免疫調節組合物,其用途及生產方法

專利名稱：免疫調節組合物,其用途及生產方法
技術領域：
該發明總體涉及免疫應答反應的調節。更具體地說，本發明涉及至少一組肽在組合物中的應用，以及調節對一種或多種多肽抗原的免疫應答反應的方法。在某些實施方式中，各組肽的序列全部或部分衍生自一種多肽抗原。各肽組中的各個肽含有對應于一種多肽抗原不同部分的氨基酸序列，并且與同組肽的至少一個其它肽顯示部分序列相同性或相似性。本發明還包括在預防、診斷和治療應用中使用這些肽的方法。此外，本發明涉及應用未經培養的未經歷活化條件但已與抗原接觸的抗原呈遞細胞或其前體細胞來調節這些細胞的接受者的免疫應答反應的方法和組合物。
本說明書中參考的各種出版物的詳細目錄收集在說明書的最后處。
背景技術：
自從近20年前被發現以來，1型人免疫缺陷病毒型(HIV-1)已奪走了二千二百萬人的生命，并且正繼續毀壞全世界的民眾(1)。目前，四千二百萬人攜帶HIV-1，盡管做了很多努力來調整高危行為，但每年仍有5百萬新的感染發生(2)。類似地，丙肝病毒(HCV)和乙肝病毒感染在世界范圍內數百萬導致人慢性肝損傷和肝細胞損傷。迫切需要對這些病毒的安全有效的預防或治療疫苗。此外，現在人們相信，很多癌癥的免疫保護或癌癥的清除需要特異性T細胞應答反應。
持續性胞內病原體如復制性病毒的消除通常需要細胞介導的免疫(CMI)。CD8+細胞毒T淋巴細胞(CTL)是CMI的主要效應細胞；它們通過識別細胞表面MHC I類分子呈遞的病毒肽來殺傷病毒感染的細胞。在病毒特異性抗體出現之前，HIV-1感染的急性階段，強力的HIV-1-特異性CTL應答反應時間上與降低的病毒血癥相關(3，4)。而且，在慢性感染時，強烈的CTL應答與降低的HIV-1病毒血癥相關(5，6)，而HIV-1-特異性CTL的降低與AIDS的快速發展相關(4，7-9)。類似地，一般認為HCV的清除靠病毒特異性T細胞應答來幫助。
尚沒有對HIV-1，HCV或癌癥的有效疫苗。早期的HCV-1疫苗策略是依據滅活的全病毒疫苗以及重組結構蛋白如包膜(env)糖蛋白。非人靈長類模型顯示這些疫苗對致病性猴免疫缺陷病毒(SIV)和高致病性SHIV(SIV-HIV-1嵌合)攻擊只提供有限的病毒株特異性保護(10-13)。第一次人III期試驗也失敗了，未顯示有效性(14)。
顆粒-和重組的全蛋白疫苗雖然安全，但傾向于產生的抗體對很多慢性病毒病原體提供的保護不夠。或者，細胞內表達的抗原隨后更可能誘導CTL應答。減毒活病毒產生強大的細胞介導的免疫(CMI)應答，然而，其臨床安全性受到關注(15)。因此，很多注意力已轉向表達HIV-1/SIV基因(如env，gag和pop)或HCV基因的遺傳工程載體(如DNA質粒和痘病毒)(16)。
不知道哪種免疫-靶抗原是保護性抗原，但已表明很多T細胞反應可降低產生病毒逃逸突變的可能性(17)。然而，正是這種大量潛在的表位使大載體的構建常常很困難，并且因為其潛在的安全性而變得十分復雜。已注意到DNA疫苗與宿主DNA整合的潛在能力，以及病毒載體疫苗在免疫損傷宿主中的安全性。這些給重組疫苗提出了重要的管理上的障礙。
此外，盡管對T細胞和線形B細胞表位是如何加工并呈遞給免疫系統的了解已獲得顯著進展，但基于表位的疫苗的全部潛能還沒有被充分探索。主要原因是必須鑒定大量不同的T細胞表位，以將這些表位包括在疫苗中來覆蓋人群中極大的人白細胞抗原(HLA)多態性。
以前已報道，灌注全抗原-脈沖或單表位-脈沖的培養的抗原呈遞細胞(APC)在小鼠模型中具有免疫原性的(22-27)。然而，在近交系(inbred)小鼠模型中的其它報道顯示，灌注單個肽脈沖細胞甚至可能是耐受原性的(tolerogenic)(誘導對抗原耐受的狀態，這對疫苗的作用不利)(28-31)。
發明概述本發明公開了一種發現，即已與感興趣的病毒多肽抗原的重疊肽接觸的自體細胞在遠交系(outbred)群體中產生強烈的免疫原性反應，這種免疫原性反應保護其免受隨后的病毒攻擊。本發明人提出，系統性給予這些重疊肽本身可達到類似的保護性反應。使用多個重疊肽提供幾種益處，包括減少逃逸(escape)突變體的出現，更易于在不知道任何表位的情況下產生基于肽的免疫原性組合物。在這方面，采用諸肽之間的重疊序列減少或防止潛在表位缺失，擴大該組合物對遠交群體之間主要組織相容性復合體(MHC)多樣性的免疫覆蓋范圍。
因此，在本發明的一個方面，提供至少一組肽用于調節對一種或多種感興趣多肽的免疫應答反應。各組中的各個肽含有感興趣多肽相應氨基酸序列的不同部分(例如，多肽的特定致病區)，并且顯示與同組肽中至少一個其它肽有部分序列相同性或相似性。在某些實施方式中，使用了至少2、3、4、5、6或7組肽，其中各組中的肽序列衍生自感興趣的特定多肽。
部分序列相同性或相似性通常包含在各肽的一端或兩端。合適地，在一端或兩端，有至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14個毗連的氨基酸殘基，其序列與至少一個其它肽中含有的氨基酸序列相同或相似。
在某些實施方式中，該肽長度至少為6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30個氨基酸殘基，合適的長度不多于約500、200、100、80、60、50、40個氨基酸殘基。合適地選擇該肽的長度以增強溶細胞的T淋巴細胞應答反應的產生(例如，長度約8-10個氨基酸的肽)或T輔助淋巴細胞應答反應的產生(例如，長度約12-20個氨基酸的肽)。
在某些實施方式中，所述肽序列衍生自與感興趣多肽相應的序列的至少約30、40、50、60、70、80、90、91、92、93、94.95、96、97、98、99％。
合適的感興趣多肽是選自下列的抗原蛋白質抗原，癌細胞表達的抗原，顆粒抗原，同種抗原，自身抗原或過敏原，或免疫復合體。在某些實施方式中，感興趣的抗原是疾病相關或病癥相關的多肽，如但不限于，病原生物或癌癥產生的多肽。病原生物的例子包括但不限于，酵母、病毒、細菌、蠕蟲、原生動物和支原體。癌癥的例子包括但不限于，黑色素瘤、肺癌、乳腺癌、子宮頸癌、前列腺癌、結腸癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌、腎癌、移植后淋巴增生疾病(PTLD)，何杰金氏(Hodgkin′s)淋巴瘤等。
另一方面，本發明提供了抗原呈遞細胞或其前體細胞，它們已與一組前面廣義描述的抗原接觸過，接觸的時間和條件足以使這些多肽或其加工形式被抗原呈遞細胞或其前體細胞呈遞。
在相關方面，本發明提供產生能調節對感興趣多肽的免疫應答反應的抗原呈遞細胞的方法。該方法通常包括，使抗原呈遞細胞或其前體細胞與至少一組前面廣義描述的肽接觸，接觸的時間和條件足以使這些多肽或其加工形式被抗原呈遞細胞或其前體細胞呈遞。當采用前體細胞時，宜將該前體細胞在足以使其分化產生抗原呈遞細胞的條件下培養一段時間。
在有些實施方式中，將所述肽或各組肽與基本上純化的抗原呈遞細胞或其前體細胞接觸。在其它實施方式中，將該肽或各組肽與異質(heterogeneous)抗原呈遞細胞或其前體細胞群接觸。在這些實施方式中，異質細胞群可以是血液或外周血單個核細胞。通常，抗原呈遞細胞或其前體細胞選自單核細胞、巨噬細胞、髓系(myeloid lineage)細胞、B細胞、樹突狀細胞或郎格罕斯細胞。在其它實施方式中，將所述肽或各組肽與未經培養的抗原呈遞細胞群或其前體細胞群接觸。該群可以是同質(homogenous)或異質的，示范性例子包括全血、新鮮的血、或其組分如但不限于，外周血單個核細胞、全血的血沉棕黃層組分、壓積的紅細胞、經輻射的血、樹突狀細胞、單核細胞、巨噬細胞、嗜中性粒細胞、淋巴細胞、自然殺傷細胞和自然殺傷T細胞。
上面廣義描述的抗原呈遞細胞也可用于產生淋巴細胞，包括T淋巴細胞和B淋巴細胞，用于調節對特定抗原或抗原組的免疫應答反應。因此，在其它方面，本發明提供產生抗原特異性淋巴細胞的方法。該方法包括將淋巴細胞群或其前體細胞群與上面廣義描述的抗原呈遞細胞接觸，接觸的時間和條件足以產生調節對至少一種多肽(從其產生了所述的重疊肽)的免疫應答反應的抗原特異性淋巴細胞。
在其它方面，本發明考慮組合物，該組合物包括上面廣義描述的至少一組多肽或抗原呈遞細胞或淋巴細胞，以及藥學上可接受的運載體和/或稀釋劑。在某些實施方式中，該組合物還包括穩定所述肽或抗原避免受宿主酶降解的佐劑或化合物。
在其它方面，本發明包括調節對感興趣多肽的免疫應答反應的方法，該方法包括給予需要該治療的患者上面廣義上描述的至少一組肽或抗原呈遞細胞或淋巴細胞或組合物，給藥時間和給藥條件足以調節免疫應答反應。
在相關方面，本發明包括治療和/預防與感興趣抗原的存在相關的疾病或病癥的方法，該方法包括給予需要這種治療或預防的患者有效量的上面廣義描述的至少一組肽或抗原呈遞細胞或淋巴細胞或組合物。在有些實施方式中，通常通過注射全身性給予肽或抗原呈遞細胞或淋巴細胞。
在其它方面，本發明考慮采用至少一組上述的肽或抗原呈遞細胞或淋巴細胞用于制備調節對感興趣多肽的免疫應答反應或用于治療或預防與感興趣多肽的存在相關的疾病或病癥的藥物。
本發明還公開了一個發現，即，使抗原呈遞細胞群或其前體細胞群與靶抗原接觸從而使接觸的細胞群調節合適的接受者中對靶抗原的免疫應答之前，不需要培養該抗原呈遞細胞群或其前體細胞群來擴增細胞群。而是，本發明人出乎意料地發現，當與靶抗原所對應的的抗原接觸時，未經培養的抗原呈遞細胞或其前體細胞足以調節對該靶抗原的免疫應答。采用未經培養的抗原呈遞細胞或其前體細胞避免了使用昂貴的培養和細胞處理設備，在某些理想的實施方式中，提供了與現有方法相比快得多的疫苗接種方案。此外，本發明人還發現，不需要在使其活化的條件下孵育未經培養的抗原呈遞細胞來使其有效調節對靶抗原的免疫應答，這進一步減少了處理和操作步驟。
因此，在其它方面，本發明的特征是一種組合物，該組合物用于在對象中調節對靶抗原的免疫應答反應，該組合物包含未經培養的抗原呈遞細胞或其前體細胞，這些未經培養的抗原呈遞細胞或其前體細胞未經歷活化條件，但已與靶抗原所對應的的抗原接觸，接觸的時間(例如約1分鐘至約5天)和條件足以表達加工或修飾形式的抗原以呈遞給該對象的免疫系統(例如，T淋巴細胞)。示范性的未經培養的抗原呈遞細胞的例子包括全血、新鮮的血、或其組分如但不限于，外周血單個核細胞、全血的棕黃層組分、壓積的紅細胞、經輻射的血、樹突狀細胞、單核細胞、巨噬細胞、嗜中性粒細胞、淋巴細胞、自然殺傷細胞和自然殺傷T細胞。
靶抗原所對應的抗原可以是任何形式，包括但不限于，核酸，肽，激素，全蛋白抗原，細胞物質(例如活的或滅活的癌細胞)，顆粒物質如但不限于細胞碎片、凋亡的細胞、脂聚集物如脂質體、膜運載體、微球、熱凝聚蛋白、病毒小體、病毒樣顆粒，以及完整的生物，包括，例如細菌、分枝桿菌、病毒、真菌、原生動物或其部分。在有些實施方式中，所述抗原選自蛋白質性質的(proteinaceous)分子或核酸分子。在有些實施方式中，將未經培養的細胞與兩種或多種抗原接觸。在該類型的示范性例子中，所述抗原的形式是重疊的或非重疊的肽，或可表達該肽的一種或多種聚核苷酸。
在有關方面，本發明將未經培養的抗原呈遞細胞或其前體細胞的用途擴展到制備用于治療患者中與某抗原的存在或異常表達相關疾病或病癥的藥物，其中抗原呈遞細胞或其前體細胞未經歷活化條件但已與靶抗原所對應的的抗原接觸，接觸的時間和條件足以表達加工或修飾形式的抗原以呈遞給該患者的免疫系統。
附圖簡述

圖1是在10、15和20周進行的體內CTL殺傷試驗的示意圖。
圖2圖示SIVgag重疊肽-脈沖細胞的體內CTL殺傷。FPV-加強接種(10周)之后兩周，用SNARF(2.5μM)或CFSE(2.5uM或0.25μM)標記3等份的PBMC細胞群，并分別用SIVpol，nef或gag重疊肽池(OPAL)脈沖。OPAL灌注后5分鐘、4小時和16小時取得血樣裂解RBC，用流式細胞計量獲得106個淋巴細胞事件。5分鐘時，所有3個標記的PBMC群具有大致相同的數目。在4和16小時，相對于SIVnef脈沖的PBMC，2xDNA/FPV免疫的猴H20對SIVgag脈沖的PBMC顯示清除率分別為27.3％和76.0％，而在對照免疫的猴E20中未觀察到SIVgag-特異性殺傷。注意到在4小時收集到的事件比16小時少。
圖3顯示對SIVgag脈沖和SIVpol-脈沖PBMC在SHIV攻擊后的強烈殺傷。SHIV攻擊(20周)后兩周，用SNARF(5μM)或CFSE(6uM或2.5μM)標記等份的PBMC群，并分別用SIVpol，無多肽或SIVgag重疊肽池(OPAL)脈沖處理。用流式細胞術測定獲得的106個RBC裂解后的淋巴細胞事件。2xDNA/FPV免疫的猴H20和H21對SIVgag脈沖的PBMC顯示出92.3％和98.3％的殺傷。這些動物接受了2次SIVpol脈沖的PBMC的灌注，顯示出＞99％的SIVpol特異性殺傷。在即將進行OPAL灌注之前，用流式細胞術分析了106淋巴細胞來計數先前CFSE-標記的PBMC(未顯示)。
圖4是照片，顯示用IFNγELISpot分析OPAL灌注后1周T細胞免疫原性的增強。在2xDNA/FPV-免疫的猴H21中，SIVgag和pol肽池應答反應的增強很明顯，在對照免疫的猴E-20中檢測到對SIVpol肽池所引發的(primed)應答反應(所示為10周)。
圖5圖示OPAL灌注后1周(第10周)的IFNγELISpot分析。OPAL灌注后1周(第10周)用ELISpot分析OPAL灌注引起的對SIVgag，pol和nef重疊肽池T細胞免疫原性的增強。在所有4個2xDNA/FPV-免疫的動物中都檢測到對SIVgag應答的增加。在2xDNA/FPV-免疫的猴H20和H21中SIVpol應答增強(猴B00和H8未接受任何pol脈沖的PBMC)，在一個對照免疫的猴E20中SIVpol應答增強。任何動物中都沒有引發對SIVnef的應答反應。因為ELISpot的顯色問題，排除了猴E20(在OPAL灌注之前)和B00(OPAL灌注后)的*IFNγ斑點試驗。
圖6圖示OPAL灌注后1周(第15周)的IFNγELISpot分析。OPAL灌注后1周(第15周)用ELISpot分析OPAL灌注引起的對SIVgag，pol，nef和HIV-1env重疊肽池T細胞免疫原性的增強。在所有4個2xDNA/FPV-免疫的動物中都檢測到對SIVgag應答的增強。在猴E22，B00，H20和H22中SIVpol應答輕微增強(或引發)。所有動物對WI SIV的應答增強明顯，沒有在任何動物中檢測到對SIVnef或HIV-env的應答反應。
圖7圖示OPAL灌注的免疫原性的平均INFγELISpot。免疫接種后第10周和15周給予OPAL灌注之前和之后，將接受OPAL灌注(黑體)的對照和2xDNA/FPV-免疫的動物對(A)SIVgag和(B)SIVpol重疊肽池的平均INFγELISpot應答反應與接受等量免疫接種但不進行OPAL灌注的動物進行比較。對于SIVpol-特異性應答的比較，根據接受1個(B00和H8)劑量或2個(H20和H21)劑量的pol-OPAL灌注將2xDNA/FPV-免疫的動物分組。
圖8圖示SHIV直腸內攻擊的結果。在18周，用SHIVmn229直腸內攻擊所有對照和2xDNA/FPV-免疫的獼猴，評估感染過程中血清SHIV RNA病毒負載和CD4+T細胞計數。將OPAL灌注的接受者與它們各自免疫的非-OPAL接受者比較。組間比較表示為平均值±標準差(SE)。根據接受1個或2個劑量的pol-脈沖的PBMC(分別是B00&H18和H20& H21)進一步將接受OPAL灌注的2xDNA/FPV-免疫的獼猴分組。
圖9圖示在用SHIV感染的猴中所誘導的對SHIV抗原的CD4+和CD8+T細胞應答反應，給予重疊的15肽脈沖的全血來進行誘導，所述肽涵蓋全部SHIV基因組的開放閱讀框。在0、4和8周(箭頭)給予肽脈沖全血，在所見各時間點后，用ICS檢測CD4+和CD8+T細胞對SHIV抗原gag，pol，env和rev-tat-vpu-nef所產生的IFNγ量來衡量T細胞免疫原性的增強。*第一次OPAL之前1周檢測的前-OPAL T細胞應答反應(周-1)。
圖10圖示給予包含全部HCV 1a型H77基因組開放閱讀框的重疊18肽脈沖的全血的猴子中從頭誘導的對HCV的CD4+和CD8+T細胞應答。在0、4和8周(箭頭)，給予經兩個獨立肽池(肽1-116，和117-441)中的肽脈沖的全血。在各時間點后，用ICS檢測CD4+和CD8+T細胞對HCV抗原產生的IFNγ來衡量T細胞免疫原性的誘導和增強。*第一次OPAL之前1周檢測的前-OPAL T細胞應答反應(周-1)。
圖11圖示給予包含已知的反轉錄酶位點或蛋白酶抗性突變位點的重疊17肽脈沖的全血的猴子中，從頭誘導的對HIV-1感染的人中所描述的HIV-1抗藥性突變代表性肽的應答反應。在0、4和8周(箭頭)給予肽脈沖全血。在所見各時間點后，用ICS檢測CD4+和CD8+T細胞對HIV-1抗藥性突變肽產生的IFNγ來衡量T細胞免疫原性的誘導和增強。*第一次OPAL之前1周檢測的前-OPAL T細胞應答反應(周-1)。
圖12圖示單個肽池的一種實施方式，所述肽池對應于HIV-1(感染的)人(Mimotopes，Melbourne)中所描述的野生型HIV-1的反轉錄酶區域或蛋白酶區域的抗藥性突變。設計17肽包含常見的已知突變位點，在各個17肽的第9位氨基酸殘基(黑體)處引入此抗性突變，從而離體蛋白水解所產生的每個9肽表位(CD8+T細胞表位的最常見長度)都含有該突變。
發明詳述1.定義除非另有說明，本文所用的所有技術和科學術語具有與本發明所屬技術領域普通技術人員的常規理解相同的含義。
雖然可采用與本文所述類似或等同的方法和材料來實施或檢測本發明，但仍然描述了優選的方法和材料。對于本發明的目的，下面定義了以下術語。
術語“一”本文用于指一個或一個以上(即，至少一個)的對象。例如，“一個元件”指一個或一個以上的元件。
術語“約”本文用于指各種條件(如數量、濃度、時間等)相對于特定條件的變化可高達30％，優選高達20％，更優選高達10％。
術語“活化條件”指可導致CD2，CD83，CD14，MHC I類，MHC II類和TNF-α之一表達的處理條件，其表達水平或功能活性的活化處理條件是在存在選自下列的制劑時孵育抗原呈遞細胞或其前體細胞細胞因子(例如，IL-4，GM-CSF或I型干擾素)、趨化因子、有絲分裂素、脂多糖或在抗原呈遞細胞或其前體細胞中誘導干擾素合成的制劑；或使抗原呈遞細胞或其前體細胞暴露于生理應激。然而，應理解，術語“活化條件”不包括導致可忽略的細胞活化的處理條件，例如當少于約20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％的細胞被活化，或當CD2、CD83、CD14、MHC I類、MHC II類和TNF-α之一的表達水平或功能活性比經上述活化處理條件處理的抗原呈遞細胞或其前體細胞的表達水平或功能活性至少低約30％、40％、50％、60％、70％、80％或90％，或甚至至少約100％、200％、300％、400％、500％、600％、700％、800％、900％或1000％高于，或至少約30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、92％、94％、96％、97％、98％或99％，或甚至至少約99.5％、99.9％、99.95％、99.99％、99.995％或99.999％時。
“抗原”指可在脊椎動物優選哺乳動物中誘發免疫應答的蛋白、多肽或其它分子或大分子的全部或其部分。這些抗原也與用所述蛋白、多肽或其它分子或大分子免疫的動物產生的抗體反應。
“抗原結合分子”指對靶抗原具有結合親和力的分子。可理解的是，該術語包括免疫球蛋白、免疫球蛋白片段以及顯示有抗原結合活性的非免疫球蛋白衍生的蛋白質構架(frameworks)。
“自體的”指衍生自同一生物的(例如，細胞、組織等)。
術語“同種異體的”本文用于指具有不同遺傳組成的細胞、組織、生物體等。
在整個說明書中，除非上下文另有要求，術語“包含”、“含有”應理解為包括所述的步驟、元件或一組步驟或元件而不排除任何其它的步驟、元件或一組步驟或元件。
“相應于”或“所對應的”指某聚核苷酸(a)具有與參比的(reference)聚核苷酸序列全部或部分基本相同或互補的核苷酸序列，或(b)編碼的氨基酸序列與某肽或蛋白中的氨基酸序列相同。該短語的范圍還包括這樣的肽或多肽，其具有的氨基酸序列與參比的肽或蛋白中的氨基酸序列基本相同或相似。
本文所用術語“培養”指體外使用的一套方法，將細胞群(或單個細胞)在已證明可支持該細胞體外生長或維持的條件下孵育。本領域知道在培養系統中需要確定很多的培養方式、培養基、溫度范圍、氣體濃度等。這些參數將根據所選擇的培養方式以及實施本文所述方法的個體的具體需要而不同。然而，應知道，培養參數的確定本質上是常規性的。
本文中調節免疫應答或治療或預防疾病或病癥的“有效量”，是指以單劑或作為一系列劑量的一部分給予需要的個體以有效調節、治療或預防的組合物的量。有效量將根據待治療個體的健康和身體狀況、待治療個體的分類組別、組合物的劑型、對醫療狀況以及其它相關因素的評估而變化。預計該量的范圍較寬、可通過常規試驗確定。
“表達載體”指可指導該載體編碼的蛋白合成的任何自主遺傳元件。這些表達載體是本領域技術人員已知的。
術語“基因”本文用于指細胞基因組的任何和所有的不連續編碼區域，以及相連的非編碼區和調控區。基因還指編碼特定多肽的開放閱讀框，內含子，以及參與表達調控的毗連的5′和3′非編碼核苷酸序列。在這一方面，基因還可包含天然狀態下與給定基因相連的控制信號，如啟動子、增強子、終止和/或聚腺苷酸化信號，或異源控制信號。DNA序列可以是cDNA或基因組DNA或其片段。基因可被引入合適的載體，在染色體外維持或整合入宿主。
如果一種化合物或組合物可以a)在原初個體中對某抗原(例如，腫瘤抗原)產生免疫應答；或b)在個體中重建、增強或維持免疫應答，如果不給予該化合物或組合物則不發生這些作用，那么該化合物或組合物是“免疫原性的”。如果一種化合物或組合物以單劑或多劑給予時可獲得以上標準之一，則它是免疫原性的。
“免疫互作的”指包括分子間的任何相互作用、反應或其它形式的結合，特別是當這些分子之一是免疫系統的一種組分或模仿該組分。
“分離的”指基本上或本質上沒有天然狀態下與其相伴隨的成分的物質。
“調節”指直接或間接提高或降低個體的免疫應答。在某些實施方式中，“調節”指所需的/所選擇的反應比沒有抗原或比單獨使用該抗原時更有效(例如，至少高10％、20％、30％、40％、50％、60％或更多)，更快速(例如，至少快10％、20％、30％、40％、50％、60％或更多)，量更大(例如，至少大10％、20％、30％、40％、50％、60％或更多)，和/或更易誘導(例如，至少高10％、20％、30％、40％、50％、60％或更多)。
術語“可操作性連接的”本文用于指將結構基因置于啟動子的調控之下，啟動子控制該基因的轉錄和任選地翻譯。在異源啟動子/結構基因組合的構建中，通常優選將遺傳序列或啟動子置于與基因轉錄起始位點有一段距離的位置，這段距離約和該遺傳序列或啟動子與天然狀態下它控制的基因(即該遺傳序列或啟動子衍生來源的基因)的距離相同。如本領域所知，這段距離可變化而不喪失功能。類似地，調控序列元件相對于其控制之下的異源基因的位置優選由該元件在其天然狀態下(即其衍生來源的基因)的位置所確定。
術語“患者”、“對象”和“個體”本文可互換使用，指需要治療或預防的任何對象，具體是脊椎動物對象，更具體是哺乳動物對象。然而，可理解的是，這些術語不表示存在癥狀。落在本發明范圍內的合適的哺乳動物包括但不限于，靈長類，家畜(例如，羊、牛、馬、驢、豬)，實驗室試驗動物(例如兔子、小鼠、大鼠、荷蘭豬、倉鼠)，寵物(例如，貓、狗)以及捕獲的野生動物(如狐貍、鹿、澳洲野犬、爬行類、禽類、魚)。
“藥學上可接受的運載體”指可安全地用于局部或全身給藥的固體或液體填充劑、稀釋劑或包裹物質。
術語“聚核苷酸”或“核酸”本文指mRNA、RNA、cRNA、cDNA或DNA。該術語通常指長度大于30個核苷酸的寡核苷酸。
“多肽”、“肽”和“蛋白”本文可互換使用，指氨基酸殘基的聚合物及其變體和合成的類似物。因此，這些術語應用于其中一個或多個氨基酸殘基是合成的非天然存在的氨基酸的聚合物，如相應的天然存在的氨基酸的化學類似物，也可應用于天然存在的氨基酸聚合物。
“啟動子”取其最廣泛的含義，包括標準的基因組基因的轉錄調控序列，包括準確起始轉錄所需的TATA盒，有或沒有CCAAT盒序列以及附加的調控元件(即，上游激活序列、增強子和沉默子)，這些附加的調控元件響應發育和/或環境刺激改變基因表達，或以組織或細胞類型特異性方式改變基因表達。啟動子通常，但不是必須，位于其調控表達的結構基因的上游或5′。此外，包含啟動子的調控元件通常位于基因轉錄起始位點2kb之內。根據本發明的優選啟動子可含有附加拷貝的一種或多種特定調控元件以進一步增強細胞中的表達，和/或改變其可操作性連接的結構基因的表達時間。
術語“純化的肽”指該肽基本上不含有衍生自其來源的細胞或組織的細胞物質或其它污染蛋白，或當化學合成時基本上不含有化學前體細胞或其它化學物質。“基本上不含有”指本發明的肽制劑至少10％是純的。在某些實施方式中，該肽制劑含有少于約30％、25％、20％、15％、10％，優選少于約5％(以干重計)的非肽蛋白質(本文也稱為“污染蛋白”)，或化學前體細胞或非肽化學品。本發明包括分離的或純化的干重至少0.01、0.1、1.0和10毫克的制劑術語“重組的聚核苷酸”本文用于指通過體外對核酸進行操作使之成為天然狀態下不存在形式的聚核苷酸。例如，重組聚核苷酸可以是表達載體的形式。一般，這些表達載體包括可操作性連接于核苷酸序列的轉錄和翻譯調控核酸。
“重組多肽”指用重組技術，即通過表達重組聚核苷酸而產生的多肽。
“報告分子”本說明書用于指由于其化學性質能提供可分析和鑒定的信號從而可檢測包含抗原結合分子及其靶抗原的復合物的分子。術語“報告分子”還包括利用在乳膠微珠上的細胞如紅血細胞的凝集或抑制其凝集等。
術語“序列相同性”本文用于指在一個比較窗口中，基于核苷酸-對-核苷酸或氨基酸-對-氨基酸的序列相同程度。因此，“序列相同百分數”是通過以下方法計算在一個比較窗口中比較兩個最佳比對的序列，確定在兩個序列中存在相同核酸堿基(例如，A、T、C、G、I)或相同氨基酸殘基(例如，Ala、Pro、Ser、Thr、Gly、Val、Leu、Ile、Phe、Tyr、Trp、Lys、Arg、His、Asp、Glu、Asn、Gln、Cys和Met)的位置的數目，以產生相匹配的位置數，用配對位置的數目除以比較窗口中位置的總數(即窗口大小)，然后將結果乘以100得到序列相同性百分數。用于本發明的目的，“序列相同性”應理解為采用DNASIS計算機程序(Version 2.5，用于windows；可購自Hitachi Softwareengineering Co.，Ltd.，South San Francisco，加利福尼亞，美國)軟件所附參考手冊中用的標準缺省值計算出的“匹配百分數”。
“相似性”指相同的或如下表B所定義的構成保守替代的氨基酸的百分數。可用序列比較程序如GAP(Deveraux等，1984，Nucleic Acid Research 12，387-395)來測定相似性。用這種方法，可用插入到比對中的缺口來比較長度相似或長度基本上不同的序列與本文所述的序列，例如可用GAP所用的比較算法來比較。
用于描述兩個或多個聚核苷酸或多肽之間序列關系的術語包括“參比序列”、“比較窗口”、“序列相同性”“序列相同性百分數”和“基本上相同”。“參比序列”長度為至少12個但很多情況下為15-18個常常為至少25個單體的單元，包括核苷酸和氨基酸殘基。因為兩個聚核苷酸可能各包含(1)在兩個聚核苷酸之間相似的序列(即，只有該完整聚核苷酸序列的一部分)和(2)在這兩個聚核苷酸之間不同的序列，通常通過“比較窗口”比較兩個聚核苷酸的序列以鑒定和比較序列相似性的局部區域，來進行兩個(或更多個)聚核苷酸之間的序列比較。“比較窗口”指概念上為至少6個通常約為50-100、更通常約為100-150個毗連位置的區段，其中將一個序列與相同毗連位置數目的參比序列在進行最佳比對后比較兩個序列。為了兩個序列的最佳比對，與參比序列(不包含添加或缺失)相比，比較窗口可包括約20％或更少的添加或缺失(即缺口)。比對比較窗口的最佳比對可用計算機執行的算法(Wisconsin Genetics SoftwarePackage Release 7.0中的GAP，BESTFIT，FASTA和TFASTA，Genetics ComputerGroup，575 Science Drive Madison，WI，美國)來進行，或通過觀察所選各種方法之一產生的最佳比對(即在比較出口中產生最高百分數的同源性)。還可參照BLAST一族的程序，如Altschul等，1997，Nucl.Acids Res.253389所公開的。序列分析的詳細描述見Ausubel等，“當代分子生物學方法”(″CurrentProtocols in Molecular Biology″)，John Wiley & Sons Inc，1994-1998，第15章，19.3單元。
“基本純化的細胞群”等是指細胞群中大于約80％，經常大于約90％，更經常大于約95％，通常大于約98％，更通常大于約99％的細胞是所選類型的抗原呈遞細胞。
術語“未經培養的”本文用于指已從動物體中取出的、經孵育或加工的細胞群(或單個細胞)，但孵育或加工的條件不造成細胞的體外增殖或擴增，或造成可忽略的細胞增殖或擴增(例如，細胞數目與孵育或加工開始時比較，增加少于約50％、40％、30％、20％、15％、10％、9％、8％、7％、6％、5％、4％、3％、2％、1％、0.5％、0.2％或0.1％)。在某些理想的實施方式中，細胞群(或單個細胞)在體外維持細胞的條件下孵育或加工。
“載體”指核酸分子，優選DNA分子，例如衍生自質粒、細菌噬菌體或植物病毒的DNA，核酸序列可插入或克隆到其中。載體優選含有一個或多個唯一的限制性位點，可在限定的宿主細胞(包括靶細胞或組織或其祖細胞或組織)中自主復制或者可整合到限定的宿主的基因組中從而克隆的序列可進行復制。因此，載體可以是自主復制載體，即，作為染色體外的實體存在的載體，其復制不依賴于染色體復制，例如，線形或閉合環形質粒，染色體外元件，小染色體或人造染色體。載體可含有確保其自身復制的任何元件。或者，載體可以是導入宿主細胞后整合到基因組中，與其整合的染色體一起復制。載體系統可包括一個載體或質粒，兩個或多個載體或質粒，它們共同含有將被導入宿主細胞基因組的總DNA，或轉座子。載體的選擇通常取決于載體與其要導入的宿主細胞的相容性。載體還可包括選擇標記如可用于選擇合適的轉化子的抗生素抗性基因。
2.免疫調節性重疊肽組本發明部分地根據以下發現，即離體與一組包含某感興趣病毒多肽抗原的重疊肽接觸的抗原呈遞細胞(本文也稱為重疊肽脈沖自體細胞，OPAL)在遠交系群中有效產生強烈的免疫應答反應，而不需事先知道抗原的表位。因為抗原呈遞細胞形成了循環系統的重要部分，提出這些重疊肽本身的全身性輸送將產生類似的保護作用。因此，本發明提供了一組用于調節對感興趣多肽免疫應答反應的廣義肽，組中各肽含有該感興趣多肽所對應氨基酸序列的不同部分，并且顯示與同組肽的至少一個其它肽有部分序列相同性或相似性。
部分序列相同性或相似性通常包含在各肽的一端或兩端。在一個實施方式中，在各肽的一端或兩端，有至少4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14，15，20，25，30，40，50個毗連的氨基酸殘基，其序列與所述至少一個其它肽中含有的氨基酸序列相同或相似。在另一個實施方式中，在各肽的一端或兩端，毗連的氨基酸殘基少于500、100、50、40、30個，其序列與所述至少一個其它肽中含有的氨基酸序列相同或相似。這種“序列重疊”有利于防止或減少感興趣多肽中含有的任何潛在表位的丟失。在本文所述的具體實施方式
中，該序列重疊是11個氨基酸殘基。
通常，當各肽具有部分序列相似性時，它們的序列常常有一個或多個保守和/或非保守氨基酸替代的差異。示范性的保守替代列于下表。
表A

