專利名稱：一種具免疫調節功能的多菌組合物及其制備方法與用途的制作方法
技術領域：
本發明涉及微生物工程領域，具體地說涉及一種具有免疫調節功能的多菌組合物及其制備方法與用途。
背景技術：
人體免疫力是人體自身的安全保衛、防御系統，是人體維護生命健康和預防疾病的重要系統，對外能消滅、抵御外侵的病毒和致病菌；對內可調控、清除非正常的變異細胞(癌細胞)，以達到保護人體生命的健康狀態。
現有的免疫增強劑類藥物，在國內外均有臨床應用及文獻報道。其產品的生產方法多為從動物、植物中提取或化學合成，也有用純單一益生菌發酵提取等，但因生產過程中經過高溫或化學物質的影響及因受生產原料的影響等諸多因數，最終造成現有的產品在使用中尚不夠理想和成本高昂等問題，使人體免疫增強劑這類產品還未能達到人類防病、治病、健康保健的理想效果。
發明內容
本發明的目的是克服上述已有的技術水平不足，通過大量的研究工作，發明了一種效果全面、明顯、制備工藝簡單、安全無毒副作用的生物免疫激活增強劑及制備技術。
本發明的目的之一是提供一種具有免疫調節功能的多菌組合物，是由兩種或多種乳酸菌屬Lacticacid bacteria菌種共同培養得到。
進一步的，上述的乳酸菌屬菌種是嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus、干酪乳桿菌Lactbacillus casri(orla-Jensen)Hansen etlessel、發酵乳桿菌Lactbacillusfermentium Beijerinck、短雙歧桿菌Bifidobacterium breue Reuer、長雙歧桿菌Bifidobacterium Iongum Reuer、兩歧雙歧桿菌Bifidobacterium bifidum、嬰兒雙歧桿菌Bifidobacterium infantis Reuer、青春雙歧桿菌Bifidobacterium adolesce ntisReuer、干酪乳桿菌干酪亞種Lactabacillus casei subsp.casei、丁酸梭菌Clostridiumbutylicum、鼠李糖乳桿菌Lactbacillus rhamnosus、植物乳桿菌。
更進一步的，上述的乳酸菌屬菌種是植物乳桿菌，短雙歧桿菌，干酪乳桿菌，發酵乳桿菌中的一種或多種。
再進一步的，上述的具有免疫調節功能的多菌組合物是由所述乳酸菌屬菌種經共同液態培養得到。
本發明的第二個目的是提供一種制備本發明具有免疫調節功能的多菌組合物的方法，該方法包括以下步驟a、將選取的乳酸菌屬菌種制備成生產種子；b、將生產種子接種到培養基上，在25℃-35℃溫度下進行共同培養；c、收集培養產物，調整濃度后分裝。
本發明的第三個目的是提供一種由上述方法制備而成的具有免疫調節功能的多菌組合物。
本發明的第四個目的是提供一種由上述具有免疫調節功能的多菌組合物。它是由上述的免疫調節組合物添加藥學上可以接受的輔助性成分制備而成的免疫調節劑。
本發明的第六個目的是提供了上述的具有免疫調節功能的多菌組合物在制備具有免疫調節功能的保健食品或免疫調節劑中的用途。
本發明免疫調節組合物能激活人體免疫系統，特別是巨噬細胞、淋巴細胞、NKT細胞、能有效的快速修復和重建人體免疫系統，使其更好的攻擊和殺滅變異細胞，是一種優秀的具有免疫調節功能的多菌組合物。本發明具有免疫調節功能的多菌組合物能用于制備免疫調節劑，具有很好的市場應用前景。
具體實施例方式下面通過對本發明較佳實施方式的詳細描述對本發明進行說明，但不應理解為是對本發明的限制。本領域技術人員可以根據本發明作出各種改變或變型，只要不脫離本發明的技術思想，均屬于本發明所附權利要求所定義的范圍。
實施例一本發明具有免疫調節功能的多菌組合物的制備a、選取以下的乳酸菌屬菌種制備成生產種子嗜酸乳桿菌、干酪乳桿菌、發酵乳桿菌、短雙歧桿菌、長雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌。
