專利名稱：：免疫調節的藥物組合物及其制備方法
技術領域：
：本發明涉及一種由含有從植物Cleomeviscose的種子中分離出的式1、2和3的三種香豆素并木脂素(coumarinolignoid)的組合的餾分組成的新的藥物組合物，用作免疫調節劑。更特別地，本發明涉及一種新的藥物組合物，由用作免疫調節劑的式1、2和3的三種香豆素并木脂素以比例范圍10-50:20-60:1-20的組合組成，從植物的種子分離得。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage6</formula>當R是H時，(式1)和(式2)當R是OCH3時，(式3)本發明進一步描述了該化合物調節體液和細胞介導免疫應答的能力。本發明進一步提供了生產用以調節體液和細胞介導免疫應答的新的藥物組合物的方法，所述組合物包含含有最佳比例的三種香豆素并木脂素的餾分。
背景技術：
：應激已經成為人生命當中密不可分的部分，已經報道產生多種疾病狀態(Wolf等人和Solomon等人，1981年)。生理學上的應激已知給生物帶來寬范圍的生物化學和行為的改變。近年來，大量關注集中在應激時發生的免疫變化，并且多種研究已經集中在應激時發生的免疫變化，各種研究已經報道應激情形事實上改變了體液和細胞介導免疫應答(Dantzer和Kelley,1989年)。可以把能夠增加身體耐疾病、應激和其他虛衰過程的分子稱為免疫調節的藥物/免疫調節劑。免疫調節劑據說是刺激免疫缺損、平衡身體功能、使身體系統正常化、促進手術后的恢復、防輻射、抵抗糖的效應、優化應激時的能量、增強精力、防運動病、防感染。67eo邊er/"osa是一年生的草本，其作為雜草在種植時出現以及在印度的東北至北部的雨量充沛的土壤中出現。在從高等植物中分離抗肝毒素和免疫調節劑化合物的篩選程序中，我們已經發現，從C7eo邁e的種子中分離出的式1、2和3三種香豆素并木脂素的組合表現了用于誘導體液和細胞介導免疫應答的顯著的免疫調節活性。香豆素并木脂素是新的一類天然產物，其中木酚素(C^單元)是通過二-惡烷橋連接香豆素部分。先前，我們已經標準化加工方法，其中比例為7:2:1的式1、2和3三種香豆素并木脂素的組合從植物的種子中分離出(印度專利號182638和182637)，其顯示了有效的保肝作用。現在，我們對先前的加工方法進行了改進，開發出改良的加工方法，其中上述香豆素并木脂素的組合是以比例3:5:2獲得，其構成我們目前的美國專利(20040191343)的主題。我們先前分離式1、2和3三種香豆素并木脂素的組合的方法，包括在室溫下用脂肪族的溶劑提取風千粉末狀的種子，用醇在室溫下提取脫脂的原料并濃縮溶劑成殘留物，用適合的吸附劑吸附以上殘留物，用芳香烴和含氯的溶劑提取吸附的物質，從以上餾分中分離出三種香豆素并木脂素的組合。以上方法的缺點包括用含氯的溶劑提取吸附的物質，其不能徹底地提取香豆素并木脂素，并導致較低收率的香豆素并木脂素。而且，以上方法的缺點包括，式l、2和3三種香豆素并木脂素的組合是以比例7:2:1獲得。不同比例的式l、2和3三種香豆素并木脂素的組合的生物學試驗揭示了其中三種香豆素并木脂素的比例是3:5:2其表現出強保肝活性。除了我們先前發現的式1、2和3三種香豆素并木脂素的組合具有保肝活性之外，通過生物測定研究還發現式1、2和3三種香豆素并木脂素的組合也具有顯著的免疫調節劑活性。鑒于該香豆素并木脂素顯示出的有效的免疫調節劑活性，已經對以上化合物進行詳細的藥理學研究，而且效率高的加工技術已經研發用于生產上述的香豆素并木脂素。香豆素并木脂素的基本比例通過HPLC分離和隨后定量。