保守或非保守替代可對應于感興趣多肽中的多態性。各種病原體和癌癥表達多態性多肽。例如，在特定個體中不同病毒株或分支或不同的癌癥表達多態性多肽。因此，當包括感興趣病原體的多態性區域時，一般需要采用額外的肽組來覆蓋多態位點中氨基酸殘基的變異。
本發明的肽可以是能用來誘發對感興趣多肽的免疫應答反應的任何合適大小的肽。很多因素可影響肽大小的選擇。例如，可選擇肽的大小使其包含或相應于CD4+T細胞表位、CD8+T細胞表位和/或B細胞表位的大小，以及符合其加工要求。本領域技術人員知道，I類限制性CD8+T細胞表位長度通常為8-10個氨基酸殘基，如果其鄰接于非天然的側翼殘基，這種表位一般需要2-3個天然側翼氨基酸殘基以確保它們可被有效加工和呈遞。II類限制性CD4+T細胞表位長度通常為12-25個氨基酸殘基，它們可能不需要天然的側翼殘基才能進行有效的蛋白裂解加工，雖然據信天然側翼殘基有某些作用。II類限制性表位的另一個重要特點是在其中部通常含有一個9-10個氨基酸殘基的核心，該核心特異性地與II類MHC分子結合，其兩端之一的側翼序列以不依賴于序列的方式與II類MHC抗原一端的保守結構結合而使表位結合穩定。因此，II類限制性表位的功能區域長度通常少于約15個氨基酸殘基。線形B細胞表位的大小和影響其加工的因素，如II類限制性表位一樣，可變性很大，雖然這些表位的大小常常小于15個氨基酸殘基。如上所述，肽的大小至少為6、7、8、9、10、11、12、13、14、15、20、25、30個氨基酸殘基是有利的但不是必須的。肽的大小合適不多于約500、200、100、80、60、50、40個氨基酸殘基。在一個實施方式中，肽的大小足以使T細胞和/或B細胞表位的丟失最小。在另一個實施方式中，肽的大小足以使肽中含有的T細胞和/或B細胞表位得到抗原呈遞細胞的呈遞。在該實施方式的一個實施例中，肽的大小約為15個氨基酸殘基。
感興趣多肽宜是疾病或病癥相關抗原，該抗原可選自個體產生的內源性抗原或對個體而言是外來的外源抗原。合適的外源性抗原包括但不限于，作為自身免疫應答靶子的自身抗原，以及癌癥或腫瘤抗原。可用于治療或預防自身免疫疾病的抗原的示范性例子包括但不限于，糖尿病，關節炎(包括類風濕性關節炎，少年類風濕性關節炎，骨關節炎，牛皮癬(psoriasic)關節炎)，多發性硬化，重癥肌無力，全身性紅斑狼瘡，自身免疫性甲狀腺炎，皮炎(包括異位性皮炎和濕疹性皮炎)，牛皮癬，Sj_gren氏綜合征，包括繼發Sj_gren氏綜合征的干性角膜結膜炎，斑禿，節肢動物叮咬反應引發的過敏反應，克羅恩病，潰瘍，虹膜炎，結膜炎，角(膜)結膜炎，潰瘍性結腸炎，哮喘，過敏性哮喘，皮膚紅斑狼瘡，硬皮病，陰道炎，直腸炎，藥物疹，麻風病逆轉反應，麻風結節性紅斑，自身免疫眼色素層炎，變應性腦脊髓炎，急性壞死出血性腦病，特發性雙側進行性感覺神經性耳聾，再生障礙性貧血，純紅細胞貧血，特發性血小板減少癥，多軟骨炎，韋格納(氏)肉芽腫病，慢性活動性肝炎，斯-約二氏綜合征，特發性口炎性腹瀉，扁平苔癬，格雷夫斯氏眼病，肉狀瘤病，原發性膽汁性肝硬變，后色素層炎，以及間質肺纖維化。其它自身抗原包括衍生自核小體的用于治療全身性紅斑狼瘡的抗原(例如，GenBank登錄號D28394；Bruggen等，1996，Ann.Med.Interne(巴黎)，147485-489)以及衍生自眼組織與O.volvulus抗原交叉反應的44,000Da肽成分的抗原(McKeclmie等，1993，Ann Trop.Med.Parasitol.87649-652)。因此，可用于本發明的組合物和方法中的示范性自身抗原包括但不限于以下的至少一部分，狼瘡自身抗原，Smith，Ro，La，U1-RNP，原纖蛋白(硬皮病)，胰腺β細胞抗原，GAD65(與糖尿病相關)，胰島素，髓磷脂堿蛋白，髓磷脂蛋白脂質蛋白質，組蛋白，PLP，膠原，6-磷酸葡萄糖異構酶，瓜氨酸化(citrullinated)蛋白和肽，甲狀腺抗原，甲狀腺球蛋白，促甲狀腺激素(TSH)受體，各種tRNA合成酶，乙酰膽堿受體(AchR)的組分，MOG，蛋白酶-3，髓過氧化酶，表皮鈣粘蛋白，乙酰膽堿受體，血小板抗原，核酸，核酸蛋白復合物，關節抗原，神經系統抗原，唾液腺蛋白，皮膚抗原，腎抗原，心抗原，肺抗原，眼抗原，紅血球抗原，肝抗原和胃抗原。
癌癥或腫瘤抗原的非限制性例子包括選自以下的癌癥或腫瘤的抗原ABL1原癌基因，愛滋相關癌癥，聽神經瘤，急性淋巴細胞性白血病，急性髓性白血病，囊性腺樣癌，腎上腺皮質癌，特發性骨髓外化生，脫毛癥，軟組織腺泡狀肉瘤，肛門癌，血管肉瘤，再生障礙性貧血，星形細胞瘤，共濟失調性毛細血管擴張癥，基底細胞癌(皮膚)，膀胱癌，骨癌，腸癌，腦干神經膠質瘤，腦和中樞神經系統腫瘤，乳腺癌，中樞神經系統腫瘤，類癌瘤，子宮頸癌，兒童期腦腫瘤，兒童期癌癥，兒童期白血病，兒童期軟組織肉瘤，軟骨肉瘤，絨毛膜癌，慢性淋巴細胞性白血病，慢性骨髓白細胞，結腸直腸癌，皮膚T細胞淋巴瘤，皮膚纖維肉瘤-突起，促結締(組)織增生-小-環-細胞瘤，導管癌，內分泌癌，子宮內膜癌，室管膜瘤，食管癌，尤因(氏)肉瘤，肝外膽管癌，眼癌，眼黑素瘤，視網膜成神經細胞瘤，輸卵管癌，先天性全血細胞減少癥，纖維肉瘤，膽囊癌，胃癌，胃腸癌，胃腸良性腫瘤，泌尿生殖器癌，生殖細胞腫瘤，妊娠性滋養層細胞病，神經膠質瘤，婦科癌癥，血液惡性腫瘤，毛細胞白血病，頭頸癌，肝細胞癌，遺傳性乳腺癌，組織細胞增多病s，何杰金氏病，人乳頭狀瘤病毒，葡萄胎，高鈣血，喉咽癌，眼內黑素瘤，胰島細胞癌，卡波濟(氏)肉瘤，腎癌，朗格罕氏-細胞-組織細胞增生癥，喉癌，平滑肌肉瘤，白血病，李弗勞明綜合征，唇癌，脂肉瘤，肝癌，肺癌，淋巴水腫，淋巴瘤，何杰金(氏)淋巴瘤，非何杰金(氏)淋巴瘤，男性乳腺癌，腎惡性棒狀腫瘤，成神經管細胞瘤，黑素瘤，默克爾細胞癌，間皮瘤，轉移癌，口癌，多發性內分泌腺瘤綜合征，蕈樣霉菌病，骨髓增生異常綜合征，骨髓瘤，骨髓增生病，鼻癌，鼻咽癌，骨髓增生病，成神經細胞瘤，多發性神經纖維瘤，Nijmegen染色體斷裂綜合征，非黑素瘤皮膚癌，非小細胞肺癌(NSCLC)，眼癌，食管癌，口腔癌，口咽癌，骨肉瘤，造痔術(Ostomy)卵巢癌，胰腺癌，鼻旁癌，甲狀旁腺癌，腮腺癌，陰莖癌，外周神經外胚層腫瘤，腦下垂體癌，真性紅細胞增多癥，前列腺癌，罕見癌及其相關疾病，腎細胞癌，視網膜成神經細胞瘤，橫紋肌肉瘤，先天性皮膚異色病(Rothmund-Thomson Syndrome)，唾液腺癌，肉瘤，神經鞘瘤，塞扎里(氏)綜合征，皮膚癌，小細胞肺癌(SCLC)，小腸癌，軟組織肉瘤，骨髓瘤，鱗狀細胞癌-(皮膚)，胃癌，滑膜肉瘤，睪丸癌，胸腺癌，甲狀腺癌，過渡細胞癌-(膀胱)，過渡細胞癌-(腎盂-/-輸尿管)，滋養細胞癌，尿道癌，泌尿系統癌，異地排尿，子宮肉瘤，子宮癌，陰道癌，外陰癌，瓦爾登斯特倫(氏)巨球蛋白血(癥)，維爾姆斯(氏)腫瘤。在某些實施方式中，癌癥或腫瘤涉及黑素瘤。黑素瘤相關抗原的示范性例子包括黑素細胞分化抗原(例如，gap100、MART、TRP-1、Tyros、TRP2、MC1R、MUC1F、MUC1R或其組合)和黑素瘤-特異性抗原(例如，BAGE、GAGE-1、gp100In4、MAGE-1(例如，GenBank登錄號X54156和AA494311)、MAGE-3、MAGE4、PRAME、TRP21N2、NYNSOla、NYNSOlb、LAGE1，p97黑素瘤抗原(例如，GenBank登錄號M12154)或其組合)。其它腫瘤特異性抗原包括與晚期癌癥相關的Ras肽和p53肽，與乳腺癌相關的MUC1-KLH抗原(例如，GenBank登錄號J03651)，與結腸直腸癌相關的CEA(癌胚抗原)(例如，GenBank登錄號X98311)，與前列腺癌相關的gap100(例如，GenBank登錄號S73003)和PSA抗原(例如，GenBank登錄號X14810)。p53基因序列是已知的(見例如，Harris等，1986 Mol.Cell.Biol.64650-4656)，其GenBank登錄號為M14694。
外來抗原宜選自移植抗原、變應原以及病原體的抗原。移植抗原可衍生自供體細胞或組織，例如心、肺、肝、胰腺、腎、神經組織移植組分或攜帶荷有自身抗原而沒有外源抗原的MHC的供體抗原呈遞細胞。
變應原的非限制性例子包括Feld1(即，家貓Felis domesticus的皮膚和唾液腺變應原，其氨基酸序列公開于國際出版物WO 91/06571)，Der pI，Der pII，Der fI或Der fII(即，房塵螨表皮螨屬的主要蛋白變應原，其氨基酸序列公開于國際出版物WO 94/24281)。其它變應原可衍生自，例如下列草、樹和雜草的花粉；真菌和霉菌；食物如魚、甲殼類動物、螃蟹、龍蝦，花生，堅果，小麥面粉，蛋和牛奶；螫刺的昆蟲如蜜蜂、黃蜂、大胡蜂和chirnomidae(不螫咬的蚊子)；其它昆蟲如家蠅、果蠅、羊麗蠅(sheep blow fly)，錐蠅(screw worm fly)，谷類象鼻蟲，蠶，蜜蜂，不螫咬的蚊幼蟲，蜜蜂的蛾幼蟲，粉(蛀)蟲，蟑螂和Tenibrio molitor甲蟲的幼蟲；蜘蛛和螨，包括房塵螨；在哺乳動物如貓、狗、牛、豬、羊、馬、兔子、大鼠、荷蘭豬、小鼠和沙鼠的皮屑、尿、唾液、血液或其它體液中發現的變應原；空氣散播的一般顆粒；橡膠；和蛋白去垢添加劑。
示范性病原體包括但不限于，病毒、細菌、真菌、藻類、原生動物和阿米巴變形蟲。病毒的示范性例子包括引起以下疾病的病毒，包括但不限于，麻疹、腮腺炎、風疹、骨髓灰質炎、甲肝、乙肝(例如，GenBank登錄號E02707)和丙肝(例如，GenBank登錄號E06890)，以及其它肝炎病毒、流感、腺病毒(例如4型和7型)、狂犬病(例如，GenBank登錄號M34678)、黃熱病、E-B病毒以及其它皰疹病毒如乳頭瘤病毒、埃博拉病毒、流感病毒、日本腦炎(例如，GenBank登錄號E07883)、骨痛熱(例如，GenBank登錄號M24444)、漢坦病毒、仙臺病毒、呼吸道合胞病毒、othromyxoviruses、水泡性口膜炎病毒、綿羊髓鞘脫落病毒、巨細胞病毒和人免疫缺陷病毒(HIV)(例如，GenBank登錄號U18552)。衍生自這些病毒的任何合適的抗原都可用于實施本發明。例如，衍生自HIV的逆轉錄病毒抗原包括但不限于，如gag、pol和env基因的產物，Nef蛋白，反轉錄酶以及其它HIV組分。肝炎病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如乙肝病毒的S、M和L蛋白抗原，乙肝病毒的前S抗原，以及其它肝炎，例如，甲肝、乙肝和丙肝的抗原，病毒組分如丙肝病毒RNA。流感病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如紅血球凝聚素和神經氨酸酶抗原(neurarninidase)以及其它流感病毒組分。麻疹病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如麻疹病毒融合蛋白抗原以及其它麻疹組分。風疹病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如蛋白E1和E2抗原以及其它風疹病毒組分；輪狀病毒(rotaviral)抗原如VP7sc和其它輪狀病毒組分。巨細胞病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如包膜糖蛋白B抗原和其它巨細胞病毒抗原組分。呼吸道合胞病毒抗原的非限制性例子包括如RSV融合蛋白、M2蛋白抗原和其它呼吸道合胞病毒抗原組分。單純皰疹病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如即刻早期(immediate early)蛋白、糖蛋白D抗原以及其它單純皰疹病毒抗原組分。
水痘帶狀皰疹病毒抗原的非限制性例子包括如9PI、gpII抗原以及其它水痘帶狀皰疹病毒抗原組分。日本腦炎病毒抗原的非限制性例子包括如蛋白E、M-E、M-E-NS1、NS1、NS1-NS2A、80％E抗原以及其它日本腦炎病毒抗原組分。狂犬病病毒抗原的示范性例子包括但不限于，如狂犬病糖蛋白、狂犬病核蛋白抗原以及其它狂犬病病毒抗原組分。乳頭瘤病毒抗原的示范性例子包括但不限于，L1和L2衣殼蛋白以及與子宮頸癌相關的E6/E7抗原，病毒抗原的其它例子見《基礎病毒學》(Fundamental Virology)，第二版，Fields，B.N.和Knipe，D.M.主編，1991，Raven Press，紐約。
真菌的示范性例子包括支頂孢屬(Acremonium spp.)，曲霉(Aspergillusspp.)，擔子菌團屬(Basidiobolus spp.)，雙極霉屬(Bipolaris spp.)，皮炎類芽生菌(Blastomyces dermatidis)，念珠菌屬(Candida spp.)、卡里翁氏分支孢子菌(Cladophialophora carrionii)、簇球孢子菌(Coccoidiodes immitis)、耳霉屬(Conidiobolus spp.)、隱球菌屬(Cryptococcus spp.)、彎孢(霉)屬(Curvulariaspp.)、表皮癬菌屬(Epidermophyton spp.)、Exophiala jeanselrraei、明臍菌屬(Exserohilum spp.)、緊密著色芽生菌(Fonsecaea compacta)、佩德羅索(氏)著色芽生菌(Fonsecaea pedrosoi)、鐮孢菌(霉)屬(Fusarium oxysporurn)、茄病鐮刀菌(Fusarium solani)、念珠地絲菌(Geotrichurra candidum)、夾膜組織胞漿菌(Histoplasma capsulatum)var.capsulatum、夾膜組織胞漿菌(Histoplasmacapsulatum)var.duboisii、Hortaea werneckii、Lacazia loboi、柯柯豆毛色二孢(Lasiodiplodia theobromae)、塞內加爾釣端球體(Leptosphaeriasenegalensis)、灰(色)馬杜拉分支菌(Madurellagrisea)、足菌腫馬杜拉分支菌(Madurellamycetomati)、糠秕馬拉色(氏)霉菌(Malassezia furfur)、小孢子菌屬(Microsporum spp.)、羅薩梯新龜甲形菌(Neotestudinarosatii)、Oitychocolacanadensis、巴西芽生菌(Paracoccidioides brasiliensis)、Plaialophora verrucosa、何德毛結節菌(Piedraia hortae)、Piedra iahortae、花斑癬(Pityriasis versicolor)、Pseudallesheria boydii、羅梅羅氏刺殼孢菌(Pyrenochaeta romeroi)、無根根霉菌(Rhizopus arrhizus)、短尾帚霉(Scopulariopsis brevicaulis)、Scytalidiumdimidiatum、申氏孢子絲菌(Sporothrix schenckii)、發癬菌(Trichophyton spp.)、毛孢子菌屬(Trichosporon spp.)、接合菌(Zygomcete fungi)、傘狀犁頭霉(Absidiacorymbifera)、微小根毛霉(Rhizomucor pusillus)和無根根霉菌(Rhizopusarrhizus)。因此，可用于本發明組合物和方法中的示范性真菌抗原包括但不限于，念珠菌屬真菌抗原組分；組織胞漿菌屬真菌抗原如熱激蛋白60(HSP60)以及其它組織胞漿菌屬真菌抗原組分；隱球菌(cryptococcal)真菌抗原如莢膜多糖以及其它隱球菌真菌抗原組分；球孢子菌真菌抗原如小球(spherule)抗原以及其它球孢子菌真菌抗原組分；以及癬真菌抗原如發癬菌素和其它球孢子菌真菌抗原組分。
細菌的示范性例子包括引起下列疾病的細菌，包括但不限于，白喉(例如，白喉棒狀桿菌)，百日咳(例如，百日咳桿菌，GenBank登錄號M35274)，破傷風(例如，破傷風梭狀芽胞桿菌，GenBank登錄號M64353)，結核病(例如，結核分支桿菌)，細菌性肺炎(例如，流感嗜血桿菌)，霍亂(例如，霍亂弧菌)，炭疽(例如，炭疽桿菌)，傷寒，鼠疫，志賀菌病(例如，志賀痢疾菌)，肉毒桿菌毒素(例如，肉毒梭狀芽胞桿菌)，沙門菌感染(例如，GenBank登錄號L03833)，消化性潰瘍(例如，幽門螺旋桿菌)，軍團病，萊姆病(例如，GenBank登錄號U59487)，氣體致病細菌包括大腸桿菌，產氣莢膜梭狀芽胞桿菌，綠膿假單胞菌，金黃色釀膿葡萄球菌和放線狀鏈球菌。因此，可用于本發明組合物和方法的細菌抗原包括但不限于百日咳細菌抗原如百日咳毒素，絲狀血凝素，百日咳桿菌黏附素(pertactin)，FM2，FIM3，腺苷酸環化酶和其它百日咳細菌抗原組分；白喉細菌抗原如白喉毒素或類毒素和其它白喉細菌抗原組分；破傷風細菌抗原如破傷風毒素或類毒素和其它破傷風細菌抗原組分，鏈球菌細菌抗原如M蛋白和其它鏈球菌細菌抗原組分；革蘭氏陰性桿菌細菌抗原如脂多糖和其它革蘭氏陰性細菌抗原組分；結核分支桿菌細菌抗原如霉菌酸，熱激蛋白65(HSP65)，30kDa的主要分泌蛋白，抗原85A和其它分支桿菌抗原組分；幽門螺旋桿菌細菌抗原組分，肺炎球菌細菌抗原如肺炎球菌溶素，肺炎球菌莢膜多糖和其它肺炎球菌細菌抗原組分；流感嗜血桿菌細菌抗原如莢膜多糖和其它流感嗜血桿菌細菌抗原組分；炭疽細菌抗原如炭疽保護性抗原和其它炭疽細菌抗原組分；立克次體細菌抗原如rompA和其它立克次體細菌抗原組分。本文所述的細菌抗原還包括任何其它細菌、分枝桿菌、支原體、立克次體或衣原體抗原。
原生動物的示范性例子包括引起下列疾病的原生動物，包括但不限于，瘧疾(例如，GenBank登錄號X53832)，鉤蟲，盤尾絲蟲病(例如，GenBank登錄號M27807)，血吸蟲病(例如，GenBank登錄號LOS 198)，弓形體病，錐蟲病，利什曼病，賈第蟲病(GenBank登錄號M33641)，阿米巴病，絲蟲病(例如，GenBank登錄號J03266)，包柔螺旋體病和旋毛蟲病。因此，可用于本發明的組合物和方法的原生動物抗原包括但不限于鐮狀瘧原蟲抗原如裂體性孢子表面抗原，子孢子表面抗原，環子孢子(circumsporozoite)抗原，配子母細胞/配子表面抗原，血液階段(blood-stage)抗原pf155/RESA和其它瘧原蟲抗原組分；弓形體抗原如SAG-1，p30和其它弓形體抗原組分；血吸蟲抗原如谷胱甘肽-S-轉移酶，副肌球蛋白，和其它血吸蟲抗原組分；利什曼原蟲主要的和其它的利什曼原蟲抗原如gp63，脂磷(酸)聚糖及其相關蛋白和其它利什曼原蟲抗原組分；和克氏錐蟲抗原如75-77kDa抗原，56kDa抗原和其它錐蟲抗原成分。
本發明還考慮毒素組分作為抗原。毒素的示范性例子包括但不限于，葡萄球菌腸毒素(staphylococcal enterotoxins)、中毒性休克綜合征毒素；逆轉錄病毒抗原(例如，衍生自HIV的抗原)，鏈球菌抗原，葡萄球菌腸毒素A(SEA)，葡萄球菌腸毒素B(SEB)，葡萄球菌腸毒素1-3(SE1-3)，葡萄球菌腸毒素D(SED)，葡萄球菌腸毒素E(SEE)以及衍生自支原體、分枝桿菌和皰疹病毒的毒素。
在本發明的一個實施例中，各肽的大小約為14或15個氨基酸殘基，在各肽一端或兩端的序列重疊約為11個氨基酸殘基。然而，可以理解的是，本發明也考慮其它合適大小的肽和序列重疊，本領域技術人員不難確定這些大小。
用感興趣多肽的完整序列來產生重疊肽組是有利的但不是必須的。通常，用相應于感興趣多肽的至少30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％的序列來產生本發明的重疊肽。然而，可理解的是，對用于產生重疊肽的感興趣多肽的序列信息知道越多，重疊肽作為免疫原對遠交系群的覆蓋率越高。不宜排除感興趣多肽的任何序列信息(例如，因為明顯缺少免疫表位，因為更為罕見或亞顯性(subdominant)表位因疏忽而遺漏)。如果需要，可在重疊肽組的構建中將感興趣多肽中的高變異序列排除，或構建和給予另外的肽組覆蓋多態性區域。肽序列可包括并非衍生自感興趣多肽的其它序列。這些添加的序列可具有各種功能，包括提高溶解度、穩定性或免疫原性或有利于純化。通常，各肽的一端或兩端包含這些添加的序列。
本領域技術人員將理解，當制備本發明的一組重疊肽時，利用病原體產生的或癌癥表達的多種不同的多肽的序列信息可能是有利的。因此，在某些實施方式中，使用了至少2、3、4、5、6、7、9、10、15、20個其它肽組來產生本發明的免疫調節組合物，其中各其它肽組的序列衍生自不同的感興趣多肽，各肽組的各肽顯示與相應肽組的至少一個其它的肽具有部分序列相同性或相似性。在這一方面，在諸肽組的構建中宜采用盡可能多的來自或有關聯的特定來源的多肽。在相應的重疊肽組的構建中，宜采用該來源表達的多肽的至少約30％、40％、50％、60％、70％、80％90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％，最好是100％。可用于該構建的示范性病毒多肽包括但不限于，潛在的(latent)多肽、調控性多肽或在病毒復制周期的早期表達的多肽。原生動物、細菌、支原體、真菌或蠕蟲多肽宜包括但不限于，分泌性多肽、調控性多肽和在這些生物表面表達的多肽。癌癥或腫瘤表達的可用于構建重疊肽組的多肽是合適的癌癥特異性多肽。
用于調節對猴免疫缺陷病毒(SIV)和/或嵌合性SIV-HIV-1(SHIV)(兩者都是已知適合用于人致病性HIV-1病毒的模型)的免疫應答的代表性重疊肽組可基于選自例如表1-4所示的SIV gag、pol、nef或SHIV env的一種或多種多肽。用于調節對HIV-1的免疫應答的示范性重疊肽組可基于選自例如表5-12所示的HIV Gag、Nef、Pol、Rev、Tat、Vif、Vpr和Vpu的一種或多種多肽。用于調節對HCV 1a的免疫應答的示范性重疊肽組可基于例如表13所示的HCV 1aH77多聚蛋白序列。用于調節對HBV基因型A的免疫應答的示范性重疊肽組可基于例如表14所示的該基因型表達的所有蛋白，以及基因型B/C/D表達的蛋白的某些部分，它們相對基因型A有顯著的變異。
可用本領域技術人員已知的任何合適的方法來制備本發明的重疊肽組。例如，可用如Atherton和Shephard，第9章(1989，固相肽合成一種實用方法.IRLPress，牛津)和Roberge等(1995，Science 269202)所述的溶液合成或固相合成來方便地合成這些肽組。合成可用，例如，叔丁氧羰基(t-butyloxycarbonyl)(t-Boc)或9-芴甲氧羰基(9-fluorenylmethyloxycarbonyl)(Fmoc)化的化合物(見Coligan等，當代蛋白質科學方法(CURRENT PROTOCOLS IN PROTEIN SCIENCE)，9.1章，John Wiley & Sons，Inc.1995-1997；Stewart和Young，1984，固相肽合成，第二版，Pierce Chemical Co.，Rockford，Ill；以及Atherton和Shephard，見上)。在具體實施方式
中，將各肽以高濃度(1毫克肽/10-30微升DMSO)溶解在DMSO(例如，100％純DMSO)中，從而在對細胞脈沖時，該大肽池不含有過量的DMSO。在一些優選實施方式中，將本發明的一個或多個溶解形式的肽組置于一個容器中(例如，可立即用于重新灌注的輸血管或小瓶)以便于將其給予對象，本發明也考慮這些容器。
或者，各肽可用下述方法制備，所述方法包括步驟(a)制備合成的構建物，該構建物包括編碼重疊肽組的各肽的合成的聚核苷酸，其中合成的聚核苷酸可操作性連接于調控性聚核苷酸；(b)將該合成的構建物導入合適的宿主細胞；(c)培養該宿主細胞以表達合成的聚核苷酸；和(d)分離各肽。優選合成的構建物是表達載體的形式。例如，該表達載體可以是自主復制的、染色體外的載體，如質粒，或者是整合到宿主基因組中的載體。通常，調控聚核苷酸包括但不限于，啟動子序列，前導序列或信號序列，核糖體結合位點，轉錄起始和終止序列，翻譯起始和終止序列，以及增強子或激活子(activator)序列。本發明考慮本領域已知的組成型和誘導型啟動子。啟動子可以是天然存在的啟動子，或組合了一種以上啟動子元件的雜合啟動子。調控性聚核苷酸一般適合于用于表達的宿主細胞。本領域已知各種類型的合適的表達載體和合適的調控聚核苷酸可用于多種宿主細胞。在某些實施方式中，表達載體含有可選擇性標記基因以供選擇轉化的宿主細胞。選擇性基因是本領域熟知的，并且隨著所用的宿主細胞而不同。在其它實施方式中，表達載體還包含編碼融合伴侶的核酸序列，從而使各肽表達成為含該融合伴侶的融合蛋白。融合伴侶的主要優點是它們有助于融合多肽的鑒定和/或純化。
示范性融合伴侶包括但不限于，谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)，人IgG的Fc部分，麥芽糖結合蛋白(MBP)和六聚組氨酸(HIS6)，它們在親和層析分離融合蛋白時尤其有用。對于用親和層析來純化融合蛋白的目的，用于親和層析的相關基質分別是谷光苷肽-，直鏈淀粉-和鎳-或鈷偶聯的樹脂。很多此類基質以“試劑盒”形式提供，如可用于(HIS6)融合伴侶的QIAexpressTM系統(Qiagen)以及Pharmacia GST純化系統。在一個優選實施方式中，在商品化的載體pFLAGTM中表達重組聚核苷酸。這些融合伴侶也宜含有蛋白酶切割位點，例如Xa因子、凝血酶和內蛋白(蛋白質內含子)的切割位點，這些位點使得相關蛋白酶可部分消化本發明的融合多肽，從而釋放本發明的重組多肽。然后可用后續的層析分離將釋放的肽與融合伴侶分離。本發明的融合伴侶其范圍還包括“表位標簽”，它們常常是可獲得特異抗體的短肽序列。可容易地獲得其特異性單克隆抗體的表位標簽的熟知例子包括c-Myc、流感病毒、血球凝集素和FLAG標簽。
可用任何合適的技術來實現將合成的構建物導入宿主細胞的步驟，這些技術包括轉染和轉化，技術的選擇取決于所用的宿主細胞。本領域技術人員熟知這些方法。也可培養經合成的構建物轉化的宿主細胞來產生本發明的肽。蛋白表達的合適的條件將隨表達載體和宿主細胞的選擇而不同。本領域技術人員可通過常規試驗容易地確定這些。用于表達的合適的宿主細胞可以是原核的或真核的。一種用于表達本發明多肽的優選的宿主細胞是細菌。所用的細菌可以是大腸桿菌。或者，宿主細胞可以是昆蟲細胞，如SF9細胞，它可與桿狀病毒表達系統一起使用。
肽的氨基酸可以是任何非天然產生的或任何天然產生的氨基酸。非天然氨基酸以及肽合成衍生物的例子包括但不限于，采用4-氨基丁酸、6-氨基己酸、4-氨基3-羥基-5-苯基戊酸、4-氨基-3-羥基-6-甲基庚酸、叔丁基甘氨酸、正亮氨酸、正纈氨酸、苯基甘氨酸、鳥氨酸、肌氨酸、2-噻吩丙氨酸和/或氨基酸的D-異構體。表B列出本發明考慮的非天然氨基酸。
表B


