專利名稱：一種藥物的新用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及一種藥物新用途，具體涉及牛蒡子苷在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。
背景技術：
牛蒡子苷是從中藥牛蒡子中提取的有效成分，具有抗癌作用和抗糖尿病的作用，但牛蒡子苷在制備治療或預防急慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥理作用未見報道，本發明人通過大量的實驗研究，發現了牛蒡子苷在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。
發明內容
本發明提供了牛蒡子苷在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。
本發明提供的牛蒡子苷純度大于等于90％小于100％。
本發明提供了以牛蒡子苷為活性成分的藥物組合物在制備治療或預防慢性腎衰竭和腎纖維化的藥物中的應用。
本發明提供的藥物組合物在用于治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化時，注射時使用劑量范圍是30mg～1000mg，優選30～500mg；口服時使用劑量范圍是200mg～2000mg，優選200～1000mg。
本發明提供的藥物組合物可以根據制劑需要，加入相應輔料，以凍干粉針、注射液、片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、糖漿、軟膠囊等形式存在，優選為凍干粉針、軟膠囊及片劑。本發明提供的各種劑型均可以采用藥學常規方法制備而成。
本發明人進行了下列試驗來證實牛蒡子苷治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。(下面的實施例用來更詳細的說明本發明，但并不意味著本發明僅限于此)。
具體實施實例制備例1 牛蒡子苷片劑的制備處方牛蒡子苷 50.0g糖粉 85.0g乳糖 40.0g羧甲基淀粉鈉 23.0g3％PVPK30水溶液 適量硬脂酸鎂 2.0
共制成 1000粒操作稱取處方量的牛蒡子苷、糖粉、乳糖和羧甲基淀粉鈉充分混合均勻后過100目篩，加入3％PVPK30水溶液適量制軟材，20目篩制粒，60℃干燥3小時，18目篩整粒，加入處方量的硬脂酸鎂，混合均勻后壓片，每片約200mg，即得。
制備例2牛蒡子苷軟膠囊的制備處方牛蒡子苷 20.0g藥用豆油 200mL
共制成1000粒操作稱取處方量的牛蒡子苷加藥用豆油充分混合均勻后制軟膠囊，每粒約200mg，即得。制備例3牛蒡子苷凍干粉針制備取牛蒡子苷50.0g，加注射用水5000ml使其溶解，加甘露醇8g，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，灌入10ml西林瓶中，5ml/只，按凍干粉針工藝凍干，制成每支含牛蒡子苷50.0mg的凍干粉針。
制備例4牛蒡子苷注射液制備取牛蒡子苷10.0g，加注射用水20000ml，攪拌溶解，超濾，得到無熱源的澄清液，灌入125ml輸液瓶中，100ml/瓶，制成每瓶含牛蒡子苷50.0mg的注射液。
試驗例1牛蒡子苷對腺嘌呤導致大鼠慢性腎衰及腎纖維化的影響1.1材料實驗動物 普通級Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開發公司實驗動物中心提供，合格號SYXK(魯)20030020。
藥物 牛蒡子苷，山東綠葉天然藥物研究開發公司制備，含量99％，批號040318；腺嘌呤，常州華通化工公司，批號040611；甲強龍，比利時法瑪西亞普強公司，批號040706；肌酐和尿素氮試劑盒，北京中生科技公司，批號050606；羥脯氨酸試劑盒，南京建成生物公司，批號050906。