發明目的本發明的主要目的是提供一種從植物"eo邁eW""a分離的作為免疫調節劑的式l、2和3的三種香豆素并木脂素的組合。本發明的另一個目的是提供一種從植物原料中分離式1、2和3的三種香豆素并木脂素的方法。而本發明的另一個目的是提供一種測試從植物的種子分離的化合物在嚙齒動物種類中的免疫調節活性方法。本發明的另一個目的是提供一種從"eo邊er/"ose的種子中提取三種香豆素并木脂素的最佳比例的上述三種香豆素并木脂素的方法。而本發明的另一個目的是開發一種分離以上香豆素并木脂素的綠色工藝，其中不使用毒性化學物質。本發明的另一個目的是開發一種中試工廠規模的大量分離上述三種香豆素并木脂素的加工技術。本發明的另一個目的是開發一種以成本有效方式分離上述香豆素并木脂素的加工技術。本發明的另一個目的是提供一種通過細胞介導和體液免疫應答治療哺乳動物應激的方法。發明概述因此，本發明提供了一種含有從醉蝶花屬的種子中分離的比例范圍10-50:20-60:1-20%(W/W)的的式1、2和3的三種香豆素并木脂素，連同藥學上可接受的栽體的新的藥物組合物，用作引發體液和細胞介導免疫的免疫調節劑。<formula>formulaseeoriginaldocumentpage9</formula>當R是H，(式l)和式2當R是0CH3(式3)在本發明的實施方案中，組合物是用作引發體液和細胞介導免疫性的免疫調節劑。本發明進一步提供了含有從醉蝶花屬的種子中分離的比例范圍10-50:20-60:1-20的式1、2和3的三種香豆素并木脂素，連同藥學上可接受的載體的藥物組合物作為引發體液和細胞介導免疫的免疫調節劑的用途。在本發明的實施方案中，體液介導免疫是通過用50-200mg/Kg體重劑量范圍的三種香豆素并木脂素組合治療動物評價。而在另一個實施方案中，所用的香豆素并木脂素的劑量是25-100mg/Kg體重。而在另一個實施方案中，香豆素并木脂素用藥方案是l-28天。在試驗體液免疫的另一個實施方案中，抗原是以0.01-0.3ml的lx108紅細胞的劑量范圍給藥。而在另一個實施方案中，用于誘導體液免疫的抗原的劑量是0.2ml的lx108紅細胞。而在另一個實施方案中，體液免疫HA滴定度的范圍是32-2048。而在另一個實施方案中，比較正常對照中的256以及注射環磷酰胺的陰性對照動物中的O，取得的體液免疫HA滴定度是高至2048。而在另一個實施方案中，用于測試細胞介導免疫的三種香豆素并木脂素的組合的劑量范圍是50-20Omg/Kg體重。而在另一個實施方案中，用于誘導細胞介導免疫的劑量是100mg/Kg體重。而在另一個實施方案中，與對照動物中的范圍0.01-0.12比較，DTH反應指數范圍是0.04-0.30。而在另一個實施方案中，與正常對照動物中的O.04比較，取得到DTH反應指數是高至0.225。本發明進一步提供了制備從醉蝶花屬的種子分離出的比例范圍為10-50:20-60:1-20%(W/W)的式l、2和3的三種香豆素并木脂素連同藥學上可接受的載體的新的藥物組合物的方法，該方法包括以下步驟a)用20-40TC的脂肪族的溶劑提取干的粉末化的種子20-80小時以獲得脫脂的原料，b)用優選20-40'C的醇提取上述的脫脂的植物原料20-80小時，并濃縮溶劑獲得醇提取物，接著用有機溶劑沉淀并過濾，c)濃縮上述的濾液，用適合的吸附劑吸附所得的提取物，在20-50。C下干燥吸附物質20-80小時，d)用有機溶劑提取上述的吸附的物質，在相同的溫度條件(20-40。C)下，用芳香烴、乙酸乙酯和極性溶劑起始，接著持續20-80小時，e)過濾，從各自的餾分濃縮溶劑以獲得香豆素并木脂素1、2和3，和f)使來自各個餾分的濾液進行色鐠法以得到增加收率的上述香豆素并木脂素。