本發明還考慮用常規的分子生物學技術修飾本發明的肽以改變其對蛋白水解降解的耐受性或優化其溶解性能或使其它們更適合作為免疫原性制劑。
3.抗原呈遞細胞的實施方式本發明還公開了以下發現，即已與第2節中所述重疊肽組接觸的抗原呈遞細胞是免疫應答的強力調節劑，對于誘發強免疫原性反應以預防或緩解感興趣疾病或病癥的癥狀尤其有用。因此，本發明提供產生抗原特異性抗原呈遞細胞的方法，包括將抗原呈遞細胞或其前體細胞與一組或多組上述廣義的肽接觸，接觸的時間和條件足以使諸肽或其加工形式被抗原呈遞細胞或其前體細胞呈遞；當采用前體細胞時，培養該前體細胞，培養的時間和條件足以使前體細胞分化成為抗原呈遞細胞。
與現有的教導相反，本發明人還出乎意料地發現，在將抗原呈遞細胞與抗原加入這些細胞的接受者中以有效調節對該抗原的免疫應答之前，不需要培養或活化純化的抗原呈遞細胞以增加其數目或效率。而是，本發明人發現，當與感興趣靶抗原所對應的抗原接觸后，未經歷活化條件的抗原呈遞細胞或其前體細胞足以在其接受者群體中有效調節對該靶抗原的免疫應答反應。因此，在另一方面，本發明提供產生抗原特異性抗原呈遞細胞的方法，包括將未經歷活化條件的未經培養的抗原呈遞細胞或其前體細胞與靶抗原所對應的的抗原接觸，接觸的時間和條件足夠抗原呈遞細胞或其前體細胞表達加工或修飾形式的該抗原。未經培養的抗原呈遞細胞的示范性例子包括全血、新鮮血液、或其組分如但不限于，外周血單個核細胞(PMBC)、全血的棕黃層組分、壓積的紅細胞、經輻射的血、樹突狀細胞、單核細胞、巨噬細胞、嗜中性粒細胞、淋巴細胞、自然殺傷細胞和自然殺傷T細胞。在具體實施方式
中，未經培養的抗原呈遞細胞群選自新鮮分離的血或PMBC。在其它實施方式中，未經培養的抗原呈遞細胞群是壞死的或凋亡的細胞群。因此，可將未經培養的細胞群與抗原接觸，然后使其進入壞死狀態，這導致細胞不可逆轉的損傷(例如，滲壓休克或暴露于化學毒品如戊二醛)，其中細胞的特征是線粒體和細胞質的明顯膨脹，然后是細胞破壞和自溶。或者，可將未經培養的細胞群與抗原接觸，然后使其進入凋亡狀態。可用本領域已知的各種方法體外或體內誘導表達或呈遞抗原的細胞使其凋亡，這些方法包括但不限于，病毒感染，紫外光照射，γ輻射，甾類，固定(例如戊二醛)，細胞因子或將營養供體細胞從細胞培養基中去除。時間過程的研究可確定對最佳誘導細胞群凋亡足夠的孵育時間。例如，用流感病毒感染的單核細胞在感染后6小時開始表達凋亡的早期標記。凋亡的特異性標記的例子包括膜聯蛋白V、TUNEL+細胞、DNA梯型和碘化丙錠的攝入。
根據本發明的這一方面，用于接觸細胞群的抗原不限于第2節中所述的重疊肽組，而是涵蓋任何生物學類型的抗原，包括，例如，簡單的中間代謝物，糖，脂，激素，以及大分子如復合糖，磷脂，核酸分子和蛋白質性質的分子。在示范性例子中，靶抗原所對應的的抗原選自全蛋白抗原、細胞物質(例如活的或滅活的癌細胞)，顆粒物質如但不限于細胞碎片、凋亡的細胞、脂聚集物如脂質體、膜運載體、微球、熱凝聚蛋白、病毒小體、病毒樣顆粒，以及完整的生物，包括例如細菌、分枝桿菌、病毒、真菌、原生動物或其部分。
如第2節所述，靶抗原可選自宿主產生的內源抗原或對該宿主為外來的外源抗原。在某些實施方式中，靶抗原所對應的的抗原是蛋白質性質的抗原。這些抗原可分離自天然來源或用本領域已知的重組技術制備。或者可如下制備粗制的抗原制劑分離用于調節免疫應答的細胞群或組織的樣品，裂解該樣品，或者將該樣品置于能導致形成凋亡細胞的條件下(例如，紫外線或γ射線照射，病毒感染，細胞因子或將營養細胞從細胞培養基去除，與過氧化氫或與藥物例如地塞米松、神經酰胺化學治療劑和抗激素制劑例如LuronTM或它莫西芬TM一起孵育)。然后裂解物或凋亡的細胞可用來作為粗制抗原的來源，采用其可溶形式或用于與抗原呈遞細胞接觸，如下詳述。
3.1抗原呈遞細胞的來源抗原呈遞細胞宜包括專職性(professional)和兼職性(facultative)抗原呈遞細胞。例如，專職性抗原呈遞細胞包括但不限于，巨噬細胞，單核細胞，髓系細胞，包括單核細胞性-粒細胞性-DC前體細胞，邊緣區域Kupffer細胞，小膠質細胞，T細胞，B細胞、朗格罕氏細胞和樹突狀細胞，包括指狀突樹突狀細胞和濾泡樹突狀細胞。兼職性抗原呈遞細胞的例子包括但不限于活化的T細胞，星形膠質細胞，濾泡細胞，內皮和成纖維細胞。在一個優選實施方式中，抗原呈遞細胞選自單核細胞，巨噬細胞，髓系細胞，樹突狀細胞或朗格罕氏細胞。
可用本領域技術人員已知的任何方法分離抗原呈遞細胞或其前體細胞。抗原呈遞細胞或其前體細胞的來源可視調節特定的免疫應答反應所需的抗原呈遞細胞而不同。在這種情況下，抗原呈遞細胞可選自樹突狀狀細胞，巨噬細胞，單核細胞和其它的骨髓系細胞。通常，抗原呈遞細胞的前體細胞可分離自任何組織，但最容易從血液、臍帶血或骨髓中分離(Sorg等，2001，Exp Hematol 291289-1294；Zheng等，2000，J Hematother Stern Cell Res 9453-464)。也可能從患病組織如活檢或關節穿刺后的類風濕性滑膜液組織或液體中獲得合適的前體細胞(Thomas等，1994，J lmmunol 1522613-2623；Thomas等，1994，J lmmunol1534016-4028)。其它例子包括但不限于，肝、脾、心、腎、腸和扁桃體(Lu等，1994，Transplantation 641808-1815；McIlroy等，2001，Blood 973470-3477；Vremec等，2000，J lmmunol 1642978-2986；Hart和Fabre，1981，J Exp Med 154(2)347-361；Hart和McKenzie，1988，J Exp Med 168(1)157-170；Pavli等，1990，Immunology 70(1)40-47)。
從組織直接分離的白細胞提供了抗原呈遞細胞前體細胞的主要來源。通常，只有在存在或不存在各種生長因子的情況下離體培養至少約6-9天，這些前體細胞才能分化成為抗原呈遞細胞。但是，在本發明的一些優選實施方式中，可將抗原呈遞細胞或其前體細胞(例如，以新鮮分離的血液或PMBC的形式)從個體簡單地分離，在存在抗原和優選存在一種或多種生長因子的條件下孵育以產生抗原特異性的有效引發對該抗原的免疫應答反應的抗原呈遞細胞，孵育的時間短得多，例如，少于約48、36、24、12、8、7、6、5、4、3或2小時或甚至少于約60、50、40、30、20、15、10、9、8、7、6、5、4、3或2分鐘。
在有些實施方式中，抗原呈遞細胞的前體細胞可從前體細胞的粗制混合物或從部分或基本上純化的前體細胞制劑中分化而來。可用密度梯度離心，例如去除嗜中性粒細胞和紅細胞(外周血單個核細胞或PBMC)的Ficoll Hypaque離心，或用氯化銨裂解紅細胞(白細胞或白血細胞)從血液或骨髓中方便地純化白細胞。很多抗原呈遞細胞的前體細胞作為非增殖性單核細胞存在于外周血中，宜通過在存在一種或多種特定細胞因子的條件下孵育這些前體細胞使其分化成為特異性抗原呈遞細胞，包括巨噬細胞和樹突狀細胞。
組織衍生的前體細胞如未組分的(unfractionated)淋巴結衍生的單個核細胞，組織樹突狀細胞或朗格罕氏細胞前體細胞通常用以下方法獲得粉碎組織(例如表皮基底層)，用膠原酶或分散酶消化，然后進行密度梯度離心，或根據其表達的細胞表面標記來選擇前體細胞。例如，朗格罕氏細胞前體細胞表達CD1分子以及HLA-DR，可根據此對其進行純化。
在有些實施方式中，抗原呈遞細胞的前體細胞是巨噬細胞的前體細胞。一般，這些前體細胞可獲自任何來源的單核細胞，并且可在培養基和巨噬細胞集落刺激因子(M-CSF)的存在下通過長時間培養分化成為巨噬細胞(Erickson-Miller等，1990，Int J Cell Cloning 8346-356；Metcalf和Burgess，1982，J Cell Physiol 111275-283)。
在其它實施方式中，抗原呈遞細胞的前體細胞是朗格罕氏細胞的前體細胞。通常，朗格罕氏細胞可在粒細胞/巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)、IL-4/TNFa和TGF的存在下從人單核細胞或CD34+骨髓前體細胞產生(Geissmann等，1998，J Exp Med 187961-966；Strobl等，1997，Blood 901425-1434 Strobl等，1997，Adv Exp Med Biol 417161-165；Strobl等，1996，J Immunol 1571499-1507)。
在有些實施方式中，抗原呈遞細胞的前體細胞是樹突狀細胞的前體細胞。幾種潛在的樹突狀細胞前體細胞可從外周血、臍帶血或骨髓獲得。這些細胞包括單核細胞、CD34+干細胞、粒細胞、CD33+CD11c+DC前體細胞和定型的髓系祖細胞(myeloid progenitors)，下面進行描述。
單核細胞。可通過使細胞群在組織培養基(例如，RPMI)和血清(例如，人或胎牛血清)中或無血清培養基中(Anton等，1998，Scarad J Immunol 47116-121.；Araki等，2001，Br J Haematol 114681-689；Mackensen等，2000，Int J Cancer86385-392；Nestle等，1998，Nat Med 4328-332；Romani等，1996，J ImmunolMeth 196137-151；Thurner等，1999，J Immunol Methods 2231-15)附著于塑料1-2小時來進行純化。單核細胞也可從外周血淘析(elutriate)獲得(Garderet等，2001，J Hematother Stem Cell Res 10553-567)。也可用免疫親和技術純化單核細胞，這些技術包括免疫磁性選擇、流式細胞計數分選或淘洗(Araki等，2001，見上；Battye和Shortman，1991，Curr.Opin.Immunol.3238-241)，用抗CD14抗體獲得CD14hi細胞。可體內應用各種細胞因子包括GM-CSF(Groopman等，1987，N Engl J Med 317593-598；Hill等，1995，J Leukoc Biol 58634-642)來增強循環性單核細胞的數目(和其產量)。在存在GM-CSF和IL-4時長時間孵育可使單核細胞分化為樹突狀細胞(Romani等，1994，J Exp Med 18083-93；Romani等，1996，見上)。聯用GM-CSF和IL-4，其中它們各自的濃度在約200-2000U/mL，更優選約500-1000U/mL，甚至更優選約800U/mL(GM-CSF)和1000U/mL(IL-4)，產生大量的未成熟樹突狀細胞，即捕獲抗原的吞噬性樹突狀細胞。促進單核細胞分化為捕獲抗原的吞噬性樹突狀細胞的其它細胞因子包括，例如，IL-13。
CD34+干細胞。也可在存在GM-CSF、TNFα±干細胞因子(SCF，c-kitL)或GM-CSF、IL-4 flt3L的條件下，從CD34+骨髓衍生的前體細胞產生樹突狀細胞(Bai等，2002，Int J Oncol 20247-53；Chen等，2001，Clin Immunol 98280-292；Loudovaris等，2001，J Hematother Stem Cell Res 10569-578)。可從骨髓吸出物或血中獲得CD34+細胞，并可用例如免疫磁性選擇或免疫柱來富集單核細胞(Davis等，1994，J Immunol Meth 175247-257)。可體內應用各種細胞因子來提高血中CD34+細胞的比例，這些細胞因子包括(最常用的)G-CSF，以及flt3L和造血生長因子(progenipoietin)(Fleming等，2001，Exp Hematol 29943-951；Pulendran等，2000，J Immunol 165566-572；Robinson等，2000，JHematother Stem Cell Res 9711-720)。
其它髓系祖細胞。在存在GM-CSF和IL-4/TNF的條件下，可用與產生CD34+細胞相似的方式從定型的早期髓系祖細胞來產生DC。這些骨髓前體細胞滲透到很多炎癥組織中，包括類風濕性關節炎滑膜液(Santiago-Schwarz等，2001，JImmunol 167(3)1758-68)。總的機體骨髓細胞包括循環性樹突狀細胞前體細胞和單核細胞的擴增可用某些細胞因子來實現，包括flt-3配基，粒細胞集落刺激因子(G-CSF)或造血生長因子(pro-GP)(Fleming等，2001，見上；Pulendran等，2000，見上；Robinson等，2000，見上)。將這些細胞因子給予人或其它哺乳動物幾天將會從外周血或或骨髓產生數目多得多的前體細胞用于體外操作。也可在GM-CSF、IL-4和TNFα存在的條件下從外周血嗜中性粒細胞前體細胞產生樹突狀細胞(Kelly等，2001，Cell Mol Biol(Noisy-le-grand)47(1)43-54；Oehler等，1998，J Exp Med.187(7)1019-28)。應注意，也可用類似的方法，從急性髓細胞樣白血病細胞產生樹突狀細胞(Oehler等，2000，Ann Hematol 79(7)355-62)組織DC前體細胞和APC前體細胞的其它來源。產生DC的其它方法來自，例如，IL-3+/-GM-CSF存在下的胸腺前體細胞，GM-CSF和膠原基質存在下的肝DC前體細胞。可用致癌基因例如(Paglia等，1993，J Exp Med 178(6)1893-901)所述的v-myc或myb(Banyer和Hapel，1999，J Leukoc Biol 66(2)217-223；Gonda等，1993，Blood 82(9)2813-2822)來產生轉化的或永生化的樹突狀細胞系。
循環的DC前體細胞。這些細胞已在人和小鼠的外周血中有描述。也可利用特殊的細胞表面標記來鑒定合適的樹突狀細胞的前體細胞。具體地，可通過表達CD11c和不表達或低表達CD14、CD19、CD56和CD3鑒定血中的各種樹突狀細胞群。(O′Doherty等，1994，Immunology 82487-493；O′Doherty等，1993，JExp Med 1781067-1078)。也可用細胞表面標記CD13和CD33來鑒別這些細胞(Thomas等，1993，J Immunol 151(12)6840-6852)。稱為漿細胞樣(plasmacytoid)樹突狀細胞前體的第二亞組缺少CD14，CD19，CD56和CD3，不表達CD11c，但表達CD123(IL-3R鏈)和HLA-DR(Farkas等，2001，Am J Pathol 159237-243；Grouard等，1997，J Exp Med 1851101-1111；Rissoan等，1999，Science 2831183-1186)。大多數的循環CD11c+樹突狀細胞前體細胞是HLA-DR+，但有些前體細胞可能是HLA-DR-。已明確證明外周血樹突狀細胞的前體細胞缺乏MHC II類表達(del Hoyo等，2002，Nature 4151043-1047)。
任選地，可在培養基中或在單核細胞條件培養基中孵育18-36小時，使上述的CD33+CD14-/1o或CD11c+HLA-DR+、譜系標記-陰性的樹突狀細胞前體細胞分化成為更成熟的抗原呈遞細胞(Thomas等，1993，J Immunol 151(12)6840-6852；Thomas和Lipsky，1994，J Immunol 1534016-4028；O′Doherty等，1993，見上)。或者，在外周血非T細胞或未純化的PBMC孵育之后，成熟的外周血樹突狀細胞的特征是低密度，因此可通過密度梯度離心包括甲泛葡胺和Nycodenz離心進行純化(Freudenthal和Steinman，1990，Proc Natl Acad Sci USA 877698-7702；Vremec and Shortman，1997，J Immunol 159565-573)，或者用特異性單克隆抗體如但不限于CMRF-44單克隆抗體進行純化，(Fearnley等，1999，Blood93，728-736；Vuckovic等，1998，Exp Hematol 261255-1264)。可根據細胞表面標記直接從外周血純化漿細胞樣樹突狀細胞，然后在IL-3存在下進行孵育(Grouard等，1997，見上；Rissoan等，1999，見上)。或者，可如上所述，通過密度梯度離心或CMRF-44選擇孵育的外周血細胞來獲得漿細胞樣DC。
一般，對于從任何前體細胞產生樹突狀細胞，當存在活化因子如單核細胞衍生的細胞因子、脂多糖和含有CpG重復基序的DNA、細胞因子如TNF-α、IL-6、IFN-α、IL-1β、壞死細胞、重粘附，完整的細菌、膜組分、RNA或多聚IC(polyIC)的條件下孵育時，未成熟的樹突狀細胞將被活化(Clark，2002，JLeukoc Biol 71388-400；Hacker等，2002，Immunology 105245-251；Kaisho和Akira，2002，Biochim Bioplays Acta 15891-13；Koski等，2001，Crit RevImmunol 21179-189)。
用于樹突狀細胞的分離、擴增和/或成熟的其它方法描述于，例如Takamizawa等(1997，J Immunol，158(5)2134-2142)，Thomas和Lipsky(1994，Immunol，153(9)4016-4028)，O′Doherty等(1994，Immunology，82(3)487-93)，Fearnley等(1997，Blood，89(10)3708-3716)，Weissman等(1995，Proc NatlAcad Sci USA，92(3)826-830)，Freudenthal和Steinman(1990，Proc Natl AcadSci U S A，87(19)7698-7702)，Romani等(1996，J lmmunol Methods，196(2)137-151)，Reddy等(1997，Blood，90(9)3640-3646)，Thurnher等(1997，Exp Hematol，25(3)232-237)，Caux等(1996，J Exp Med，184(2)695-706；1996，Blood，87(6)2376-85)，Luft等(1998，Exp Hematol，26(6)489-500；1998，Immunol，161(4)1947-1953)，Cella等，(1999，J Exp Med，189(5)821-829；1997，Nature，388(644)782-787；1996，J Exp Med，184(2)747-572)，Ahonen等(1999，Cell Immunol，197(1)62-72)以及Piemonti等(1999，J Immunol，162(11)6473-6481)。
在某些實施方式中，抗原呈遞細胞或其前體細胞是基本上純化的細胞群的形式。在其它實施方式中，抗原呈遞細胞或其前體細胞是異質細胞池。用于接觸抗原的基本上純化的或異質細胞群宜是如本文所述的培養的或未經培養的形式。在采用未經培養的抗原呈遞細胞群或其前體細胞群的某些優選實施方式中，可以短時間(例如，小于約5、10、15、20、20、40、50、60分鐘)孵育該細胞群，而不作進一步培養，將接觸的細胞群直接灌注到接受者中。這進一步縮短了加工時間，使得能在一次設置中或在一天中收獲自體的或同系基因型的(syngeneic)抗原呈遞細胞，用抗原處理這些細胞，將接觸過抗原的細胞灌注到患者中。
3.2抗原輸送到抗原呈遞細胞可用本領域技術人員已知的方法促進外源抗原輸送給抗原呈遞細胞。例如，已開發了幾種不同的策略用于將外源抗原輸送到抗原呈遞細胞尤其是樹突狀細胞的內源加工途徑。這些方法包括將抗原插入到pH敏感的脂質體中(Zhou和Huang，1994，Immunomethods，4229-235)，可溶性抗原胞飲攝入后滲透裂解的胞飲體(Moore等，1988，Cell，54777-785)，將抗原偶聯到強力的佐劑(Aichele等，1990，J.Exp.Med.，1711815-1820；Gao等，1991，J.Immunol.，1473268-3273；Schulz等，1991，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88991-993；Kuzu等，1993，Euro.J.Immunol.，231397-1400；和Jondal等，1996，Immunity 5295-302)以及抗原的凋亡細胞輸送(Albert等1998，Nature 39286-89；Albert等1998，Nature Med.41321-1324；和國際出版物WO 99/42564和WO 01/85207)。可將重組細菌(如大腸桿菌)或轉染的哺乳動物宿主細胞脈沖到樹突狀細胞上(分別作為顆粒抗原，或凋亡小體)用于抗原輸送。重組的嵌合病毒樣顆粒(VLP)也已作為運載體用于將外源性異種抗原輸送到樹突狀細胞系的MHC I類加工途徑(Bachmann等，1996，Eur.J.Immunol.，26(11)2595-2600)。在有些實施方式中，將溶解的抗原(例如溶解在DMSO中)與抗原呈遞細胞一起孵育。
或者，或此外，可將抗原連接于或結合于溶細胞素，促進肽轉移到本發明抗原呈遞細胞的胞質溶膠中以輸送到MHC I類途徑。示范性溶細胞素包括皂角甙化合物如含有皂角甙的免疫刺激復合物(ISCOM)(見例如，Cox和Coulter，1997，Vaccine 15(3)248-256和美國專利No.6,352,697)，磷脂酶(見，例如，Camilli等，1991，J.Exp.Med.173751-754)，成孔毒素(例如，α-毒素)，革蘭氏陽性細菌的天然溶細胞素，如李斯特菌溶血素O(LLO，例如，Mengaud等，1988，Infect.Immun.56766-772和Portnoy等，1992，Infect.Immun.602710-2717)，鏈球菌溶血素O(SLO，例如Palmer等，1998，Biochemistry 37(8)2378-2383)和產氣莢膜芽孢梭菌溶血素O(PFO，例如，Rossjohn等，Cell，89(5)685-692)。當抗原呈遞細胞是吞噬小體(phagosomal)時，宜采用酸活化的溶細胞素。例如，李斯特菌溶血素在中等酸性pH(吞噬小體中的pH條件)時顯示成孔能力更大，從而有助于將液泡(包括吞噬小體和內體)內容物輸送到細胞質中(見，例如，Portnoy等，Infect.Immun.1992，602710-2717)。
本領域技術人員可經驗性地確定用于與抗原呈遞細胞接觸的抗原的量。抗原呈遞細胞暴露于抗原的時間應該足夠這些細胞呈遞肽或其加工形式以調節T細胞。在某些優選實施方式中，抗原呈遞細胞在抗原存在時孵育時間少于約48，36，24，12，8，7，6，5，4，3或2小時，或甚至少于約60，50，40，30，20，15，10，9，8，7，6，5，4，3或2分鐘。可用脈沖追蹤方法確定細胞任選地加工和呈遞肽或其加工形式所需的時間和肽的劑量，在脈沖追蹤方法中，暴露于肽之后，有一個洗除期，然后暴露于讀出(read-out)系統，例如抗原反應性T細胞。一旦確定了細胞在其表面表達肽或其加工形式所需的最佳時間和劑量，可采用方法制備細胞和肽用于誘導免疫應答反應。
在這方面，本領域技術人員將認可，抗原呈遞細胞在其表面呈遞抗原所需的時間可能根據所用的抗原或抗原的形式、其劑量、所用的抗原呈遞細胞以及加載抗原的條件而不同。本領域技術人員可用常規方法確定這些參數。可通過體外檢測T細胞細胞毒活性或用抗原呈遞細胞作為CTL的靶來確定引發抗原呈遞細胞的效率。本發明也考慮本領域技術人員已知的可檢測抗原呈遞細胞暴露于一種或多種修飾的或未修飾的抗原之后其表面存在的抗原的其它方法。
通常，約0.1-20μg/mL抗原(例如肽抗原)至1百萬-1千萬抗原呈遞細胞適合于產生引發的抗原特異性抗原呈遞細胞。通常，將抗原呈遞細胞與抗原在37℃孵育約1-6小時，雖然也可以使抗原呈遞細胞暴露于抗原與一種或多種生長因子一段孵育時期。如上所述，本發明人已證明，可用短得多的孵育時間(例如，約5、10、15、20、30、40、50分鐘)和約10-20μg/mL濃度的抗原來實現抗原(如肽抗原)或其加工形式的成功呈遞。
如果需要，可將所有或部分抗原呈遞細胞冷凍在合適的冷藏保存溶液中，直到需要用這些細胞。例如，可將細胞稀釋在合適的培養基中，如用磷酸緩沖鹽水配的含有10％自身血清+10％二甲亞砜的培養基。在某些實施方式中，細胞以脫水形式保存。
4.淋巴細胞實施方式可用多種方法之一來獲得或制備本發明的抗原呈遞細胞以使其含有和/或表達一種或多種抗原，從而這些抗原或其加工形式被這些細胞呈遞以可能調節其它免疫細胞，包括T淋巴細胞和B淋巴細胞，特別是產生引發的對特定抗原或抗原組起反應的T淋巴細胞和B淋巴細胞。在某些實施方式中，所述抗原呈遞細胞可用于產生引發的對抗原或抗原組的T淋巴細胞。可用任何合適的方法來測定誘導淋巴細胞尤其是T淋巴細胞產生對特定抗原的免疫應答反應的效率，這些方法包括但不限于，用例如抗原特異性抗原呈遞細胞作為抗原特異性溶細胞性T淋巴細胞(CTL)的靶細胞來體外檢測T淋巴細胞的溶細胞活性；檢測抗原特異性T淋巴細胞的增殖(見，例如，Vollenweider和Groseurth，1992，J.Immunol.Meth.149133-135)，用例如ELISPOT試驗和ELISA試驗檢測對該抗原的B細胞應答反應；檢測詢問性(interrogating)細胞因子圖譜(cytokine profiles)；或通過測試皮膚對特定抗原的反應來檢測遲緩型超敏(DTH)反應(見，例如，Chang等(1993，Cancer Res.531043-1050)。本發明也考慮本領域技術人員已知的可檢測暴露于抗原后在抗原呈遞細胞表面上存在的抗原的其它方法。
因此，本發明還提供抗原特異性B或T淋巴細胞，尤其是T淋巴細胞，它們以抗原特異性方式對抗原的存在起反應。在有些實施方式中，通過使上述抗原呈遞細胞與T淋巴細胞群接觸來產生抗原特異性T淋巴細胞，所述T淋巴細胞群可從任何合適的來源獲得，如脾或扁桃腺/淋巴結但優選從外周血獲得。所用T淋巴細胞可以是粗制劑或部分純化或基本上純化的制劑，這些制劑宜用標準技術獲得，例如“免疫化學技術，G部分淋巴細胞的分離和鑒定”(″Immunochemical Techniques，Part GSeparation and Characterization ofLymphoid Cells″)(Meth.in Enzymol.108，Di Sabato等編，1984，科學出版社)中所述。這包括用綿羊紅血細胞形成花環，經過尼龍毛柱或塑料粘附以去除粘附細胞，用本領域已知的合適的單克隆抗體來進行免疫磁性試驗或流式細胞篩選。
使T淋巴細胞制劑與本發明的抗原呈遞細胞接觸一段時間，該時間足夠引發T淋巴細胞對那些抗原呈遞細胞呈遞的抗原的應答反應。這段時間優選至少約1天，多達約5天。
在有些實施方式中，在存在異質T淋巴細胞群以及本發明的一組肽的條件下培養抗原呈遞細胞群，所述異質T淋巴細胞群宜獲自外周血，所述本發明的一組肽對應于需要對其產生免疫應答反應的抗原。培養這些細胞，培養的時間和條件足以使這些肽或其加工形式被抗原呈遞細胞呈遞；這些抗原呈遞細胞從而引發T淋巴細胞亞群對該抗原的反應。
5.基于細胞的治療或預防可將第3節中所述的抗原呈遞細胞以及第4節中所述的淋巴細胞給予患者，可單獨給藥或組合給藥，來調節免疫應答反應，尤其是調節對一種或多種同源抗原(cognate antigens)的免疫應答反應。因此，這些細胞組合物可用于治療或預防上述的疾病或病癥。可用任何方法(例如注射)將本發明的細胞導入患者中，產生對某抗原或抗原組的所需的免疫應答反應。這些細胞可衍生自該患者(即，自體細胞)或衍生自與該患者MHC相配或不相配(即，同種異體)的個體或多個個體。通常，細胞來源于哪個患者，將其自體細胞注射回該患者。注射部位可以是皮下、腹膜內、肌肉內、真皮內、靜脈內或淋巴內。可將細胞給予已患疾病或病癥或易患疾病或病癥的患者，給予的細胞的數目足夠治療或預防或緩解該疾病或病癥的癥狀。注射入需要進行治療或預防的患者中的細胞數目，除其它因素外，可視抗原以及個體的大小等而變化。該數目可介于例如約103-1011之間，常常介于105-107個細胞(例如，以血液、PMBC或純化的樹突狀細胞或T淋巴細胞的形式)。這些細胞可一次或多次(2、3、4或5次給予)，細胞的數目和給予方式由治療醫師選擇。細胞應該在藥學上可接受的對細胞和個體沒有毒性的運載體中給予。這些運載體可以是培養這些細胞的培養基，或任何合適的緩沖培養基如磷酸緩沖鹽水。這些細胞可單獨給予或作為輔助治療與其它本領域已知的用于治療或預防不良免疫應答的其它療法聯合給藥，其它療法包括但不限于，糖皮質激素、氨甲喋呤、D-青霉胺、羥氯喹、金鹽、柳氮磺吡啶、TNF-α或白介素-1抑制劑，和/或其它形式的特異性免疫療法。
6.組合物第2節中所述的重疊肽組和第3節中所述的抗原引發的抗原呈遞細胞或第4節中所述的淋巴細胞(治療性/或預防性制劑)可單獨使用或作為活性成分一起使用，來治療或預防與一種或多種靶多肽抗原的存在相關的各種病癥。這些治療性/或預防性制劑可單獨給予患者，或在組合物中給予患者，在組合物中它們與合適的藥學上可接受的運載體和/或稀釋劑或佐劑混合。
本發明還涵蓋通過給予患者上述治療性制劑或組合物來刺激患者免疫系統的方法，優選誘發對感興趣多肽的體液和/或細胞免疫應答反應。可用這些刺激來治療和/預防疾病或病癥，包括但不限于，病原體感染(例如，病毒、細菌、真菌、原生動物)或癌癥。因此，本發明考慮治療和/或預防疾病或病癥的方法，包括給予需要該治療的患者治療/預防有效量的上述治療性制劑或組合物。
根據所治療的具體病癥，配制治療性/預防性制劑，全身性或局部給藥。配制和給藥的技術可見“雷明頓藥物科學”(″Remington′s PharmaceuticalSciences，″)，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，最新版。合適的途徑可包括，例如，口服、直腸、透粘膜或腸內給藥；腸胃外輸送，包括肌肉內、皮下、髓內注射，以及鞘內、直接心室內、靜脈內、腹膜內、鼻內或眼內注射。對于構成本發明一種理想的實施方式的注射來講，可將本發明的治療性制劑配方成液體溶液，優選用生理相容的緩沖液如Hanks氏溶液，林格氏溶液，或生理鹽水緩沖液配制。對于透粘膜給藥，在制劑中使用能穿透粘膜屏障的合適的通透劑。這些通透劑是本領域通常所知的。肌肉內和皮下注射適合，例如給予免疫原性組合物、疫苗和DNA疫苗。在本發明某些實施方式中，靜脈內注射給予免疫原性組合物。
可用本領域熟知的藥學上可接受的運載體容易地將治療性/預防性制劑配制成適于口服給藥的劑量。這些運載體可將本發明的組合物配制成例如片劑、丸劑、膠囊、液體、凝膠、糖漿、膏劑、懸液等劑型，用于待治療的患者口服。這些載體可選自糖、淀粉、纖維素及其衍生物、麥芽糖、明膠、滑石、硫酸鈣、植物油、合成油、多元醇、褐藻酸、磷酸鹽緩沖溶液、乳化劑、等滲鹽水，以及無熱原的水。
適用于本發明的藥物組合物包括含有有效量的可實現其預期目的的活性成分的組合物。給予患者的制劑的劑量應在一定時間內足夠在患者中產生有益的反應，如減輕該疾病相關癥狀。給予的治療性/預防性制劑的量可取決于待治療的對象，包括其年齡、性別、體重和總體健康狀況。在這方面，給予的治療性/預防性制劑的準確劑量將取決于醫師的判斷。在確定治療或預防病癥時給予的制劑的有效量時，醫師可評估靶抗原的組織含量和疾病或病癥的進展。在任何情況下，本領域技術人員將不難確定本發明的治療性制劑的合適劑量。
用于腸胃外給予的藥物制劑包括水溶性形式的活性化合物的水溶液。此外，可將活性化合物的懸浮液制備為合適的油性注射懸浮液。合適的親脂溶劑或運載體包括脂肪油如芝麻油，或合成的脂肪酸脂，如油酸乙酯或甘油三酯，或脂質體。水性注射懸浮液可包含增加懸浮液粘性的物質，如羧甲基纖維素鈉、山梨醇或葡聚糖。任選地，懸浮液還可包含合適的穩定劑或增加化合物溶解度的物質以允許制備高濃度的溶液。