1.2試驗方法與結果大鼠130只，體重150-200g，動物喂養1周，將動物分為13組，即正常組，模型組、甲強龍組(12mg/kg)組，牛蒡子苷靜脈注射小劑量(1mg/kg)組，牛蒡子苷靜脈注射中劑量(3mg/kg)組，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(10mg/kg)組1，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(50mg/kg)組2，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(100mg/kg)組3，牛蒡子苷灌胃小劑量(10mg/kg)組，牛蒡子苷灌胃中劑量(20mg/kg)組，牛蒡子苷灌胃大劑量(50mg/kg)組1，牛蒡子苷灌胃大劑量(100mg/kg)組2，牛蒡子苷灌胃大劑量(200mg/kg)組3，除正常組外，每只大鼠ip腺嘌呤150mg/kg，連續給予4天，7天后，大鼠眼框取血，血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸，觀察造模情況，從第8天開始給藥，連續給藥14天，從眼眶取血，測定血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸，處死作病理切片，觀察腎功能的病理改變。
從表1結果可以看出，牛蒡子苷靜脈注射中劑量(3mg/kg)組、牛蒡子苷灌胃中劑量(20mg/kg)組降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮、羥脯氨酸(與模型組比較，p＜0.05)；甲強龍(10mg/kg)組，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(10mg/kg)組1，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(50mg/kg)組2，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(100mg/kg)組3，牛蒡子苷灌胃大劑量(50mg/kg)組1，牛蒡子苷灌胃大劑量(100mg/kg)組2，牛蒡子苷灌胃大劑量(200mg/kg)組3，明顯降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮、羥脯氨酸(與模型組比較，p＜0.01)；牛蒡子苷灌胃大劑量(100mg/kg)組2降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮、羥脯氨酸與牛蒡子苷灌胃大劑量(200mg/kg)組3比較，無顯著性差異；牛蒡子苷靜脈注射大劑量(50mg/kg)組2降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮、羥脯氨酸與牛蒡子苷靜脈注射大劑量(100mg/kg)組3比較，無顯著性差異。
病理檢查正常對照組腎組織結構正常，模型組有明顯腎組織結晶沉淀物，腎小管破壞，萎縮，管腔變小，其中可見淋巴細胞浸潤及局部纖維組織增生，腎小球腫大，腎小球上皮細胞出現空泡變性，內皮細胞下出現大量疏松物質，基底膜增厚，定量分析腎小管面積與腎小球體積，模型組與正常對照組比較有顯著性差異。牛蒡子苷各組各劑量組隨劑量增加損傷程度明顯減輕，但仍未恢復至正常水平。
表1牛蒡子苷對大鼠慢性腎衰血清肌酐、尿素氮、羥脯氨酸的影響(n＝10)
*，p＜0.05，**，p＜0.01，與模型組比較試驗2牛蒡子苷對腎切除導致大鼠慢性腎衰的影響2.1材料實驗動物 普通級Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開發公司實驗動物中心提供，合格號SYXK(魯)20030020。
藥物 牛蒡子苷，山東綠葉天然藥物研究開發公司制備，含量99％，批號040318；甲強龍，比利時法瑪西亞普強公司，批號040706；肌酐和尿素氮試劑盒，北京中生科技公司，批號050606；羥脯氨酸試劑盒，南京建成生物公司，批號050906。