而在另一個實施方案中，所用的脂肪族的溶劑是選自石油醚和己坑o而在另一個實施方案中，所用的脂肪族的溶劑是石油醚。如權利要求15中要求的方法，其中所用的醇是選自乙醇和甲醇的烷基醇。而在另一個實施方案中，過濾沉淀的醇提取物是用乙酸乙酯、甲醇、丙酮及石油醚-乙酸乙酯(l:l)的混合物完成。而在另一個實施方案中，所用的吸附劑是選自硅藻土、纖維素及其混合物o而在另一個實施方案中，適合的吸附劑是硅藻土。而在另一個實施方案中，所用的芳香烴溶劑是選自甲苯和甲苯石油醚。而在另一個實施方案中，所用的芳香烴是曱苯。而在另一個實施方案中，該吸附的物質是用20-40TC的乙酸乙酯提取。而在另一個實施方案中，該吸附的物質是用乙酸乙酯提取20-80小時。而在另一個實施方案中，該吸附的物質是用選自乙醇和曱醇的極性溶劑提取。而在另一個實施方案中，所用的極性溶劑是甲醇。而在另一個實施方案中，該濃縮餾分的過濾是使用乙酸乙酯、丙酮、甲苯、甲醇、乙醇、石油醚-乙酸乙酯(l:l)的混合物、甲苯-乙酸乙酯(hl)的混合物完成。而在另一個實施方案中，濾液是使用硅膠、硅酸、硅酸鋁(Horosil)色譜分離，接著用石油醚(60-80iC)、曱苯、甲苯-石油醚(l:l)及石油醚-乙酸乙酯的比例為1:1和1:3的混合物、甲苯-乙酸乙酯的比例為1:1和1:3的混合物、乙酸乙酯、含2-5%甲醇的乙酸乙酯洗脫。而在另一個實施方案中，色譜法是使用硅膠(60-120目)進行。而在另一個實施方案中，所用的溶劑是再循環的。而在另一個實施方案中，表達免疫調節劑活性的式1、2和3香豆素并木脂素的最佳比例的組合的意味著香豆素并木脂素1范圍是10-50%,2范圍是20-60%，3范圍是1-20°/。。然而在另一個實施方案中，式l、2和3的三種香豆素并木脂素的組合的比例是35-40:50-55:5-15。發明詳述本發明提供了一種含有得自植物醉蝶花屬viscose的種子的用作體液和細胞介導免疫的免疫調節劑的式1、2和3的三種香豆素并木脂素的組合的新的藥物組合物。評估該免疫調節劑活性的方法包括以下步驟A.對于體液免疫應答而言a)用劑量范圍50-200mg/Kg體重的三種香豆素并木脂素的組合治療動物1-28天。b)用范圍為0.01-0.3ml的5x109RBCs的抗原，連同所用抗原的20-80%的藥學上可接受的稀釋劑在第7天給藥動物用于引發抗體的產生。c)在初次免疫當日之后的第3-14天，給藥相同劑量給藥法的抗原和稀釋劑，作為加強劑量。d)在初次免疫當日之后的第18-25天，使用毛細管從動物的眼眶叢取出血液。e)評估在第28天在96孔'U'底微量滴定板中32-2048滴定度范圍下的通過血凝集分開和分離的血清中產生抗體。B.對于細胞介導免疫應答(遲發型超敏反應)而言a)用該香豆素并木脂素治療動物1-15天。b)在藥物治療之后第5天，皮下使用RBCs作為抗原(lx108個細胞)與藥學上可接受的稀釋劑(所用抗原的20-80%)的組合敏化動物，接著在第12天用1x108個細胞皮下注射加強劑量，在最后抗原給藥之后的48小時，在動物的左后爪的跖肌表面使用相同量激發免疫反應。右后爪保留作為對照，接受相同量的正常生理鹽水。c)評估香豆素并木脂素的組合在50-100mg/Kg體重的劑量范圍時表現出的細胞介導免疫。遲發型超敏反應的程度是在激發給藥之后24小時器官充滿度測量法評估。