可用以下方法獲得口服藥物制品將活性化合物與固體賦形劑混合，任選地碾碎產生的混合物并處理顆粒混合物，加入合適的輔助物后(如果需要)，獲得片劑或糖衣片的芯。合適的賦形劑具體是，填充劑如糖，包括乳糖、蔗糖、甘露醇或山梨醇；纖維素制品如玉米淀粉、小麥淀粉、水稻淀粉、土豆淀粉、明膠、黃蓍膠、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、羧甲基纖維素鈉，和/或聚乙烯吡咯烷酮(PVP)。如果需要，可加入崩解劑，如交聯的聚乙烯吡咯烷酮，瓊脂或褐藻酸或其鹽，如海藻酸鈉。可用制藥學中的任何方法制備這些組合物，但所有方法都包括這一步驟，即將一種或多種上述治療性制劑與構成一種或多種必要成分的運載體組合。通常，可用已知的方法，例如，通過常規的混合、溶解、成粒、制成糖衣片(dragee-making)、研磨(levigating)、乳化、膠囊化、捕集(entrapping)或凍干過程來制備本發明的藥物組合物。
給糖衣片芯提供合適的包衣。為此目的，可用濃縮的糖溶液，該溶液任選地包含阿拉伯糖、滑石、聚乙烯吡咯烷酮、聚羧乙烯膠、聚乙二醇，和/或二氧化鈦、漆(lacquer)溶液，和合適的有機溶劑或溶劑混合物。可在片劑或糖衣片包衣中加入顏料或色素以辨認或鑒別活性化合物劑量的不同組合。
可口服應用的藥物包括明膠做的壓合式(push-fit)膠囊，以及明膠和增塑劑如甘油或山梨醇做的軟密封膠囊。壓合式膠囊可包含與填充劑如乳糖，粘合劑如淀粉，和/或潤滑劑如滑石或硬脂酸鎂和任選的穩定劑混合的活性成分。在軟膠囊中，活性化合物可溶解或懸浮在合適的液體中，如脂肪油、液狀石蠟或液體聚乙二醇。此外，可加入穩定劑。
本發明治療性制劑的劑型還可包括專門設計用于此目的的注射或植入控釋裝置，或其它形式的以該方式提供附加作用的經修飾的植入體。可用例如疏水聚合物包括丙烯酸樹脂、蠟、高級脂肪醇、聚乳酸、聚乙醇酸和某些纖維素衍生物如羥丙基甲基纖維素來包被本發明的制劑，實現本發明制劑的控釋。此外，可用其它聚合物基質、脂質體和/或微球來實現控釋。
本發明的治療性制劑可以藥學上相容的抗衡離子(counterions)的鹽的形式提供。藥學上相容的鹽可以用很多酸形成，包括但不限于，鹽酸、硫酸、乙酸、乳酸、酒石酸、蘋果酸、琥珀酸等。鹽在水性或其它相應的游離堿形式的質子溶劑中更易溶解。
對于本發明方法中所用的任何化合物，最初可由細胞培養試驗來評估其有效劑量。例如，配制的劑量在動物模型中所達到的循環濃度范圍包括在細胞培養中測定的IC50(例如被測制劑的濃度達到靶抗原的最大降低的一半)。可利用這些信息更準確地確定人用劑量。
可在細胞培養物或實驗動物中用標準的藥學方法，例如測定LD50(50％細胞群致死的劑量)和ED50(對50％細胞群治療有效的劑量)，來測定本發明化合物的毒性和治療功效。毒性和治療效果的劑量比是治療指數，可表示為ED50/LD50之比。優選治療指數大的化合物。從這些細胞培養試驗和動物研究中獲得的數據可用于形成人用劑量范圍。這些化合物的劑量優選在循環濃度(包括ED50和很少或沒有毒性)的范圍內。該劑量可取決于所用劑型和給藥途徑而在該范圍內變動。患者的醫師可視患者的情況來選擇確切的劑型、給藥途徑和劑量。(見，例如，Fingl等，1975，“治療的藥理學基礎”(“ThePharmacological Basis of Therapeutics”)，第1章第1頁)。
可單獨地調整劑量和間隔時間以使活性化合物的血漿水平足以維持減少靶抗原的效果或緩解疾病或病癥的效果。對于全身性給藥，患者劑量范圍常常為1-2000毫克/天，一般為1-250毫克/天，通常為10-150毫克/天。對于患者體重而言，劑量范圍常常為0.02-25毫克/千克/天，一般為0.02-3毫克/千克/天，通常為0.2-1.5毫克/千克/天。對于患者體表面積而言，劑量范圍常常為0.5-1200毫克/平方米/天，一般為0.5-150毫克/平方米/天，通常為5-100毫克/平方米/天。
或者，可局部給予制劑而非以全身性給予的方式，例如通過將化合物直接注射入組織，常常以緩釋(depot)或持釋(sustained release)劑型的形式。此外，可在定向藥物輸遞系統中給予制劑，例如，在用組織特異性抗體包被的脂質體中。脂質體將被靶向于該組織并被選擇性吸收。
從上述可以理解，本發明的制劑可用作治療性或預防性免疫調節組合物或疫苗。因此，本發明包括含有作為活性化合物的本發明一種或多種治療性/預防性制劑的免疫調節組合物的生產。考慮可用任何合適的方法來生產這些疫苗。示范性方法包括，例如，新一代疫苗(NEW GENERATION VACCINES)(1997，Levine等，Marcel Dekker，Inc.New York，Basel Hong Kong)中所述的方法。
本發明的免疫調節組合物可含有生理上可接受的稀釋劑或賦形劑如水、磷酸鹽緩沖鹽水和鹽水。它們還可包含本領域所熟知佐劑。合適的佐劑包括但不限于表面活性物質，如十六烷基胺、十八烷基胺、十八烷基氨基酸酯、溶血卵磷脂、溴化二甲基雙十八烷基、N，N-二椰油癸基(dicoctadecyl)-N’，N’雙(2-羥乙基-丙烷二胺)，甲氧基十六烷基丙三醇，以及復合多元醇；聚胺如吡喃、硫酸葡聚糖、聚IC聚羥乙烯；肽如胞壁酰二肽及衍生物、二甲基甘氨酸、吞噬刺激肽(tuftsin)；油乳膠；和礦物膠如磷酸鋁、氫氧化鋁或明礬；淋巴因子，QuilA和免疫刺激復合物(ISCOMS)。
本發明抗原引發的抗原呈遞細胞和由這些抗原呈遞細胞產生的抗原特異性T淋巴細胞，如上所述，可在免疫調節組合物中作為活性化合物，用于預防性或治療性應用。在有些實施方式中，本發明抗原引發的抗原呈遞細胞可用于產生大量的CD8+或CD4+CTL，過繼性轉移給免疫抑制的不能產生正常免疫應答反應的個體。例如，可將抗原特異性CD8+CTL過繼性轉移來治療罹患HIV感染(Koup等，1991，J.Exp.Med.，1741593-1600；Carmichael等，1993，J.Exp.Med.，177249-256；以及Johnson等，1992，J.Exp.Med.，175961-971)，瘧疾(Hill等，1992，Nature，360434-439)和惡性腫瘤例如黑素瘤(Van der Brogen等，1991，Science，2541643-1647；以及Young和Steinman，1990，J.Exp.Med.，1711315-1332)的個體。
在其它實施方式中，本發明的免疫調節組合物適于治療或預防癌癥。可根據本發明的實施而進行合適治療的癌癥包括與病毒感染相關的癌癥如子宮頸癌(例如乳頭瘤病毒感染)和Burkitt氏淋巴瘤(例如Epstein Barr病毒感染)。其它病毒相關癌癥包括但不限于，HTLV1相關的白血病，非何杰金淋巴瘤(EBV)，肛門癌，皮膚癌(HPV)，肝細胞癌(HBV)和卡波濟氏肉瘤(HHV8)。或者，癌癥可以是非病毒相關的癌癥如但不限于，黑素瘤，肺癌，乳腺癌，前列腺癌，結腸癌胰腺癌，胃癌，膀胱癌，腎癌，移植后淋巴增生疾病(PTLD)，何杰金氏淋巴瘤等。
在另外一個實施方式中，免疫調節組合物適于治療或預防病毒、細菌或原生動物感染。本發明考慮的病毒感染包括但不限于，HIV，肝炎病毒，流感病毒，日本腦炎病毒，Epstein-Barr病毒和呼吸道合胞病毒引起的感染。細菌感染包括但不限于，奈瑟菌屬，腦膜炎球菌屬，嗜血桿菌屬，沙門氏菌屬，鏈狀球菌屬，軍團桿菌屬和分枝桿菌屬引起的感染。本發明涵蓋的原生動物感染包括但不限于，變形蟲屬(例如，瘧疾)，血吸蟲屬(例如，血吸蟲病)，利什曼原蟲屬，錐蟲屬，弓形體屬和賈第蟲屬引起的感染。
7.評價免疫調節的方法可用任何合適的技術評價免疫接種的效率。個體產生對外來抗原或疾病特異性抗原(例如，病毒抗原和癌癥抗原)應答反應的能力，可通過評價被引發而攻擊這些抗原的細胞數目、活性以及識別和摧毀這些抗原的能力是否提高來測定。免疫應答的強度用標準試驗來檢測，包括用本領域已知的方法直接檢測外周血淋巴細胞；自然殺傷細胞細胞毒性試驗(見，例如，Provinciali M.等(1992，J.Immunol.Meth.15519-24)，細胞增殖試驗(見，例如，Vollenweider，I.和Groseurth，P.J.(1992，J.Immunol.Meth.149133-135)，免疫細胞和其亞組的免疫試驗(見，例如，Loeffler，D.A.，等(1992，Cytom.13169-174)；Rivoltini，L.，等(1992，Can.Immunol.Immunother.34241-251)；或細胞介導的免疫的皮膚試驗(見，例如，Chang，A.E.等(1993，Cancer Res.531043-1050)。或者，可用一種或多種技術來監測免疫接種的效力，這些技術包括但不限于，HLA I類四聚體染色-新鮮的和激活的PBMC(見例如Allen等，見上)，增殖試驗(Allen等，見上)，ELISPOT試驗和細胞內細胞因子染色(Allen等，見上)，ELISA試驗-用于線性B細胞表位應答；以及細胞樣品中表達的合成聚核苷酸的Western印跡。特別相關的檢測是抗原活化T細胞的細胞因子圖譜，具體說是IFNγ，IL-2，IL4，IL5，IL-10，TGFβ和TNFα的產生和分泌。
可用本領域技術人員已知的任何合適的技術來評價T淋巴細胞的細胞毒活性，特別是受抗原呈遞細胞誘導的細胞毒性T淋巴細胞的殺傷能力。例如，獲得含有待檢測細胞毒活性的T淋巴細胞的樣品，然后使T淋巴細胞暴露于抗原引發的抗原呈遞細胞，引起抗原呈遞細胞呈遞抗原。合適的時間之后(該時間可通過評價已知可被誘導成為細胞毒性細胞的對照T淋巴細胞群的細胞毒活性來確定)，在標準細胞毒試驗中檢測待評價的T淋巴細胞的細胞毒活性。
評價CTL活性的方法對于評估個體對表達腫瘤或病毒抗原的細胞產生細胞毒應答反應的能力尤其有用。因此，該方法可用于評估個體對癌癥或病毒產生免疫應答反應的能力。例如，CTL溶解試驗可采用激活的脾細胞或外周血單個核細胞(PBMC)對用51Cr標記的肽包被或重組病毒感染的靶細胞的殺傷來測試。這類試驗可用例如靈長類、小鼠或人細胞來進行(Allen等，2000，J.Immunol.164(9)4968-4978，以及Woodberry等，同上)。此外，可用圖1中所述的體內檢測方法檢測遠交系靈長類動物的CTL活性。在該方法中，自體細胞用任選的可檢測標記(例如，熒光、化學發光或磷光或可見標記或染色)來標記，使其與本文所述的一個或多個肽組接觸。選擇肽組使得它們對應于測試患者引起CTL應答反應的抗原。將自體細胞灌注到個體中，合適的時間(例如灌注后10分鐘至24小時)以允許該個體的免疫系統足以對這些自體細胞產生免疫應答反應之后，從個體中收獲淋巴細胞。然后分析收獲的淋巴細胞，鑒定含有或攜帶任選的可檢測標記的淋巴細胞數目或比例，從而提供該患者對此抗原的體內CTL應答反應的測量值。
為了使本發明容易理解并能產生實際效果，現在用以下非限制性實施例來描述特別優選的實施方式。
實施例實施例1體內細胞毒性T淋巴細胞的殺傷通過靶細胞釋放的放射性同位素51Cr來檢測病毒特異性CTL效應細胞的標準測量值，該試驗非常繁重并且靈敏度差。通過用大的SIV和SHIV重疊肽(OPAL)池脈沖顏料標記的獼猴自體PBMC，將這些細胞灌注回同一只動物中，本發明人能夠用流式細胞術動態顯示OPAL灌注后不同時間點血液樣品中的SHIV-特異性殺傷。
完成免疫接種(第10周)后2周，4只免疫動物中的3只在OPAL灌注后16小時顯示中度到高度的(11.4-76％)gag脈沖PBMC的殺傷，而對照免疫的猴顯示＜7％的gag特異性殺傷。一只免疫的動物，猴H20，在早至灌注后4小時即顯示強烈的gag特異性殺傷(27.3％)(圖2)。這些數據與用IFNγELISpot和ICS分析的該疫苗誘導的T細胞應答反應(數據未顯示)是一致的，表明OPAL可用于檢測DNA和FPV疫苗引發的有效的CTL效應細胞應答。
SHIV直腸內攻擊后不久(2周)，OPAL灌注后16小時4只免疫動物都顯示高度gag特異性殺傷(65-98.3％)，4只中的2只(猴H20和H21)還顯示＞99％的pol-特異性殺傷(圖3)。與對照免疫的動物比較，猴E20顯示＜6％的gag-和pol-脈沖PBMC的殺傷，而猴E22顯示對gag-和pol-脈沖PBMC的殺傷分別為＞90％和31.9％。令人感興趣的是，顯示中度至高度的pol-特異性殺傷的動物(猴H20、H21和H22)也是曾接受過2劑量的pol-脈沖PBMC(第10周和15周)灌注的動物，而猴B00、H8和E20以前只接受過一次pol-脈沖PBMC。這一觀察提示，OPAL灌注可能(a)加強了疫苗引發的pol特異性T細胞應答反應，而這些反應用IFNγELISpot和ICS時檢測很微弱或檢測不到(數據未顯示)；和(b)在SHIV攻擊后的原初動物中誘導了明顯的pol特異性免疫力。
實施例2灌注肽脈沖自體細胞而誘導的免疫原性的分析如果OPAL灌注可有效地檢測到體內CTL殺傷，那該方法可能能夠引發新的或加強已經存在的免疫應答反應，這似乎是合理的。因此，在每次OPAL灌注試驗之前和之后1周進行了IFNγELISpot和ICS試驗，來分析該疫苗或OPAL灌注方法本身是否能增強先前已引發的T細胞免疫原性(圖4)。
第10周進行OPAL灌注之后，在猴H20和H21中檢測到對SIV gag肽池反應的IFNγ-分泌細胞增加了3-16倍，檢測到高達430個斑點形成(spot-forming)細胞(圖5)。猴H8檢測到54％的增加，有215個斑點形成細胞，而在對照免疫的動物中未檢測到增加。因為該試驗的顯色問題，對于所有分析的抗原，都不包括對猴B00(OPA L灌注后)和E20(OPAL灌注前)的分析。在第10周接受pol脈沖細胞的4只動物中，猴H20、H21和E22顯示pol應答反應的增加，OPAL灌注后有多達140個斑點形成細胞，而在猴E20中未檢測到顯著的ELISpot應答反應。在OPAL灌注之前或之后，所有動物中都沒有明顯的nef特異性T細胞。這些結果提示，在先前已引發SIVgag/pol應答反應的動物中，用gag-和pol-肽脈沖后對T細胞免疫原性有增強作用，還表明在原初動物(猴E22)中引發了對SIVpol的免疫應答。
在第15周，完成免疫接種后8周，在6只動物中進行了第二次OPAL灌注試驗。ELISpot分析顯示對gag肽池反應的增強，在預先用DNA和FPV疫苗免疫的4只動物中，從OPAL灌注前約50或更少的斑點形成細胞升高到多達500個斑點形成細胞。在對照免疫的動物中，在試驗前和試驗后未檢測到gag特異性T細胞(圖6)。相比較，只在少數動物中檢測到pol特異性應答反應比基線水平略微增加(多達40個斑點形成細胞)。在所有預先免疫的動物中檢測到對WI SIV的應答反應大為增強(多達450個斑點形成細胞)，而對照免疫的動物顯示出輕度增強或不增強(多達50個斑點形成細胞)。所有動物中在OPAL灌注之前和之后，對SIV nef和SHIV env的應答反應都很微弱或檢測不到。
SHIV直腸內攻擊后，除猴E20之外的所有動物都顯示對gag應答反應的增強，檢測到50-600個斑點形成細胞。對WI SIV觀察到類似的反應，多達200個斑點形成細胞，而多于50個斑點形成細胞的pol應答反應只見于猴H20中。
通過與接受同樣免疫接種方案但不接受OPAL灌注的動物作比較來進一步驗證了OPAL灌注的免疫原性(圖7)。從第9周到第11周以及第15周到第18周，在組1(對照免疫的)和組2(2×DNA/FPV-免疫的)中未檢測到SIV gag，pol或WI SIV-特異性T細胞的增加。各組第20周到第21周的應答反應略有增加，歸因于第18周SHIV攻擊所增強的應答反應。
在獼猴上進行用肽脈沖全血灌注的實驗也證明了對以下3組肽(a)接受經SHIV-肽脈沖血液的猴對SHIV的幾個肽部分(圖9)，(b)接受經HCV-肽脈沖血液的猴對包含整個HCV基因組全長的2個HCV肽池(圖10)，和(c)接受經HIV-1抗性肽脈沖自體血液的猴對包含已知的HIV抗藥性突變的肽池(圖11)的CD4+和CD8+T細胞應答反應的增強。
實施例3SHIVmn229直腸內攻擊的結果以105TCID50的劑量完全免疫接種后10周，用高致病性SHIVmn229攻擊貯液直腸內接種所有獼猴。然后測定所有的對照-和2×DNA/FPV-免疫的動物(圖8)血漿SHIV RNA和計數CD4+細胞。
對照-免疫的猴E20和E22在攻擊后2周顯示7.8±0.7log10拷貝/毫升的峰值病毒負載。猴E20的峰值病毒負載可能在第1-2周之間已經出現，但這兩只猴的設定點(set-point)(攻擊后5-11后檢測)水平保持在5.9±0.3log10拷貝/毫升的高度。相反，在第2周，CD4+T細胞計數顯著降低至淋巴細胞總數的1.6±1.1％，設定點水平穩定在0.3±0.2％。接受同樣的免疫接種但不接受OPAL灌注(組1)的猴就峰值病毒負載和設定點病毒負載(8.2±0.1log10拷貝/毫升和6.2±0.3log10拷貝/毫升)以及CD4+計數(設點點為0.5±0.3％)而言只比猴E20和E22稍微差一點。根據可能歸因于分別做了2次OPAL灌注的pol特異性殺傷的增強，將猴H20和H21的SHIV病毒負載和CD4+T細胞計數與只接受1劑量pol-OPAL灌注的猴B00和H8比較。猴H20和H21(接受2次pol-OPAL灌注)的峰值病毒負載比猴B00和H8(5.9±1.3vs.7.1±0.4log10拷貝/毫升，P＝0.08)至少低10倍，設定點病毒負載顯示降低的趨勢(4.1±0.9vs.5.4±0.7log10拷貝/毫升，P＝0.08，斯氏t測驗)。附帶地說，猴H20和H21的設定點CD4+T細胞計數顯著高于猴B00和H8(18.9±6.1％vs.8.4％，P＝0.02)。雖然與接受同樣免疫接種但不接受OPAL灌注的組2動物比較沒有統計學顯著性(P＝0.12)，但接受多次pol-OPAL灌注的猴H20和H21顯示CD4+T細胞數保持穩定的趨勢，雖然病毒負載比較類似，暗示對病毒攻擊有保護力。組2的設定點CD4+T細胞計數和病毒負載分別為13.0±3.7％和4.8±0.2log10拷貝/毫升。
與對照-免疫的猴E20和E22比較，猴H20和H21的設定點病毒負載和CD4+T細胞計數都顯著不同(P＝0.01，P＝0.00)。另一方面，雖然猴B00和H8的設定點CD4+T細胞水平顯著低于猴E20和E22(P＝0.01)，但猴B00和H8的設定點病毒負載不明顯低于猴E20和E22(P＝0.37)。注意到從第5周之后，猴H20完全清除了血漿病毒RNA，并且CD4+T細胞數保持在正常水平。
實施例討論
HIV-1-特異性CD4+T-輔助(Th)和CD8+CTL應答反應在控制HIV-1復制中的重要作用是當前很多疫苗理論的關注點。灌注經大的SHIV15肽的重疊肽組(OPAL)脈沖的自體PBMC令人驚訝地具有免疫原性，如IFNγELISpot和ICS試驗所分析的，可加強SHIV特異性免疫應答應答反應。這一發現形成了本文所述新疫苗或免疫治療策略的潛在基礎。
肽脈沖的新鮮PBMC的免疫原性證據有五點(a)在所有接種疫苗的猴中，3次SIV gag OPAL灌注(第10、15和20周)的各次之后1周，觀察到SIV gag特異性IFNγELISpot應答反應增強。相反，在第10和15周，在同樣免疫的但未接受OPAL灌注的動物(組2)中，SIVgag應答反應顯著下降。(b)在第10和20周SIV pol灌注后1周免疫動物中觀察到SIV pol-特異性IFNγELISpot應答反應的增強。令人感興趣的是，只在SHIV攻擊(第10和15周)前接受多次SIV pol OPAL灌注的兩只動物猴H20和H21中觀察到這種現象，而在接受經SIV pol肽脈沖細胞的動物中第15周未觀察到。因為對DNA和FPV疫苗的pol-特異性T細胞應答反應只是輕度的，或ELISpot和ICS檢測不到的，所以這種現象特別令人感興趣。(c)接受先前SIV pol OPAL灌注的兩只猴中還觀察到高水平的SIV pol-特異性體內殺傷。(d)在接受多次SIV pol OPAL灌注的兩只免疫動物中，產生的高水平SIV pol-特異性IFNγ細胞內細胞因子應答反應進一步確證了免疫原性數據。(e)在接受多次OPAL灌注的動物中，傾向于產生更高的保護力來抵抗SHIV的攻擊。綜合在一起，這些結果提示，用重疊肽池離體脈沖自體PBMC是加強免疫應答反應的有效方法。此外，數據說明，肽脈沖的全血既可在接受SHIV-肽脈沖的全血的猴子激發對SHIV幾個組成部分的T細胞應答反應，又可從頭誘導對(a)接受HCV-肽脈沖的血液的猴對包含整個HCV基因組全長的2個HCV肽池，和(b)接受HIV-1抗性肽脈沖的自體血液的猴包含已知的HIV-1抗藥性突變的肽池的T細胞應答反應。
有大量的數據證明用確定的肽表位或完整抗原脈沖自體(autologous)或同系基因型(syngeneic)細胞可用于誘導(或交叉引發)免疫應答反應(22，23，27，34，35)。已經廣泛研究采用例如單一腫瘤抗原或滅活的全SIV脈沖的專化(specialised)抗原呈遞細胞如單核細胞衍生的樹突狀細胞，可用作免疫治療工具(36-39)。然而，據本發明人所知，這是用包含整個蛋白質(125個SIV gag 15肽或263個SIV pol 15肽)全長的大肽池和用離體短期培養的全部PBMC作為加強免疫應答反應方法的第一篇報道。
在一只對照免疫的動物，接受多次SIV pol(和SIV gag)脈沖PBMC灌注的猴22中，檢測到輕度誘導了SIV gag和SIV pol-特異性IFNγELISpot誘導反應。后來在第20周分析時，該動物產生了高水平的SIV gag-和pol-特異性殺傷，推測是由于SHIV攻擊導致的加強作用。因此，用OPAL灌注來引發免疫應答反應看來是可行的。如ICS評估的那樣，當用HCV或HIV-1抗藥性肽脈沖的全血有效誘導高水平的CD4+和CD8+T細胞應答反應時，這些數據得到了證實。這些數據還證明，用全血作為抗原呈遞細胞(APC)來源的可行性，這在本領域比用PBMC或其它更復雜的APC制品(如單核細胞衍生的樹突狀細胞)更加實用。
對OPAL技術的其它改進，如富集APC和/或樹突狀細胞(DC)(40)，可能會增強作為治療性疫苗的OPAL的免疫原性，因為從HIV-感染患者(41，42)和SIV-感染動物(40)的PBMC培養得到的DC可誘導強效的T細胞應答反應。或者，用全血而非PBMC組分作為輸遞OPAL的工具的前景必將有益于臨床安排，尤其是對HIV感染的人。另外，較小的全血樣品可能不需要高濃度的肽，因為1微克/毫升的肽在體外對用ICS進行的全血分析有效。還可想像，直接靜脈內灌注混合的肽將模擬OPAL免疫原性的效果。采用共有(consensus)的HIV-1分支(clade)gag和pol肽組提供了人用有效的治療性疫苗所需的表位寬度。用這種策略也可改進當前疫苗方法免疫原性微弱的調節病毒復制的抗原，如rev，tat，vpu，vif和vpr的免疫原性。此外，用血液或PBMC或其它未經培養的含有APC的組分直接作為APC來源的通用方法直接提示了可能在灌注前用其它來源的抗原(包括但不限于完整蛋白、DNA、活病毒載體疫苗或癌細胞制劑)脈沖這些APC群。據信，這些負載有抗原的細胞的APC群可能比用其它常規方法如肌肉內(存在的APC很少)注射該抗原的免疫原性更高(推測通過直接結合于豐富的APC)。
實施例4方法和材料動物研究了雄性幼年、克隆雜交的豬尾(pigtailed)獼猴(Macaca nemestrina，2-4歲)。所有動物都在CSIRO澳大利亞動物健康實驗室(CSIRO Australian AnimalHealth Laboratory)，季隆(Geelong)，PC3生物安全條件下由經過訓練的動物技術員飼養。在所有程序之前，用可他命麻醉動物(10mg/kg，肌肉內)。常規監測動物的健康狀況和體重。所有實驗條件和方案都是CSIRO動物健康委員會墨爾本大學動物倫理委員會批準的。
預接種為了評價OPAL方法是否能增強預先引發免疫應答的動物的T細胞應答反應。如先前所述(16)，給予表達HIV或SIV結構基因的2種DNA疫苗，然后給予表達類似物質的HIV或SIV基因的FPV加強疫苗，在獼猴中誘導T細胞應答反應。以1毫克/劑量兩次肌肉內注射(每個前股四頭肌注射0.5毫升)給予用鹽水配的DNA疫苗。以5×107pfu劑量肌肉內輸送FPV加強疫苗。
從全血中分離血漿和外周血單個核細胞(PBMC)在疫苗接種和SHIV攻擊之前和之后數周，從所研究各動物的股靜脈收集血液加到9毫升肝素鈉和3毫升EDTA真空試管中。離心后(800×g，室溫，RT，8分鐘；Beckman Coulter)取出血漿樣品，-70℃保存在3×1.5-毫升試管中。收集EDTA-抗凝血中的血漿用于RNA提取。在血液中加入與收集的血漿等體積的培養基(添加青霉素、鏈霉素和谷氨酰胺的RPMI-1640；Invitrogen)并混合，然后在Ficoll-Paque上分離PBMC，按廠商說明書(Amersham Pharmacia)使用。將PBMC洗滌兩次(500×g，10℃，6分鐘)后重懸在1毫升培養基中計數(BeckmanCoulter Counter_)，準備進行免疫試驗。
重疊肽將各1毫克肽等份溶解在10-40μL DMSO中至終濃度SIVmac239gag(670μg/mL或730μg/mL)；pol(304μg/mL)；nef(4.762mg/mL)；SHIVSF162P3env(330μg/mL)，混合后制成包含SIVmac239的整個gag(125個肽)，pol(260個肽)和nef(21個肽)以及SHIVSF162P3的env(211個肽)蛋白全長(NIH愛滋研究和參考試劑貯藏所)(表1-4)的有11個氨基酸重疊的15肽(＞80％純度)池，-70℃儲存直到使用。將包含整個HCV開放閱讀框全長(NIH AIDS研究和參考試劑貯藏所)的有11個氨基酸重疊的18肽混合成2個肽池(HCV1和HCV2)，其包含了HCV的結構和調控基因。專門設計包含HIV-1抗藥性突變已知位點的非重疊性17肽池，購自Mimotopes Australia(圖12)。
用于體外分析的SIV抗原將滅活的全SIV(WI SIV)疫苗及其對照(用來培養WI SIV的Hut78-CLE細胞系的上清液)(AIDS疫苗工程，國家癌癥研究院，MD)(AIDS Vaccine Program，National Cancer Institute，MD)保存在-70℃直到使用。
體內細胞毒T淋巴細胞殺傷首次疫苗接種后第10、15和20周，如上所述，從40-50毫升血液中分離獼猴的PBMC。采血樣后立即將25毫升無菌注射鹽水注入動物中以防止血容量過低。將PBMC重懸在PBS中，分成3或4等份體積，各為0.5毫升。用PBS配的SIVgag，pol，nef或SHIV env肽池(10μg/mL)或DMSO(體積與SIVgag的體積相同)在37℃或在冰上脈沖細胞90分鐘，定時混合。為了隨后用流式細胞術跟蹤各肽脈沖的細胞群，將各肽/DMSO脈沖的細胞用一定濃度的CFSE或SNARF(分子探針)標記。在-20℃將DMSO配的5mM CFSE貯液解凍并用PBS稀釋。將純凈的SNARF貯液溶解在83μL DMSO中至1mM并用PBS稀釋。表1顯示各染液的終濃度。徹底混合細胞，37℃水浴染色10分鐘，然后用RF5和PBS各洗滌一次(500×g，10℃，6分鐘)。將各動物的所有肽/DMSO脈沖的細胞合并在1.5毫升鹽水中再次灌注到股靜脈中。灌注后5分鐘、4小時和16小時從對側股靜脈采3毫升血樣。用10毫升FACS裂解液(BD Biosciences)室溫孵育10分鐘沉淀裂解紅血細胞。細胞用PBS洗滌兩次(800×g，RT，7分鐘)，用1-2毫升2％多聚甲醛固定(圖1)。
為了測定細胞群是否被選擇性殺傷，用流式細胞儀(FACSort Calibre，BD)收集了門控的106個事件的活淋巴細胞。分別經FL1和FL2通道檢測CFSE和SNARF的熒光。對于分析，殺傷表示為經靶肽與對照肽-脈沖的細胞清除的百分數。OPAL灌注后5分鐘用流式細胞儀獲得不相等標記的細胞群中，殺傷的程度隨后以5分鐘時獲得的起始細胞群的比例來擴大。還用IFNγELISpot和ICS分析了OPAL灌注之前和之后的PBMC，檢測T細胞免疫應答反應是否增強。
獼猴的SHIV攻擊為了評價該疫苗的功效，如上所述(32)，首次免疫后18周，在2天中用0.5毫升劑量的SHIVmn229(對CD8-缺失的猴PBMC為5×104TCID50/毫升)直腸內接種各獼猴(共105TCID50/毫升)。
用反轉錄酶實時PCR定量測定病毒SHIV RNARNA提取為檢測SHIV攻擊后獼猴的SHIV RNA，如所述(32)，用QIAamp_病毒RNA商品試劑盒(Qiagen)先從收集的EDTA抗凝血的貯存血漿樣品中提取總RNA。簡言之，離心血漿樣品(500×g，RT，10分鐘)除去細胞(防止DNA污染)。在緩沖液AVL和96-100％乙醇中離心偶聯于載體RNA的140μL血漿RNA，使之結合于濾膜。通過旋轉柱用緩沖液AW1和AW2洗脫得到60μL RNA。該試劑盒提供了除乙醇之外的所有試劑。
反轉錄PCR然后一式兩份，用反應混合物(20μL)2.9μL不含RNA酶/DNA酶的水(Promega)；3μL 10× TaqMan緩沖液A(Applied Biosystems)；6μLMgCl2(25nM)(Applied Biosystems)；1.5μL隨機六聚物(1/2稀釋；AppliedBiosystems)；6μl dNTPs(2.5nM；Promega)；1.5μL；Promega)；0.5μL Rnasin(40U/mL；Promega)；0.1μL MMLV-RT超轉錄物(superscript)(200U/mL；Invitrogen)，一輪熱循環25℃(15分鐘)→42℃(40分鐘)→75℃(5分鐘)(GeneAmp PCR系統9700，Applied Biosystems)將10μL RNA反轉錄為cDNA。用同樣的反應混合物(除去MMLV-RT超轉錄物)，每個樣品進行第三次測試以評價是否存在SHIV DNA污染。將SIV RNA標準品(33)進行系列稀釋并一式兩份進行反轉錄(檢測極限，1500拷貝/毫升)。
實時PCR如所述(33)，用反應混合物(20μl)141μl不含RNA酶/DNA酶的水(Promega)；2μL 10× PCR緩沖液II(Applied Biosystems)；1μL MgCl2(AppliedBiosystems)；1μL SL03 SIVgag(20pmol/μL)；1μL SL04 SIVgag(20pmol/L)；0.3μL SL07分子標記0.5μL Tag Gold(Applied Biosystems)擴增cDNA。開始時增高反應溫度，保持在95℃10分鐘以激活Tag Gold酶，然后45輪熱循環95℃(15秒)→55℃(30秒)→72℃(30秒)。用Sequence Detector軟件v1.6.3(Applied Biosystems)在55℃(30秒)階段檢測擴增子來進行實時分析。
CD4+T細胞計數為了評價SHIV攻擊后CD4+T細胞的耗竭，將200μL全血細胞與5μL PE-偶聯的抗-人CD3，5μL FITC-偶聯的抗人CD4，5μL PerCP-偶聯的抗人CD8(分別是克隆SP34；L200；和Leu-2a；BD Pharmingen)單克隆抗體在黑暗中室溫孵育20分鐘。如方法2.8所述，用2毫升FACS裂解液(BD Biosciences)裂解紅細胞然后固定。用3-色FACScan Calibre_收集總數50,000個細胞，CD4+和CD8+T細胞計數表示為門控淋巴細胞的百分數。
分析全血OPAL技術對SHIV、HCV和衍生自抗性HIV-1株的肽的刺激和誘導在一個獨立的試驗中評價(a)是否肽-脈沖全血(和以前采用的PBMC比較)可有效地用作免疫激活劑，以及(b)是否OPAL技術可從頭激活未引發的免疫應答反應，該試驗中用全血灌注所選的SHIV感染的獼猴，所述全血用一系列重疊的SHIV15肽(3個池)，或一系列重疊的HCV18肽(2個池)，以及一系列包含HIV-1藥物誘生的已知突變的非重疊17肽以5μg/mL脈沖1小時，如圖9-12所示。
本文引用的各專利、專利申請和出版物的全部內容都納入本文作為參考。
本文引用的任何參考文獻都不應解釋為承認該參考文獻作為本申請的“現有技術”而可獲得。
在整個說明書中，目的是描述本發明的優選實施方式，而不將本發明限制于任何一個實施方式或特征的特定集合。因此，本領域技術人員將理解，根據本發明，可對具體的實施方式進行各種改進和變化而不偏離本發明的范圍。所有這些改進和變化都包括在所附權利要求的范圍內。
表表1SIVmac236gag肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為15個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。肽125長度為14個氨基酸。全長gag序列〔SEQ IDNO2184〕是從HIV序列數據庫http://hiv-web.lanl.gov修飾而來。