2.2試驗方法與結果大鼠195只，體重150-200g，動物喂養1周，將動物分為13組，即正常組，模型組、甲強龍組(12mg/kg)組，牛蒡子苷靜脈注射小劑量(1mg/kg)組，牛蒡子苷靜脈注射中劑量(3mg/kg)組，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(10mg/kg)組1，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(50mg/kg)組2，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(100mg/kg)組3，牛蒡子苷灌胃小劑量(10mg/kg)組，牛蒡子苷灌胃中劑量(20mg/kg)組，牛蒡子苷灌胃大劑量(50mg/kg)組1，牛蒡子苷灌胃大劑量(100mg/kg)組2，牛蒡子苷灌胃大劑量(200mg/kg)組3，除正常組外，大鼠用5/6腎切除方法制成慢性腎衰模型，第一次手術切除左腎2/3，一周后行第二次手術切除右腎，第二次手術后一周開始給藥，給藥方式為灌胃給藥或腹腔注射給藥，給藥后4周、8周分別大鼠眼框取血，測定血清肌酐和尿素氮，給藥后4周處死5只，試驗結束處死10只，作病理切片，觀察腎功能的病理改變。
從表2、表3結果可以看出，牛蒡子苷靜脈注射中劑量(3mg/kg)組、牛蒡子苷灌胃中劑量(20mg/kg)組降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮(與模型組比較，p＜0.05)；甲強龍(12mg/kg)組，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(10mg/kg)組1，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(50mg/kg組2，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(100mg/kg)組3，牛蒡子苷灌胃大劑量(50mg/kg)組1，牛蒡子苷灌胃大劑量(100mg/kg)組2，牛蒡子苷灌胃大劑量(200mg/kg)組3，明顯降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮(與模型組比較，p＜0.01)；牛蒡子苷灌胃大劑量(100mg/kg)組2降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮與牛蒡子苷灌胃大劑量(200mg/kg)組3比較，無顯著性差異；牛蒡子苷靜脈注射大劑量(50mg/kg)組2降低大鼠慢性腎衰血清肌酐和尿素氮與牛蒡子苷靜脈注射大劑量(100mg/kg)組3比較，無顯著性差異。
病理改變給藥第4周模型組光鏡下見腎小球有不同程度代償性肥大，系膜細胞增生，系膜基質增多，腎小球毛細血管襻呈分葉狀，部分腎小球囊腔消失，毛細血管管壁增厚，腎小管腫脹、擴張，管腔內有蛋白沉積，部分小管萎縮，間質有炎性細胞浸潤，各給藥組亦見上述改變，但病變程度較輕，隨劑量增大，病變程度減輕；給藥第8周模型組光鏡下見系膜細胞增生，基質明顯增多，毛細血管管壁塌陷，毛細血管節段性硬化，硬化區多在血管壁附近硬化的腎小球內可見均質圓形PAS染色深紅色的沉積物，個別腎小球有局灶球囊粘連，局灶新月體形成，間質可見炎細胞浸潤，纖維組織增生，各組腎小球硬化程度不等，隨劑量增大，病變程度減輕。
表2牛蒡子苷對大鼠腎切除慢性腎衰給藥4周血清肌酐和尿素氮的影響(n＝5)
*，p＜0.05，**，p＜0.01，與模型組比較表3牛蒡子苷對大鼠腎切除慢性腎衰給藥8周血清肌酐和尿素氮的影響
*，p＜0.05，**，p＜0.01，與模型組比較試驗3牛蒡子苷對單側輸尿管結扎大鼠腎間質纖維化的影響3.1材料實驗動物 普通級Wistar大鼠，雄性，體重150-200g，SD大鼠，山東綠葉天然藥物研究開發公司實驗動物中心提供，合格號SYXK(魯)20030020。
藥物 牛蒡子苷，山東綠葉天然藥物研究開發公司制備，含量99％，批號040318；苯那普利，北京諾華制藥有限公司生產，批號040306；羥脯氨酸試劑盒，南京建成生物公司，批號050906。