b、將生產種子接種到100ml液態培養基上，在25℃-35℃溫度下進行共同培養；c、收集培養產物，調整濃度后分裝。
實施例二本發明具有免疫調節功能的多菌組合物的制備a、選取以下的乳酸菌屬菌種制備成生產種子嗜酸乳桿菌、發酵乳桿菌、短雙歧桿菌、長雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌。
b、將生產種子接種到3000ml液態培養基上，在25℃-35℃溫度下進行共同培養；c、收集培養產物，調整濃度后分裝。
實施例三本發明具有免疫調節功能的多菌組合物的制備a、選取以下的乳酸菌屬菌種制備成生產種子植物乳桿菌，短雙歧桿菌，干酪乳桿菌，發酵乳桿菌b、將生產種子接種到5000ml液態培養基上，在25℃-35℃溫度下進行共同培養；c、收集培養產物，調整濃度后分裝。
實施例四本發明具有免疫調節功能的多菌組合物的制備1、在實施例1-3中發酵培養后分別取出菌體，將菌絲體干燥粉碎后，用60％-70％的乙醇提取。
2、將步驟1的提取物去除沉淀物和乙醇，再與發酵液合并混勻。
3、分別濃縮加工并調整濃度至200ug/ml，得到口服液。
實施例五本發明具有免疫調節功能的多菌組合物的制備1、取實施例1-3中制備的免疫調節組合物各200升，分別冷凍干燥除去水分。
2、將步驟1所得產物制為細粉。
3、將步驟2所制得的細粉按常規工藝裝入腸溶性硬膠囊，壓板、質檢、包裝后得本發明多菌組合物的膠囊劑。
實驗例一本發明多菌口服液的Beagle犬長期毒性實驗使用本發明實施例一制得的多菌口服液分4.0ml/kg、2.0ml/kg、1.0ml/kg，大、中、小三個劑量(相當于臨床擬定劑量80、40、20倍)，經Beagle犬連續270天口服給藥，停藥后恢復期觀察30天。
三個劑量結果各劑量組均順利完成全程試驗。試驗過程中大、中、小劑量組和對照組各犬給藥后食欲和食量、行為活動等均未見異常，被毛光滑，各犬天然孔無異常分泌物，大、小便無異常，動物行走正常，精神正常，呼吸正常，給藥過程中雌犬有發情現象。停藥觀察30天各組犬均未見異常。
藥前2次、給藥45天、90天、135天、180天、225天、270天以及停藥30天，小便常規檢查10項未見異常。
體溫和眼科檢查，藥前2次、給藥45天、90天、135天、180天、225天、270天以及停藥30天無異常。
外周血象，藥前2次、給藥45天、90天、135天、180天、225天、270天以及停藥30天檢查，各劑量組及對照組各項指標均在正常范圍內波動，給藥組與對照組比較無無統計學差異。
各劑量組及對照組于給藥135、270天以及停藥30天，各組動物骨髓象增生活躍，均未見有原始和異常細胞。
心電圖檢查，藥前2次、給藥45天、90天、135天、180天、225天、270天以及停藥30天，各給藥組及對照組心電圖檢查均為竇性心律，P、T波與QRS主波方向一致，各波電壓、時間正常。
血液生化檢查，藥前2次、給藥45天、90天、135天、180天、225天、270天以及停藥30天，給藥各組及對照組血液生化10項指標，各指標均在正常范圍波動，組間比較無統計學差異(P＞0.05)。
系統尸解，給藥135、270天以及停藥30天，給藥各組及對照組各臟器重量和系數組間比較無統計學差異(P＞0.05)。
病理組織學檢查，給藥135天、給藥270天和停藥恢復觀察30天，試驗各組各組織病理學檢查均未見異常。
本實驗結果表明本發明免疫調節組合物4.0ml/kg、2.0ml/kg、1.0ml/kg三個劑量連續270天插管灌胃給藥和停藥觀察30天，動物未見明顯毒性反應，藥物對重要臟器無明顯的病理損傷，認為推薦臨床試驗劑量有較大安全性。
實驗例二本發明多菌口服液免疫調節實驗以上述實例制備的具有免疫調節功能的多菌組合物和免疫調節劑按常規藥效實驗方法分組進行免疫調節實驗。
實驗結果證明本發明中多種有益微生物的代謝產物和微生物孢內物質中含有大量的可幫助消化的多種酶、菌多糖、小分子蛋白、維生素和多種氨基酸，并且含有大量抗氧化物質可以增強人體細胞所需的各種營養成分，增強激活人體免疫力。本發明免疫調節組合物還具有幫助消化、提高免疫力、殺死和抑制胃腸道中的致病菌并有幫助通排便的作用。