表2SIVmac236pol肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為15個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。全長pol序列〔SEQ ID NO2185〕是從HIV序列數據庫http://hiv-web.lanl.gov修飾而來。






表3SIVmac236nef肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為15個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。全長nef序列〔SEQ ID NO2186〕是從HIV序列數據庫http://hiv-web.lanl.gov修飾而來。

表4SHIVSF162P3env肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為15個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。肽211的長度為14個氨基酸。*肽與前一個肽有10個氨基酸的重疊以除去禁忌(forbidden)的Q n-末端肽。全長env序列〔SEQID NO2187〕是從HIV序列數據庫http://hiv-web.lanl.gov修飾而來。






表5HIV-1共有B分支Gag肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為15個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。肽124的長度為12個氨基酸。全長Gag序列〔SEQ ID NO2188〕是從HIV序列數據庫修飾而來。



表6HIV-1共有B分支Nef肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為15個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。肽49的長度為14個氨基酸。全長Nef序列〔SEQ ID NO2189〕是從HIV序列數據庫修飾而來。


表7HIV-1共有B分支Pol肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為15個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。肽248的長度為14個氨基酸。全長Pol序列〔SEQ ID NO2190〕是從HIV序列數據庫HIV-1修飾而來。






表8HIV-1共有B分支Rev肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為15個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。肽27的長度為13個氨基酸。全長Rev序列〔SEQ ID NO2191〕是從HIV序列數據庫修飾而來。

表9HIV-1共有B分支Tat肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為15個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。肽24的長度為14個氨基酸。全長Tat序列〔SEQ ID NO2192〕是從HIV序列數據庫修飾而來。

表10HIV-1共有B分支Vif肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為15個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。肽46的長度為12個氨基酸。全長Vif序列〔SEQ ID NO2193〕是從HIV序列數據庫修飾而來。


表11HIV-1共有B分支Vpr肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為15個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。肽22的長度為12個氨基酸。全長Vpr序列〔SEQ ID NO2194〕是從HIV序列數據庫修飾而來。

表12HIV-1共有B分支Vpu肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為15個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。肽18的長度為13個氨基酸。全長Vpu序列〔SEQ ID NO2195〕是從HIV序列數據庫修飾而來。

表13HCV 1a H77肽池序列的一種實施方式。各肽序列長度為18個氨基酸，與前一個肽有11個氨基酸的重疊。肽對25和26，153和154，220和221，239和240，242和243，244和245，345和346由于最初的18肽的未定(problematic)序列而斷裂成為15-和14-肽。全長HCV 1a H77序列〔SEQ ID NO2196〕是從HCV序列數據庫修飾而來。










表14包含HBV所有蛋白質全長的15肽重疊肽的一種實施方式。選擇基因型A作為起始HBV菌株。當觀察到基因型A和基因型B-D之間的HBV基因組有顯著變異時，設計另外的肽使整個組能誘導對HBV所有基因型的免疫應答反應。當特定的T細胞表位圖顯示了最小的表位時，也將它們包括在該肽組中，以最優誘導對這些表位的特異性免疫應答反應。序列的細目分類1-394基因型A序列-所有基因-(共394個肽)；395-543為基因型B/C/D-相應于基因型A的顯著變異-(共149個肽)；和544-564為已知表位(共21個肽)。