3.2試驗方法與結果大鼠130只，體重150-200g，動物喂養1周，各大鼠以10％水合氯醛3.0mL/kg腹腔注射麻醉后，將大鼠右側臥位固定于手術臺上，剪毛后用碘酒、75％酒精消毒手術區，行左側腹切口，逐層切開皮膚、肌肉及腹壁各層，暴露并分離左側輸尿管，假手術組僅切開腹腔并游離左側輸尿管，但不結扎和剪斷，其他各組大鼠用4-0絲線結扎兩道，上一道結扎點位于左腎下極水平，然后在兩道結扎點間剪斷輸尿管，逐層縫合，將動物分為13組，即假手術組，模型組、苯那普利(10mg/kg)組，牛蒡子苷靜脈注射小劑量(1mg/kg)組，牛蒡子苷靜脈注射中劑量(3mg/kg)組，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(10mg/kg)組1，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(50mg/kg)組2，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(100mg/kg)組3，牛蒡子苷灌胃小劑量(10mg/kg)組，牛蒡子苷灌胃中劑量(20mg/kg)組，牛蒡子苷灌胃大劑量(50mg/kg)組1，牛蒡子苷灌胃大劑量(100mg/kg)組2，牛蒡子苷灌胃大劑量(200mg/kg)組3，術后各組開始給藥，21天后10％水合氯醛麻醉后處死各組動物，生理鹽水反復灌洗后留取左側腎臟，腎組織經4％的多聚甲醛緩沖液固定。切取適量腎組織，按羥脯氨酸試劑盒測定說明測定羥脯氨酸。
從表4結果可以看出，牛蒡子苷靜脈注射中劑量(3mg/kg)組、牛蒡子苷灌胃中劑量(20mg/kg)組降低單側輸尿管結扎大鼠腎羥脯氨酸含量(與模型組比較，p＜0.05)；苯那普利(10mg/kg)組，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(10mg/kg)組1，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(50mg/kg)組2，牛蒡子苷靜脈注射大劑量(100mg/kg)組3，牛蒡子苷灌胃大劑量(50mg/kg)組1，牛蒡子苷灌胃大劑量(100mg/kg)組2，牛蒡子苷灌胃大劑量(200mg/kg)組3，明顯降低單側輸尿管結扎大鼠腎羥脯氨酸含量(與模型組比較，p＜0.01)；牛蒡子苷灌胃大劑量(100mg/kg)組2降低單側輸尿管結扎大鼠腎羥脯氨酸含量與牛蒡子苷灌胃大劑量(200mg/kg)組3比較，無顯著性差異；牛蒡子苷靜脈注射大劑量(50mg/kg)組2降低單側輸尿管結扎大鼠腎羥脯氨酸含量與牛蒡子苷靜脈注射大劑量(100mg/kg)組3比較，無顯著性差異。
常規病理學檢查①肉眼檢查假手術組腎臟顏色鮮紅，表面光滑，包膜光澤，無粘連。其他各組腎臟體積增大，顏色蒼白，表面呈顆粒狀，類似人體大白腎，少數區域腎包膜粘連。②光鏡檢查假手術組腎單位結構清晰，腎小球囊無擴張或縮小，腎小管上皮細胞無明顯變性及壞死，管腔內無脫落上皮細胞或管型，間質中無血管擴張或炎細胞浸潤。模型對照組大片腎小管壞死，腎間質纖維細胞增生，腎小管擴張，內有大量棕黃色折光物質或壞死脫落的上皮細胞，腎小球數目減少，部分腎小球纖維化并與包曼氏囊壁粘連，囊腔消失。給藥各組病變與模型對照組類似，但均有不同程度的形態學改善，尤以牛蒡子苷灌胃大劑量和牛蒡子苷靜脈注射大劑量各組顯著，與模型對照組比較有明顯差異。
表4牛蒡子苷對單側輸尿管結扎大鼠腎羥脯氨酸含量的影響
*，p＜0.05，**，p＜0.01，與模型組比較
權利要求
1.牛蒡子苷在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。
2.以牛蒡子苷為活性成分的藥物組合物在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。
3.根據權利要求2所述的應用，藥物組合物可以以凍干粉針、注射液、片劑、丸劑、顆粒劑、膠囊、糖漿或軟膠囊的形式存在。
4.根據權利要求3所述的應用，藥物組合物優選為凍干粉針、片劑、軟膠囊。
5.根據權利要求2-4任一所述的應用，使用劑量范圍注射時為30mg～1000mg，口服時為200～2000mg。
6.根據權利要求5所述的應用，使用劑量范圍優選注射時為30～500mg，口服時為200mg～1000mg。
全文摘要
本發明提供了牛蒡子苷的新用途，具體提供了牛蒡子苷在制備治療或預防慢性腎功能衰竭及腎纖維化的藥物中的應用。
文檔編號A61K36/634GK101081226SQ20061004452
公開日2007年12月5日 申請日期2006年5月31日 優先權日2006年5月31日
發明者蔣王林, 曲桂武, 侯健, 張太平, 吳海霞, 田京偉 申請人:山東綠葉天然藥物研究開發有限公司