本發明通過將具有不同功效的成分加以組合，制備成免疫調節組合物，不僅提高了人體的免疫力，促進身體健康長壽而且能顯著的預治各種腫瘤疾病。
本發明具有免疫調節功能的多菌組合物的制備方法通過控制營養元素含量的方法配制的有益微生物培養基，實現了多種有益微生物的共生繁殖，克服了不同微生物菌種間相互抑制的作用，實現有益微生物能夠在營養充分和全面的環境中保持持久活力，活菌數量超出國家標準數量級，并產生抗病的積極效果，簡化了工藝，節約了時間和生產成本。
上述實例證明本發明提供的免疫調節劑能激活人體免疫系統，特別是巨噬細胞、淋巴細胞、NKT細胞、能有效的快速修復和重建人體免疫系統，使其更好的攻擊和殺滅變異細胞，是一種優秀的具有免疫調節功能的多菌組合物，能用于制備免疫調節劑和免疫調節保健食品。本發明制備方法簡便快速、產品得率高、活性強、利于大規模生產，具有很好的應用前景以上對本發明的詳細描述并不限制本發明，本領域的技術人員可以根據本發明作出各種改變及變形，只要不脫離本發明的精神，均屬于本發明所附權利要求所定義的范圍。
權利要求
1.一種具有免疫調節功能的多菌組合物，其特征在于由兩種或多種乳酸菌屬Lacticacid bacteria菌種共同培養得到。
2.根據權利要求1所述的具有免疫調節功能的多菌組合物，特征在于所述的乳酸菌屬菌種是嗜酸乳桿菌Lactobacillus acidophilus、干酪乳桿菌Lactbacillus casri(orla-Jensen)Hansen etlessel、發酵乳桿菌Lactbacillusfermentium Beijerinck、短雙歧桿菌Bifidobacterium breue Reuer、長雙歧桿菌Bifidobacterium longum Reuer、兩歧雙歧桿菌Bifidobacterium bifidum、嬰兒雙歧桿菌Bifidobacterium infantis Reuer、青春雙歧桿菌Bifidobacteriumadolesce ntis Reuer、干酪乳桿菌干酪亞種Lactabacillus casei subsp.casei、丁酸梭菌Clostridium butylicum、鼠李糖乳桿菌Lactbacillus rhamnosus、植物乳桿菌中。
3.根據權利要求2所述的具有免疫調節功能的多菌組合物，特征在于所述的乳酸菌屬菌種是植物乳桿菌，短雙歧桿菌，干酪乳桿菌，發酵乳桿菌中的兩種或多種。
4.根據權利要求3所述的具有免疫調節功能的多菌組合物，其特征在于是由所述乳酸菌屬菌種共同液態培養得到。
5.一種制備權利要求1-4任一項所述具有免疫調節功能的多菌組合物的的方法，包括以下的步驟a、將選取的乳酸菌屬菌種制備成生產種子；b、將生產種子接種到培養基上，在25℃-35℃溫度下進行共同培養；c、收集培養產物，調整濃度后分裝。
6.一種具有免疫調節功能的多菌組合物，是由權利要求5所述的方法制備而成的。
7.一種具有免疫調節功能的多菌組合物，是由權利要求1-4、6任一項所述的免疫調節組合物添加藥學上可以接受的輔助性成分制備而成的。
8.權利要求1-4、6任一項所述具有免疫調節功能的多菌組合物在制備免疫調節保健食品中的用途。
9.權利要求1-4、6任一項所述具有免疫調節功能的多菌組合物在制備免疫調節劑中的用途。
全文摘要
本發明提供了一種具有免疫調節功能的多菌組合物，以及該多菌組合物的制備方法與用途。該多菌組合物是由兩種或多種乳酸菌屬(Lacticacid bacteria)菌種共同培養得到。本發明多菌組合物能激活和快速修復并重建免疫系統，使免疫細胞有能力去攻擊和殺滅變異細胞，從而達到提高免疫力的目的。本發明多菌組合物能用于制備免疫調節劑、抗癌藥物與保健食品。
文檔編號A61P37/02GK1957953SQ200610131968
公開日2007年5月9日 申請日期2006年10月13日 優先權日2005年10月14日
發明者王殿學, 王晶晶 申請人:德陽創新生物工程有限公司