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<223>SIV gag肽1<400>1Met Gly Val Arg Asn Ser Val Leu Ser Gly Lys Lys Ala Asp Glu1 5 10 15<210>2<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV gag肽22
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<223>SIV gag肽23<400>23His Ala Glu Glu Lys Val Lys His Thr Glu Glu Ala Lys Gln Ile1 5 10 15<210>24<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽24<400>24Lys Val Lys His Thr Glu Glu Ala Lys Gln Ile Val Gln Arg His1 5 10 15<210>25<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽25<400>25Thr Glu Glu Ala Lys Gln Ile Val Gln Arg His Leu Val Val Glu1 5 10 15<210>26<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽26<400>26Lys Gln Ile Val Gln Arg His Leu Val Val Glu Thr Gly Thr Thr1 5 10 15<210>27<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽27<400>27Gln Arg His Leu Val Val Glu Thr Gly Thr Thr Glu Thr Met Pro1 5 10 15<210>28<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽28<400>28Val Val Glu Thr Gly Thr Thr Glu Thr Met Pro Lys Thr Ser Arg1 5 10 15<210>29<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽29<400>29Gly Thr Thr Glu Thr Met Pro Lys Thr Ser Arg Pro Thr Ala Pro1 5 10 15<210>30<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>SIV gag肽30<400>30Thr Met Pro Lys Thr Ser Arg Pro Thr Ala Pro Ser Ser Gly Arg1 5 10 15<210>31<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽31<400>31Thr Ser Arg Pro Thr Ala Pro Ser Ser Gly Arg Gly Gly Asn Tyr1 5 10 15<210>32<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽32<400>32Thr Ala Pro Ser Ser Gly Arg Gly Gly Asn Tyr Pro Val Gln Gln1 5 10 15<210>33<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽33<400>33Ser Gly Arg Gly Gly Asn Tyr Pro Val Gln Gln Ile Gly Gly Asn1 5 10 15<210>34<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽34<400>34Gly Asn Tyr Pro Val Gln Gln Ile Gly Gly Asn Tyr Val His Leu1 5 10 15<210>35<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽35<400>35Val Gln Gln Ile Gly Gly Asn Tyr Val His Leu Pro Leu Ser Pro1 5 10 15<210>36<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽36<400>36Gly Gly Asn Tyr Val His Leu Pro Leu Ser Pro Arg Thr Leu Asn1 5 10 15<210>37<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽37<400>37Val His Leu Pro Leu Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys1 5 10 15<210>38
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽38<400>38Leu Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Leu Ile Glu Glu1 5 10 15<210>39<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽39<400>39Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Leu Ile Glu Glu Lys Lys Phe Gly1 5 10 15<210>40<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽40<400>40Trp Val Lys Leu Ile Glu Glu Lys Lys Phe Gly Ala Glu Val Val1 5 10 15<210>41<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽41<400>41Ile Glu Glu Lys Lys Phe Gly Ala Glu Val Val Pro Gly Phe Gln1 5 10 15<210>42<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽42<400>42Lys Phe Gly Ala Glu Val VaI Pro Gly Phe Gln Ala Leu Ser Glu1 5 10 15<210>43<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽43<400>43Glu Val Val Pro Gly Phe Gln Ala Leu Ser Glu Gly Cys Thr Pro1 5 10 15<210>44<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽44<400>44Gly Phe Gln Ala Leu Ser Glu Gly Cys Thr Pro Tyr Asp Ile Asn1 5 10 15<210>45<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽45<400>45Leu Ser Glu Gly Cys Thr Pro Tyr Asp Ile Asn Gln Met Leu Asn
1 5 10 15<210>46<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽46<400>46Cys Thr Pro Tyr Asp Ile Asn Gln Met Leu Asn Cys Val Gly Asp1 5 10 15<210>47<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽47<400>47Asp Ile Asn Gln Met Leu Asn Cys Val Gly Asp His Gln Ala Ala1 5 10 15<210>48<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽48<400>48Met Leu Asn Cys Val Gly Asp His Gln Ala Ala Met Gln Ile Ile1 5 10 15<210>49<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽49<400>49Val Gly Asp His Gln Ala Ala Met Gln Ile Ile Arg Asp Ile Ile1 5 10 15<210>50<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽50<400>50Gln Ala Ala Met Gln Ile Ile Arg Asp Ile Ile Asn Glu Glu Ala1 5 10 15<210>51<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽51<400>51Gln Ile Ile Arg Asp Ile Ile Asn Glu Glu Ala Ala Asp Trp Asp1 5 10 15<210>52<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽52<400>52Asp Ile Ile Asn Glu Glu Ala Ala Asp Trp Asp Leu Gln His Pro1 5 10 15<210>53<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽53
<400>53Glu Glu Ala Ala Asp Trp Asp Leu Gln His Pro Gln Pro Ala Pro1 5 10 15<210>54<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽54<400>54Asp Trp Asp Leu Gln His Pro Gln Pro Ala Pro Gln Gln Gly Gln1 5 10 15<210>55<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽55<400>55Gln His Pro Gln Pro Ala Pro Gln Gln Gly Gln Leu Arg Glu Pro1 5 10 15<210>56<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽56<400>56Pro Ala Pro Gln Gln Gly Gln Leu Arg Glu Pro Ser Gly Ser Asp1 5 10 15<210>57<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽57<400>57Gln Gly Gln Leu Arg Glu Pro Ser Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr1 5 10 15<210>58<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽58<400>58Arg Glu Pro Ser Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr Ser Ser Val1 5 10 15<210>59<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽59<400>59Gly Ser Asp Ile Ala Gly Thr Thr Ser Ser Val Asp Glu Gln Ile1 5 10 15<210>60<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽60<400>60Ala Gly Thr Thr Ser Ser Val Asp Glu Gln Ile Gln Trp Met Tyr1 5 10 15<210>61<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>SIV gag肽61<400>61Ser Ser Val Asp Glu Gln Ile Gln Trp Met Tyr Arg Gln Gln Asn1 5 10 15<210>62<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽62<400>62Glu Gln Ile Gln Trp Met Tyr Arg Gln Gln Asn Pro Ile Pro Val1 5 10 15<210>63<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽63<400>63Trp Met Tyr Arg Gln Gln Asn Pro Ile Pro Val Gly Asn Ile Tyr1 5 10 15<210>64<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽64<400>64Gln Gln Asn Pro Ile Pro Val Gly Asn Ile Tyr Arg Arg Trp Ile1 5 10 15<210>65<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽65<400>65Ile Pro Val Gly Asn Ile Tyr Arg Arg Trp Ile Gln Leu Gly Leu1 5 10 15<210>66<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽66<400>66Asn Ile Tyr Arg Arg Trp Ile Gln Leu Gly Leu Gln Lys Cys Val1 5 10 15<210>67<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽67<400>67Arg Trp Ile Gln Leu Gly Leu Gln Lys Cys Val Arg Met Tyr Asn1 5 10 15<210>68<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽68<400>68Leu Gly Leu Gln Lys Cys Val Arg Met Tyr Asn Pro Thr Asn Ile1 5 10 15<210>69
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽69<400>69Lys Cys Val Arg Met Tyr Asn Pro Thr Asn Ile Leu Asp Val Lys1 5 10 15<210>70<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽70<400>70Met Tyr Asn Pro Thr Asn Ile Leu Asp Val Lys Gln Gly Pro Lys1 5 10 15<210>71<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽71<400>71Thr Asn Ile Leu Asp Val Lys Gln Gly Pro Lys Glu Pro Phe Gln1 5 10 15<210>72<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽72<400>72Asp Val Lys Gln Gly Pro Lys Glu Pro Phe Gln Ser Tyr Val Asp1 5 10 15<210>73<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽73<400>73Gly Pro Lys Glu Pro Phe Gln Ser Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys1 5 10 15<210>74<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽74<400>74Pro Phe Gln Ser Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Ser Leu Arg Ala1 5 10 15<210>75<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽75<400>75Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Ser Leu Arg Ala Glu Gln Thr Asp1 5 10 15<210>76<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽76<400>76Phe Tyr Lys Ser Leu Arg Ala Glu Gln Thr Asp Ala Ala Val Lys
1 5 10 15<210>77<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽77<400>77Leu Arg Ala Glu Gln Thr Asp Ala Ala Val Lys Asn Trp Met Thr1 5 10 15<210>78<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽78<400>78Gln Thr Asp Ala Ala Val Lys Asn Trp Met Thr Gln Thr Leu Leu1 5 10 15<210>79<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽79<400>79Ala Val Lys Asn Trp Met Thr Gln Thr Leu Leu Ile Gln Asn Ala1 5 10 15<210>80<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽80<400>80Trp Met Thr Gln Thr Leu Leu Ile Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys1 5 10 15<210>81<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽81<400>81Thr Leu Leu Ile Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Leu Val Leu1 5 10 15<210>82<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽82<400>82Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Leu Val Leu Lys Gly Leu Gly1 5 10 15<210>83<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽83<400>83Pro Asp Cys Lys Leu Val Leu Lys Gly Leu Gly Val Asn Pro Thr1 5 10 15<210>84<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽84
<400>84Leu Val Leu Lys Gly Leu Gly Val Asn Pro Thr Leu Glu Glu Met1 5 10 15<210>85<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽85<400>85Gly Leu Gly Val Asn Pro Thr Leu Glu Glu Met Leu Thr Ala Cys1 5 10 15<210>86<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽86<400>86Asn Pro Thr Leu Glu Glu Met Leu Thr Ala Cys G1n Gly Val Gly1 5 10 15<210>87<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽87<400>87Glu Glu Met Leu Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly Pro Gly Gln1 5 10 15<210>88<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽88<400>88Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly Pro Gly Gln Lys Ala Arg Leu1 5 10 15<210>89<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽89<400>89Gly Val Gly Gly Pro Gly Gln Lys Ala Arg Leu Met Ala Glu Ala1 5 10 15<210>90<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽90<400>90Pro Gly Gln Lys Ala Arg Leu Met Ala Glu Ala Leu Lys Glu Ala1 5 10 15<210>91<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽91<400>91Ala Arg Leu Met Ala Glu Ala Leu Lys Glu Ala Leu Ala Pro Val1 5 10 15<210>92<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>SIV gag肽92<400>92Ala Glu Ala Leu Lys Glu Ala Leu Ala Pro Val Pro Ile Pro Phe1 5 10 15<210>93<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽93<400>93Lys Glu Ala Leu Ala Pro Val Pro Ile Pro Phe Ala Ala Ala Gln1 5 10 15<210>94<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽94<400>94Ala Pro Val Pro Ile Pro Phe Ala Ala Ala Gln Gln Arg Gly Pro1 5 10 15<210>95<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽95<400>95Ile Pro Phe Ala Ala Ala Gln Gln Arg Gly Pro Arg Lys Pro Ile1 5 10 15<210>96<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽96<400>96Ala Ala Gln Gln Arg Gly Pro Arg Lys Pro Ile Lys Cys Trp Asn1 5 10 15<210>97<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽97<400>97Arg Gly Pro Arg Lys Pro Ile Lys Cys Trp Asn Cys Gly Lys Glu1 5 10 15<210>98<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽98<400>98Lys Pro Ile Lys Cys Trp Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Ser Ala1 5 10 15<210>99<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽99<400>99Cys Trp Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Ser Ala Arg Gln Cys Arg1 5 10 15<210>100
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽100<400>100Gly Lys Glu Gly His Ser Ala Arg Gln Cys Arg Ala Pro Arg Arg1 5 10 15<210>101<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽101<400>101His Ser Ala Arg Gln Cys Arg Ala Pro Arg Arg Gln Gly Cys Trp1 5 10 15<210>102<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽102<400>102Gln Cys Arg Ala Pro Arg Arg Gln Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys1 5 10 15<210>103<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽103<400>103Pro Arg Arg Gln Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys Met Asp His Val1 5 10 15<210>104<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽104<400>104Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys Met Asp His Val Met Ala Lys Cys1 5 10 15<210>105<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽105<400>105Cys Gly Lys Met Asp His Val Met Ala Lys Cys Pro Asp Arg Gln1 5 10 15<210>106<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽106<400>106Asp His Val Met Ala Lys Cys Pro Asp Arg Gln Ala Gly Phe Leu1 5 10 15<210>107<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽107<400>107Ala Lys Cys Pro Asp Arg Gln Ala Gly Phe Leu Gly Leu Gly Pro
1 5 10 15<210>108<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽108<400>108Asp Arg Gln Ala Gly Phe Leu Gly Leu Gly Pro Trp Gly Lys Lys1 5 10 15<210>109<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽109<400>109Gly Phe Leu Gly Leu Gly Pro Trp Gly Lys Lys Pro Arg Asn Phe1 5 10 15<210>110<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽110<400>110Leu Gly Pro Trp Gly Lys Lys Pro Arg Asn Phe Pro Met Ala Gln1 5 10 15<210>111<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽111<400>111Gly Lys Lys Pro Arg Asn Phe Pro Met Ala Gln Val His Gln Gly1 5 10 15<210>112<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽112<400>112Arg Asn Phe Pro Met Ala Gln Val His Gln Gly Leu Met Pro Thr1 5 10 15<210>113<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽113<400>113Met Ala Gln Val His Gln Gly Leu Met Pro Thr Ala Pro Pro Glu1 5 10 15<210>114<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽114<400>114His Gln Gly Leu Met Pro Thr Ala Pro Pro Glu Asp Pro Ala Val1 5 10 15<210>115<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽115
<400>115Met Pro Thr Ala Pro Pro Glu Asp Pro Ala Val Asp Leu Leu Lys1 5 10 15<210>116<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽116<400>116Pro Pro Glu Asp Pro Ala Val Asp Leu Leu Lys Asn Tyr Met Gln1 5 10 15<210>117<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽117<400>117Pro Ala Val Asp Leu Leu Lys Asn Tyr Met Gln Leu Gly Lys Gln1 5 10 15<210>118<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽118<400>118Leu Leu Lys Asn Tyr Met Gln Leu Gly Lys Gln Gln Arg Glu Lys15 10 15<210>119<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽119<400>119Tyr Met Gln Leu Gly Lys Gln Gln Arg Glu Lys Gln Arg Glu Ser1 5 10 15<210>120<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽120<400>120Gly Lys Gln Gln Arg Glu Lys Gln Arg Glu Ser Arg Glu Lys Pro1 5 10 15<210>121<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽121<400>121Arg Glu Lys Gln Arg Glu Ser Arg Glu Lys Pro Tyr Lys Glu Val1 5 10 15<210>122<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽122<400>122Arg Glu Ser Arg Glu Lys Pro Tyr Lys Glu Val Thr Glu Asp Leu1 5 10 15<210>123<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>SIV gag肽123<400>123Glu Lys Pro Tyr Lys Glu Val Thr Glu Asp Leu Leu His Leu Asn1 5 10 15<210>124<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽124<400>124Lys Glu Val Thr Glu Asp Leu Leu His Leu Asn Ser Leu Phe Gly1 5 10 15<210>125<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV gag肽125<400>125Glu Asp Leu Leu His Leu Asn Ser Leu Phe Gly Gly Asp Gln1 5 10<210>126<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽1<400>126Val Leu Glu Leu Trp Glu Arg Gly Thr Leu Cys Lys Ala Met Gln1 5 10 15<210>127<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽2<400>127Trp Glu Arg Gly Thr Leu Cys Lys Ala Met Gln Ser Pro Lys Lys1 5 10 15<210>128<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽3<400>128Thr Leu Cys Lys Ala Met Gln Ser Pro Lys Lys Thr Gly Met Leu1 5 10 15<210>129<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽4<400>129Ala Met Gln Ser Pro Lys Lys Thr Gly Met Leu Glu Met Trp Lys1 5 10 15<210>130<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽5<400>130Pro Lys Lys Thr Gly Met Leu Glu Met Trp Lys Asn Gly Pro Cys1 5 10 15<210>131
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽6<400>131Gly Met Leu Glu Met Trp Lys Asn Gly Pro Cys Tyr Gly Gln Met1 5 10 15<210>132<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽7<400>132Met Trp Lys Asn Gly Pro Cys Tyr Gly Gln Met Pro Arg Gln Thr1 5 10 15<210>133<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽8<400>133Met Trp Lys Asn Gly Pro Cys Tyr Gly Gln Met Pro Arg Gln Thr1 5 10 15<210>134<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽9<400>134Gly Gln Met Pro Arg Gln Thr Gly Gly Phe Phe Arg Pro Trp Sar1 5 10 15<210>135<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽10<400>135Arg Gln Thr Gly Gly Phe Phe Arg Pro Trp Ser Met Gly Lys Glu1 5 10 15<210>136<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽11<400>136Gly Phe Phe Arg Pro Trp Ser Met Gly Lys Glu Ala Pro Gln Phe1 5 10 15<210>137<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽12<400>137Pro Trp Ser Met Gly Lys Glu Ala Pro Gln Phe Pro His Gly Ser1 5 10 15<210>138<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽13<400>138Gly Lys Glu Ala Pro Gln Phe Pro His Gly Ser Ser Ala Ser Gly
1 5 10 15<210>139<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽14<400>139Pro Gln Phe Pro His Gly Ser Ser Ala Ser Gly Ala Asp Ala Asn1 5 10 15<210>140<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽15<400>140His Gly Ser Ser Ala Ser Gly Ala Asp Ala Asn Cys Ser Pro Arg1 5 10 15<210>141<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽16<400>141Ala Ser Gly Ala Asp Ala Asn Cys Ser Pro Arg Gly Pro Ser Cys1 5 10 15<210>142<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽17<400>142Asp Ala Asn Cys Ser Pro Arg Gly Pro Ser Cys Gly Ser Ala Lys1 5 10 15<210>143<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽18<400>143Ser Pro Arg Gly Pro Ser Cys Gly Ser Ala Lys Glu Leu His Ala1 5 10 15<210>144<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽19<400>144Pro Ser Cys Gly Ser Ala Lys Glu Leu His Ala Val Gly Gln Ala1 5 10 15<210>145<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽20<400>145Ser Ala Lys Glu Leu His Ala Val Gly Gln Ala Ala Glu Arg Lys1 5 10 15<210>146<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽21
<400>146Leu His Ala Val Gly Gln Ala Ala Glu Arg Lys Ala Glu Arg Lys1 5 10 15<210>147<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽22<400>147Gly Gln Ala Ala Glu Arg Lys Ala Glu Arg Lys Gln Arg Glu Ala1 5 10 15<210>148<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽23<400>148Glu Arg Lys Ala Glu Arg Lys Gln Arg Glu Ala Leu Gln Gly Gly1 5 10 15<210>149<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽24<400>149Glu Arg Lys Gln Arg Glu Ala Leu Gln Gly Gly Asp Arg Gly Phe1 5 10 15<210>150<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽25<400>150Arg Glu Ala Leu Gln Gly Gly Asp Arg Gly Phe Ala Ala Pro Gln1 5 10 15<210>151<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<220>
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<223>SIV pol肽30<400>155Arg Pro Val Val Thr Ala His Ile Glu Gly Gln Pro Val Glu Val1 5 10 15<210>156<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV pol肽32<400>157Glu Gly Gln Pro Val Glu Val Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp Asp1 5 10 15<210>158<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽33<400>158Val Glu Val Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp Asp Ser Ile Val Thr1 5 10 15<210>159<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽34<400>159Leu Asp Thr Gly Ala Asp Asp Ser Ile Val Thr Gly Ile Glu Leu1 5 10 15<210>160<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽35<400>160Ala Asp Asp Ser Ile Val Thr Gly Ile Glu Leu Gly Pro His Tyr1 5 10 15<210>161<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV pol肽38<400>163Pro His Tyr Thr Pro Lys Ile Val Gly Gly Ile Gly Gly Phe Ile1 5 10 15<210>164<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽39<400>164Pro Lys Ile Val Gly Gly Ile Gly Gly Phe Ile Asn Thr Lys Glu1 5 10 15<210>165<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽40<400>165Gly Gly Ile Gly Gly Phe Ile Asn Thr Lys Glu Tyr Lys Asn Val1 5 10 15<210>166<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽41<400>166Gly Phe Ile Asn Thr Lys Glu Tyr Lys Asn Val Glu Ile Glu Val1 5 10 15<210>167<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽42<400>167Thr Lys Glu Tyr Lys Asn Val Glu Ile Glu Val Leu Gly Lys Arg1 5 10 15<210>168<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽43<400>168Lys Asn Val Glu Ile Glu Val Leu Gly Lys Arg Ile Lys Gly Thr1 5 10 15<210>169<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽44<400>169Ile Glu Val Leu Gly Lys Arg Ile Lys Gly Thr Ile Met Thr Gly
1 5 10 15<210>170<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽45<400>170Gly Lys Arg Ile Lys Gly Thr Ile Met Thr Gly Asp Thr Pro Ile1 5 10 15<210>171<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽46<400>171Lys Gly Thr Ile Met Thr Gly Asp Thr Pro Ile Asn Ile Phe Gly1 5 10 15<210>172<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽47<400>172Met Thr Gly Asp Thr Pro Ile Asn Ile Phe Gly Arg Asn Leu Leu1 5 10 15<210>173<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV pol肽49<400>174Ile Phe Gly Arg Asn Leu Leu Thr Ala Leu Gly Met Ser Leu Asn1 5 10 15<210>175<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV pol肽52
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<223>SIV pol肽54<400>179Val Glu Pro Val Lys Val Ala Leu Lys Pro Gly Lys Asp Gly Pro1 5 10 15<210>180<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV pol肽56<400>181Lys Pro Gly Lys Asp Gly Pro Lys Leu Lys Gln Trp Pro Leu Ser1 5 10 15<210>182<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽57<400>182Asp Gly Pro Lys Leu Lys Gln Trp Pro Leu Ser Lys Glu Lys Ile1 5 10 15<210>183<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽58<400>183Leu Lys Gln Trp Pro Leu Ser Lys Glu Lys Ile Val Ala Leu Arg1 5 10 15<210>184<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽59<400>184Pro Leu Ser Lys Glu Lys Ile Val Ala Leu Arg Glu Ile Cys Glu1 5 10 15<210>185<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
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<223>SIV pol肽62<400>187Ile Cys Glu Lys Met Glu Lys Asp Gly Gln Leu Glu Glu Ala Pro1 5 10 15<210>188<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽63<400>188Met Glu Lys Asp Gly Gln Leu Glu Glu Ala Pro Pro Thr Asn Pro1 5 10 15<210>189<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽64<400>189Gly Gln Leu Glu Glu Ala Pro Pro Thr Asn Pro Tyr Asn Thr Pro1 5 10 15<210>190<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV pol肽74<400>199Gln Asp Phe Thr Glu Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly1 5 10 15<210>200<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽75<400>200Glu Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly Leu Ala Lys Arg
1 5 10 15<210>201<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽76<400>201Gly Ile Pro His Pro Ala Gly Leu Ala Lys Arg Lys Arg Ile Thr1 5 10 15<210>202<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽77<400>202Pro Ala Gly Leu Ala Lys Arg Lys Arg Ile Thr Val Leu Asp Ile1 5 10 15<210>203<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽78<400>203Ala Lys Arg Lys Arg Ile Thr Val Leu Asp Ile Gly Asp Ala Tyr1 5 10 15<210>204<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽79<400>204Arg Ile Thr Val Leu Asp Ile Gly Asp Ala Tyr Phe Ser Ile Pro1 5 10 15<210>205<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV pol肽81<400>206Asp Ala Tyr Phe Ser Ile Pro Leu Asp Glu Glu Phe Arg Gln Tyr1 5 10 15<210>207<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV pol肽83
<400>208Asp Glu Glu Phe Arg Gln Tyr Thr Ala Phe Thr Leu Pro Ser Val1 5 10 15<210>209<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>SIV pol肽85<400>210Ala Phe Thr Leu Pro Ser Val Asn Asn Ala Glu Pro Gly Lys Arg1 5 10 15<210>211<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽86<400>211Pro Ser Val Asn Asn Ala Glu Pro Gly Lys Arg Tyr Ile Tyr Lys1 5 10 15<210>212<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽87<400>212Asn Ala Glu Pro Gly Lys Arg Tyr Ile Tyr Lys Val Leu Pro Gln1 5 10 15<210>213<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽88<400>213Gly Lys Arg Tyr Ile Tyr Lys Val Leu Pro Gln Gly Trp Lys Gly1 5 10 15<210>214<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽89<400>214Ile Tyr Lys Val Leu Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile1 5 10 15<210>215<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽90<400>215Leu Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Tyr Thr1 5 10 15<210>216<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>SIV pol肽91<400>216Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Tyr Thr Met Arg His Val1 5 10 15<210>217<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽92<400>217Pro Ala Ile Phe Gln Tyr Thr Met Arg His Val Leu Glu Pro Phe1 5 10 15<210>218<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽93<400>218Gln Tyr Thr Met Arg His Val Leu Glu Pro Phe Arg Lys Ala Asn1 5 10 15<210>219<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽94<400>219Arg His Val Leu Glu Pro Phe Arg Lys Ala Asn Pro Asp Val Thr1 5 10 15<210>220<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽95<400>220Glu Pro Phe Arg Lys Ala Asn Pro Asp Val Thr Leu Val Gln Tyr1 5 10 15<210>221<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽96<400>221Lys Ala Asn Pro Asp Val Thr Leu Val Gln Tyr Met Asp Asp Ile1 5 10 15<210>222<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽97<400>222Asp Val Thr Leu Val Gln Tyr Met Asp Asp Ile Leu Ile Ala Ser1 5 10 15<210>223<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽98<400>223Val Gln Tyr Met Asp Asp Ile Leu Ile Ala Ser Asp Arg Thr Asp1 5 10 15<210>224
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽99<400>224Asp Asp Ile Leu Ile Ala Ser Asp Arg Thr Asp Leu Glu His Asp1 5 10 15<210>225<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽100<400>225Ile Ala Ser Asp Arg Thr Asp Leu Glu His Asp Arg Val Val Leu1 5 10 15<210>226<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽101<400>226Arg Thr Asp Leu Glu His Asp Arg Val Val Leu Gln Ser Lys Glu1 5 10 15<210>227<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽102<400>227Glu His Asp Arg Val Val Leu Gln Ser Lys Glu Leu Leu Asn Ser1 5 10 15<210>228<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽103<400>228Val Val Leu Gln Ser Lys Glu Leu Leu Asn Ser Ile Gly Phe Ser1 5 10 15<210>229<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>SIV pol肽104<400>229Ser Lys Glu Leu Leu Asn Ser Ile Gly Phe Ser Thr Pro Glu Glu1 5 10 15<210>230<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 gag肽18<400>638Leu Gln Thr Gly Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Val1 5 10 15<210>639<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽19<400>639Ser Glu Glu Leu Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Val Ala Thr Leu Tyr1 5 10 15<210>640<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽20<400>640Arg Ser Leu Tyr Asn Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Gln1 5 10 15<210>641<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽21<400>641Asn Thr Val Ala Thr Leu Tyr Cys Val His Gln Arg Ile Glu Val1 5 10 15<210>642<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽22
<400>642Thr Leu Tyr Cys Val His Gln Arg Ile Glu Val Lys Asp Thr Lys1 5 10 15<210>643<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽23<400>643Val His Gln Arg Ile Glu Val Lys Asp Thr Lys Glu Ala Leu Glu1 5 10 15<210>644<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽24<400>644Ile Glu Val Lys Asp Thr Lys Glu Ala Leu Glu Lys Ile Glu Glu1 5 10 15<210>645<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽25<400>645Asp Thr Lys Glu Ala Leu Glu Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys1 5 10 15<210>646<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽26<400>646Ala Leu Glu Lys Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys Ser Lys Lys Lys1 5 10 15<210>647<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽27<400>647Ile Glu Glu Glu Gln Asn Lys Ser Lys Lys Lys Ala Gln Gln Ala1 5 10 15<210>648<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽28<400>648Gln Asn Lys Ser Lys Lys Lys Ala Gln Gln Ala Ala Ala Asp Thr1 5 10 15<210>649<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽29<400>649Lys Lys Lys Ala Gln Gln Ala Ala Ala Asp Thr Gly Asn Ser Ser1 5 10 15<210>650<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 gag肽30<400>650Gln Gln Ala Ala Ala Asp Thr Gly Asn Ser Ser Gln Val Ser Gln1 5 10 15<210>651<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽31<400>651Ala Asp Thr Gly Asn Ser Ser Gln Val Ser Gln Asn Tyr Pro Ile1 5 10 15<210>652<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽32<400>652Asn Ser Ser Gln Val Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Val Gln Asn Leu1 5 10 15<210>653<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽33<400>653Val Ser Gln Asn Tyr Pro Ile Val Gln Asn Leu Gln Gly Gln Met1 5 10 15<210>654<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽34<400>654Tyr Pro Ile Val Gln Asn Leu Gln Gly Gln Met Val His Gln Ala1 5 10 15<210>655<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽35<400>655Gln Asn Leu Gln Gly Gln Met Val His Gln Ala Ile Ser Pro Arg1 5 10 15<210>656<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽36<400>656Gly Gln Met Val His Gln Ala Ile Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala1 5 10 15<210>657<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽37<400>657His Gln Ala Ile Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val1 5 10 15<210>658
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽38<400>658Ser Pro Arg Thr Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Val Glu Glu Lys1 5 10 15<210>659<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽39<400>659Leu Asn Ala Trp Val Lys Val Val Glu Glu Lys Ala Phe Ser Pro1 5 10 15<210>660<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽40<400>660Val Lys Val Val Glu Glu Lys Ala Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro1 5 10 15<210>66l<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽41<400>661Glu Glu Lys Ala Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Ser Ala1 5 10 15<210>662<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽42<400>662Phe Ser Pro Glu Val Ile Pro Met Phe Ser Ala Leu Ser Glu Gly1 5 10 15<210>663<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽43<400>663Val Ile Pro Met Phe Ser Ala Leu Ser Glu Gly Ala Thr Pro Gln1 5 10 15<210>664<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽44<400>664Phe Ser Ala Leu Ser Glu Gly Ala Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr1 5 10 15<210>665<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽45<400>665Ser Glu Gly Ala Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr
1 5 10 15<210>666<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽46<400>666Thr Pro Gln Asp Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly Gly His1 5 10 15<210>667<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽47<400>667Leu Asn Thr Met Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gln Ala Ala Met1 5 10 15<210>668<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽48<400>668Leu Asn Thr Val Gly Gly His Gln Ala Ala Met Gln Met Leu Lys1 5 10 15<210>669<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽49<400>669Gly Gly His Gln Ala Ala Met Gln Met Leu Lys Glu Thr Ile Asn1 5 10 15<210>670<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 gag肽52<400>672Glu Thr Ile Asn Glu Glu Ala Ala Glu Trp Asp Arg Leu His Pro1 5 10 15<210>673<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽53
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<223>HIV-1 gag肽55<400>675Leu His Pro Val His Ala Gly Pro Ile Ala Pro Gly Gln Met Arg1 5 10 15<210>676<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽56<400>676His Ala Gly Pro Ile Ala Pro Gly Gln Met Arg Glu Pro Arg Gly1 5 10 15<210>677<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<220>
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<223>HIV-1 gag肽62<400>682Leu Gln Glu Gln Ile Gly Trp Met Thr Asn Asn Pro Pro Ile Pro1 5 10 15<210>683<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 gag肽65<400>685Pro Ile Pro Val Gly Glu Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly1 5 10 15<210>686<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽66<400>686Gly Glu Ile Tyr Lys Arg Trp Ile Ile Leu Gly Leu Asn Lys Ile1 5 10 15<210>687<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 gag肽73<400>693Gln Gly Pro Lys Glu Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr1 5 10 15<210>694<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽74<400>694Glu Pro Phe Arg Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Arg1 5 10 15<210>695<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽75<400>695Asp Tyr Val Asp Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Arg Ala Glu Gln Ala1 5 10 15<210>696<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽76<400>696Arg Phe Tyr Lys Thr Leu Arg Ala Glu Gln Ala Ser Gln Glu Val
1 5 10 15<210>697<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 gag肽79<400>699Gln Glu Val Lys Asn Trp Met Thr Glu Thr Leu Leu Val Gln Asn1 5 10 15<210>700<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽80<400>700Asn Trp Met Thr Glu Thr Leu Leu Val Gln Asn Ala Asn Pro Asp1 5 10 15<210>701<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽81<400>701Glu Thr Leu Leu Val Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile1 5 10 15<210>702<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽82<400>702Val Gln Asn Ala Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Lys Ala Leu1 5 10 15<210>703<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽83<400>703Asn Pro Asp Cys Lys Thr Ile Leu Lys Ala Leu Gly Pro Ala Ala1 5 10 15<210>704<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽84
<400>704Lys Thr Ile Leu Lys Ala Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Glu Glu1 5 10 15<210>705<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽85<400>705Lys Ala Leu Gly Pro Ala Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala1 5 10 15<210>706<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽86<400>706Pro Ala Ala Thr Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly Val1 5 10 15<210>707<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽87<400>707Leu Glu Glu Met Met Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly Pro Gly1 5 10 15<210>708<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽88<400>708Met Thr Ala Cys Gln Gly Val Gly Gly Pro Gly His Lys Ala Arg1 5 10 15<210>709<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽89<400>709Gln Gly Val Gly Gly Pro Gly His Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu1 5 10 15<210>710<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽90<400>710Gly Pro Gly His Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu Ala Met Ser Gln1 5 10 15<210>711<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽91<400>711Lys Ala Arg Val Leu Ala Glu Ala Met Ser Gln Val Thr Asn Ser1 5 10 15<210>712<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 gag肽92<400>712Leu Ala Glu Ala Met Ser Gln Val Thr Asn Ser Ala Thr Ile Met1 5 10 15<210>713<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽93<400>713Met Ser Gln Val Thr Asn Ser Ala Thr Ile Met Met Gln Arg Gly1 5 10 15<210>714<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽94<400>714Thr Asn Ser Ala Thr Ile Met Met Gln Arg Gly Asn Phe Arg Asn1 5 10 15<210>715<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽95<400>715Thr Ile Met Met Gln Arg Gly Asn Phe Arg Asn Gln Arg Lys Thr1 5 10 15<210>716<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽96<400>716Gln Arg Gly Asn Phe Arg Asn Gln Arg Lys Thr Val Lys Cys Phe1 5 10 15<210>717<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽97<400>717Phe Arg Asn Gln Arg Lys Thr Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys1 5 10 15<210>718<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽98<400>718Arg Lys Thr Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Ile1 5 10 15<210>719<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽99<400>719Val Lys Cys Phe Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Ile Ala Lys Asn1 5 10 15<210>720
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽100<400>720Asn Cys Gly Lys Glu Gly His Ile Ala Lys Asn Cys Arg Ala Pro1 5 10 15<210>721<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽101<400>721Glu Gly His Ile Ala Lys Asn Cys Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly1 5 10 15<210>722<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽102<400>722Ala Lys Asn Cys Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly Cys Trp Lys Cys1 5 10 15<210>723<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽103<400>723Arg Ala Pro Arg Lys Lys Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys Glu Gly1 5 10 15<210>724<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽104<400>724Lys Lys Gly Cys Trp Lys Cys Gly Lys Glu Gly His Gln Met Lys1 5 10 15<210>725<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽105<400>725Trp Lys Cys Gly Lys Glu Gly His Gln Met Lys Asp Cys Thr Glu1 5 10 15<210>726<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽106<400>726Lys Glu Gly His Gln Met Lys Asp Cys Thr Glu Arg Gln Ala Asn1 5 10 15<210>727<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽107<400>727Gln Met Lys Asp Cys Thr Glu Arg Gln Ala Asn Phe Leu Gly Lys