,本發明進一步提供了制備從C7e咖er"cow的種子中分離出的最佳比例的式1、2和3的三種香豆素并木脂素新的藥物組合物的方法，該方法包括以下步驟a)用20-40lC的脂肪族的溶劑提取千的粉末化的種子20-80小時以獲得脫脂的原料，b)用優選20-40X:的醇提取上述的脫脂的植物原料20-80小時，并濃縮溶劑獲得醇提取物，所述醇提取物用有機溶劑沉淀并過濾，c)濃縮上述的濾液，用適合的吸附劑吸附所得的提取物，在20-50t:下干燥吸附物質20-80小時，d)用有機溶劑提取上述的吸附的物質，在相同的溫度條件(20-40。C)下，用芳香烴、乙酸乙酯和極性溶劑起始，接著持續20-80小時，e)過濾，從各自的餾分濃縮溶劑以獲得香豆素并木脂素1、2和3，和f)使來自各個餾分的濾液進行色鐠法以得到增加收率的上述香豆素并木脂素。脂肪族的溶劑是選自石油醚(60-8(TC)及己烷，優選是石油醚60-80。C。所用的醇是選自乙醇和甲醇的烷基醇。沉淀的醇提取物是使用乙酸乙酯、甲醇、丙酮、甲苯、石油醚(60-80匸)-乙酸乙酯(l:l)的混合物、甲苯-乙酸乙酯過濾。所述吸附劑物質是選自硅藻土、纖維素及其混合物，優選是硅藻土。所述吸附的物質是在20-50X:下干燥20-80小時。所用的芳香烴溶劑是選自甲苯和(1:1)的曱苯-石油醚(60-80匸)，優選是甲苯。所述吸附的物質是用20-4(TC的芳香烴提取20-80小時，接著用20-40。C的乙酸乙酯提取20-80小時。所述吸附的物質的提取所用的極性溶劑是選自甲醇和乙醇的烷基醇，優選是甲醇。吸附的物質是用20-40t:的甲醇提取20-80小時。濃縮之后所得的上述餾分的過濾是使用乙酸乙酯、丙酮、甲苯、甲醇、石油醚(60-80。C)-乙酸乙酯(l:l)的混合物、曱苯-乙酸乙酯。從各個餾分得到的濾液進一步進行色鐠法，使用硅膠、硅酸或硅酸鋁，然后使用石油醚(60-80r:)、石油醚(60-80*€)-乙酸乙酯(1:1)的混合物、石油醚(60-80X:)-乙酸乙酯(1:3)的混合物及乙酸乙酯洗脫。在本發明優選的實施方案中，硅膠用于色鐠法。表達免疫調節劑活性的式1、2和3香豆素并木脂素的最佳比例意味著式1的香豆素并木脂素的范圍是10-50%,式2的香豆素并木脂素的范圍是20-60%，式3的香豆素并木脂素的范圍是1-20%。本發明是用以下給出的實施例詳細描述，所述實施例是用作舉例說明的，因此，不應當解釋為限制本發明的保護范圍。實施例1C.的空氣干燥的粉末狀的種子(20Kg)通過在室溫下使用石油醚(60-8(TC)(30升x4)72小時的滲濾法脫脂。脫脂的原料然后用甲醇(35升x5)徹底提取75小時。提取物的甲醇溶液濃縮成殘留物(2.37Kg)，殘留物使用石油醚-乙酸乙酯(1:1)的混合物沉淀出并過濾，得到三種香豆素并木脂素1、2和3(10.2gms)的組合。濾液濃縮成殘留物，用硅藻土(2.94Kg)吸附，在30。C下干燥60小時。吸附的物質裝滿粗平布并在室溫下提取72小時，由甲苯(10升X5)開始，乙酸乙酯(10升X5)，最后采用曱醇(10升X7)，各個提取連續。濃縮以上通過采用石油醚-乙酸乙酯(l:l)的過濾收集的式1，2和3的香豆素并木脂素供給的三種餾分，收率2.4gms。來自各個餾分的濾液分別濃縮和通過采用石油醚(60-80X:)硅膠色譜層析。柱子用石油醚-乙酸乙酯的比例為(1:l)和(l:3)的混合物接連著洗脫。濃縮以上兩種洗脫液結晶出并用石油醚-乙酸乙酯(1:l)濾過，得到香豆素并木脂素l、2和3的組合，收率51gms。實施例2C.Wow的空氣干燥的粉末狀的種子(20Kg)通過在室溫下使用己烷(30升x4)72小時的滲濾法脫脂。脫脂的原料然后用乙醇(35升x5)徹底提取75小時。提取物的乙醇溶液濃縮成殘留物(2.40Kg)，殘留物使用甲醇-乙酸乙酯(l:l)的混合物沉淀出并過濾，得到三種香豆素并木脂素l、2和3(10.2gms)的組合。