求1所述的巧克力，其特征在于，所述動物內臟提取物為脾臟提取物和/ 或肝臟提取物。3. 根據權利要求1所述的巧克力，其特征在于，所述脾臟提取物中含有轉移因子;所述 肝臟提取物中含有促肝細胞生長素。4. 根據權利要求1所述的巧克力，其特征在于，所述動物內臟提取物的質量分數為1% ~3% 〇5. 根據權利要求1所述的巧克力，其特征在于，所述可可脂、可可粉、甜味劑、香料和動 物內臟提取物的質量比為(30~40): (15~30): (10~26): (15~20):(1~3)。6. 根據權利要求1所述的巧克力，其特征在于，所述甜味劑選自蔗糖或蜂蜜;所述香料 為香草香精。7. 權利要求1~6任一項所述的巧克力的制備方法，其特征在于，包括： 步驟1:將可可脂、甜味劑、香料于50°C~60°C混合，制得A成分； 步驟2:將可可粉與動物內臟提取混合，制得B成分； 步驟3:將所述A成分與所述B成分混合后，冷卻至25 °C~35°C后，0 °C以下放置2h~4h， 制得巧克力。8. 權利要求1~6任一項所述的巧克力在制備提高T細胞細胞活性的產品中的應用。9. 權利要求1~6任一項所述的巧克力在制備保健品中的應用;所述保健品為提高免疫 力的保健品。10. -種保健品，其特征在于，包括權利要求1~6任一項所述的巧克力。
【文檔編號】A23G1/48GK105961767SQ201610542275
【公開日】2016年9月28日
【申請日】2016年7月7日
【發明人】周天瓊, 羅伯特, 高留根, 戴彬彬, 何濱霞
【申請人】杭州華締集團生物科技有限公司