1 5 10 15<210>728<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽108<400>728Cys Thr Glu Arg Gln Ala Asn Phe Leu Gly Lys Ile Trp Pro Ser1 5 10 15<210>729<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽109<400>729Gln Ala Asn Phe Leu Gly Lys Ile Trp Pro Ser His Lys Gly Arg1 5 10 15<210>730<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽110<400>730Leu Gly Lys Ile Trp Pro Ser His Lys Gly Arg Pro Gly Asn Phe1 5 10 15<210>731<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽111<400>731Trp Pro Ser His Lys Gly Arg Pro Gly Asn Phe Leu Gln Ser Arg1 5 10 15<210>732<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽112<400>732Lys Gly Arg Pro Gly Asn Phe Leu Gln Ser Arg Pro Glu Pro Thr1 5 10 15<210>733<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽113<400>733Gly Asn Phe Leu Gln Ser Arg Pro Glu Pro Thr Ala Pro Pro Glu1 5 10 15<210>734<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽114<400>734Gln Ser Arg Pro Glu Pro Thr Ala Pro Pro Glu Glu Ser Phe Ara1 5 10 15<210>735<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽115
<400>735Glu Pro Thr Ala Pro Pro Glu Glu Ser Phe Arg Phe Gly Glu Glu1 5 10 15<210>736<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽116<400>736Pro Pro Glu Glu Ser Phe Arg Phe Gly Glu Glu Thr Thr Thr Pro1 5 10 15<210>737<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽117<400>737Ser Phe Arg Phe Gly Glu Glu Thr Thr Thr Pro Ser Gln Lys Gln1 5 10 15<210>738<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽118<400>738Gly Glu Glu Thr Thr Thr Pro Ser Gln Lys Gln Glu Pro Ile Asp1 5 10 15<210>739<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽119<400>739Thr Thr Thr Pro Ser Gln Lys Gln Glu Pro Ile Asp Lys Glu Leu1 5 10 15<210>740<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽120<400>740Ser Gln Lys Gln Glu Pro Ile Asp Lys Glu Leu Tyr Pro Leu Ala1 5 10 15<210>741<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽121<400>741Glu Pro Ile Asp Lys Glu Leu Tyr Pro Leu Ala Ser Leu Arg Ser1 5 10 15<210>742<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 gag肽122<400>742Lys Glu Leu Tyr Pro Leu Ala Ser Leu Arg Ser Leu Phe Gly Asn1 5 10 15<210>743<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
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<223>HIV-1 nef肽2<400>746Trp Ser Lys Arg Ser Val Val Gly Trp Pro Thr Val Arg Glu Arg1 5 10 15<210>747<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽3<400>747Ser Val Val Gly Trp Pro Thr Val Arg Glu Arg Met Arg Arg Ala1 5 10 15<210>748<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽4<400>748Trp Pro Thr Val Arg Glu Arg Met Arg Arg Ala Glu Pro Ala Ala1 5 10 15<210>749<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽5<400>749Arg Glu Arg Met Arg Arg Ala Glu Pro Ala Ala Asp Gly Val Gly1 5 10 15<210>750<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽6<400>750Arg Arg Ala Glu Pro Ala Ala Asp Gly Val Gly Ala Val Ser Arg1 5 10 15<210>751
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽7<400>751Pro Ala Ala Asp Gly Val Gly Ala Val Ser Arg Asp Leu Glu Lys1 5 10 15<210>752<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽8<400>752Gly Val Gly Ala Val Ser Arg Asp Leu Glu Lys His Gly Ala Ile1 5 10 15<210>753<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽9<400>753Val Ser Arg Asp Leu Glu Lys His Gly Ala Ile Thr Ser Ser Asn1 5 10 15<210>754<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽10<400>754Leu Glu Lys His Gly Ala Ile Thr Ser Ser Asn Thr Ala Ala Asn1 5 10 15<210>755<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽11<400>755Gly Ala Ile Thr Ser Ser Asn Thr Ala Ala Asn Asn Ala Asp Cys1 5 10 15<210>756<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽12<400>756Ser Ser Asn Thr Ala Ala Asn Asn Ala Asp Cys Ala Trp Leu Glu1 5 10 15<210>757<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽13<400>757Ala Ala Asn Asn Ala Asp Cys Ala Trp Leu Glu Ala Gln Glu Glu1 5 10 15<210>758<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽14<400>758Ala Asp Cys Ala Trp Leu Glu Ala Gln Glu Glu Glu Glu Val Gly
1 5 10 15<210>759<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽15<400>759Trp Leu Glu Ala Gln Glu Glu Glu Glu Val Gly Phe Pro Val Arg1 5 10 15<210>760<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽16<400>760Gln Glu Glu Glu Glu Val Gly Phe Pro Val Arg Pro Gln Val Pro1 5 10 15<210>761<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽17<400>761Glu Val Gly Phe Pro Val Arg Pro Gln Val Pro Leu Arg Pro Met1 5 10 15<210>762<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽18<400>762Pro Val Arg Pro Gln Val Pro Leu Arg Pro Met Thr Tyr Lys Ala1 5 10 15<210>763<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽19<400>763Gln Val Pro Leu Arg Pro Met Thr Tyr Lys Ala Ala Val Asp Leu1 5 10 15<210>764<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽20<400>764Arg Pro Met Thr Tyr Lys Ala Ala Val Asp Leu Ser His Phe Leu1 5 10 15<210>765<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽21<400>765Tyr Lys Ala Ala Val Asp Leu Ser His Phe Leu Lys Glu Lys Gly1 5 10 15<210>766<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽22
<400>766Val Asp Leu Ser His Phe Leu Lys Glu Lys Gly Gly Leu Glu Gly1 5 10 15<210>767<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 nef肽24<400>768Glu Lys Gly Gly Leu Glu Gly Leu Ile Tyr Ser Gln Lys Arg Gln1 5 10 15<210>769<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽25<400>769Leu Glu Gly Leu Ile Tyr Ser Gln Lys Arg Gln Asp Ile Leu Asp1 5 10 15<210>770<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 nef肽29<400>773Trp Val Tyr His Thr Gln Gly Tyr Phe Pro Asp Trp Gln Asn Tyr1 5 10 15<210>774<211>15<212>PRT<213>人工序列
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<223>HIV-1 nef肽37<400>781Leu Val Pro Val Glu Pro Glu Lys Val Glu Glu Ala Asn Glu Gly1 5 10 15<210>782
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<223>HIV-1 nef肽38<400>782Glu Pro Glu Lys Val Glu Glu Ala Asn Glu Gly Glu Asn Asn Ser1 5 10 15<210>783<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽39<400>783Val Glu Glu Ala Asn Glu Gly Glu Asn Asn Ser Leu Leu His Pro1 5 10 15<210>784<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽40<400>784Asn Glu Gly Glu Asn Asn Ser Leu Leu His Pro Met Ser Leu His1 5 10 15<210>785<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 nef肽46<400>790Leu Val Trp Lys Phe Asp Ser Arg Leu Ala Phe His His Met Ala1 5 10 15<210>791<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽47<400>791Phe Asp Ser Arg Leu Ala Phe His His Met Ala Arg Glu Leu His1 5 10 15<210>792<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 nef肽48<400>792Leu Ala Phe His His Met Ala Arg Glu Leu His Pro Glu Tyr Tyr1 5 10 15<210>793<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 pol肽2<400>795Asp Leu Ala Phe Pro Gln Gly Lys Ala Arg Glu Phe Ser Ser Glu1 5 10 15<210>796<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽3<400>796Pro Gln Gly Lys Ala Arg Glu Phe Ser Ser Glu Gln Thr Arg Ala1 5 10 15<210>797<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽4
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<223>HIV-1 pol肽9<400>802Val Trp Gly Arg Asp Asn Asn Ser Leu Ser Glu Ala Gly Ala Asp1 5 10 15<210>803<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 pol肽13<400>806Gln Gly Thr Val Ser Phe Ser Phe Pro Gln Ile Thr Leu Trp Gln1 5 10 15<210>807<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽14<400>807Ser Phe Ser Phe Pro Gln Ile Thr Leu Trp Gln Arg Pro Leu Val1 5 10 15<210>808<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽15<400>808Pro Gln Ile Thr Leu Trp Gln Arg Pro Leu Val Thr Ile Lys Ile1 5 10 15<210>809<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽16<400>809Leu Trp Gln Arg Pro Leu Val Thr Ile Lys Ile Gly Gly Gln Leu1 5 10 15<210>810<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽17<400>810Pro Leu Val Thr Ile Lys Ile Gly Gly Gln Leu Lys Glu Ala Leu1 5 10 15<210>811<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽18<400>811Ile Lys Ile Gly Gly Gln Leu Lys Glu Ala Leu Leu Asp Thr Gly1 5 10 15<210>812<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 pol肽22<400>815Asp Asp Thr Val Leu Glu Glu Met Asn Leu Pro Gly Arg Trp Lys1 5 10 15<210>816<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽23<400>816Leu Glu Glu Met Asn Leu Pro Gly Arg Trp Lys Pro Lys Met Ile1 5 10 15<210>817<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽24<400>817Asn Leu Pro Gly Arg Trp Lys Pro Lys Met Ile Gly Gly Ile Gly1 5 10 15<210>818<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽25<400>818Arg Trp Lys Pro Lys Met Ile Gly Gly Ile Gly Gly Phe Ile Lys1 5 10 15<210>819<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽26<400>819Lys Met Ile Gly Gly Ile Gly Gly Phe Ile Lys Val Arg Gln Tyr1 5 10 15<210>820<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽27<400>820Gly Ile Gly Gly Phe Ile Lys Val Arg Gln Tyr Asp Gln Ile Leu
1 5 10 15<210>821<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽28<400>821Phe Ile Lys Val Arg Gln Tyr Asp Gln Ile Leu Ile Glu Ile Cys1 5 10 15<210>822<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽29<400>822Arg Gln Tyr Asp Gln Ile Leu Ile Glu Ile Cys Gly His Lys Ala1 5 10 15<210>823<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽30<400>823Gln Ile Leu Ile Glu Ile Cys Gly His Lys Ala Ile Gly Thr Val1 5 10 15<210>824<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽31<400>824Glu Ile Cys Gly His Lys Ala Ile Gly Thr Val Leu Val Gly Pro1 5 10 15<210>825<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽32<400>825His Lys Ala Ile Gly Thr Val Leu Val Gly Pro Thr Pro Val Asn1 5 10 15<210>826<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽33<400>826Gly Thr Val Leu Val Gly Pro Thr Pro Val Asn Ile Ile Gly Arg1 5 10 15<210>827<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽34<400>827Val Gly Pro Thr Pro Val Asn Ile Ile Gly Arg Asn Leu Leu Thr1 5 10 15<210>828<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽35
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<223>HIV-1 pol肽36<400>829Ile Gly Arg Asn Leu Leu Thr Gln Ile Gly Cys Thr Leu Asn Phe1 5 10 15<210>830<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽37<400>830Leu Leu Thr Gln Ile Gly Cys Thr Leu Asn Phe Pro Ile Ser Pro1 5 10 15<210>831<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽38<400>831Ile Gly Cys Thr Leu Asn Phe Pro Ile Ser Pro Ile Glu Thr Val1 5 10 15<210>832<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽39<400>832Leu Asn Phe Pro Ile Ser Pro Ile Glu Thr Val Pro Val Lys Leu1 5 10 15<210>833<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽40<400>833Ile Ser Pro Ile Glu Thr Val Pro Val Lys Leu Lys Pro Gly Met1 5 10 15<210>834<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽41<400>834Glu Thr Val Pro Val Lys Leu Lys Pro Gly Met Asp Gly Pro Lys1 5 10 15<210>835<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽42<400>835Val Lys Leu Lys Pro Gly Met Asp Gly Pro Lys Val Lys Gln Trp1 5 10 15<210>836<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 pol肽43<400>836Pro Gly Met Asp Gly Pro Lys Val Lys Gln Trp Pro Leu Thr Glu1 5 10 15<210>837<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽44<400>837Gly Pro Lys Val Lys Gln Trp Pro Leu Thr Glu Glu Lys Ile Lys1 5 10 15<210>838<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽45<400>838Lys Gln Trp Pro Leu Thr Glu Glu Lys Ile Lys Ala Leu Val Glu1 5 10 15<210>839<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽46<400>839Leu Thr Glu Glu Lys Ile Lys Ala Leu Val Glu Ile Cys Thr Glu1 5 10 15<210>840<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽47<400>840Lys Ile Lys Ala Leu Val Glu Ile Cys Thr Glu Met Glu Lys Glu1 5 10 15<210>841<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽48<400>841Leu Val Glu Ile Cys Thr Glu Met Glu Lys Glu Gly Lys Ile Ser1 5 10 15<210>842<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽49<400>842Cys Thr Glu Met Glu Lys Glu Gly Lys Ile Ser Lys Ile Gly Pro1 5 10 15<210>843<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽50<400>843Glu Lys Glu Gly Lys Ile Ser Lys Ile Gly Pro Glu Asn Pro Tyr1 5 10 15<210>844
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽51<400>844Lys Ile Ser Lys Ile Gly Pro Glu Asn Pro Tyr Asn Thr Pro Val1 5 10 15<210>845<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽52<400>845Ile Gly Pro Glu Asn Pro Tyr Asn Thr Pro Val Phe Ala Ile Lys1 5 10 15<210>846<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽53<400>846Asn Pro Tyr Asn Thr Pro Val Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asp Ser1 5 10 15<210>847<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽54<400>847Thr Pro Val Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asp Ser Thr Lys Trp Arg1 5 10 15<210>848<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽55<400>848Ala Ile Lys Lys Lys Asp Ser Thr Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp1 5 10 15<210>849<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽56<400>849Lys Asp Ser Thr Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp Phe Arg Glu Leu1 5 10 15<210>850<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽57<400>850Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp Phe Arg Glu Leu Asn Lys Arg Thr1 5 10 15<210>851<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽58<400>851Leu Val Asp Phe Arg Glu Leu Asn Lys Arg Thr Gln Asp Phe Trp
1 5 10 15<210>852<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽59<400>852Arg Glu Leu Asn Lys Arg Thr Gln Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu1 5 10 15<210>853<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽60<400>853Lys Arg Thr Gln Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu Gly Ile Pro His1 5 10 15<210>854<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽61<400>854Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly Leu1 5 10 15<210>855<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽62<400>855Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly Leu Lys Lys Lys Lys1 5 10 15<210>856<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽63<400>856Ile Pro His Pro Ala Gly Leu Lys Lys Lys Lys Ser Val Thr Val1 5 10 15<210>857<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽64<400>857Ala Gly Leu Lys Lys Lys Lys Ser Val Thr Val Leu Asp Val Gly1 5 10 15<210>858<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽65<400>858Lys Lys Lys Ser Val Thr Val Leu Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe1 5 10 15<210>859<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽66
<400>859Val Thr Val Leu Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe Ser Val Pro Leu1 5 10 15<210>860<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽67<400>860Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe Ser Val Pro Leu Asp Lys Asp Phe1 5 10 15<210>861<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽68<400>861Ala Tyr Phe Ser Val Pro Leu Asp Lys Asp Phe Arg Lys Tyr Thr1 5 10 15<210>862<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽69<400>862Val Pro Leu Asp Lys Asp Phe Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr Ile1 5 10 15<210>863<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽70<400>863Lys Asp Phe Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr Ile Pro Ser Ile Asn1 5 10 15<210>864<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽71<400>864Lys Tyr Thr Ala Phe Thr Ile Pro Ser Ile Asn Asn Glu Thr Pro1 5 10 15<210>865<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽72<400>865Phe Thr Ile Pro Ser Ile Asn Asn Glu Thr Pro Gly Ile Arg Tyr1 5 10 15<210>866<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽73<400>866Ser Ile Asn Asn Glu Thr Pro Gly Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn Val1 5 10 15<210>867<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 pol肽74<400>867Glu Thr Pro Gly Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu Pro Gln Gly1 5 10 15<210>868<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽75<400>868Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser1 5 10 15<210>869<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽76<400>869Tyr Asn Val Leu Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe1 5 10 15<210>870<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽77<400>870Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Ser Ser Met1 5 10 15<210>871<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽78<400>871Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Ser Ser Met Thr Lys Ile Leu1 5 10 15<210>872<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽79<400>872Ala Ile Phe Gln Ser Ser Met Thr Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg1 5 10 15<210>873<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽80<400>873Ser Ser Met Thr Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg Lys Gln Asn Pro1 5 10 15<210>874<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽81<400>874Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val Ile1 5 10 15<210>875
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽82<400>875Pro Phe Arg Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val Ile Tyr Gln Tyr Met1 5 10 15<210>876<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽83<400>876Gln Asn Pro Asp Ile Val Ile Tyr Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr1 5 10 15<210>877<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽84<400>877Ile Val Ile Tyr Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser Asp1 5 10 15<210>878<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽85<400>878Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile Gly1 5 10 15<210>879<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽86<400>879Asp Leu Tyr Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile Gly Gln His Arg Thr1 5 10 15<210>880<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽87<400>880Gly Ser Asp Leu Glu Ile Gly Gln His Arg Thr Lys Ile Glu Glu1 5 10 15<210>881<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽88<400>881Glu Ile Gly Gln His Arg Thr Lys Ile Glu Glu Leu Arg Gln His1 5 10 15<210>882<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽89<400>882His Arg Thr Lys Ile Glu Glu Leu Arg Gln His Leu Leu Arg Trp
1 5 10 15<210>883<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽90<400>883Ile Glu Glu Leu Arg Gln His Leu Leu Arg Trp Gly Phe Thr Thr1 5 10 15<210>884<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽91<400>884Arg Gln His Leu Leu Arg Trp Gly Phe Thr Thr Pro Asp Lys Lys1 5 10 15<210>885<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽92<400>885Leu Arg Trp Gly Phe Thr Thr Pro Asp Lys Lys His Gln Lys Glu1 5 10 15<210>886<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽93<400>886Phe Thr Thr Pro Asp Lys Lys His Gln Lys Glu Pro Pro Phe Leu1 5 10 15<210>887<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽94<400>887Asp Lys Lys His Gln Lys Glu Pro Pro Phe Leu Trp Met Gly Tyr1 5 10 15<210>888<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽95<400>888Gln Lys Glu Pro Pro Phe Leu Trp Met Gly Tyr Glu Leu His Pro1 5 10 15<210>889<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽96<400>889Pro Phe Leu Trp Met Gly Tyr Glu Leu His Pro Asp Lys Trp Thr1 5 10 15<210>890<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽97
<400>890Met Gly Tyr Glu Leu His Pro Asp Lys Trp Thr Val Gln Pro Ile1 5 10 15<210>891<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽98<400>891Leu His Pro Asp Lys Trp Thr Val Gln Pro Ile Val Leu Pro Glu1 5 10 15<210>892<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽99<400>892Lys Trp Thr Val Gln Pro Ile Val Leu Pro Glu Lys Asp Ser Trp1 5 10 15<210>893<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽100<400>893Gln Pro Ile Val Leu Pro Glu Lys Asp Ser Trp Thr Val Asn Asp1 5 10 15<210>894<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽101<400>894Leu Pro Glu Lys Asp Ser Trp Thr Val Asn Asp Ile Gln Lys Leu1 5 10 15<210>895<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽102<400>895Asp Ser Trp Thr Val Asn Asp Ile Gln Lys Leu Val Gly Lys Leu1 5 10 15<210>896<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽103<400>896Val Asn Asp Ile Gln Lys Leu Val Gly Lys Leu Asn Trp Ala Ser1 5 10 15<210>897<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽104<400>897Gln Lys Leu Val Gly Lys Leu Asn Trp Ala Ser Gln Ile Tyr Ala1 5 10 15<210>898<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 pol肽105<400>898Gly Lys Leu Asn Trp Ala Ser Gln Ile Tyr Ala Gly Ile Lys Val1 5 10 15<210>899<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽106<400>899Trp Ala Ser Gln Ile Tyr Ala Gly Ile Lys Val Lys Gln Leu Cys1 5 10 15<210>900<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽107<400>900Ile Tyr Ala Gly Ile Lys Val Lys Gln Leu Cys Lys Leu Leu Arg1 5 10 15<210>901<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽108<400>901Ile Lys Val Lys Gln Leu Cys Lys Leu Leu Arg Gly Thr Lys Ala1 5 10 15<210>902<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽109<400>902Gln Leu Cys Lys Leu Leu Arg Gly Thr Lys Ala Leu Thr Glu Val1 5 10 15<210>903<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽110<400>903Leu Leu Arg Gly Thr Lys Ala Leu Thr Glu Val Ile Pro Leu Thr1 5 10 15<210>904<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽111<400>904Thr Lys Ala Leu Thr Glu Val Ile Pro Leu Thr Glu Glu Ala Glu1 5 10 15<210>905<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽112<400>905Thr Glu Val Ile Pro Leu Thr Glu Glu Ala Glu Leu Glu Leu Ala1 5 10 15<210>906
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽113<400>906Pro Leu Thr Glu Glu Ala Glu Leu Glu Leu Ala Glu Asn Arg Glu1 5 10 15<210>907<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽114<400>907Glu Ala Glu Leu Glu Leu Ala Glu Asn Arg Glu Ile Leu Lys Glu1 5 10 15<210>908<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽115<400>908Glu Leu Ala Glu Asn Arg Glu Ile Leu Lys Glu Pro Val His Gly1 5 10 15<210>909<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽116<400>909Asn Arg Glu Ile Leu Lys Glu Pro Val His Gly Val Tyr Tyr Asp1 5 10 15<210>910<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽117<400>910Leu Lys Glu Pro Val His Gly Val Tyr Tyr Asp Pro Ser Lys Asp1 5 10 15<210>911<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽118<400>911Val His Gly Val Tyr Tyr Asp Pro Ser Lys Asp Leu Ile Ala Glu1 5 10 15<210>912<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽119<400>912Tyr Tyr Asp Pro Ser Lys Asp Leu Ile Ala Glu Ile Gln Lys Gln1 5 10 15<210>913<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽120<400>913Ser Lys Asp Leu Ile Ala Glu Ile Gln Lys Gln Gly Gln Gly Gln
1 5 10 15<210>914<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽121<400>914Ile Ala Glu Ile Gln Lys Gln Gly Gln Gly Gln Trp Thr Tyr Gln1 5 10 15<210>915<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽122<400>9L5Gln Lys Gln Gly Gln Gly Gln Trp Thr Tyr Gln Ile Tyr Gln Glu1 5 10 15<210>916<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽123<400>916Gln Gly Gln Trp Thr Tyr Gln Ile Tyr Gln Glu Pro Phe Lys Asn1 5 10 15<210>917<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽124<400>917Thr Tyr Gln Ile Tyr Gln Glu Pro Phe Lys Asn Leu Lys Thr Gly1 5 10 15<210>918<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽125<400>918Tyr Gln Glu Pro Phe Lys Asn Leu Lys Thr Gly Lys Tyr Ala Arg1 5 10 15<210>919<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽126<400>919Phe Lys Asn Leu Lys Thr Gly Lys Tyr Ala Arg Met Arg Gly Ala1 5 10 15<210>920<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽127<400>920Lys Thr Gly Lys Tyr Ala Arg Met Arg Gly Ala His Thr Asn Asp1 5 10 15<210>921<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽128
<400>921Tyr Ala Arg Met Arg Gly Ala His Thr Asn Asp Val Lys Gln Leu1 5 10 15<210>922<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽129<400>922Arg Gly Ala His Thr Asn Asp Val Lys Gln Leu Thr Glu Ala Val1 5 10 15<210>923<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽130<400>923Thr Asn Asp Val Lys Gln Leu Thr Glu Ala Val Gln Lys Ile Ala1 5 10 15<210>924<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽131<400>924Lys Gln Leu Thr Glu Ala Val Gln Lys Ile Ala Thr Glu Ser Ile1 5 10 15<210>925<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽132<400>925Glu Ala Val Gln Lys Ile Ala Thr Glu Ser Ile Val Ile Trp Gly1 5 10 15<210>926<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽133<400>926Lys Ile Ala Thr Glu Ser Ile Val Ile Trp Gly Lys Thr Pro Lys1 5 10 15<210>927<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽134<400>927Glu Ser Ile Val Ile Trp Gly Lys Thr Pro Lys Phe Lys Leu Pro1 5 10 15<210>928<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽135<400>928Ile Trp Gly Lys Thr Pro Lys Phe Lys Leu Pro Ile Gln Lys Glu1 5 10 15<210>929<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 pol肽136<400>929Thr Pro Lys Phe Lys Leu Pro Ile Gln Lys Glu Thr Trp Glu Ala1 5 10 15<210>930<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽137<400>930Lys Leu Pro Ile Gln Lys Glu Thr Trp Glu Ala Trp Trp Thr Glu1 5 10 15<210>931<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽138<400>931Gln Lys Glu Thr Trp Glu Ala Trp Trp Thr Glu Tyr Trp Gln Ala1 5 10 15<210>932<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽139<400>932Trp Glu Ala Trp Trp Thr Glu Tyr Trp Gln Ala Thr Trp Ile Pro1 5 10 15<210>933<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽140<400>933Trp Thr Glu Tyr Trp Gln Ala Thr Trp Ile Pro Glu Trp Glu Phe1 5 10 15<210>934<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽141<400>934Trp Gln Ala Thr Trp Ile Pro Glu Trp Glu Phe Val Asn Thr Pro1 5 10 15<210>935<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽142<400>935Trp Ile Pro Glu Trp Glu Phe Val Asn Thr Pro Pro Leu Val Lys1 5 10 15<210>936<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽143<400>936Trp Glu Phe Val Asn Thr Pro Pro Leu Val Lys Leu Trp Tyr Gln1 5 10 15<210>937
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽144<400>937Asn Thr Pro Pro Leu Val Lys Leu Trp Tyr Gln Leu Glu Lys Glu1 5 10 15<210>938<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽145<400>938Leu Val Lys Leu Trp Tyr Gln Leu Glu Lys Glu Pro Ile Val Gly1 5 10 15<210>939<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽146<400>939Trp Tyr Gln Leu Glu Lys Glu Pro Ile Val Gly Ala Glu Thr Phe1 5 10 15<210>940<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<220>
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1 5 10 15<210>976<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<220>
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<220>
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<223>HIV-1 pol肽230<400>1023Asp Ile Ile Ala Thr Asp Ile Gln Thr Lys Glu Leu Gln Lys Gln1 5 10 15<210>1024<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
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<223>HIV-1 pol肽233<400>1026Gln Lys Gln Ile Thr Lys Ile Gln Asn Phe Arg Val Tyr Arg Asp1 5 10 15<210>1027<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽234<400>1027Thr Lys Ile Gln Asn Phe Arg Val Tyr Arg Asp Ser Arg Asp Pro1 5 10 15<210>1028<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽235<400>1028Asn Phe Arg Val Tyr Arg Asp Ser Arg Asp Pro Leu Trp Lys Gly1 5 10 15<210>1029<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽236<400>1029Tyr Arg Asp Ser Arg Asp Pro Leu Trp Lys Gly Pro Ala Lys Leu1 5 10 15<210>1030
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽237<400>1030Arg Asp Pro Leu Trp Lys Gly Pro Ala Lys Leu Leu Trp Lys Gly1 5 10 15<210>1031<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽238<400>1031Trp Lys Gly Pro Ala Lys Leu Leu Trp Lys Gly Glu Gly Ala Val1 5 10 15<210>1032<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽239<400>1032Ala Lys Leu Leu Trp Lys Gly Glu Gly Ala Val Val Ile Gln Asp1 5 10 15<210>1033<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽240<400>1033Trp Lys Gly Glu Gly Ala Val Val Ile Gln Asp Asn Ser Asp Ile1 5 10 15<210>1034<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽241<400>1034Gly Ala Val Val Ile Gln Asp Asn Ser Asp Ile Lys Val Val Pro1 5 10 15<210>1035<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽242<400>1035Ile Gln Asp Asn Ser Asp Ile Lys Val Val Pro Arg Arg Lys Ala1 5 10 15<210>1036<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽243<400>1036Ser Asp Ile Lys Val Val Pro Arg Arg Lys Ala Lys Ile Ile Arg1 5 10 15<210>1037<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽244<400>1037Val Val Pro Arg Arg Lys Ala Lys Ile Ile Arg Asp Tyr Gly Lys
1 5 10 15<210>1038<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽245<400>1038Arg Lys Ala Lys Ile Ile Arg Asp Tyr Gly Lys Gln Met Ala Gly1 5 10 15<210>1039<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽246<400>1039Ile Ile Arg Asp Tyr Gly Lys Gln Met Ala Gly Asp Asp Cys Val1 5 10 15<210>1040<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽247<400>1040Tyr Gly Lys Gln Met Ala Gly Asp Asp Cys Val Ala Ser Arg Gln1 5 10 15<210>1041<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 pol肽248<400>1041Met Ala Gly Asp Asp Cys Val Ala Ser Arg Gln Asp Glu Asp1 5 10<210>1042<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽1<400>1042Met Ala Gly Arg Ser Gly Asp Ser Asp Glu Glu Leu Leu Lys Thr Leu1 5 10 15<210>1043<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽2<400>1043Ser Gly Asp Ser Asp Glu Glu Leu Leu Lys Thr Val Arg Leu Ile Cys1 5 10 15<210>1044<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽3<400>1044Asp Glu Glu Leu Leu Lys Thr Val Arg Leu Ile Lys Phe Leu Tyr Cys1 5 10 15<210>1045<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽4
<400>1045Leu Lys Thr Val Arg Leu Ile Lys Phe Leu Tyr Gln Ser Asn Pro Gly1 5 10 15<210>1046<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽5<400>1046Arg Leu Ile Lys Phe Leu Tyr Gln Ser Asn Pro Pro Pro Ser Pro Val1 5 10 15<210>1047<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽6<400>1047Phe Leu Tyr Gln Ser Asn Pro Pro Pro Ser Pro Glu Gly Thr Arg Gln1 5 10 15<210>1048<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽7<400>1048Ser Asn Pro Pro Pro Ser Pro Glu Gly Thr Arg Gln Ala Arg Arg Glu1 5 10 15<210>1049<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽8<400>1049Pro Ser Pro Glu Gly Thr Arg Gln Ala Arg Arg Asn Arg Arg Arg1 5 10 15<210>1050<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽9<400>1050Gly Thr Arg Gln Ala Arg Arg Asn Arg Arg Arg Arg Trp Arg Glu1 5 10 15<210>1051<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽10<400>1051Ala Arg Arg Asn Arg Arg Arg Arg Trp Arg Glu Arg Gln Arg Gln1 5 10 15<210>1052<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽11<400>1052Arg Arg Arg Arg Trp Arg Glu Arg Gln Arg Gln Ile Arg Ser Ile1 5 10 15<210>1053<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽12<400>1053Trp Arg Glu Arg Gln Arg Gln Ile Arg Ser Ile Ser Glu Trp Ile1 5 10 15<210>1054<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽13<400>1054Gln Arg Gln Ile Arg Ser Ile Ser Glu Trp Ile Leu Ser Thr Tyr1 5 10 15<210>1055<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽14<400>1055Arg Ser Ile Ser Glu Trp Ile Leu Ser Thr Tyr Leu Gly Arg Pro1 5 10 15<210>1056<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽15<400>1056Glu Trp Ile Leu Ser Thr Tyr Leu Gly Arg Pro Ala Glu Pro Val1 5 10 15<210>1057<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽16<400>1057Ser Thr Tyr Leu Gly Arg Pro Ala Glu Pro Val Pro Leu Gln Leu1 5 10 15<210>1058<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽17<400>1058Gly Arg Pro Ala Glu Pro Val Pro Leu Gln Leu Pro Pro Leu Glu1 5 10 15<210>1059<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽18<400>1059Glu Pro Val Pro Leu Gln Leu Pro Pro Leu Glu Arg Leu Thr Leu1 5 10 15<210>1060<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽19<400>1060Leu Gln Leu Pro Pro Leu Glu Arg Leu Thr Leu Asp Cys Asn Glu1 5 10 15<210>1061<211>15<212>PRT
<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽20<400>1061Pro Leu Glu Arg Leu Thr Leu Asp Cys Asn Glu Asp Cys Gly Thr1 5 10 15<210>1062<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽21<400>1062Thr Leu Asp Cys Asn Glu Asp Cys Gly Thr Ser Gly Thr Gln1 5 10<210>1063<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽22<400>1063Asn Glu Asp Cys Gly Thr Ser Gly Thr Gln Gly Val Gly Ser1 5 10<210>1064<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽23<400>1064Gly Thr Ser Gly Thr Gln Gly Val Gly Ser Pro Gln Ile Leu1 5 10<210>1065<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽24<400>1065Thr Gln Gly Val Gly Ser Pro Gln Ile Leu Val Glu Ser Pro1 5 10<210>1066<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽25<400>1066Gly Ser Pro Gln Ile Leu Val Glu Ser Pro Ala Val Leu Glu1 5 10<210>1067<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽26<400>1067Ile Leu Val Glu Ser Pro Ala Val Leu Glu Ser Gly Thr Lys1 5 10<210>1068<211>12<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 rev肽27<400>1068Ser Pro Ala Val Leu Glu Ser Gly Thr Lys Glu Glu1 5 10
<210>1069<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽1<400>1069Met Glu Pro Val Asp Pro Arg Leu Glu Pro Trp Lys His Pro Gly Pro1 5 10 15<210>1070<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽2<400>1070Asp Pro Arg Leu Glu Pro Trp Lys His Pro Gly Ser Gln Pro Lys Pro1 5 10 15<210>1071<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽3<400>1071Glu Pro Trp Lys His Pro Gly Ser Gln Pro Lys Thr Ala Cys Thr Lys1 5 10 15<210>1072<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽4<400>1072His Pro Gly Ser Gln Pro Lys Thr Ala Cys Thr Asn Cys Tyr Cys Lys1 5 10 15<210>1073<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽5<400>1073Gln Pro Lys Thr Ala Cys Thr Asn Cys Tyr Cys Lys Lys Cys Cys1 5 10 15<210>1074<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽6<400>1074Ala Cys Thr Asn Cys Tyr Cys Lys Lys Cys Cys Phe His Cys Gln1 5 10 15<210>1075<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽7<400>1075Cys Tyr Cys Lys Lys Cys Cys Phe His Cys Gln Val Cys Phe Ile1 5 10 15<210>1076<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽8<400>1076Lys Cys Cys Phe His Cys Gln Val Cys Phe Ile Thr Lys G1y Leu
1 5 10 15<210>1077<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽9<400>1077His Cys Gln Val Cys Phe Ile Thr Lys Gly Leu Gly Ile Ser Tyr1 5 10 15<210>1078<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽10<400>1078Cys Phe Ile Thr Lys Gly Leu Gly Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Lys1 5 10 15<210>1079<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽11<400>1079Lys Gly Leu Gly Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg1 5 10 15<210>1080<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽12<400>1080Ile Ser Tyr Gly Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ala Pro1 5 10 15<210>1081<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽13<400>1081Arg Lys Lys Arg Arg Gln Arg Arg Arg Ala Pro Gln Asp Ser Gln1 5 10 15<210>1082<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽14<400>1082Arg Gln Arg Arg Arg Ala Pro Gln Asp Ser Gln Thr His Gln Val1 5 10 15<210>1083<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽15<400>1083Arg Ala Pro Gln Asp Ser Gln Thr His Gln Val Ser Leu Ser Lys1 5 10 15<210>1084<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽16
<400>1084Asp Ser Gln Thr His Gln Val Ser Leu Ser Lvs Gln Pro Ala Ser1 5 10 15<210>1085<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽17<400>1085His Gln Val Ser Leu Ser Lys Gln Pro Ala Ser Gln Pro Arg Gly1 5 10 15<210>1086<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽18<400>1086Leu Ser Lys Gln Pro Ala Ser Gln Pro Arg Gly Asp Pro Thr Gly1 5 10 15<210>1087<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽19<400>1087Pro Ala Ser Gln Pro Arg Gly Asp Pro Thr Gly Pro Lys Glu Ser1 5 10 15<210>1088<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽20<400>1088Arg Gly Asp Pro Thr Gly Pro Lys Glu Ser Lys Lys Lys Val1 5 10<210>1089<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽21<400>1089Thr Gly Pro Lys Glu Ser Lys Lys Lys Val Glu Arg Glu Thr1 5 10<210>1090<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽22<400>1090Glu Ser Lys Lys Lys Val Glu Arg Glu Thr Glu Thr Asp Pro1 5 10<210>1091<211>13<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 tat肽23<400>1091Lys Val Glu Arg Glu Thr Glu Thr Asp Pro Val Asp Gln1 5 10<210>1092<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 vif肽1<400>1092Met Glu Asn Arg Trp Gln Val Met Ile Val Trp Gln Val Asp Arg1 5 10 15<210>1093<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽2<400>1093Trp Gln Val Met Ile Val Trp Gln Val Asp Arg Met Arg Ile Arg1 5 10 15<210>1094<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽3<400>1094Ile Val Trp Gln Val Asp Arg Met Arg Ile Arg Thr Trp Lys Ser1 5 10 15<210>1095<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽4<400>1095Val Asp Arg Met Arg Ile Arg Thr Trp Lys Ser Leu Val Lys His1 5 10 15<210>1096<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽5<400>1096Arg Ile Arg Thr Trp Lys Ser Leu Val Lys His His Met Tyr Ile1 5 10 15<210>1097<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽6<400>1097Trp Lys Ser Leu Val Lys His His Met Tyr Ile Ser Arg Lys Ala1 5 10 15<210>1098<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽7<400>1098Val Lys His His Met Tyr Ile Ser Arg Lys Ala Lys Gly Trp Phe1 5 10 15<210>1099<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽8<400>1099Met Tyr Ile Ser Arg Lys Ala Lys Gly Trp Phe Tyr Arg His His1 5 10 15<210>1100