濾液濃縮成殘留物，用硅藻土-纖維素混合物(2.94Kg)吸附，在30匸下千燥60小時。吸附的物質裝滿粗平布并在室溫下提取72小時，由甲苯-石油醚(60-80匸)(IO升X5)開始、乙酸乙酯(10升X5),最后使用乙醇(10升X7)，各個提取連續。濃縮以上通過釆用甲苯-乙酸乙酯(1:1)的過濾收集的式l，2和3的香豆素并木脂素供給的三種餾分，收率L4gms，來自各個餾分的濾液是分別濃縮和通過采用甲苯-石油醚(60-80匸)硅膠色譜層析。柱子用甲苯-乙酸乙酯的比例為(1:l)和(l:3)的混合物接連著洗脫。濃縮以上兩種洗脫液結晶出并用甲苯-乙酸乙酯(1:l)濾過，得到香豆素并木脂素1、2和3的組合，收率51gms。實施例3正常小鼠(M/s膨""/m)中的免疫刺激劑6體濕"咖orra/刀活性正常健康遠系雜交種小鼠，在標準條件U2+3X:,12:12小時晝夜循環，團粒食物和soakedBengalgram)飼養，每組有5只動物進行實驗。動物喂養試驗化合物1-28天，劑量比是50-100mg/Kg體重。新鮮采集和洗滌的兔RBCs用作抗原，所述抗原用于在第7天免疫動物，接著在第14天加強劑量給藥。在21天之后從眼眶叢中采集血液，用于血細胞凝集(HA)滴定度評估。血凝集是在96孔'U'底微量滴定板中使用連續兩倍稀釋的血清進行。顯示了可見凝集的最高的稀釋用作抗體滴度。實施例4由本發明的三種香豆素并木脂素的組合顯示的免疫調節劑活性是導的免疫調節劑活性，比較概況是在表l中描述。表1:當前可得到的制劑的血凝集滴定度，比較我們的三種香豆素并木脂素的制劑及對照<table>tableseeoriginaldocumentpage16</column></row><table>實施例5通過遲發型超敏反應模型(DTH)的正常大鼠(Rattusnorvegicus)中免疫刺激劑(細胞介導)活性。正常健康遠系雜交種的SpragueDawley大鼠，在標準條件("+3匸，12:12小時晝夜循環，團粒食物和soakedBengalgram)飼養，每組有5只動物進行實驗。動物喂養試驗化合物l5天，劑量比是50-100mg/Kg體重。在藥物治療開始之后，動物用洗過RBCs作為抗原(皮下，0.2ml含1x108細胞)預處理5天，接著在第12天使用相同量的抗原皮下加強劑量給藥。在最后抗原給藥之后48小時，動物是在后肢爪的跖肌表面用相同的抗原激發免疫反應。24小時之后，讀數是器官充滿度測量法取得。實施例6用香豆素并木脂素治療的肝細胞的細胞培養物上清液的血清谷草轉氨酶(SGOT)定量。分離肝細胞，在組織培養板中培養，并(1-半乳糖胺@1yg/ml損傷，用所討論的化合物處理細胞。在孵育48-72小時之后，獲取細胞培養物上清液用于評估SG0T水平，其表示最初培養的肝細胞的損傷。結果在表2中提及。表2:用化合物@1jig/ml處理的細胞培養物上清液的SGOT水平，及不同濃度的損傷劑<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>表3:當用免疫調節劑活性的化合物治療時，巨噬細胞的細胞滴定度的倍數增強<table>tableseeoriginaldocumentpage17</column></row><table>巨噬細胞是從大鼠腹膜中采集，細胞計數的4x104的細胞用10lLigm/ml的化合物處理，通過NBT測定法用于巨噬細胞刺激的測定。比較香豆素并木脂素12&3(70:20:10)的1.4倍，香豆素并木脂素12&3(37.9:51.66:10.41)顯示了細胞滴定度的3.65倍增強。