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽9<400>1100Arg Lys Ala Lys Gly Trp Phe Tyr Arg His His Tyr Glu Ser Thr1 5 10 15<210>1101<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽10<400>1101Gly Trp Phe Tyr Arg His His Tyr Glu Ser Thr His Pro Arg Ile1 5 10 15<210>1102<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽11<400>1102Arg His His Tyr Glu Ser Thr His Pro Arg Ile Ser Ser Glu Val1 5 10 15<210>1103<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽12<400>1103Glu Ser Thr His Pro Arg Ile Ser Ser Glu Val His Ile Pro Leu1 5 10 15<210>1104<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽13<400>1104Pro Arg Ile Ser Ser Glu Val His Ile Pro Leu Gly Asp Ala Arg1 5 10 15<210>1105<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽14<400>1105Ser Glu Val His Ile Pro Leu Gly Asp Ala Arg Leu Val Ile Thr1 5 10 15<210>1106<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽15<400>1106Ile Pro Leu Gly Asp Ala Arg Leu Val Ile Thr Thr Tyr Trp Gly1 5 10 15<210>1107<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽16<400>1107Asp Ala Arg Leu Val Ile Thr Thr Tyr Trp Gly Leu His Thr Gly
1 5 10 15<210>1108<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽17<400>1108Val Ile Thr Thr Tyr Trp Gly Leu His Thr Gly Glu Arg Asp Trp1 5 10 15<210>1109<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽18<400>1109Tyr Trp Gly Leu His Thr Gly Glu Arg Asp Trp His Leu Gly Gln1 5 10 15<210>1110<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽19<400>1110His Thr Gly Glu Arg Asp Trp His Leu Gly Gln Gly Val Ser Ile1 5 10 15<210>1111<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽20<400>1111Arg Asp Trp His Leu Gly Gln Gly Val Ser Ile Glu Trp Arg Lys1 5 10 15<210>1112<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽21<400>1112Leu Gly Gln Gly Val Ser Ile Glu Trp Arg Lys Lys Arg Tyr Ser1 5 10 15<210>1113<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽22<400>1113Val Ser Ile Glu Trp Arg Lys Lys Arg Tyr Ser Thr Gln Val Asp1 5 10 15<210>1114<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽23<400>1114Trp Arg Lys Lys Arg Tyr Ser Thr Gln Val Asp Pro Asp Leu Ala1 5 10 15<210>1115<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽24
<400>1115Arg Tyr Ser Thr Gln Val Asp Pro Asp Leu Ala Asp Gln Leu Ile1 5 10 15<210>1116<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽25<400>1116Gln Val Asp Pro Asp Leu Ala Asp Gln Leu Ile His Leu Tyr Tyr1 5 10 15<210>1117<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽26<400>1117Asp Leu Ala Asp Gln Leu Ile His Leu Tyr Tyr Phe Asp Cys Phe1 5 10 15<210>1118<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽27<400>1118Gln Leu Ile His Leu Tyr Tyr Phe Asp Cys Phe Ser Glu Ser Ala1 5 10 15<210>1119<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽28<400>1119Leu Tyr Tyr Phe Asp Cys Phe Ser Glu Ser Ala Ile Arg Asn Ala1 5 10 15<210>1120<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽29<400>1120Asp Cys Phe Ser Glu Ser Ala Ile Arg Asn Ala Ile Leu Gly His1 5 10 15<210>1121<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽30<400>1121Glu Ser Ala Ile Arg Asn Ala Ile Leu Gly His Ile Val Ser Pro1 5 10 15<210>1122<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽31<400>1122Arg Asn Ala Ile Leu Gly His Ile Val Ser Pro Arg Cys Glu Tyr1 5 10 15<210>1123<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 vif肽32<400>1123Leu Gly His Ile Val Ser Pro Arg Cys Glu Tyr Gln Ala Gly His1 5 10 15<210>1124<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽33<400>1124Val Ser Pro Arg Cys Glu Tyr Gln Ala Gly His Asn Lys Val Gly1 5 10 15<210>1125<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽34<400>1125Cys Glu Tyr Gln Ala Gly His Asn Lys Val Gly Ser Leu Gln Tyr1 5 10 15<210>1126<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽35<400>1126Ala Gly His Asn Lys Val Gly Ser Leu Gln Tyr Leu Ala Leu Ala1 5 10 15<210>1127<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽36<400>1127Lys Val Gly Ser Leu Gln Tyr Leu Ala Leu Ala Ala Leu Ile Thr1 5 10 15<210>1128<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽37<400>1128Leu Gln Tyr Leu Ala Leu Ala Ala Leu Ile Thr Pro Lys Lys Ile1 5 10 15<210>1129<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽38<400>1129Ala Leu Ala Ala Leu Ile Thr Pro Lys Lys Ile Lys Pro Pro Leu1 5 10 15<210>1130<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽39<400>1130Leu Ile Thr Pro Lys Lys Ile Lys Pro Pro Leu Pro Ser Val Thr1 5 10 15<210>1131
<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽40<4 0>1131Lys Lys Ile Lys Pro Pro Leu Pro Ser Val Thr Lys Leu Thr Glu1 5 10 15<210>1132<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽41<400>1132Pro Pro Leu Pro Ser Val Thr Lys Leu Thr Glu Asp Arg Trp Asn Lys1 5 10 15<210>1133<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽42<400>1133Pro Pro Leu Pro Ser Val Thr Lys Leu Thr Glu Asp Arg Trp Asn1 5 10 15<210>1134<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽43<400>1134Ser Val Thr Lys Leu Thr Glu Asp Arg Trp Asn Lys Pro Gln Lys1 5 10 15<210>1135<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽44<400>1135Leu Thr Glu Asp Arg Trp Asn Lys Pro Gln Lys Thr Lys Gly His1 5 10 15<210>1136<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽45<400>1136Arg Trp Asn Lys Pro Gln Lys Thr Lys Gly His Arg Gly Ser His1 5 10 15<210>1137<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽46<400>1137Pro Gln Lys Thr Lys Gly His Arg Gly Ser His Thr Met Asn Gly1 5 10 15<210>1138<211>12<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽47<400>1138Lys Gly His Arg Gly Ser His Thr Met Asn Gly His
1 5 10<210>1139<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vif肽48<400>1139Pro Gln Lys Thr Lys Gly His Arg Gly Ser His Thr Met Asn Gly His1 5 10 15<210>1140<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽1<400>1140Met Glu Gln Ala Pro Glu Asp Gln Gly Pro Gln Arg Glu Pro Tyr Ile1 5 10 15<210>1141<211>16<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽2<400>1141Pro Glu Asp Gln Gly Pro Gln Arg Glu Pro Tyr Asn Glu Trp Thr Arg1 5 10 15<210>1142<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽3<400>1142Gly Pro Gln Arg Glu Pro Tyr Asn Glu Trp Thr Leu Glu Leu Leu1 5 10 15<210>1143<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽4<400>1143Glu Pro Tyr Asn Glu Trp Thr Leu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys1 5 10 15<210>1144<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽5<400>1144Glu Trp Thr Leu Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Ser Glu Ala Val1 5 10 15<210>1145<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽6<400>1145Glu Leu Leu Glu Glu Leu Lys Ser Glu Ala Val Arg His Phe Pro1 5 10 15<210>1146<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽7
<400>1146Glu Leu Lys Ser Glu Ala Val Arg His Phe Pro Arg Ile Trp Leu1 5 10 15<210>1147<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽8<400>1147Glu Ala Val Arg His Phe Pro Arg Ile Trp Leu His Gly Leu Gly1 5 10 15<210>1148<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽9<400>1148His Phe Pro Arg Ile Trp Leu His Gly Leu Gly Gln His Ile Tyr1 5 10 15<210>1149<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽10<400>1149Ile Trp Leu His Gly Leu Gly Gln His Ile Tyr Glu Thr Tyr Gly1 5 10 15<210>1150<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽11<400>1150Gly Leu Gly Gln His Ile Tyr Glu Thr Tyr Gly Asp Thr Trp Ala1 5 10 15<210>1151<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽12<400>1151His Ile Tyr Glu Thr Tyr Gly Asp Thr Trp Ala Gly Val Glu Ala1 5 10 15<210>1152<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽13<400>1152Thr Tyr Gly Asp Thr Trp Ala Gly Val Glu Ala Ile Ile Arg Ile1 5 10 15<210>1153<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽14<400>1153Thr Trp Ala Gly Val Glu Ala Ile Ile Arg Ile Leu Gln Gln Leu1 5 10 15<210>1154<211>15<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 vpr肽15<400>1154Val Glu Ala Ile Ile Arg Ile Leu Gln Gln Leu Leu Phe Ile His1 5 10 15<210>1155<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽16<400>1155Ile Arg Ile Leu Gln Gln Leu Leu Phe Ile His Phe Arg Ile Gly1 5 10 15<210>1156<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽17<400>1156Gln Gln Leu Leu Phe Ile His Phe Arg Ile Gly Cys Gln His Ser1 5 10 15<210>1157<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽18<400>1157Phe Ile His Phe Arg Ile Gly Cys Gln His Ser Arg Ile Gly Ile1 5 10 15<210>1158<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽19<400>1158Arg Ile Gly Cys Gln His Ser Arg Ile Gly Ile Thr Arg Gln Arg1 5 10 15<210>1159<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽20<400>1159Gln His Ser Arg Ile Gly Ile Thr Arg Gln Arg Arg Ala Arg Asn1 5 10 15<210>1160<211>14<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽21<400>1160Gly Ile Thr Arg Gln Arg Arg Ala Arg Asn Gly Ala Ser Arg1 5 10<210>1161<211>11<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpr肽22<400>1161Gln Arg Arg Ala Arg Asn Gly Ala Ser Arg Ser1 5 10<210>1162<211>15
<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽1<400>1162Met Gln Ser Leu Gln Ile Leu Ala Ile Val Ala Leu Val Val Ala1 5 10 15<210>1163<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽2<400>1163Gln Ile Leu Ala Ile Val Ala Leu Val Val Ala Ala Ile Ile Ala1 5 10 15<210>1164<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽3<400>1164Ile Val Ala Leu Val Val Ala Ala Ile Ile Ala Ile Val Val Trp1 5 10 15<210>1165<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽4<400>1165Val Val Ala Ala Ile Ile Ala Ile Val Val Trp Ser Ile Val Phe1 5 10 15<210>1166<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽5<400>1166Ile Ile Ala Ile Val Val Trp Ser Ile Val Phe Ile Glu Tyr Arg1 5 10 15<210>1167<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽6<400>1167Val Val Trp Ser Ile Val Phe Ile Glu Tyr Arg Lys Ile Leu Arg1 5 10 15<210>1168<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽7<400>1168Ile Val Phe Ile Glu Tyr Arg Lys Ile Leu Arg Gln Arg Lys Ile1 5 10 15<210>1169<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽8<400>1169Glu Tyr Arg Lys Ile Leu Arg Gln Arg Lys Ile Asp Arg Leu Ile1 5 10 15
<210>1170<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽9<400>1170Ile Leu Arg Gln Arg Lys Ile Asp Arg Leu Ile Asp Arg Ile Arg1 5 10 15<210>1171<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽10<400>1171Arg Lys Ile Asp Arg Leu Ile Asp Arg Ile Arg Glu Arg Ala Glu1 5 10 15<210>1172<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽11<400>1172Arg Leu Ile Asp Arg Ile Arg Glu Arg Ala Glu Asp Ser Gly Asn1 5 10 15<210>1173<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽12<400>1173Arg Ile Arg Glu Arg Ala Glu Asp Ser Gly Asn Glu Ser Glu Gly1 5 10 15<210>1174<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽13<400>1174Arg Ala Glu Asp Ser Gly Asn Glu Ser Glu Gly Asp Gln Glu Glu1 5 10 15<210>1175<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽14<400>1175Ser Gly Asn Glu Ser Glu Gly Asp Gln Glu Glu Leu Ser Ala Leu1 5 10 15<210>1176<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽15<400>1176Ser Glu Gly Asp Gln Glu Glu Leu Ser Ala Leu Val Glu Met Gly1 5 10 15<210>1177<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽16
<400>1177Gln Glu Glu Leu Ser Ala Leu Val Glu Met Gly His His Ala Pro1 5 10 15<210>1178<211>15<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽17<400>1178Ser Ala Leu Val Glu Met Gly His His Ala Pro Trp Asp Val Asp1 5 10 15<210>1179<211>13<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 vpu肽18<400>1179Glu Met Gly His His Ala Pro Trp Asp Val Asp Asp Leu1 5 10<210>1180<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1180Met Ser Thr Asn Pro Lys Pro Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn1 5 10 15Arg Arg<210>1181<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1181Gln Arg Lys Thr Lys Arg Asn Thr Asn Arg Arg Pro Gln Asp Val Lys1 5 10 15Phe Pro<210>1182<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1182Thr Asn Arg Arg Pro Gln Asp Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gln Ile1 5 10 15Val Gly<210>1183<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1183Val Lys Phe Pro Gly Gly Gly Gln Ile Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu1 5 10 15Pro Arg<210>1184<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1184Gln Ile Val Gly Gly Val Tyr Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu1 5 10 15Gly Val<210>1185<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1185
Leu Leu Pro Arg Arg Gly Pro Arg Leu Gly Val Arg Ala Thr Arg Lys1 5 10 15Thr Ser<210>1186<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1186Arg Leu Gly Val Arg Ala Thr Arg Lys Thr Ser Glu Arg Ser Gln Pro1 5 10 15Arg Gly<210>1187<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1187Arg Lys Thr Ser Glu Arg Ser Gln Pro Arg Gly Arg Arg Gln Pro Ile1 5 10 15Pro Lys<210>1188<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1188Gln Pro Arg Gly Arg Arg Gln Pro Ile Pro Lys Ala Arg Arg Pro Glu1 5 10 15Gly Arg<210>1189<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1189Pro Ile Pro Lys Ala Arg Arg Pro Glu Gly Arg Thr Trp Ala Gln Pro1 5 10 15Gly Tyr<210>1190<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1190Pro Glu Gly Arg Thr Trp Ala Gln Pro Gly Tyr Pro Trp Pro Leu Tyr1 5 10 15Gly Asn<210>1191<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1191Gln Pro Gly Tyr Pro Trp Pro Leu Tyr Gly Asn Glu Gly Cys Gly Trp1 5 10 15Ala Gly<210>1192<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1192Leu Tyr Gly Asn Glu Gly Cys Gly Trp Ala Gly Trp Leu Leu Ser Pro1 5 10 15Arg Gly<210>1193<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1193
Gly Trp Ala Gly Trp Leu Leu Ser Pro Arg Gly Ser Arg Pro Ser Trp1 5 10 15Gly Pro<210>1194<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1194Ser Pro Arg Gly Ser Arg Pro Ser Trp Gly Pro Thr Asp Pro Arg Arg1 5 10 15Arg Ser<210>1195<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1195Ser Trp Gly Pro Thr Asp Pro Arg Arg Arg Ser Arg Asn Leu Gly Lys1 5 10 15Val Ile<210>1196<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1196Arg Arg Arg Ser Arg Asn Leu Gly Lys Val Ile Asp Thr Leu Thr Cys1 5 10 15Gly Phe<210>1197<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1197Gly Lys Val Ile Asp Thr Leu Thr Cys Gly Phe Ala Asp Leu Met Gly1 5 10 15Tyr Ile<210>1198<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1198Thr Cys Gly Phe Ala Asp Leu Met Gly Tyr Ile Pro Leu Val Gly Ala1 5 10 15Pro Leu<210>1199<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1199Met Gly Tyr Ile Pro Leu Val Gly Ala Pro Leu Gly Gly Ala Ala Arg1 5 10 15Ala Leu<210>1200<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1200Gly Ala Pro Leu Gly Gly Ala Ala Arg Ala Leu Ala His Gly Val Arg1 5 10 15Val Leu<210>1201<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1201
Ala Arg Ala Leu Ala His Gly Val Arg Val Leu Glu Asp Gly Val Asn1 5 10 15Tyr Ala<210>1202<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1202Val Arg Val Leu Glu Asp Gly Val Asn Tyr Ala Thr Gly Asn Leu Pro1 5 10 15Gly Cys<210>1203<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1203Val Asn Tyr Ala Thr Gly Asn Leu Pro Gly Cys Ser Phe Ser Ile Phe1 5 10 15Leu Leu<210>1204<211>15<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1204Leu Pro Gly Cys Ser Phe Ser Ile Phe Leu Leu Ala Leu Leu Ser1 5 10 15<210>1205<211>14<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1205Ser Phe Ser Ile Phe Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Leu Thr1 5 10<210>1206<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1206Ile Phe Leu Leu Ala Leu Leu Ser Cys Leu Thr Val Pro Ala Ser Ala1 5 10 15Tyr Gln<210>1207<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1207Ser Cys Leu Thr Val Pro Ala Ser Ala Tyr Gln Val Arg Asn Ser Ser1 5 10 15Gly Leu<210>1208<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1208Ser Ala Tyr Gln Val Arg Asn Ser Ser Gly Leu Tyr His Val Thr Asn1 5 10 15Asp Cys<210>1209<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1209Ser Ser Gly Leu Tyr His Val Thr Asn Asp Cys Pro Asn Ser Ser Ile1 5 10 15Val Tyr
<210>1210<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1210Thr Asn Asp Cys Pro Asn Ser Ser Ile Val Tyr Glu Ala Ala Asp Ala1 5 10 15Ile Leu<210>1211<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1211Ser Ile Val Tyr Glu Ala Ala Asp Ala Ile Leu His Thr Pro Gly Cys1 5 10 15Val Pro<210>1212<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1212Asp Ala Ile Leu His Thr Pro Gly Cys Val Pro Cys Val Arg Glu Gly1 5 10 15Asn Ala<210>1213<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1213Gly Cys Val Pro Cys Val Arg Glu Gly Asn Ala Ser Arg Cys Trp Val1 5 10 15Ala Val<210>1214<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1214Glu Gly Asn Ala Ser Arg Cys Trp Val Ala Val Thr Pro Thr Val Ala1 5 10 15Thr Arg<210>1215<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1215Trp Val Ala Val Thr Pro Thr Val Ala Thr Arg Asp Gly Lys Leu Pro1 5 10 15Thr Thr<210>1216<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1216Val Ala Thr Arg Asp Gly Lys Leu Pro Thr Thr Gln Leu Arg Arg His1 5 10 15Ile Asp<210>1217<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1217Leu Pro Thr Thr Gln Leu Arg Arg His Ile Asp Leu Leu Val Gly Ser1 5 10 15Ala Thr
<210>1218<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1218Arg His Ile Asp Leu Leu Val Gly Ser Ala Thr Leu Cys Ser Ala Leu1 5 10 15Tyr Val<210>1219<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1219Gly Ser Ala Thr Leu Cys Ser Ala Leu Tyr Val Gly Asp Leu Cys Gly1 5 10 15Ser Val<210>1220<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1220Ala Leu Tyr Val Gly Asp Leu Cys Gly Ser Val Phe Leu Val Gly Gln1 5 10 15Leu Phe<210>1221<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1221Cys Gly Ser Val Phe Leu Val Gly Gln Leu Phe Thr Phe Ser Pro Arg1 5 10 15Arg His<210>1222<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1222Gly Gln Leu Phe Thr Phe Ser Pro Arg Arg His Trp Thr Thr Gln Asp1 5 10 15Cys Asn<210>1223<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1223Pro Arg Arg His Trp Thr Thr Gln Asp Cys Asn Cys Ser Ile Tyr Pro1 5 10 15Gly His<210>1224<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1224Gln Asp Cys Asn Cys Ser Ile Tyr Pro Gly His Ile Thr Gly His Arg1 5 10 15Met Ala<210>1225<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1225Tyr Pro Gly His Ile Thr Gly His Arg Met Ala Trp Asp Met Met Met1 5 10 15Asn Trp
<210>1226<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1226His Arg Met Ala Trp Asp Met Met Met Asn Trp Ser Pro Thr Ala Ala1 5 10 15Leu Val<210>1227<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1227Met Met Asn Trp Ser Pro Thr Ala Ala Leu Val Val Ala Gln Leu Leu1 5 10 15Arg Ile<210>1228<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1228Ala Ala Leu Val Val Ala Gln Leu Leu Arg Ile Pro Gln Ala Ile Met1 5 10 15Asp Met<210>1229<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1229Leu Leu Arg Ile Pro Gln Ala Ile Met Asp Met Ile Ala Gly Ala His1 5 10 15Trp Gly<210>1230<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1230Ile Met Asp Met Ile Ala Gly Ala His Trp Gly Val Leu Ala Gly Ile1 5 10 15Ala Tyr<210>1231<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1231Ala His Trp Gly Val Leu Ala Gly Ile Ala Tyr Phe Ser Met Val Gly1 5 10 15Asn Trp<210>1232<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1232Gly Ile Ala Tyr Phe Ser Met Val Gly Asn Trp Ala Lys Val Leu Val1 5 10 15Val Leu<210>1233<211>18<212>PRT<213>丙肝病毒<400>1233Val Gly Asn Trp Ala Lys Val Leu Val Val Leu Leu Leu Phe Ala Gly1 5 10 15Val Asp
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210521102115Ser Ser Leu Thr Val Thr Gln Leu Leu Arg Arg Leu His Gln Trp212021252130Ile Ser Sar Glu Cys Thr Thr Pro Cys Ser Gly Ser Trp Leu Arg213521402145Asp Ile Trp Asp Trp Ile Cys Glu Val Leu Ser Asp Phe Lys Thr215021552160Trp Leu Lys Ala Lys Leu Met Pro Gln Leu Pro Gly IIe Pro Phe216521702175Val Ser Cys Gln Arg Gly Tyr Arg Gly Val Trp Arg Gly Asp Gly218021852190Ile Met His Thr Arg Cys His Cys Gly Ala Glu Ile Thr Gly His219522002205Val Lys Asn Gly Thr Met Arg Ile Val Gly Pro Arg Thr Cys Arg221022152220Asn Met Trp Ser Gly Thr Phe Pro Ile Asn Ala Tyr Thr Thr Gly222522302235Pro Cys Thr Pro Leu Pro Ala Pro Thr Thr Gly Pro Cys Thr Pro224022452250Leu Pro Ala Pro Asn Tyr Lys Phe Ala Leu Trp Arg Val Ser Ala225522602265Glu Glu Tyr Val Glu Ile Arg Arg Val Gly Asp Phe His Tyr Val227022752280Ser Gly Met Thr Thr Asp Asn Leu Lys Cys Pro Cys Gln Ile Pro228522902295Ser Pro Glu Phe Phe Thr Glu Leu Asp Gly Val Arg Leu His Arg230023052310Phe Ala Pro Pro Cys Lys Pro Leu Leu Arg Glu Glu Val Ser Phe231523202325Arg Val Gly Leu His Glu Tyr Pro Val Gly Ser Gln Leu Pro Cys233023352340Glu Pro Glu Pro Asp Val Ala Val Leu Thr Ser Met Leu Thr Asp234523502355Pro Ser His Ile Thr Ala Glu Ala Ala Gly Arg Arg Leu Ala Arg236023652370Gly Ser Pro Pro Ser Met Ala Ser Ser Ser Ala Ser Gln Leu Ser237523802385Ala Pro Ser Leu Lys Ala Thr Cys Thr Leu Ser Ala Pro Ser Leu239023952400Lys Ala Thr Cys Thr Ala Asn His Asp Ser Pro Asp Ala Glu Leu240524102415Ile Glu Ala Asn Leu Leu Trp Arg Gln Glu Met Gly Gly Asn Ile242024252430Thr Arg Val Glu Ser Glu Asn Lys Val Val Ile Leu Asp Ser Phe243524402445Asp Pro Leu Val Ala Glu Glu Asp Glu Arg Glu Val Ser Val Pro245024552460Ala Glu Ile Leu Arg Lys Ser Arg Arg Phe Ala Arg Ala Leu Pro246524702475Val Trp Ala Arg Pro Asp Tyr Asn Pro Pro Leu Val Glu Thr Trp248024852490Lys Lys Pro Asp Tyr Glu Pro Pro Val Val His Gly Cys Pro Leu249525002505Pro Pro Pro Arg Ser Pro Pro Val Pro Pro Pro Arg Lys Lys Arg251025152520Thr Val Val Leu Thr Glu Ser Thr Leu Ser Thr Ala Leu Ala Glu252525302535Leu Ala Thr Lys Ser Phe Gly Ser Ser Ser Glu Leu Ala Thr Lys254025452550Ser Phe Gly Ser Ser Ser Thr Ser Gly Ile Thr Gly Asp Asn Thr255525602565Thr Thr Ser Ser Glu Pro Ala Pro Ser Gly Cys Pro Pro Asp Ser257025752580Asp Val Glu Ser Tyr Ser Ser Met Pro Pro Leu Glu Gly Glu Pro258525902595Gly Asp Pro Asp Leu Ser Asp Gly Ser Trp Pro Gly Asp Ser Thr260026052610Val Ser Ser Gly Ala Asp Thr Glu Asp Val Val Cys Cys Ser Met261526202625Ser Tyr Ser Trp Thr Gly Ala Leu Val Thr Pro Cys Ala Ala Glu263026352640Glu Gln Lys Leu Pro Ile Asn Ala Leu Ser Asn Ser Leu Leu Arg264526502655His His Asn Leu Val Tyr Ser Thr Thr Ser Arg Ser Ala Cys Gln266026652670Arg Tyr Ser Thr Thr Ser Arg Ser Ala Cys Gln Arg Gln Lys Lys267526802685
Val Thr Phe Asp Arg Leu Gln Val Leu Asp Ser His Tyr Gln Asp2690 2695 2700Val Leu Lys Glu Val Lys Ala Ala Ala Ser Lys Val Lys Ala Asn270527102715Leu Leu Ser Val Glu Glu Ala Cys Ser Leu Thr Pro Pro His Ser272027252730Ala Lys Ser Lys Phe Gly Tyr Gly Ala Lys Asp Val Arg Cys His273527402745Ala Arg Lys Ala Val Ala His Ile Asn Ser Val Trp Lys Asp Leu275027552760Leu Glu Asp Ser Val Thr Pro Ile Asp Thr Thr Ile Met Ala Lys276527702775Asn Glu Val Phe Cys Val Gln Pro Glu Lys Gly Gly Arg Lys Pro278027852790Ala Arg Leu Ile Val Phe Pro Asp Leu Gly Val Arg Val Cys Glu279528002805Lys Met Ala Leu Tyr Asp Val Val Ser Lys Leu Pro Leu Ala Val281028152820Met Gly Val Val Ser Lys Leu Pro Leu Ala Val Met Gly Ser Ser282528302835Tyr Gly Phe Gln Tyr Ser Pro Gly Gln Arg Val Glu Phe Leu Val284028452850Gln Ala Trp Lys Ser Lys Lys Thr Pro Met Gly Phe Ser Tyr Asp285528602865Thr Arg Cys Phe Asp Ser Thr Val Thr Glu Ser Asp Ile Arg Thr287028752880Glu Glu Ala Ile Tyr Gln Cys Cys Asp Leu Asp Pro Gln Ala Arg288528902895Val Ala Ile Lys Ser Leu Thr Glu Arg Leu Tyr Val Gly Gly Pro290029052910Leu Thr Asn Ser Arg Gly Glu Asn Cys Gly Tyr Arg Arg Cys Arg291529202925Ala Ser Gly Val Leu Thr Thr Ser Cys Gly Asn Thr Leu Thr Cys293029352940Tyr Ile Lys Ala Arg Ala Ala Cys Arg Ala Ala Gly Leu Gln Asp294529502955Cys Thr Met Leu Val Cys Gly Asp Asp Leu Val Val Ile Cys Glu296029652970Ser Ala Gly Asp Asp Leu Val Val Ile Cys Glu Ser Ala Gly Val297529802985Gln Glu Asp Ala Ala Ser Leu Arg Ala Phe Thr Glu Ala Met Thr299029953000Arg Tyr Ser Ala Pro Pro Gly Asp Pro Pro Gln Pro Glu Tyr Asp300530103015Leu Glu Leu Ile Thr Ser Cys Ser Ser Asn Val Ser Val Ala His302030253030Asp Gly Ala Gly Lys Arg Val Tyr Tyr Leu Thr Arg Asp Pro Thr303530403045Thr Pro Leu Ala Arg Ala Ala Trp Glu Thr Ala Arg His Thr Pro305030553060Val Asn Ser Trp Leu Gly Asn Ile Ile Met Phe Ala Pro Thr Leu306530703075Trp Ala Arg Met Ile Leu Met Thr His Phe Phe Ser Val Leu Ile308030853090Ala Arg Asp Gln Leu Glu Gln Ala Leu Asn Cys Glu Ile Tyr Gly309531003105Ala Cys Tyr Ser Ile Glu Pro Leu Asp Leu pro Pro Cys Tyr Ser311031153120Ile Glu Pro Leu Asp Leu Pro Pro I1e Ile Gln Arg Leu His Gly312531303135Leu Ser Ala Phe Ser Leu His Ser Tyr Ser Pro Gly Glu Ile Asn314031453150Arg Val Ala Ala Cys Leu Arg Lys Leu Gly Val Pro Pro Leu Arg315531603165Ala Trp Arg His Arg Ala Arg Ser VaI Arg Ala Arg Leu Leu Ser317031753180Arg Gly Gly Arg Ala Ala Ile Cys Gly Lys Tyr Leu Phe Asn Trp318531903195Ala Val Arg Thr Lys Leu Lys Leu Thr Pro Ile Ala Ala Ala Gly320032053210Arg Leu Asp Leu Ser Gly Trp Phe Thr Ala Gly Tyr Ser Gly Gly321532203225Asp Ile Tyr His Ser Val Ser His Ala Arg Pro Arg Trp Phe Trp323032353240Phe Cys Leu Leu Leu Leu Ala Ala Gly Val Gly Ile Tyr Leu Leu324532503255Pro Asn Arg
3260<210>2197<211>215<212>PRT<213>人免疫缺陷病毒1型<400>2197Lys Val Lys Gln Trp Pro Leu Thr Glu Glu Lys Ile Lys Ala Leu Val1 5 10 15Glu Ile Cys Thr Glu Met Glu Lys Glu Gly Lys Ile Ser Lys Ile Gly20 25 30Pro Glu Asn Pro Tyr Asn Thr Pro Val Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asp35 40 45Ser Thr Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp Phe Arg Glu Leu Asn Lys Arg50 55 60Thr Gln Asp Phe Trp Glu Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Ala Gly65 70 75 80Leu Lys Lys Lys Lys Ser Val Thr Mal Leu Asp Val Gly Asp Ala Tyr85 90 95Phe Ser Val Pro Leu Asp Lys Asp Phe Arg Lys Tyr Thr Ala Phe Thr100 105 110Ile Pro Ser Ile Asn Asn Glu Thr Pro Gly Ile Arg Tyr Gln Tyr Asn115 120 125Val Leu Pro Gln Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala Ile Phe Gln Ser Ser130 135 140Met Thr Lys Ile Leu Glu Pro Phe Arg Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val145 150 155 160Ile Tyr Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile165 170 175Gly Gln His Arg Thr Lys Ile Glu Glu Leu Arg Gln His Leu Leu Arg180 185 190Trp Gly Phe Thr Thr Pro Asp Lys Lys His Gln Lys Glu Pro Pro Phe195 200 205Leu Trp Met Gly Tyr Glu Leu210 215<210>2198<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽1<400>2198Ala Leu Val Glu Ile Cys Thr Glu Leu Glu Lys Glu Gly Lys Ile Ser1 5 10 15Lys<210>2199<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽2<400>2199Glu Ile Cys Thr Glu Met Glu Lys Asp Gly Lys Ile Ser Lys Ile Gly1 5 10 15Pro<210>2200<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽3<400>2200Asn Thr Pro Val Phe Ala Ile Lys Arg Lys Asp Ser Thr Lys Trp Arg1 5 10 15Lys<210>2201<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽4
<400>2201Pro Val Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asn Ser Thr Lys Trp Arg Lys Leu1 5 10 15Val<210>2202<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽5<400>2202Phe Ala Ile Lys Lys Lys Asp Ser Asp Lys Trp Arg Lys Leu Val Asp1 5 10 15Phe<210>2203<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽6<400>2203Ala Ile Lys Lys Lys Asp Ser Thr Arg Trp Arg Lys Leu Val Asp Phe1 5 10 15Arg<210>2204<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽7<400>2204Lys Asp Ser Thr Lys Trp Arg Lys Val Val Asp Phe Arg G1u Leu Asn1 5 10 15Lys<210>2205<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽8<400>2205Asp Ser Thr Lys Trp Arg Lys Leu Thr Asp Phe Arg Glu Leu Asn Lys1 5 10 15Arg<210>2206<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽9<400>2206Val Gln Leu Gly Ile Pro His Pro Gly Gly Leu Lys Lys Lys Lys Ser1 5 10 15Val<210>2207<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽10<400>2207Pro His Pro Ala Gly Leu Lys Lys Asn Lys Ser Val Thr Val Leu Asp1 5 10 15Val
<210>2208<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽11<400>2208Asp Val Gly Asp Ala Tyr Phe Ser Ile Pro Leu Asp Lys Asp Phe Arg1 5 10 15Lys<210>2209<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽12<400>2209Arg Tyr Gln Tyr Asn Val Leu Pro Met Gly Trp Lys Gly Ser Pro Ala1 5 10 15Ile<210>2210<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽13<400>2210Lys Gln Asn Pro Asp Ile Val Ile Cys Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr1 5 10 15Val<210>2211<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽14<400>2211Pro Asp Ile Val Ile Tyr Gln Tyr Val Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser1 5 10 15Asp<210>2212<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽15<400>2212Pro Asp Ile Val Ile Tyr Gln Tyr Ile Asp Asp Leu Tyr Val Gly Ser1 5 10 15Asp<210>2213<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽16<400>2213Ile Tyr Gln Tyr Met Asp Asp Leu Leu Val Gly Ser Asp Leu Glu Ile1 5 10 15Gly<210>2214<211>17<212>PRT<213>人工序列
<220>
<223>HIV-1 RT 肽17<400>2214Gln Tyr Met Asp Asp Leu Tyr Val Ala Ser Asp Leu Glu Ile Gly Gln1 5 10 15His<210>2215<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽18<400>2215Ile Glu Glu Leu Arg Gln His Leu Trp Arg Trp Gly Phe Phe Thr Pro1 5 10 15Asp<210>2216<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽19<400>2216Gln His Leu Leu Arg Trp Gly Phe Phe Thr Pro Asp Lys Lys His Gln1 5 10 15Lys<210>2217<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽20<400>2217Gln His Leu Leu Arg Trp Gly Phe Tyr Thr Pro Asp Lys Lys His Gln1 5 10 15Lys<210>2218<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1 RT 肽21<400>2218Arg Trp Gly Phe Thr Thr Pro Asp Gln Lys His Gln Lys Glu Pro Pro1 5 10 15Phe<210>2219<211>99<212>PRT<213>人免疫缺陷病毒1型<400>2219Pro Gln Ile Thr Leu Trp Gln Arg Pro Leu Val Thr Ile Lys Ile Gly1 5 10 15Gly Gln Leu Lys Glu Ala Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp Asp Thr Val20 25 30Leu Glu Glu Met Asn Leu Pro Gly Arg Trp Lys Pro Lys Met Ile Gly35 40 45Gly Ile Gly Gly Phe Ile Lys Val Arg Gln Tyr Asp Gln Ile Leu Ile50 55 60Glu Ile Cys Gly His Lys Ala Ile Gly Thr Val Leu Val Gly Pro Thr65 70 75 80Pro Val Asn Ile Ile Gly Arg Asn Leu Leu Thr Gln Ile Gly Cys Thr85 90 95Leu Asn Phe<210>2220<211>17
<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽1<400>2220Gln Ile Thr Leu Trp Gln Arg Pro Ile Val Thr Ile Lys Ile Gly Gly1 5 10 15Gln<210>2221<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽2<400>2221Thr Ile Lys Ile Gly Gly Gln Leu Arg Glu Ala Leu Leu Asp Thr Gly1 5 10 15Ala<210>2222<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽3<400>2222Ala Leu Leu Asp Thr Gly Ala Asp Asn Thr Val Leu Glu Glu Met Asn1 5 10 15Leu<210>2223<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽4<400>2223Leu Pro Gly Arg Trp Lys Pro Lys Ile Ile Gly Gly Ile Gly Gly Phe1 5 10 15Ile<210>2224<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽5<400>2224Gly Arg Trp Lys Pro Lys Met Ile Val Gly Ile Gly Gly Phe Ile Lys1 5 10 15Val<210>2225<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽6<400>2225Trp Lys Pro Lys Met Ile Gly Gly Val Gly Gly Phe Ile Lys Val Arg1 5 10 15Gln<210>2226<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽7
<400>2226Lys Met Ile Gly Gly Ile Gly Gly Leu Ile Lys Val Arg Gln Tyr Asp1 5 10 15Gln<210>2227<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽8<400>2227Met Ile Gly Gly Ile Gly Gly Phe Val Lys Val Arg Gln Tyr Asp Gln1 5 10 15Ile<210>2228<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽9<400>2228Lys Val Arg Gln Tyr Asp Gln Ile Pro Ile Glu Ile Cys Gly His Lys1 5 10 15Ala<210>2229<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽10<400>2229Thr Val Leu Val Gly Pro Thr Pro Ala Asn Ile Ile Gly Arg Asn Leu1 5 10 15Leu<210>2230<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽11<400>2230Thr Val Leu Val Gly Pro Thr Pro Thr Asn Ile Ile Gly Arg Asn Leu1 5 10 15Leu<210>2231<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽12<400>2231Leu Val Gly Pro Thr Pro Val Asn Val Ile Gly Arg Asn Leu Leu Thr1 5 10 15Gln<210>2232<211>17<212>PRT<213>人工序列<220>
<223>HIV-1蛋白酶肽13<400>2232Val Asn Ile Ile Gly Arg Asn Leu Met Thr Gln Ile Gly Cys Thr Leu1 5 10 15Asn
權利要求
1.至少一組肽在制備用于調節免疫應答反應的藥物中的用途，其特征在于，各肽組的各個肽含有一個感興趣多肽所對應的氨基酸序列的不同部分，并且顯示與同組肽中至少一個其它肽有部分序列相同性或相似性。
2.如權利要求1所述的用途，其特征在于，至少采用2組肽，其中各組中的肽序列衍生自感興趣的不同多肽。
3.如權利要求1所述的用途，其特征在于，至少采用3組肽，其中各組中的肽序列衍生自感興趣的不同多肽。
4.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述部分序列相同性或相似性包含在各肽的一端或兩端。
5.如權利要求4所述的用途，其特征在于，所述一端或兩端包含至少4個毗連的氨基酸，所述至少4個毗連的氨基酸的序列與所述至少一個其它肽含有的氨基酸序列相同或相似。
6.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述肽的長度至少為6個氨基酸殘基。
7.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述肽的長度不多于約500個氨基酸殘基。
8.如權利要求1所述的用途，其特征在于，選擇所述肽的長度以增強溶細胞性T淋巴細胞應答的產生。
9.如權利要求8所述的用途，其特征在于，所述肽的長度約為8-10個氨基酸殘基。
10.如權利要求1所述的用途，其特征在于，選擇所述肽的長度以增強T輔助淋巴細胞應答的產生。
11.如權利要求10所述的用途，其特征在于，所述肽的長度約為12-20個氨基酸殘基。
12.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述肽序列衍生自感興趣多肽所對應序列的至少約30％。
13.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述肽序列衍生自感興趣多肽所對應序列的至少約90％。
14.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述感興趣多肽是選自蛋白質抗原、癌細胞表達的抗原、顆粒抗原、同種異體抗原、自身抗原或變應原或免疫復合物的抗原。
15.如權利要求1所述的用途，其特征在于，所述感興趣多肽是疾病或病癥相關的多肽。
16.如權利要求15所述的用途，其特征在于，所述疾病或病癥相關的多肽是病原生物體或癌癥產生的多肽。
17.如權利要求15所述的用途，其特征在于，所述疾病或病癥相關的多肽是選自酵母、病毒、細菌、蠕蟲、原生動物和支原體的病原生物體產生的多肽。
18.如權利要求15所述的用途，其特征在于，所述疾病或病癥相關的多肽是選自黑素瘤、肺癌、乳腺癌、子宮頸癌、前列腺癌、結腸癌、胰腺癌、胃癌、膀胱癌、腎癌、移植后淋巴增生疾病(PTLD)、何杰金氏淋巴瘤的癌癥產生的多肽。
19.一種抗原呈遞細胞或其前體細胞，所述抗原呈遞細胞或其前體細胞已與至少一組肽接觸，接觸的時間和條件足以使所述肽或其加工形式被所述抗原呈遞細胞或其前體細胞呈遞，其中各肽組的各個肽含有一個感興趣多肽所對應的氨基酸序列的不同部分，并且顯示與同組肽中至少一個其它肽有部分序列相同性或相似性。
20.一種抗原呈遞細胞群或其前體細胞群，所述抗原呈遞細胞群或其前體細胞群已與至少一組肽接觸，接觸的時間和條件足以使所述肽或其加工形式被所述抗原呈遞細胞或其前體細胞呈遞，其中各肽組的各個肽含有一個感興趣多肽所對應的氨基酸序列的不同部分，并且顯示與同組肽中至少一個其它肽有部分序列相同性或相似性。
21.一種產生用于調節對感興趣多肽的免疫應答反應的抗原呈遞細胞的方法，所述方法包括使抗原呈遞細胞或其前體細胞與至少一組肽接觸，接觸的時間和條件足以使所述肽或其加工形式被所述抗原呈遞細胞或其前體細胞呈遞，其中各肽組的各個肽含有一個感興趣多肽所對應的氨基酸序列的不同部分，并且顯示與同組肽中至少一個其它肽有部分序列相同性或相似性。
22.如權利要求21所述的方法，還包括培養的時間和條件足以使所述前體細胞分化成為抗原呈遞細胞。
23.如權利要求21所述的方法，其特征在于，使所述肽或各組肽與基本上純化的抗原呈遞細胞或其前體細胞接觸。
24.如權利要求21所述的方法，其特征在于，使所述肽或各組肽與異質性抗原呈遞細胞或其前體細胞群接觸。
25.如權利要求22所述的方法，其特征在于，所述異質細胞群選自血液或外周血單個核細胞。
26.如權利要求21所述的方法，其特征在于，所述抗原呈遞細胞或其前體細胞選自單核細胞、巨噬細胞、髓系細胞、B細胞、樹突狀細胞或朗格罕氏細胞。
27.如權利要求21所述的方法，其特征在于，使所述肽或各組肽與未經培養的抗原呈遞細胞群或其前體細胞群接觸。
28.如權利要求27所述的方法，其特征在于，所述細胞群是同質細胞群。
29.如權利要求27所述的方法，其特征在于，所述細胞群是異質細胞群。
30.如權利要求27所述的方法，其特征在于，所述細胞群是異質細胞群，其選自全血、新鮮的血、或其組分，所述組分選自外周血單個核細胞、全血的棕黃層組分、壓積的紅細胞、經輻射的血、樹突狀細胞、單核細胞、巨噬細胞、嗜中性粒細胞、淋巴細胞、自然殺傷細胞或自然殺傷T細胞。
31.一種產生抗原特異性淋巴細胞的方法，所述方法包括使如權利要求19所述的抗原呈遞細胞群或其前體細胞群與淋巴細胞群或其前體細胞群接觸，接觸的時間和條件足以產生調節對至少一種感興趣多肽的免疫應答反應的抗原特異性淋巴細胞。
32.一種組合物，該組合物包含至少一組肽和藥學上可接受的運載體和/或稀釋劑，其特征在于，各肽組的各個肽含有一個感興趣多肽所對應的氨基酸序列的不同部分，并且顯示與同組肽中至少一個其它肽有部分序列相同性或相似性。
33.如權利要求32所述的組合物，還包含穩定所述肽避免受宿主酶降解的佐劑或化合物。
34.一種組合物，該組合物包含如權利要求19所述的抗原呈遞細胞或其前體細胞，或如權利要求20所述的抗原呈遞細胞群或其前體細胞群，以及藥學上可接受的運載體和/或稀釋劑。
35.如權利要求34所述的組合物，還包含佐劑。
36.一種組合物，該組合物包含如權利要求31所述產生的抗原特異性淋巴細胞，以及藥學上可接受的運載體和/或稀釋劑。
37.如權利要求36所述的組合物，還包含佐劑。
38.一種調節對感興趣多肽的免疫應答反應的方法，包括給予需要這種治療的患者至少一組肽，給予的時間和條件足以調節所述免疫應答反應，其中，各肽組的各個肽含有一個感興趣多肽所對應的氨基酸序列的不同部分，并且顯示與同組肽中至少一個其它肽有部分序列相同性或相似性。
39.一種調節對感興趣多肽的免疫應答反應的方法，包括給予需要這種治療的患者如權利要求20所述的抗原呈遞細胞群，給予的時間和條件足以調節所述免疫應答反應。
40.一種調節對感興趣多肽的免疫應答反應的方法，包括給予需要這種治療的患者如權利要求31所述產生的抗原特異性淋巴細胞，給予的時間和條件足以調節所述免疫應答反應。
41.一種治療和/或預防與感興趣多肽的存在相關的疾病或病癥的方法，包括給予需要這種治療或預防的患者治療有效量的至少一組肽，其中各肽組的各個肽含有一個感興趣多肽所對應的氨基酸序列的不同部分，并且顯示與同組肽中至少一個其它肽有部分序列相同性或相似性。
42.一種治療和/或預防與感興趣多肽的存在相關的疾病或病癥的方法，包括給予需要這種治療或預防的患者治療有效量的如權利要求20所述的抗原呈遞細胞群。
43.一種治療和/或預防與感興趣多肽的存在相關的疾病或病癥的方法，包括給予需要這種治療或預防的患者治療有效量的如權利要求31所述產生的抗原特異性淋巴細胞。
44.一種調節對象對靶抗原的免疫應答反應的組合物，該組合物包含未經培養的抗原呈遞細胞或其前體細胞，所述抗原呈遞細胞或其前體細胞未經歷活化條件，它們已與靶抗原所對應的抗原接觸，接觸的時間和條件足以表達加工或修飾形式的抗原以呈遞給所述對象免疫系統。
45.如權利要求44所述的組合物，其特征在于，所述未經培養的抗原呈遞細胞或其前體細胞與所述抗原接觸約1分鐘至約5天。
46.如權利要求44所述的組合物，其特征在于，所述未經培養的抗原呈遞細胞或其前體細胞選自全血、新鮮的血、或其組分。
47.如權利要求46所述的組合物，其特征在于，所述組分選自外周血單個核細胞、全血的棕黃層組分、壓積的紅細胞、經輻射的血、樹突狀細胞、單核細胞、巨噬細胞、嗜中性粒細胞、淋巴細胞、自然殺傷細胞或自然殺傷T細胞。
48.如權利要求44所述的組合物，其特征在于，所述靶抗原所對應的抗原選自核酸；肽；激素；全蛋白抗原；細胞物質；選自細胞碎片、凋亡的細胞、脂聚集物、膜運載體、微球、熱凝聚蛋白、病毒小體、病毒樣顆粒的顆粒物質；以及選自細菌、分枝桿菌、病毒、真菌、原生動物的完整生物，或其部分。
49.如權利要求44所述的組合物，其特征在于，所述抗原選自蛋白質性質的分子或核酸分子。
50.如權利要求44所述的組合物，其特征在于，所述未經培養的細胞與兩種或多種抗原接觸。
51.如權利要求50所述的組合物，其特征在于，所述抗原的形式選自重疊肽、非重疊肽、可表達重疊肽的一種或多種聚核苷酸或可表達非重疊肽的一種或多種聚核苷酸。
52.未經培養的抗原呈遞細胞或其前體細胞在制備治療對象的疾病或病癥的藥物中的用途，所述疾病或病癥與靶抗原的存在或異常表達相關，其中，所述抗原呈遞細胞或其前體細胞未經歷活化條件但已與靶抗原所對應的抗原接觸，接觸的時間和條件足以表達加工或修飾形式的抗原以呈遞給所述對象免疫系統。
全文摘要
本發明涉及至少一組肽在組合物中的應用，以及調節對一種或多種多肽抗原的免疫應答反應的方法。在某些實施方式中，各組肽的序列全部或部分衍生自一個多肽抗原。各肽組中的各個肽含有一個多肽抗原所對應的氨基酸序列的不同部分，并且顯示與同組肽的至少一個其它肽有部分序列相同性或相似性。本發明還包括在預防、診斷和治療應用的范圍內使用這些肽的方法。此外，本發明涉及未經培養的抗原呈遞細胞或其前體細胞在調節這些細胞的接受者的調節免疫應答反應的方法和組合物中的應用，這些抗原呈遞細胞或其前體細胞未經歷活化條件，但已與抗原接觸。
文檔編號A61P37/00GK1832960SQ200480022584
公開日2006年9月13日 申請日期2004年6月10日 優先權日2003年6月10日
發明者S·J·肯特 申請人:墨爾本大學