總之，濃度10jigm/ml的化合物可以用作細胞介導免疫應答的免疫刺激劑。益處三種香豆素并木脂素的組合據發現是非毒性的，即使在Musmusculus中2000mg/Kg體重的劑量。因此，化合物對于人類使用是安全的。由香豆素并木脂素的組合顯示的免疫調節劑活性據發現在誘導細胞和體液免疫應答中是有效的。固體基質(硅藻土、纖維素等)吸附技術的應用有助于以直接迅速方式高產率地分離香豆素并木脂素。提取方法所用的溶劑可以是再循環的，因此方法是成本有效的。非毒性化學物質和溶劑已經用于分離香豆素并木脂素的方法，因此方法是生態友好的。固體基質的使用排除了分離香豆素并木脂素的水分配，因此該方法是適于化合物的商業生產。本發明中所述的方法不使用任何極端溫度和壓力條件，因此該方法適于商業上生產具有免疫調節劑活性的該香豆素并木脂素。鑒于香豆素并木脂素的有效的免疫調節劑性質，及其易于從C7ecweK"cow的種子中分離，該化合物易于上規模和成本有效方式用于進一步商業開發。權利要求1、一種新的藥物組合物，包含從醉蝶花屬的種子中分離的餾分，和任選的藥學上可接受的載體，所述餾分含有比例范圍為10-5020-601-20％(W/W)的式1、2和3的三種香豆素并木脂素的組合當R是H時，(式1)和當R是OCH3(式3)2、權利要求l的組合物，其中具有式l，2和3的化合物分別是9H-吡喃并-(2，3-f)-l，4-苯并二-惡英-9-酮、2，3-二氫-3-(4-羥基-3-曱氧基苯基)-2-(羥甲基)-5-甲氧基-反式-(±)、9H-吡喃并-(2，3-f)-l，4-苯并二哺英-9-酮、2，3-二氫-2-(4-羥基-3-甲氧基苯基)-3-(羥曱基)-5-甲氧基-反式-(±)和9H-吡喃并-(2，3-f)-l，4-苯并二p惡英-9-酮、2，3-二氫-3-(4-羥基-3，5-二甲氧基苯基)-2-(羥甲基)-5-曱氧基-反式-(±)。3、權利要求1的組合物是用作引發體液和細胞介導免疫的免疫調節劑。4、包含從醉蝶花屬的種子中分離的餾分和任選的藥學上可接受的載體的藥物組合物作為引發體液和細胞介導免疫的免疫調節劑的用途，所迷餾分含有比例范圍為10-50:20-60:1-20%(W/W)的式l、2和3的三種香豆素并木脂素的組合。5、權利要求3的組合物的用途，其中體液介導免疫是通過用含有50-200mg/Kg體重劑量范圍的三種香豆素并木脂素的組合的餾分治療動物評估。6、權利要求3的組合物的用途，其中所用的香豆素并木脂素劑量是25-100mg/Kg體重。7、權利要求4的組合物的用途，其中香豆素并木脂素給藥方案是給予1-28天。8、權利要求4的組合物的用途，其中對于體液免疫的測試而言，抗原是以0.01-0.3ml的lx108個紅細胞的劑量給藥。9、權利要求8的組合物的用途，其中誘導體液免疫的所用抗原的劑量是0.2ml的lx108個紅細胞。10、權利要求4的組合物的用途，其中體液免疫HA滴定度范圍是32-2048。11、權利要求10的組合物的用途，其中獲得的體液免疫HA滴定度與正常對照的256及注射環磷酰胺的陰性對照動物中的0相比是高至2048。12、權利要求4的組合物的用途，其中用于測試細胞介導免疫的的組合物的劑量是50-200mg/Kg體重。13、權利要求12的組合物的用途，其中用于誘導細胞介導免疫的劑量是100mg/Kg體重。14、權利要求4的組合物的用途，其中與對照動物中0.01-0.12的范圍相比，DTH反應指數范圍是0.04-0.30。15、權利要求14的組合物的用途，其中與正常對照動物中0.04相比，DTH反應指數達到高至0.225。16、一種制備包含從醉蝶花屬的種子中分離的餾分，任選加上藥學上可接受的栽體的新的藥物組合物的方法，所述餾分含有比例范圍為10-50:20-60:1-20%(W/W)的式1、2和3的三種香豆素并木脂素的組合，包括以下步驟a)用20-40^C的脂肪族的溶劑提取干的粉末化的種子20-80小時以獲得脫脂的原料，b)用優選20-4(TC的醇提取上述的脫脂的植物原料20-80小時，并濃縮溶劑獲得醇提取物，接著用有機溶劑沉淀并過濾，c)濃縮上述的濾液，用適合的吸附劑吸附所得的提取物，在20-50lC下干燥吸附物質20-80小時，d)用有機溶劑提取上述的吸附的物質，在相同的溫度條件(20-40匸)下，開始用芳香烴、乙酸乙酯和極性溶劑起始，連續持續20-80小時，e)過濾，從各自的餾分濃縮溶劑以獲得香豆素并木脂素1、2和3，f)使來自各個餾分的濾液進行色鐠法以得到增加收率的上述香豆素并木脂素。17、權利要求16的方法，其中所用的脂肪族的溶劑選自石油醚和己坑。18、權利要求16的方法，其中所用的脂肪族的溶劑是石油醚。19、權利要求16的方法，其中所用的醇是選自乙醇和甲醇的烷基醇。20、權利要求16的方法，其中沉淀的醇提取物的過濾使用乙酸乙酯、甲醇、丙酮及石油醚-乙酸乙酯(l:l)混合物進行。21、權利要求16的方法，其中所用吸附劑選自硅藻土、纖維素及其混合物。22、權利要求21的方法，其中該適合的吸附劑是硅藻土。23、權利要求16的方法，其中所用的芳香烴溶劑選自甲苯和甲苯石油醚。24、權利要求23的方法，其中所用的芳香烴是甲苯。25、權利要求16的方法，其中該吸附的物質用20-40X:的乙酸乙酯提取。26、權利要求16的方法，其中該吸附的物質用乙酸乙酯提取20-80小時。27、權利要求16的方法，其中該吸附的物質用選自乙醇和甲醇的極性溶劑提取。28、權利要求27的方法，其中所用的極性溶劑是甲醇。29、權利要求16的方法，其中濃縮餾分的過濾使用乙酸乙酯、丙酮、甲苯、甲醇、乙醇、石油醚-乙酸乙酯(l:l)的混合物、甲苯-乙酸乙酯(l:l)的混合物進行。30、權利要求16的方法，其中濾液使用硅膠、硅酸、硅酸鋁色傳分離，接著用石油醚(60-80X:)、甲苯、甲苯-石油醚(l:l)及石油醚-乙酸乙酯的比例為1:1和1:3的混合物、甲苯-乙酸乙酯的比例為1:1和1:3的混合物、乙酸乙酯、含2-5%甲醇的乙酸乙酯洗脫。31、權利要求15的方法，其中色譜法使用硅膠(60-120目)進行。32、權利要求16的方法，其中所用溶劑是再循環的。33、權利要求16的方法，其中表達免疫調節劑活性的式1、2和3香豆素并木脂素的最佳比例意味著式1的香豆素并木脂素的范圍是10-50%，式2的香豆素并木脂素的范圍是20-60°/。，式3的香豆素并木脂素的范圍是1-20%。34、權利要求33的方法，其中式l、2和3三種香豆素并木脂素的組合的比例是35-40:50-55:5-15。全文摘要本發明提供了一種由從植物Cleomeviscosa的種子中分離出的式1、2和3的三種香豆素并木脂素的組合連同藥學上可接受的載體構成的用作免疫調節劑的新的藥物組合物。本發明還描述了該化合物調節體液和細胞介導免疫應答的能力。其進一步提供了制備用于調節體液和細胞介導免疫應答的最佳比例的三種香豆素并木脂素的新的藥物組合物的方法。文檔編號A61P37/02GK101365444SQ200680051962公開日2009年2月11日申請日期2006年12月4日優先權日2005年12月6日發明者A·K·古普塔,A·P·考霍,A·S·奈吉,A·加爾格,A·帕爾,M·P·達羅卡爾,R·P·帕特爾,S·K·查托帕迪亞雅,S·P·S·哈努加,S·譚頓,T·考爾申請人:科學與工業研究會;生物技術部